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1、金黄色葡萄球菌是奶牛乳房炎最主要的传染 性致病菌， 也是影响生鲜乳质量的重要因素1。近 年来, 由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒越来越 多,而中毒食品以乳和乳制品为主2。我国也常发 生金黄色葡萄球菌食物中毒，是卫生防疫部门重 点监测项目3。我国最新国标规定生鲜乳中不得 检出金黄色葡萄球菌。乳源金葡菌耐药性不仅会 影响牛乳房炎的治疗而且也影响乳生产企业的效 益， 其耐药性也会通过乳传递给人， 增加人在相关 感染时治疗失败的风险。从贵阳市周边 5 个大型 奶牛场和一个牛奶加工厂的各生产环节采集乳 样，进行生鲜乳金黄色葡萄球菌的污染来源及其 耐药性研究，以期为生鲜乳生产质量控制和被调 查奶牛场乳房炎治
2、疗提供帮助。 1材料和方法 1.1材 料 1.1.1试剂7.5%氯化钠肉汤， 金黄色葡萄球菌 显色培养基， 贝尔德-帕克氏培养基基础， 亚碲酸 收稿日期：2014-02-25；修订日期：2014-03-17 基金项目: 贵州省科技厅农业公关项目 （黔科合 NZ 字20123011 号） ； 贵阳市农委科学技术计划项目 (筑科合 2009 第 12-1 号) 作者简介: 白光耀 （1987） ， 男， 山东青岛人， 在读硕士生， 主要从事微生物与生化药学研究。 通讯作者简介: 谭艾娟 （1963） ， 女， 贵州六枝人， 教授， 主要从事微生物与生化药学研究。 生鲜乳金黄色葡萄球菌污染来源调查及
3、其耐药性 白光耀 1， 谭艾娟1， 吕世明2 ， 王黔生 3 ， 周国君 3 ， 金志强 4 ， 方 英 4 (1.贵州大学 生命科学学院， 贵州 贵阳 5500252； 2.贵州大学 动物科学学院， 贵州 贵阳 550025； 3.贵州三联乳业有限公司， 贵州 贵阳 550025， 4.贵州省贵阳市农业委员会, 贵州 贵阳 550081) 摘 要：为考察贵阳市生鲜乳中金黄色葡萄球菌污染环节及其对药物的敏感性， 采集贵阳市周边 5个大型奶牛场及一个 牛奶加工厂的乳区棉签拭子 7 5份和各生产环节奶样 3 1 0份， 按国家标准 （G B4 7 8 9 . 1 0 2 0 1 0 ） 分离鉴定金
4、黄色葡萄球菌， 并测定其对 9种常用抗菌药物的敏感性。 结果表明： 生鲜乳中金黄色葡萄球菌污染主要来源于牛乳头内； 传统的 “弃前三 把奶” 工艺对降低生鲜乳中金黄色葡萄球菌污染的作用不明显； 规范的乳区消毒可以有效地降低乳头外环境金黄色葡萄 球菌对生鲜乳安全的影响； 所调查奶牛场的金黄色葡萄球菌对磺胺类、 -内酰胺类和四环素类药物的耐药水平较高。 关键词：金黄色葡萄球菌； 污染； 检出率； 耐药性； 多重耐药 中图分类号：S855.1+2文献标识码：ADOI编码：10.3969/j.issn.10066500.2014.05.023 Investigation of Pollution So
5、urces and Resistance Assay of Staphylococcus aureus in Raw Fresh Milk BAI Guang -yao1， TAN Ai -juan1， LYU Shi -ming2， WANG Qian -sheng3， ZHOU Guo -jun3， JIN Zhi -qiang4， FANG Ying4 （1.College of Life Science， Guizhou University， Guiyang, Guizhou 550025, China； 2. College of Animal Science， Guizhou U
6、niversity， Guiyang, Guizhou 550025, China； 3.Guizhou Trigeminy Dairy Industry Limited Company， Guiyang, Guizhou 550025, China； 4.Guiyang Agricultural Commit tee, Guiyang, Guizhou 550081, China） Abstract：In order to investigate the pollution sources of Staphylococcus aureus(S.saureus) in raw fresh mi
7、lk and determine the re- sistance of S.saureus, 88 strains S.saureus were isolated with the national standard method（GB4789.102010）from 310 milk samlpes and 75 udder region swabs, which collected from 5 large-scale dairy farms and a dairy plant in Guiyang city. The antibiotic susceptibilities of 88
8、strains S.saureus to 9 common antibiotics were tested with the method of micro-broth dilution according to the standard of CLSI(2009). The results showed that the S.saureus growing inside udder was the main pollution sources of S.saureus contaminating raw fresh milk. The effect of traditional proces
9、s, which discarded milking of initial three hands, to reduce the pollution of S.saureus in the raw milk was not obvious. The way of specification disinfection on udder region could diminish the risk of S. saureus contamination to raw fresh milk. The resistances of isolated S.saureus to sulfa, beta l
10、actam and tetracycline were high. Key words：Staphylococcus aureus; pollution; detection rate; drug-resistance; multi-resistance 2014，20（5）：101-103 畜牧兽医与水产养殖 天津农业科学 Tianjin Agricultural Sciences 天津农业科学第 20 卷 盐卵黄增菌液， 60%甘油， 16 种葡萄菌生化鉴定 管， MH 肉汤。 1.1.2药 物青霉素、 红霉素、 阿莫西林、 头孢噻呋、 环丙沙星、 恩诺沙星、 强力霉素、 土霉素、 氟苯尼
11、 考、 磺胺二甲嘧啶。 1.1.3质 控 菌 株金黄色葡萄球菌质控菌株 ATCC25923， 购买自中国菌种资源保藏中心。 1.1.4主要设备超净工作台，高压灭菌锅， 恒 温培养箱， 恒温干燥箱， 电子天平等。 1.2方 法 1.2.1样品的采集乳区棉签拭子采集： 牛乳区温 水洗涤热敷、 按摩， 聚维酮碘消毒， 灭菌后棉签擦拭 乳头， 置入亚碲酸盐卵黄增菌液内保存； 其余为第 1 把奶、 第 4 把奶、 牛场集奶罐、 运奶车、 加工车间 贮奶罐、 半成品和成品奶样， 共计 385 份 （表 1 ） 。 1.2.2金黄色葡萄球菌的分离鉴定参照 GB47 89.102010 ， 进行分离鉴定。 1
12、.2.3药物敏感性试验采用微量肉汤稀释法 测定金黄色葡萄球菌对常用 10 种抗菌药物的最 小抑菌浓度 （MIC） ， 按美国临床实验室标准化委 员会 （CLSI） 2009 版推荐的判定标准及中国兽医 药品监察所标准进行耐药性统计。 2结果与分析 2.1金黄色葡萄球菌分离鉴定结果 在总计为 385 份的样品中，共分离鉴定出金 黄色葡萄球菌 88 株， 分离率为 22.86%。 金黄色葡 萄球菌的检出率高低依次为第 1 把奶、 第 4 把奶、 奶牛场的集奶罐、 运奶车、 加工车间贮奶罐； 加工 车间的成品和半成品奶均未查到金黄色葡萄球 菌， 乳区棉签拭子的检出率低于奶样品。 2.2生鲜乳中金黄色
13、葡萄球菌耐药性检测结果 分离到的 88 株金黄色葡萄球菌对 9 种常用 抗菌药物都具有不同程度的耐药， 其耐药顺序为： 磺胺二甲嘧啶、 青霉素、 强力霉素、 土霉素、 头孢 噻呋、 氟苯尼考、 恩诺沙星和环丙沙星。这表明分 离菌对磺胺类、 -内酰胺类和四环素类药物的敏 感性较低。 2.3金色葡萄球菌的多重耐药情况 本次试验中分离的 88 株金黄色葡萄球菌均 表现为多重耐药，最少的为 3 重，占总菌株数的 11.36%； 最高的为 7 重， 占总菌株数的 4.55%； 多 重耐药谱主要集中在 4 重 （39.77%） 和 5 重 （34.09%） 之间 （图 1） 。 3结论与讨论 （1） 本试
14、验总计 385 份样品， 共分离出金黄色 葡萄球菌 88 株， 检出率为 22.86%。 该菌在不同国 家及地区的生鲜乳中检出率为 12%79%6-7。我国 生鲜乳中金葡菌的检出率主要在 15%38%8-9。 金黄色葡萄球菌的检出率高低顺序说明：该菌在 牛乳腺内定植较为普遍， 正常状态下， 约 3 成牛乳 头内有金黄色葡萄球菌的存在。随着奶量的不断 表1样品来源与金黄色葡萄球菌检出率 来源样品数检出数检出率/% 乳区拭子7579.33 第 1 把奶752432.00 第 4 把奶752128.00 奶牛场集奶罐601728.33 运奶车601525.00 加工车间贮奶罐20420.00 半成品
15、1000 成品1000 合计3858822.86 注：“” 表示 CLSI 无对应的判定标准。 表2金黄色葡萄球菌耐药性检测结果(%) 药物敏感率中介率耐药率 磺胺二甲嘧啶0-100 青霉素4.55-95.45 强力霉素11.361.1487.50 土霉素7.955.6886.36 头孢噻呋5.689.0985.23 氟苯尼考42.0522.7335.23 环丙沙星88.643.417.95 恩诺沙星3.4172.7323.86 红霉素26.1452.2721.59 图1 88株金黄色葡萄球菌对10种抗菌药物的 多重耐药性比较 占菌株总数的比例/% 102 第 5 期 汇集， 牛场集奶罐、 运
16、奶车、 加工厂贮奶罐的检出 率逐渐降低，说明生鲜乳中金黄色葡萄球菌污染 主要来源于牛乳头内。 （2） 为降低生鲜乳中细菌污染， 传统工艺为弃 前三把奶， 然后才收集鲜奶， 试验结果表明： 弃前 三把奶对降低生鲜乳中金黄色葡萄球菌污染作用 不明显 （10%左右） ， 实际意义不大， 却增加了弃奶 时人手对乳头污染的机会， 故 “弃前三把奶” 工艺 有待进一步研究和评估。 （3） 乳区棉签拭子的检出率明显低于其他奶 样，说明规范的乳区消毒可以有效地降低乳头外 环境致病菌对生鲜乳安全的影响。 但是， 在使用聚 维酮碘消毒时奶牛出现明显的刺激性疼痛反应， 此疼痛应激反应对奶牛产量的影响和消毒药在鲜 奶
17、中残留的风险有待进一步研究。生鲜乳在经过 加工车间加工后，无论成品或半成品中均没有检 出金黄色葡萄球菌，说明该加工厂的奶消毒工艺 可靠。 （4） 本次调查结果中， 5 种药物的耐药率高于 85%， 其中磺胺二甲嘧啶耐药率达到 100%， 青霉 素耐药率也高达 95.45%， 头孢噻呋、 强力霉素和 土霉素的耐药率也均在 85%以上， 说明所调查的 奶牛场对磺胺类、 -内酰胺类和四环素类药物的 耐药水平较高， 与王冰等10、 燕霞等11报道的结果 相似。 建议奶牛场建立细菌药敏动态数据库， 根据 药物敏感性， 实时调整抗感染药物的使用方案， 以 提高疗效、 降低用药成本、 减少治疗性弃奶量和减
18、少乳中药物残留的可能。 参考文献: 1 曹立亭， 胡松华奶牛乳房炎主要致病菌在牛奶中的分 布J安徽农业科学, 2010, 38(34):19 541-19 542. 2 黄丹， 殷文政， 刘晓川， 等. 呼和浩特地区乳中金黄色 葡萄球菌的分离鉴定及药敏性试验研究J. 农产品加工， 2007 （12） :72-74. 3 史红. 金黄色葡萄球菌耐药性及肠毒素分型研究J. 动物医学进展， 2012,33(6)： 87-90. 4 吕素玲 南宁市生牛奶金黄色葡萄球菌污染状况及其 耐药性和肠毒素基因检测 J 应用预防医学, 2001,16(5): 271-274. 5 Levy S B. Antibi
19、otic resistance:an ecological imbalanceC /Chad-wick D J, Goode J. Antibiotic resistance:origin,evolu tion,selection,andspread,cibafoundationsymposium207. Chichester: John Wiley & Sons,1997:1-14. 6 徐勤， 巢国祥.生牛奶中金黄色葡萄球菌污染状况及耐 药性状研究J.中国卫生检验杂志， 2005， 15(8): 972-973 7 黄冰， 邓志爱， 谭铭雄， 等.食品中金黄色葡萄球菌污染 状况、 产肠毒素
20、特性及耐药性研究J.中国卫生检验杂志， 2009， 19(6): 1 380-1 382 8 闫军， 遇晓杰， 苏华， 等 原料乳中金黄色葡萄球菌风 险评估基础研究J中国公共卫生管理， 2010， 26(1): 39- 40 9 薛秀恒， 孙茂忠， 王菊花， 等安徽不同地区奶站牛奶中 金黄色葡萄球菌及其肠毒素污染状况评估 J. 中国微生 态学杂志， 2012， 24 （4） :302-307 10 王冰， 刘明春， 吴聪明， 等.呼和浩特地区奶牛乳房炎 金黄色葡萄球菌的耐药性调查J.中国兽医杂志， 2007, 43 (3):30-32. 11 燕霞， 陈俭， 张丽佳， 等浙江省主要奶牛养殖区乳房 炎致病菌金黄色葡萄球菌的耐药性 J. 福建农林大学学 报， 2012， 41(6):633-636. 白光耀等： 生鲜乳金黄色葡萄球菌污染来源调查及其耐药性 103