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1、检验、科研与实践,一、科研与实践若干问题,（一）科研经费申请的途径 （二）科研中应注意的几个问题 （三）关于检验（实验）防护问题 （四）发现问题注意寻找原因 （有时实验中还需要设计一些小实验） （五） 如何看科研成果,（一）科研经费申请的途径,1、卫生局 2、市科委 3、省卫生厅 4、省科委（自然基金、其它） 5、卫生部 6、国家自然科学基金 7、863计划 8、973计划 9、其它（人事部、人事厅、教委、药品等）,（二）科研中应注意的几个问题,尊重科研结果（如阳性、阴性，阴性不一定没有意义，目前这方面问题较大，即使中华杂志也有。） 目标一旦确定，要“疯狂”追求下去，“疯狂”追求但决不搞僵化。
2、实例如下： 要善于抓住偶发现象（例1、2）,DNA双螺旋结构模型的建立,1953年4月5日自然杂志同时刊出两篇关于DNA研究的重要论文：,实例,沃森、克里克关于DNA螺旋结构 的研究 维尔金斯、富兰克琳关于DNA结晶的 X-射线衍射研究,当时几个人决定对DNA结构采用两种路线进行互补研究,维尔金斯等用X-射线衍射法求取DNA 单晶结构，以客观检测为主要手段。 沃森等另辟其径，采用建立数理模型的方法对概念系统做抽象把握。,善于迂回、拼而不僵,当时提出14股学说，但错误地排除了2股和4股学说，开始建立了3股模型； 3股失败，一度灰心，沃森经鲍林鼓舞后又确定了单股模型，结果又失败； 关键时刻富兰克琳
3、提供照片后受到启发，建立了双螺旋结构，结果成功。,研究背景,1、沃森 25岁 克里克 37岁 维尔金斯 37岁 富兰克琳 33岁 2、项目仅仅用了18个月（1.5年） 3、1958年富兰克琳去世，1962年3位幸存 者共同获奖。,（三）关于检验（实验）防护问题 （四）发现问题注意寻找原因 （有时实验中还需要设计一些小实验） （五） 如何看科研成果,二、科研立项,1、立项的着手点： （1）灵感 （2）论文中的问题 （3）系列研究中所得出的问题 （4）创新性课题 经过一系列研究，提出新的观点 首次创新,2、项目的类型 （1）临床病例性研究（个例、大样本） （2）实验性研究 低难度项目，例如用ELI
4、SA法检 测一个指标，目前意义不大。 中、高难度项目 （3）方式：回顾性研究；前瞻性研究。,3、如何评价一个科研项目的水平,实验难度 实验意义 实验前景,意义更大,ESR-TNF： （1） 血清TNF水平与ESR的相关性 （2）不同计量TNF对ESR的体外调控研究 （3）rTNFR及抗TNF对TNF的阻断,4、有时实验并不需要太高级的仪器设备,0pg TNF 50pg TNF 100pg TNF 500pgTNF 1000pg TNF,皮内注射,组胺+西咪替丁+苯海拉明,组胺+西咪替丁,组胺+苯海拉明,组胺,盐水对照,免疫组化,染色阴性 胞核染色阳性 胞浆染色阳性,弱阳性（+） 阳性（+） 强
5、阳性（+）,5、关于系列性项目,（1）一般系列如限于高血压（意义不大） （2）经典系列如对表皮细胞角蛋白研究、 T细胞活化机理研究。（意义非常大） （3）横向系列如对角蛋白基因研究，有 可能涉及几十个遗传性疾病。 （4）纵向系列例如我们正在进行的实验。,6、查阅资料,目前检索资料的特点,7、实验设计及构思过程（讲座重点）,实例（近年来我们对银屑病的一些研究观点、过程及展望） 综合结果 提出问题（一个课题切入点可能有多个，我们着手点是因果关系，跨度大。）,（1）1990-1998年： 对银屑病进行一些探讨性研究，主要为细胞因子测定，意义不大。 （2）1998-2000年： 将今后课题明确定为“T
6、细胞在银屑病发病中的作用研究”，重点研究T细胞活化部位与TNF-及IL-8等的关系。从该期开始，我们的课题虽也有微观研究，但重点在因果关系的研究（跨度大），通过上述研究初步证实两方面的问题： T细胞活化的部位； 与TNF-及IL-8等的关系.,（3）2001-2003年： 因先期T细胞作用已显得非常重要，结合国外T细胞在SCID 鼠的研究，即银屑病T细胞小鼠皮下注射诱发银屑病，2001-2003年，在上述研究基础上，我们又提出如下设想： 如果将银屑病患者T细胞与正常人皮肤共培养，结果会如何？ 我们通过共培养后，进行了三方面的观察： A、表皮增殖调控基因 B、表皮通过时间 C、T细胞活化的特异性
7、,通过上述研究，相应明确了： A、银屑病患者T细胞可导致正常人皮 肤调控基因表达异常 B、银屑病患者T细胞可导致正常人表 皮通过时间延长 C、银屑病患者T细胞活性与超抗原刺 激后的正常人T细胞活性不同,由于上述研究是将T细胞与表皮细胞共培养，定量较差，同时T细胞又分几个亚型，所以之后又进一步设想，如果将T细胞分类后进行研究，从而观察究竟是哪种T细胞的作用，即： A、CD3+T细胞与KC共培养 B、CD4+T细胞与KC共培养 C、CD8+T细胞与KC共培养 （观察Ki67等变化） 通过系列研究，初步明确所有T细胞均可导致增殖调控基因异常，但作用程度不同，CD4+T细胞作用最强，其次为CD8+T细
8、胞。,经过2001-2003年的一系列研究，我们认为表皮增殖过快，可能是由于T细胞到达皮肤后通过复杂的细胞因子网络的作用，首先引起表皮增殖调控基因表达异常，之后可能才发生表皮通过时间缩短。即：T细胞可能是KC增殖过快的主要介质。 通过这一阶段的研究，接下来的研究将有两个途径： 1、进一步弄清T细胞与表皮之间的关系。 2、另一个途径：揭示银屑病患者T细胞活性异常的根源。,（4）2003年以后 在我们的研究基础上，结合国外研究成果，拟对银屑病概念进行更新，2003年底我们首次系统地提出了银屑病发病的全新观点：骨髓银屑病的发病中枢。 中华皮肤科杂志（专论） 中国皮肤病性病学杂志（2004年第8期） Journal of Investigative Dermatology. 为了证实这一观点，从2003年开始，我们又进行了新的研究，构建两个创新性研究平台，即： A、骨髓移植构建银屑病动物模型 B、银屑病患者骨髓CD34+细胞体外定向分化 的T细胞功能研究,实例：具体路线图,三、如何撰写论文,1、命题及注意事项 2、目的 3、材料与方法 4、结果 5、讨论 6、参考文献,