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1、细菌的接种、分离与鉴定思路,邵阳市第一人民医院检验科,罗甫花,常用细菌培养方法,需氧培养法（一般培养） 适用于需氧菌和兼性厌氧菌培养。 培养温度：37（采用恒温培养箱）。 培养时间：1824h。,二氧化碳培养法 适用于奈瑟菌属和布鲁菌属等苛养菌培养。 可采用烛缸法、二氧化碳培养箱。,微需氧培养法 适用于空肠弯曲菌、幽门螺杆菌等微需氧菌培养。 可采用抽气换气法。 厌氧培养法 适用于专性厌氧菌培养。 厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等。,细菌接种的基本程序,灭菌接种环,沾取标本,接种,灭菌接种环,杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本,杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境,带菌接种环
2、的正确烧法,热导法：从环的根部（靠近柄部）开始烧，通过热传导让接种环或针上带的菌慢慢受热，直至干燥，最后放在氧化焰（外层温度高）上彻底灭菌。 从还原焰开始法：（内层温度低），带菌的接种环或针直接置于此不会引起气溶胶喷溅，待完全干燥后再移至氧化焰部位彻底灭菌。,接种方法,平板划线法 原则和目的：通过划线稀释细菌 获得单个菌落 要领： G 划线均匀而细密，不重复。 A 充分的利用培养基的面积。 B 培养基不能划破。 GB 培养时培养皿倒置。,培养时培养皿倒置的原因,一 防止培养基的水分蒸发 二 防止形成的冷凝水滴落在培养基上造成染菌 三 倒放可以在某种程度上防止菌落蔓延，好形成单个菌落，利于计数
3、四 防止外来的污染,平板划线法,（1）连续划线法 此法多用于含菌量相对少，无菌部位来源的如血液，胸腹水，脑脊液等标本的细菌分离培养。,（2）分区划线法（可分二区，三区和四区） 此法多用于含菌量较多的粪便、脓汁等标本的细菌的分离培养。,第一区划线,灭菌接种环,第二区划线,灭菌接种环,第三区划线,灭菌接种环,（3）密集划线法 此法用于纸片药敏实验培养,密集划线法,用于药敏实验,细菌在固体培养基中生长表现： 1、大小 （ mm表示。1mm以内露滴状；1-2mm小菌落。2- -4mm中等大菌落；4-6mm以上称大菌落或巨大菌落） 2、形状 （圆形、不规则形） 3、边缘 （整齐、锯齿状） 4、表面性状（
4、光滑、粗糙、） 5、隆起度（扁平、隆起、中凸） 6、颜色及透明度（黄色、灰白、光泽、透明） 7、硬度（干燥、湿润、粘液） 8、溶血（在血培养基上的表现）,试管培养基接种法,琼脂斜面接种法 该法主要用于纯种增菌及保存菌种，也可用于某些生化鉴定试验如双糖铁培养基的接种。,手执塑料杆处,小指夹棉塞,试管口离火焰1cm,手执试管底露出斜面,操作顺序： 接种环灭菌 勾取细菌 取棉塞 接种 塞棉塞 接种环灭菌 标记 培养。,细菌分离培养,选择适合细菌生长的条件和温度,按无菌操作 选择适合细菌生长的培养基 接种量少,革兰氏染色法步骤 一般包括初染、媒染、脱色、复染 1）涂片干后加热固定。 2）结晶紫染30s
5、，水洗 3）加碘液约30s，水洗 4）加95%酒精数滴，摇动脱色，30秒-1分钟，至无紫色脱落为止，水洗 5）加复红染色染，染30秒后，水洗。 干燥，镜检。,+C鉴定思路,乳糖-,触酶+ 微球菌科,O/F试验氧化型 微球菌属,h2o2+,触酶- 链球菌科,血浆凝固酶-,新生霉素敏感试验S 表皮葡萄球菌,O/F试验发酵型 葡萄球菌属,血浆凝固酶+ 金黄色葡萄球菌,新生霉素敏感试验R 腐生葡萄球菌,Mac生长试验阳性 肠链球菌属,靛基质-,Mac生长试验阴性,溶血Optochin S为肺链 R为甲链,溶血 杆菌肽S为A群链 CAMP试验+为B群链,-b鉴定思路,乳糖-,OX+双糖- 非发酵菌科,鞭毛染色-为黄杆菌属莫拉菌属,h2o2+,OX 双糖+ 肠杆菌科,端鞭毛为假单胞 一根鞭毛为绿脓 周鞭毛为产碱杆菌,动力-NIT-不动杆菌 动力+NIT+嗜麦牙单胞菌,IMVC + + - -为大肠 - + +为产气和肺克 + - +为沙门 D + - -为志贺,PD 葡萄糖酸盐,Ox-双糖- 非发酵菌科,Ox+双糖发酵型 弧菌科 0/129R为气单胞菌 S为弧菌属和霍乱弧菌,实验安排：,每人一个营养琼脂平皿做划线分离，要求分出单个菌落。（培养时倒置） 每人一支营养琼脂斜面做斜面接种。,感谢聆听！,