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1、,微生物学实验,实验三 酵母菌形态的观察和显微镜直接计数法,观察酵母菌的形态，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。 掌握酵母菌的一般形态特征。 明确血球计数板计数的原理。 掌握使用血球计数板进行微生物计数的方法。,实验目的,实验原理,美兰染色检测酵母菌死活细胞的原理： 美兰在氧化态时为蓝色，在还原态时为无色。活的酵母细胞具有还原能力，能使美兰保持为还原态，因此染色后死的为蓝色、活的为无色。 酵母菌细胞计数的原理: 将菌液放在已知体积计数室(1mm20.1mm)，计数室薄，因此每个细胞都可以被看到。体积确定，因此数完所有细胞后就知道单位体积的细胞个数。,一、酵母菌形态的观察 （美蓝浸片的观察） 1
2、. 在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种环挑取少量酵母菌苔放染色液中，混合均匀。 2. 用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。 注意：盖玻片不宜平放，以免产生气泡影响观察 3. 将玻片放置约3分钟后镜检，先用低倍镜观察后用高倍镜观察酵母菌的形态，并根据颜色区别死活细胞。,三.实验步骤:,作业 画图说明你所观察到的酵母菌的形态特征，并说明死细胞和活细胞分别为什么颜色。,三.实验步骤:,二显微镜直接计数法 1. 菌悬液的制备：以无菌水将酿酒酵母制成浓度适中的菌悬液 2. 镜检计数室：在加样前，先对计数板的计数室进行镜检，若有污物，则
3、需清洗，吹干后才能计数。 3. 加样品：将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌滴管将摇匀的菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，一般计数室均能充满菌液。 注意：取样时先要摇匀菌液；加样时计数室不可有气泡产生。,三.实验步骤:,二显微镜直接计数法 4. 显微镜计数：加样后静止5分钟，然后将血球计数板置于显微镜下，先用低倍镜找到计数室，再用高倍镜进行计数。 在计数前若发现菌液太浓或太稀，需重新调节稀释度再计数。一般样品稀释度要求每个中格内15-20个菌体为宜。每个计数室选5个中格（可选4个角和中央的一个中格）中的菌液进行计数。 注：位于格上的菌体一般只数上方和右边线上的（计上不计下，计右不计左）。若遇酵母出芽，芽体大小与母细胞一样大时，即作为两个菌体计算。,三.实验步骤:,二显微镜直接计数法 5. 清洗血球计数板：使用完毕后，将血球计数板在水龙头上用水冲洗干净，切勿用硬物洗刷，洗完后自行凉干。,三.实验步骤:,作业 将结果记录于表中。P112，表1。 下次实验：培养基的配制与灭菌。,三.实验步骤:,Thank You !,