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1、铁皮石斛原球茎增殖条件的研究第34卷第4期2007年l2月福建林业科技JourofFujianForestrySciandTechVo1.34NO.4Dec.2007铁皮石斛原球茎增殖条件的研究莫昭展.贝学军(玉林师范学院化学与生物系,广西玉林537000)摘要:研究了不同基本培养基,不同浓度的脱落酸和培养方式对铁皮石斛原球茎增殖的影响.结果表明在改良MS中加入0.5mg?L脱落酸,进行固体培养或液体振荡培养,原球茎增殖的效果都比较好.关键词:铁皮石斛;原球茎增殖;组织培养中图分类号:$567.2文献标识码:A文章编号:10027351(2007)040055一O4Studyontheprot
2、ocormmultiplicati0nofDendrobiumCandidumMoZhao-zhan.BEIXue-jun(ChemistryandBiologyDepartmentofYulinNormalCollege,Yunn,Guangxi537000,China)Abstract:Inthispapertheimpactofdifferentbasicmedia,ABAconcentrationsandculturewaysonprotocormmultiplicationofDendrobiumcandidumwasstudied.theresultshowedthatmodifi
3、edMSsuppliedwithsucrose30mg?LandABA0.5mg?L一usingliquidorsolidculturewasbetterforprotocormmultiplication.Keywords:Dendrobiumcandidumwal1.exlind/;protocormmultiplication;tissueculture铁皮石斛(Dendrobiumcandidumwal1.exlind1)是2000年版(中国药典>收录的5种药用石斛之一,为多年生附生草本,是传统名贵中药,有滋阴清热,生津益胃,止咳润肺的功效.但由于其栖息地范围狭窄,野外生长周期长
4、,资源十分有限,加上人们长期采挖,自然资源日趋枯竭L1.为保护这一珍贵中药品种,许多学者对铁皮石斛的组织培养技术进行了研究,但大多数试管苗增殖系数低,试管苗茎细小,细弱,移栽成活率不高,影响了铁皮石斛试管苗快繁和大规模的工厂化生产2.在石斛组织培养过程中,石斛原球茎增殖是一个十分关键的环节,通过诱导石斛产生原球茎,将所得的原球茎进行分化形成丛生芽,再将丛生芽培养成小苗,从而达到快速繁殖的目的.本文用铁皮石斛茎段诱导出的原球茎通过在不同基本培养基,不同浓度脱落酸(ABA)及不同培养方式进行增殖,试图寻找出适合原球茎增殖的培养基以及培养方式,为工厂化育苗提供技术支撑.1材料和方法1.1材料铁皮石斛
5、原球茎来源于玉林师范学院化学与生物系植物组织培养室用茎段诱导出的原球茎,原球茎呈小圆锥状,每一团原球茎包含多个原球茎,原球茎顶端有鳞片状的叶原基突起,呈淡绿色,尚未分化出真叶.1.2方法1.2.1基本培养基的筛选选取相同条件下生长良好的原球茎,切割成直径为1.5cm团块,每种培养基接种5瓶,每瓶接种3个原球茎团,以MS,1/2MS,改良MS(NH4NO3减少50%,其余与MS相同),N6,B5为基本培养基,并附加蔗糖30g?L,固体培养,培养45d后观察原球茎增殖情况.1.2.2不同ABA浓度筛选选取相同条件下生长良好的原球茎,切割成直径为1.5cm团块,每种培养基接种5瓶,每瓶接种3个原球茎
6、团,以改良MS为基本培养基,附加30g?L1蔗糖及不同浓度的ABA进行固体培养,培养45d后观察原球茎增殖情况.收稿日期:20070426;修回日期:200706O6基金项目:广西教育厅科技项目;玉林师范学院博士启动项目作者简介:莫昭展(1974一),男,广西玉林人,王林师范学院副教授,博士.从事植物种质资源利用的教学与研究工作.?56?福建林业科技第34卷1.2.3不同培养方式的筛选选取相同条件下生长良好的原球茎,切割成直径为1.5cm团块,每种培养基接种5瓶,每瓶接种3个原球茎团,以改良MS为基本培养基,附加30g?L一蔗糖及0.5mg?L_.ABA,分别在固体培养基,液体静止培养基,液体
7、振荡培养基上培养.1.2.4培养条件光照时间12h?d一1t光照强度10001600Ix,温度25*(21,固体培养加琼脂7.2g?L一,液体培养不加琼脂,振荡培养把培养瓶放置于振荡培养箱(摇箱)中培养,转速95r?min一.2结论与讨论2.1不同培养基对原球茎增殖的影响原球茎接种于不同的培养基上,经45d后,原球茎增殖的结果见表1.在5种培养基中,原球茎增殖倍数均呈上升的趋势,其中改良MS的增殖倍数明显高于其他培养基.但在增殖过程中,在不同培养基培养相同的时间,原球茎增殖速度不同,并且在相同的培养基中,不同时段增殖的速度也不同.刚接种10d内,原球茎几乎不增殖,而且有少量的变黄,可能是原球茎
8、还没有适应新的培养基;表1不同基本培养基对原球茎增殖的影响*:+表示原球茎增殖程度优秀,+表示良好.+表示中等,+表示一般,+表示差,以下相同.从10d到20d时,增殖的速度有所增加,当达30d时,MS,1/2MS,B5,N6出现最高峰,原球茎生长旺盛,未分化,但在改良MS培养40d后,才出现最高峰,颜色鲜绿,不过此后原球茎的增殖速度有所下降.不同培养基中原球茎的生长状况如图1所示.改良MS培养基I/2MS培养基MS培养瑟N6培养基B5培:芥幕图1不同基本培养基对铁皮石斛原球茎增殖的影响2.2不同浓度ABA对原球茎增殖影响将原球茎接种到8种ABA浓度不同的改良MS培养基中,原球茎增殖结果见表2
9、和图2.从表2可知,添加ABA对原球茎的增殖有明显的效果,尤其当ABA浓度为0.5mg?L时效果最佳,但随ABA浓度的增加,原球茎增殖倍数呈现下降的趋势,同时分化加剧.表2不同ABA浓度对原球茎增殖影响第4期莫昭展,等:铁皮石斛原球茎增殖条件的研究0.IMg?L-l0,5Mg?L-l0.8Mg?L-l图2不同ABA浓度对铁皮石斛原球茎增殖的影响2.3不同培养方式对原球茎增殖的影响在原球茎接种改良MS的培养基上,附加30g?L蔗糖及0.5mg?L_.ABA,进行不同方式的培养,经45d培养后,原球茎增殖结果见表3,从表中可知,固体培养和液体振荡培养时原球茎增殖倍数均较高,显示固体培养和液体振荡培
10、养是比较好的培养方式,其在不同培养方式中原球茎生长状况如图3.表3不同培养方式对原球茎增殖的影响固体培养液体静止培养液体振荡培养图3不同培养方式对原球茎增殖的影响3结论与讨论1)用于石斛类植物组织培养的培养基有MS,Nitch,KnudsonC(KC),N6,B5,C17,SH,Kn,VacinWent(vw),Winber(w),1/2B5,1/2N6,1/2SH,1/2C17,1/2MS,1/2vw等j,但使用最多的是MS.本次研究结果表明在5种不同固体培养基中,改良MS培养基中的铁皮石斛原球茎增殖倍数最高,1/2MS,MS次之,N6最差.在MS,改良MS,1/2MS中,大量元素的含量不同
11、,微量元素含量相同,但铁皮石斛的原球茎增殖系数不同,说明铁皮石斛的原球茎的增殖与培养基中的无机盐浓度有关;在实验的过程中还发现,在不同培养基中原球茎的增殖速率到达高峰的时间有所不同,在改良MS培养基中的铁皮石斛原球茎增殖倍数最高,但到达增殖高峰的时间最长.2)侯丕勇,郭顺星(2005)在对悬浮培养的铁皮石斛原球茎在固体培养基上的生长和分化状况进行研究的结果表明,NAA,IAA,IBA和GA等激素有利于原球茎的生长与分化I.本次研究结果表明ABA激素浓度过高或过低都不利于铁皮石斛原球茎的增殖,适当的激素浓度才能有效地促进原球茎的生长增殖.当ABA浓度为0.5mg?L时,原球茎增殖最大,继续提高激
12、素浓度时,原球茎的增殖速率下降,同时原球茎的分化加剧.3)在3种培养方式中,固体培养和液体振荡培养时铁皮石斛的原球茎增殖倍数最高,显示这2种培养方式是比较适合铁皮石斛原球茎增殖的培养方式.液体静止培养的原球茎增殖倍数较低,并且在培养过?58?福建林业科技第34卷程中观察发现浸泡在培养基中的原球茎腐烂,培养一段时间后,打开瓶盖有恶臭味,这是因为原球茎浸泡在培养基中不能与空气充分接触,导致增殖受到抑制.4)通过提高原球茎的净增殖系数,以大幅度提高细胞收获量,是药用植物细胞大量培养进行工业化生产中降低成本和提高生产率的重要途径之一.适宜的培养条件对铁皮石斛组织培养和快速繁殖非常重要,特别是原球茎增殖
13、阶段,如果培养的条件不适宜原球茎的增殖,就很容易产生变异,从而影响试管苗的质量.所以为了提高试管苗的质量,仍需加大对原球茎增殖的条件研究,本实验通过不同基本培养基和不同ABA浓度以及不同碳源和不同培养方式的筛选,寻求适合铁皮石斛原球茎增殖的最佳培养基和ABA浓度以及碳源和培养方式,为以后铁皮石斛的研究以及开发应用提供技术依据.参考文献:1陈瑞蕊,林先贵,施亚琴.药用石斛及其组培技术研究概要J.江苏农业科学,2002(5):6566.2张明,夏鸿西,朱利泉,等.石斛组织培养研究进展J.中国中药杂志,2000,25(6):323326.3唐桂香,黄福灯,周伟军.铁皮石斛的种胚萌发及其离体繁殖研究J
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