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1、! “ # $ % 7 8 9法结果表明 ?扩增产物, 与小鼠基因组4 56:人基因组4 56:巨细胞病毒和乙肝病毒无交叉阳性反应; 7 8 9 法最低能检测. / / A大肠埃希菌4 56;检测实验动物细菌感染,具有快速:特异性和敏感性高的特 点;本研究证实 ? ; ! H 7 8 9反应体系7 8 9 反应体系总体积 呼吸道疾病较多B二是试验饲料中的赖氨酸 含量达不到杜长嘉三元杂种猪的需要量所 致; X H 屠宰测定,试验-组眼肌面积最大,为 - G H / . _ D, 膘厚为- H E E _ B试验D组眼肌面 积和膘厚最小,说明与使用添加剂有关B因D 组没有添加有机铬,而用天然生长肽
2、来调节 膘的厚薄,尽管有机铬能增加眼肌面积,但对 提高整体瘦肉率作用不明显,起不到天然生 长肽和有机铬的相辅作用;试验.组眼肌面 积D K H K K _ D,膘厚D H E / _ ,是由于天然生长 肽和有机铬起到了相辅作用B试验-组因饲 料中添加了有机铬,眼肌面积较大,但膘厚不 能控制,故对肉质有一定影响; a1a 浙江畜牧兽医 D / / D年第G期 万方数据 为! “ # $ %内含 : $ %? - A %, - ! 556 $ 7 8 B1 : $C%, “ “ # 1 7 5$ %D E7 F G明 胶% ) *+模板, # 1等% H “ # $液体石腊覆盖封闭 反应体系I上述
3、反应混合物在3 : J扩增仪上 K ! L ! 5 0 %然后K , L , 5 0 . ! H L , 5 0 . M C L , 5 0循环/ !次% 最后M C L保留M 5 0 I每次 实验均设阳性.阴性及空白对照I N - O 3 : J产物的电泳检测 含适量溴化乙 锭的琼脂糖凝胶上电泳%紫外透射仪下观察 记录结果I N - P 3 : J法敏感性检测 用经典酚Q氯仿 法抽提大肠埃希菌标准菌株 ) *+%在, “ 0 1 D , “ QK1 G Q, R 1 D , “Q, H1 G 大肠埃希菌 ) *+的 范围内%一个数量级一档% 3 : J扩增%检测敏 感性I S 结果 S -
4、N 标准菌株N P T ; ) *+ 3 : J扩增结果及 特异性检测详见表, I, H种标准菌株进行 3 : J扩 增%均 获 阳 性 条 带%扩 增 产 物 为 / M , U ? % 与设计相符合I对小鼠基因组) *+. 巨细胞病毒.人基因组 ) *+和乙肝病毒进 行3 : J扩增%未获阳性扩增产物I 表, 3 : J扩增特异性结果 名称结果名称结果 大肠埃希菌 V 金黄色葡萄球菌 V 变形杆菌 V+群链球菌V 铜绿假单胞菌 V)群链球菌V 小肠结肠炎耶尔森菌 V 肺炎链球菌 V 痢疾志贺菌 V 枯草杆菌 V 伤寒沙门菌 V 微球菌 V 嗜血流感杆菌 V 小鼠基因组) *+ Q 克雷伯杆
5、菌 V 巨细胞病毒 Q 枸橼酸杆菌 V 人基因组) *+ Q 沙门菌 V 乙肝病毒 Q S - S , H T ; ) *+ 3 : J扩增的敏感性检测 详见表C I将大肠埃希菌) *+从, “ 0 1 D , “ QK 1 G Q , R 1 D , “ Q, H1 G以 , “倍 递 减 稀 释%进 行 3 : J扩增% 结果当含有, “ “ R 1 D , “ Q, A 1 G 大肠埃 希菌) *+时%仍然能见到清晰的阳性条带% 表明检测低限为, “ “ R 1大肠埃希菌) *+I 表C大肠埃希菌) *+敏感性检测 含量 , “ 0 1 , 0 1 , “ “ ? 1, “ ? 1 ,
6、? 1 , “ “ R 1 , “ R 1 , R 1 结果 VVVVVVQQ W 讨论 , H T ; ) *+是细菌染色体上编码细菌核 糖 体 J *+ D ; U 6 4 6 5 $J *+%; J *+G中 , H T ; ) *+相对应的) *+序列% 与细菌染色 体其他基因组的变化相比%保守性极强%某些 序列片段为所有细菌共有I本文通过使用细 菌, H T ; ) *+保守区引物%对, H种常见 X V 和X Q标准菌株% 进行3 : J扩增%均获阳性产 物%而与小鼠基因组) *+.人基因组) *+. 巨细胞病毒和乙肝病毒无交叉阳性反应%说 明该检测方法只能扩增细菌 ) *+%特异
7、性 强I经3 : J法扩增后%最低能检测到, “ “ R 1 大肠埃希菌) *+%证明该检测方法具有高度 敏感性I , H T ; ) *+基因序列已报道的菌种数达 C ! “ “个%但3 : J通常仅对某一菌株进行检 测%在病原菌未明时%需用多种不同引物对不 同病原进行3 : J扩增%费时费力I本文克服 了一般3 : J法仅对单一菌株检测的限制%使 小鼠败血症等细菌感染的早期发现成为可 能I因操作简便%检测快速%可望成为实验动 物饲养.实验期间的重要检测方法I 参考文献 Y , Z 6 0 4 6 F ;+% $ - ) 6 06 R : B 0_ ; 0 : 6 5= ? ; 4 6 0U
8、 E 0) *+= ) *+ a b U ; 2 c 6 0 % F ; _ 4 4 6 = $ 6 0 0 2 55_ 0 6 $ ; 6 05 ; 6 4 6 ? b % d ; 6 $ B a % , K M % , H C K e/ M Y C Z X _ $ $ J J % $ - 8 4 4 6 0 4 R ; 6 5 0 F 6 $ F 0 1; J *+ , H 4 0 2C / 4; J *+ 4 ; 0 _ ; 4R ; 6 5 6 5? ; F ? ; = 4 ? F - B ; 6 U 6 $ J F % , K K A % ! , “ eC H fMfC “ “ C年第A期 浙江畜牧兽医 万方数据