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1、2 6 中国实用神经疾病杂志2 0 0 9 年2 月第1 z 卷第3 期 C h i n e s eJ o u r n a lo fP r a c t i c a lN e r v o u sD i s c a s a sF e b 2 0 0 9 ，V 0 1 1 2N o 3 在暴露组中发生惊厥的病例数为3 7 例，阳性率 为1 1 5 3 ；非暴露组中发生惊厥的病例数为1 1 例，阳性率为3 1 4 。见表1 。 表1暴露组与非暴露组队列研究结果 4 讨论 轻度胃肠炎伴良性婴幼儿惊厥早在1 9 8 2 年就 由日本学者M o r o o k a 提出。我国对该病的认识较 晚，于本世纪对其
2、临床研究才逐渐增多，但都局限于 临床病例分析。对于轻度胃肠炎伴良性婴幼儿惊厥 患儿发生惊厥的机制目前尚无统一的看法。有作 者认为是一种症状性惊厥，也有作者 2 认为是良 性婴儿惊厥( b e n i g ni n f a n t i l ec o n v u l s i o n s ) 福山型的 表现形式之一。有学者在患儿的脑脊液和大便中发 现的R V R N A 均有相同的结构蛋白区V p 7 ，说明 是同一病毒感染了肠道和中枢神经系统( C N S ) ，推 测该病毒引起的C N S 感染是导致惊厥发作的主要 原因 3 。而我们在此类病例进行脑电图检查未见明 显的脑炎改变( 弥漫性或局灶性
3、慢波) ，以及进行脑 脊液检查未见明显异常，不支持R V 脑炎说法。 K o m o r iH 等 4 认为惊厥的发生可能与胃肠炎时惊 厥阈值下降有关；O k u m u r aA 等 5 3 发现一对双胞胎 惊厥发作的时间及发作形式基本一致，考虑本病可 能有家族遗传倾向。 目前虽已有很多临床医生在工作中发现本病可 能和轮状病毒感染之间可能存在一定的联系，但对 轮状病毒和本病的相关性研究文献少之又少。本研 究通过回顾性队列研究轮状病毒感染和轻度胃肠炎 伴良性婴幼儿惊厥患儿的相关性，肯定了两者之间 存在显著相关性( P I 异硫氰荧光素( A n n e x i n - V - F I T C
4、) 和5 t d 碘化丙啶 混匀后室温避光孵育1 5m i n ，最后加P B S 缓冲液保 持终体积3 0 0 t l 。用流式细胞仪分析，结果用 C E L L Q u e s t 软件分析 3 1 3 1 5 B a x 和B c l 一2 的蛋白测定参照文献 s ：细胞 洗涤后，2 福尔马林固定3 0 m i n ，0 5 吐温X 1 0 0 处理后，加入B c l 一2 或B a x 单克隆抗体，室温孵育 3 0 m i n ，用预冷的0 0 1 t o o l L 的P B S 洗涤后，加入 F I T C 标记的羊抗兔I g G 工作液1 0 t A ，3 7 孵育 3 0 m
5、i n 。洗涤后制成浓度为2 1 0 9 个L 的细胞悬 液，流式细胞仪测定细胞B c l 一2 和B a x 蛋白的表达 率，结果用表示。 1 6 统计学处理用S P S S1 3 0 软件完成统计学 处理，实验数据以均值标准值表示。组间分析比 较采用t 检验，P 0 0 5 为差异有统计学意义。 2 结果 万方数据 2 8 中国实用煎墅壅病袈盔2 0 0 9 年2 月第1 2 卷第3 期C h i n e s eJ o u r n a lo fP r a c t i c a lN e r v o u sD i s e a s e sF e b j 塑里J o l 一2N o 3 2 1 6
6、 一O H D A 对P C I 2 细胞活力的影响实验结 果表明随着6 一O H D A 加入量的提高，浓度梯度分别 为0 、2 5 、5 0 、1 0 0 p m o l L 。P C I 2 细胞活力呈剂量依 赖性下降，其吸光度值( A 。，。) 依次为1 0 9 1 士0 0 9 1 、 0 9 8 6 士0 0 9 4 、0 7 9 7 士0 1 0 1 、0 3 9 2 土0 1 0 5 ；当6 一 O H D A 浓度为1 0 0 1 m o l L 时，细胞存活率仅为正 常组的3 5 9 ，和正常对照组相比差异具有统计学 意义( P O 0 1 ) 。 2 26 一O H D
7、A 诱导P C I 2 细胞调亡的影响 结果 表明由于6 一O H D A 的加入导致细胞发生凋亡，细胞 凋亡率随6 一O H D A 加入浓度的提高而增加，其空白 对照组细胞凋亡百分率为8 7 3 士1 0 9 ；6 一O H D A 浓 度依次为2 5 、5 0 、1 0 0 - m o l L 时，细胞凋亡率分别上 升至1 0 9 7 士1 5 2 、2 5 7 7 士0 9 5 、5 7 9 4 土1 2 3 ；6 0 H D A 处理的中、高浓度组和空白对照组相比差异 具有统计学意义( P o 0 1 ) 。 2 3 6 0 H D A 作用P C I 2 后对B c l 一2 和B
8、 a x 蛋白 表达水平的影响图1 、图2 所示，在经过不同浓度 的6 一O H D A 处理后，P C I 2 细胞B c l - 2 蛋白表达率比 空白对照组降低，而B a x 蛋白表达率却增高，两者 问的比值呈显著下降趋势( P o 0 1 ) 。 后尸检病理也发现黑质神经细胞存在明显的凋亡样 改变。本实验在对6 0 H D A 导致P C I 2 死亡的实 质进行研究，结果表明6 0 H D A 能够导致P C I 2 细 胞凋亡，在一定浓度范围内随浓度增高细胞凋亡数 增多。近年来，一些研究表明P D 患者脑黑质部位 D A 能神经元具有细胞凋亡的形态及生化特征u 1 ， 为细胞凋亡参
9、与P D 发病机制提供了直接依据。 细胞凋亡是细胞在各种死亡信号刺激后发生的 一系列瀑布式激活的主动性细胞死亡过程 8 。研究 显示B c l 家族成员与细胞凋亡密切相关，是生理性或 病理性神经元死亡的关键因子。B c l 一2 蛋白在P D 患 者基底节区比正常同龄人群明显增高，被认为是患者 自身抗活性氧的一种防御机制。B c l - 2 基因作为B c l 家族中抗凋亡的代表，更是近年来研究的热点之一。 B c l 家族的两个重要成员B a x 和B c 卜2 能影响线粒体 膜电势的渗透 9 。B a x 是蛋白质B c l 一2 家族中的促凋 亡成分，通过促进细胞色素C 的释放从线粒体膜
10、间空 隙进入细胞只，导致C a s p a s e 激活细胞死亡而发挥主 要作用。而抗凋亡蛋白B c l - 2 可与促凋亡蛋白B a x 拮 抗，抑制细胞色素C 自线粒体释放至胞质，阻止细胞 色素C 对C a s p a s e 蛋白酶的激活，从而抑制凋亡。 B c l 一2 和B a x 比值( B c l - 2 B a x ) 能提示是否发生凋亡。 T a t t o n 等口叩通过研究P 5 3 一甘油醛一3 脱氢酶 ( G A P D H ) 一B A X 途径表明抑癌基因P 5 3 的降低引 起磷酸甘油醛脱氢酶( g l y c e r a l d e h y d ep h o
11、s p h a t e d e h y d r o g e n a s e ，G A P D H ) 活性增加，而G A P D H 可 增加线粒体的通透性，提高凋亡蛋白B a x 水平，降 低抗凋亡蛋白B c l 一2 、B c l X ( L ) 水平，这可能是P D 凋亡机制的基础。因此我们认为6 一O H D A 导致细 胞内B c l - 2 和B a x 蛋白的表达失衡，是导致黑质D A 能神经元凋亡的共同分子机制。 参考文献 1 S c h a p i r aA H E t i o l o g yo fP a r k i n s o n 7 Sd i s e a s eL J N
12、 e u r o l o g y 2 0 0 6 6 6 ( 1 0S u p p l4 ) ：S 1 0 一$ 2 3 2 B a k e rS A ，B a k e rK A ，H a g gT D o p a m i n e r g i cn i g r o s t r i a t a l p r o j e c t i o n sr e g u l a t en e u r a lp r e c u r s o rp r o l i f e r a t i o ni nt h ea d u l t n l o u s es u b v e n t r i c u l a rz o n
13、e J E u rJN e u r o s c i 2 0 0 4 ，2 0 ： 5 7 5 5 7 9 3 D a v i dR ，N i c h o l a sJ C ，M a r yC ，e ta 1 T h ei n t r a c e l l u l a ro x i d a t i o no f2 ，7 一出c h l o r o n u o r e s c i ni nm u r i n eTl y m p h o c y t e s 刀 3 讨论 F r e eR 8 d i 。lB i oM e d , 2 0 0 1 , 3 0 ( 1 ) ：8 2 2 8 2 8 细胞凋
14、亡又称为程序性细胞死亡( p r o g r a m m e d 43Riz。z。aionrdin。i。M。dea,Lu。pii。M。,=三：三兰。M。ito。ch。oglundr。：兰 c e l ld e a t h ) ，目前认识到细胞凋亡可能在某些神经 d 印1 e t i 。g 。g e n te t h a c r y n i ca c i d J JN e u r o ls d 2 0 0 3 2 0 7 ： 系统变性疾病中起着关键作用C 6 。在对P D 患者死 5 1 2 5 5 8 万方数据 生国实用神经疾病杂志约。旦年z 月多1 2 卷第3 期C h i n e s eJ
15、 o u r n a lo fP r a c t i c a lN e r v o u sD i s e a s e sF e b 2 0 0 9 ，V o L1 2N o 32 9 5 L i uX ，Z h uX T - R o l e so fp 5 3 ，c - M y c ，B c l 一2 ，B a xa n dc a s p a s e s i ng l u t a m a t e - i n d u c e da e u r o n a la p o p t o s i sa n dt h ep o s s i b l en e u r o p r o t e c t i v
16、em e c h a n i s mo fb a s i cf i b r o b l a s tg r o w t hf a c t o r J M o lB r a i nR e s 。1 9 9 9 ，7 1 ( 2 ) t 2 0 1 2 1 6 6 S a v i t zS I ，R o s e n h a u mD N LA p o p t o s i si sn e u r o l o g i c a ld i s e a s e s 口 N e u r o s u r g ，1 9 9 8 ，4 2 ：5 5 5 5 7 2 7 F M M B e U i s s i m oM
17、 I ，A n s e l m 十F r a n c iJ A ，e ta LC o m p a t i s O n o fb i l a t e r a l l y6 - 0 H D A - a n dM P T P - l e s i o n e dr a t s a sm o d e l so f t h ee a r l yp h a s eo fP a r k i n s o n sd i s e a s e ：h i s t o l o g i c a l n e u r o c h e m i c a l m o t o ra n dm e m o r ya l t e r a
18、t i o n s J N e u r o s e iM e t h - o d s ，2 0 0 5 1 4 8 。7 8 8 7 8 G o l s t e i nP C o n t r o U i n gc e l ld e a t h J S c i e n c e ，1 9 9 7 ，2 7 5 ( 5 3 0 3 ) ：1 0 8 1 1 0 8 2 9 L e v i t e sY A m i tT ，Y o u d i mM B ，e ta 1 I n v o l v e m e n to fp r o t e i nk i n a s eCa c t i v a t i o
19、na n dc e l ls u r v i v a l c e l lc y c l eg e n e si n g r e e nt e ap o l y p h e n o l ( 一) 一e p i g a l l o c a t e c h i n3 - g a l l a t en e u r o p r o - t e c t i v ea c t i o n J JB i o lC h e m ，2 0 0 2 2 7 7 ( 3 4 ) ：3 0 5 7 4 3 0 5 8 0 1 0 3 T a t t o nW G C h a l m e n s R e d m a nR
20、 ，B r o w nD e ta t A p o p t o s i si n P a r l d n s o n Sd i s e a s e ：s i g n a l sf o rn e u r o n a ld e g r a d a t i o n 刀 A n nN e u r o l ，2 0 0 3 ，5 3 ( S u p p l3 ) l $ 6 1 ( 收稿2 0 0 8 1 0 2 2 ) 2 型糖尿病患者C 肽与红细胞膜N a + - K + A T P a s e 及血浆 N O S 活性的关系 王漫丽1 张妍2 张苏河1 1 ) 郑州大学第二附属医院内分泌科郑州4
21、5 0 0 1 42 ) 河南中医学院郑州4 5 0 0 0 8 【摘要】 目的观察C 肽与2 型糖尿病患者红细胞膜A T P 酶及血浆N O S 活性的关系方法1 7 2 例实验对象分为健 康对照组、2 型糖尿病胰岛素组与口服药物组3 组，记录年龄、病程C 肽、空腹血塘、糖化血红蛋白等指标，酶比色法测定红细 胞膜N a + 一K + A T P a s e 及血浆N O S 水平并进行比较，分析其与C 肽等指标的相关性结果胰岛紊组N a + 一K + - A T P a s e 及 N O S 活性较1 2 1 服药物组低，P 0 0 5 ；胰岛素组红细胞膜N a + - K + - A T
22、 P a s e 及N O S 活性与C 肽水平呈正相关，与病程呈负相 关，1 2 服药物组N a + 一K + 一A T P a s e 及N O S 活性仅与C 肽水平呈正相关。结论C 肽参与了N a + - K + - A T P a s e 及N O S 活性的 维持，可能有延缓糖尿病微血管并发症的发生发展的作用。 【关键词】2 型糖尿病；C 肽；N a + 一K + A T P a s e ；N O S ；微血管并发症 【中图分类号】R 5 8 7 1【文献标识码】A【文章编号I1 6 7 3 5 1 1 0 ( 2 0 0 9 ) 0 3 0 0 2 9 0 3 长期以来C 肽一直
23、被认为是胰岛素生物合成 的副产物而没有其他生物活性。近年研究发现在机 体中存在C 肽受体并可与多种组织细胞，如胰岛肿 瘤细胞、肾小管细胞、皮肤成纤维细胞、隐静脉内皮 细胞膜上特异受体结合而发挥作用 1 ，C 肽能协助 胰岛素增强其降血糖效应 z 、促进骨骼肌对葡萄糖 和氨基酸的摄取利用、加速葡萄糖的转运率D 、舒张 血管“、改善红细胞变形性引、改善N a + K + 一A T P 酶活性 o - r 与细胞内C a 2 + 的浓度I s 等重要生物学效 应。 有研究发现N a + - K + - A T P 酶( N a + 一K + 一A T P a s e ) 及内皮型一氧化氮合酶( e
24、N O S ) 介导了C 肽 的某些作用，并认为它们的变化共同参与了糖尿病 ( D M ) 微血管并发症，如糖尿病神经病变的发生发 展。本实验即针对2 型D M 来探讨血浆C 肽水平 与红细胞膜N a + - K + - A T P a s e 活性及血浆N O S 活 性之间的相关关系，分析验证C 肽改善及延缓D M 通讯作者：张苏河，教授，硬导。郑州大学第二附属医院内分泌科 4 5 0 0 1 4 微血管并发症生物活性的存在并阐述其机制。 1 材料与方法 1 1 实验对象健康对照组4 2 例均来自年龄、性 别相仿的健康体检者，2 型D M 患者1 3 0 例来自郑 州大学第二附属医院内分泌
25、科的住院患者，根据 1 9 9 9 年w H O 专家委员会协商性报告予以确诊。 所有对象均无原发性心脏、肝脏、肾脏疾病，感染和 其他内分泌疾病，无糖尿病酮症等急性并发症，2 周 内均未使用血管活性物质，并排除最近1 个月内使 用可能影响红细胞膜N a + - K + - A T P a s e 及血浆 N O S 活性药物( 如洋地黄类、钙离子拮抗剂等) 的患 者。 1 2 标本采集所有对象均记录年龄、性别、体重 指数、病程等一般项目，采集晨起空腹血样测定血浆 C 肽浓度、胰岛素水平、血糖及糖化血红蛋白 ( H b A I c ) 浓度，余3 m l 备用检测红细胞膜N a + - K + 一 A T P a s e 及血浆N O S 活性，红细胞膜N a + - K + 一A T P a s e 及血浆N O S 活性测定应用酶比色法，严格按 照测定试剂盒说明书进行。 万方数据