CC创面覆盖物生物学评价研究.pdf

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1、C - C创面覆盖物生物学评价研究 * 姜华1贾文英1祝君梅1刘欣1聂卫1 程琳1史弘道1邓诗琳2 1 (天津市医药科学研究所,天津3 0 0 0 7 0 ) 2(天津市烧伤外科研究所,天津3 0 0 2 2 2 ) 摘要目前已有多种烧伤创面覆盖物,但除自体皮移植以外,还没有一种覆盖物能作为永久性创面覆盖物。近 2 0年来,开发和研究各种创面覆盖物并使之最终成为令人满意的永久性人体皮肤替代物已日益引起国内外学者的 关注。依据国家标准( G B / T1 6 8 8 6 . 1 - 1 9 9 7 )对医疗器械生物学评价的要求,我们对胶原-壳聚糖( C - C )创面覆盖物选 择( 1 )细胞毒

2、性试验; ( 2 )急性全身毒性试验; ( 3 )溶血试验; ( 4 )皮肤致敏试验; ( 5 )原发性皮肤刺激试验; ( 6 )热原试 验; ( 7 )遗传毒性试验,进行生物学安全性评价研究。结果显示: C - C创面覆盖物的各项生物学性能指标全部符合国 家标准要求,具有良好的生物相容性,无全身毒性和细胞毒性,无热源性、致敏性、刺激性,也无遗传毒性,是一种生 物相容性优良的C - C创面覆盖物。 关键词 C - C创面覆盖物 生物学评价医疗器械 B i o l o g i c a l E v a l u a t i o no f A r t i f i c i a l S k i nS u

3、b s t i t u t e J i a n gHu a 1 J i aWe n y i n g 1 Z h uJ u n me i 1 L i uX i n 1 N i eWe i 1 C h e n gL i n 1 S h i Ho n g d a o 1 D e n gS h i l i n 2 1( T i a n j i nI n s t i t u t e o fMe d i c a l a n dP h a r ma c e u t i c a l S c i e n c e ,T i a n j i n 3 0 0 0 7 0 , C h i n a ) 2( T i a

4、n j i nI n s t i t u t e o fB u r nS c i e n c e ,T i a n j i n 3 0 0 2 2 2 , C h i n a ) A b s t r a c t Mu l t i p l ek i n d so f Ar t i f i c i a l S k i nS u b s t i t u t ea r en o wa v a i l a b l e .Ho we v e r ,e x c e p t f o r t h eHo moS k i n G r a f tt h e r ei sn oAr t i f i c i a l S

5、 k i nS u b s t i t u t et h a tc a nb eu s e da sp e r ma n e n tAr t i f i c i a l S k i nS u b s t i t u t e .D u r i n gt h e p a s t2 0y e a r s ,mo r ea n dmo r es c h o l a r sa r o u n dt h ewo r l dh a v ee x p r e s s e di n c r e a s e di n t e r e s t si nt h er e s e a r c ha n d d e v

6、e l o p me n to fAr t i f i c i a l S k i nG r a f tt h a tc a nb eu t i l i z e da ss a t i s f y i n gp e r ma n e n tAr t i f i c i a l S k i nS u b s t i t u t e .We c o n d u c t e do u rr e s e a r c ho nt h eb i o l o g i c a l e v a l u a t i o no f me d i c a l d e v i c e so f C o l l a g

7、e n - C h i t o s a n ( C - C )Ar t i f i c i a l S k i n S u b s t i t u t ea c c o r d i n gt ot h eNa t i o n a l S t a n d a r d( G B / T1 6 8 8 6 . 1 - 1 9 9 7 ) .T h ef o l l o wi n ge x p e r i me n t swe r ec o n d u c t e d : ( 1 ) C y t o t o x i c i t y , ( 2 ) S y s t e mi ct o x i c i t

8、 y ( a c u t et o x i c i t y ) , ( 3 ) Ha e mo c o mp a t i b i l i t y , ( 4 ) S e n s i t i z a t i o n , ( 5 ) I n t r a c u t a n e o u s r e a c t i v i t y , ( 6 ) P y r o g e nt e s t , ( 7 ) G e n o t o x i c i t y .T h ee x p e r i me n tr e s u l t sd e mo n s t r a t et h a ta l lb i o l

9、 o g i c a lf u n c t i o n a l i n d e x e so f t h eAr t i f i c i a l S k i nG r a f t me e t t h eNa t i o n a l S t a n d a r d s .T h e r e f o r e ,wec o n c l u d et h a t C - CAr t i f i c i a l S k i n G r a f t i sc h a r a c t e r i s t i co f g o o db i o l o g i c a l c o mp a t i b i

10、l i t y .I t i sn o n - i r r i t a n t a n dh a sn os y s t e mi ca n dc e l l u l a rt o x i c i t y , n og e n o t o x i c i t y ,n op y r o g e n ,a n dn oa l l e r g e n . Ke yw o r d s C - CAr t i f i c i a l S k i nS u b s t i t u t eB i o l o g i c a l e v a l u a t i o nMe d i c a l d e v i

11、 c e s 1 前言 本项研究选用壳聚糖-胶原,复合制备具有三维 结构的创面覆盖物。胶原作为一种亲水性高聚物,具 有高张力,低延展性,可控制的交联度和生物降解等 性能。但由于胶原降解速度过快,强度过低,单纯制 *天津市科委重点基金项目( 0 2 3 8 0 3 0 1 1 ) 膜作为创面覆盖物,无法解决降解过快,强度过低的 弱点。壳聚糖是天然生物材料之一,以其生物相容性 优良,促进细胞生长,抗感染,强度高,可吸收降解的 性能,被用于烧伤治疗领域。由于壳聚糖在体内降解 缓慢,单纯以其制膜也有不利的一面 1 。本项研究是 将可吸收降解的医用生物材料“壳聚糖-胶原“按照 一定的比例,通过特定的工艺

12、制成一种具有透良好 气性、并可降解吸收的、具有三维结构的创面覆盖 生物医学工程学杂志 JB i o me dE n g = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = 2 0 0 6 ; 2 3 ( 2 ) :3 5 7 3 6 1 物。在创面覆盖物制作过程中可能有微量化学物品 的残留,因此我们参照 G B / T1 6 8 8 6 . 1 - 1 9 9 7 2 、 G B /

13、T 1 4 2 3 3 . 2 - 9 3 3 和 G B / T 1 6 1 7 5 - 1 9 9 6 4 的 有 关 规 定,对其进行生物学安全性评价研究。 2 材料和方法 2 . 1 细胞毒性试验 5 2 . 1 . 1 材料阴性对照样品为1 0 0mm2的聚乙烯 膜圆片,阳性对照样品为1 0 0mm2的聚氯乙烯膜圆 片,表面经含1 %二丁锡二月桂酸的D OP涂布,试 验样品为C - C创面覆盖物1 0 0mm2的圆片。试验用 细胞株为我室传代培养的小鼠成纤维细胞( L 9 2 9 ) 。 R P MI 1 6 4 0培养液,内含1 5 %胎牛血清和适量青链 霉素。 2 . 1 . 2

14、 方法取对数生长期的L 9 2 9细胞,制成浓 度为3 1 0 5细胞数/ ml 的细胞悬液,接种于直径为 9 0mm的培养皿内, 1 0ml / 皿,放置5 %C O2培养 箱。3 7 培养2 4h后弃去原培养液,经琼脂培养基 覆盖,中性红染色,放置样品(每皿内同时放置对照 样品和待测样品) ,再置5 %C O2培养箱3 7 培养 2 4h后进行结果评价。 2 . 2 急性全身毒性试验 6 2 . 2 . 1 材料取C - C创面覆盖物6 0c m2,置有2 0 ml生理盐水的三角瓶, 经3 7 浸提7 2h制成浸提 液。动物为昆明种小白鼠,雌雄各半,体重1 7 2 3g 。 2 . 2 .

15、 2 方法将小鼠随机分为样品组和对照组,每 组5只。雌雄不拘。试验组由尾静脉恒速注射样品 组浸提液5 0ml / k g ,注射速度不超过0 . 1ml / s ,对 照组尾静脉恒速注射与浸提液同批号灭菌生理盐水 5 0ml / k g ,注射速度不超过0 . 1ml / s ,于注射后即刻 及4 、 2 4 、 4 8 、 7 2h观察和记录样品组和对照组动物 一般状态、毒性表现和死亡动物数。于注射前后及 2 4 、 4 8 、 7 2h称重并记录两组动物的体重变化。 2 . 3 溶血试验 4 、 5 2 . 3 . 1 材料将 C - C创面覆盖物6 0c m 2, 剪成5 c m3c m

16、的条状, 经清洗处理后置5 0ml三角烧瓶 中加入生理盐水1 0ml ,样品为3瓶。阴性对照样品 为同批号0 . 9 %氯化钠注射液,阳性对照样品为蒸 馏水。动物为健康家兔。 2 . 3 . 2 方法将C - C创面覆盖物、阴性对照、阳性 对照各组试液1 0ml分别置于5 0ml三角瓶中,每 组各设3个三角瓶,置于3 7 水浴中3 0mi n 。然后 在各瓶中加入新鲜稀释兔血0 . 2ml轻轻摇匀,在 3 7 水浴中继续保存6 0mi n ,取上清液分别于分光 光度计5 4 5n m波长测定吸光度。试验组和对照组 吸光度均取三瓶平均值,阴性对照瓶的吸光度应不 大于0 . 0 3 ,阳性对照组吸

17、光度应为0 . 8 0 . 3 。溶血 程度用溶血率( %)表示,溶血率按下式计算: 溶血率( %) = (试验样品的吸光度-阴性对照 的吸光度) / (阳性对照的吸光度-阴性对照的吸光 度) 1 0 0 % 2 . 4 皮肤致敏试验 6 2 . 4 . 1 材料选用健康白色豚鼠,雌雄均可,体重 3 0 0 3 5 0g ,样品浸提液制备同前。阴性对照组为 0 . 9 %生理盐水。阳性对照组为5 %甲醛溶液。佛氏 完全佐剂:自配。乳化剂制备:取等量的佛氏完全佐 剂与材料浸提液、 0 . 9 %生理盐水和5 %甲醛溶液分 别制备成乳化剂。 2 . 4 . 2 方法豚鼠背部剪毛4c m6c m区域

18、作为 注射区,常规消毒注射区,肩胛骨内侧从头向尾成对 地注射6个点,每点注射0 . 1ml ,分别为佛氏完全 佐剂、被试液( 0 . 9 %生理盐水、样品浸提液、 5 %甲醛 溶液) 、佛氏完全佐剂与被试液的混合乳化剂。试验 的第7d ,同区域剪毛,用1 0 %十二烷基硫酸钠涂布 各注射点,次日将2c m4c m滤纸分别浸入样品浸 提液和阴、阳性对照液中至饱和,将其贴敷于豚鼠背 部注射部位,封闭固定4 8h 。于诱导完成后第1 7d , 在豚鼠腹部剪毛2c m4c m,常规消毒。将2c m 2c m滤纸浸入样品浸提液、 阴性对照液和阳性对照 液中至饱和,分别贴敷于剪毛区,封闭固定2 4h ,将

19、 贴敷物取下后1 、 2 4 、 4 8h观察贴敷处红斑、水肿的 情况并记分,如激发部位记分为2或大于2 ,则为致 敏。 2 . 5 原发性皮肤刺激试验 7 2 . 5 . 1 材料将 C - C创面覆盖物制成2 . 5c m 2 . 5c m试片。阴性对照将2 . 5c m2 . 5c m滤纸块 浸泡于生理盐水中至饱和。动物为健康白色家兔,雌 雄不拘,体重2 . 5k g ,共3只动物。 2 . 5 . 2 方法试验前2 4h在兔脊柱两侧各剪3c m 3c m面积的去毛区, 间距1 0c m。 7 0 %乙醇消毒动 物背部去毛区。将C - C创面覆盖物试片和浸有生理 盐水的滤纸片贴敷于去毛区

20、皮肤处,然后用3c m 3c m纱布块覆盖, 最外层用胶布固定。贴敷固定2 4 h后, 除去贴敷物。观察除去贴敷物后1 、 2 4 、 4 8 、 7 2h 试验部位的红斑和水肿反应情况并记分。按记分情 况计算原发性刺激指数,原发性刺激指数小于0 . 4 为无皮肤刺激反应。 2 . 6 细菌内毒素试验 8 853 生 物 医 学 工 程 学 杂 志第2 3 = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = =

21、= = = = = = 卷 2 . 6 . 1 材料鲎试剂( T AL ) (批号9 9 1 0 1 0 ,灵敏度 0 . 2 5 E Uml -1,每支 0 . 1ml ;细菌内毒素工作标准 品( C S E )(批号9 9 1 1 0 0 ,每支5E U) ;细菌内毒素检 查用水( B E T水)(批号9 9 0 2 0 5 ,每支2ml ) ;以上试 剂均为福州东方试剂厂生产。样品浸提液制备同前。 2 . 6 . 2 方法 T AL灵敏度复核: 经天津市药品 检验所复核,结果符合规定。 细菌内毒素工作标准 品( C S E )稀释液的制备:取一支C S E +1 ml B E T水 5E

22、 Uml -1, 取5E Uml -1 0 . 5ml +2 . 0ml B E T水1E Uml -1, 取1E Uml -11 ml +1 ml B E T水0 . 5E Uml -1。( 每步稀释均混悬3 0 s ) 样品细菌内毒素试验方法:取复溶后的 T AL原安 瓿6支,其中2支加入0 . 1ml C - C创面覆盖物浸提 液作为供试品管, 2支加入0 . 1ml C S E稀释液作为 阳性对照管, 2支加入0 . 1ml B E T水作为阴性对照 管。将安瓿中溶液轻轻混匀后,垂直放入3 7 水浴 中,保温6 0mi n 。轻轻取出观察判断结果。 2 . 7 热原试验 8 2 . 7

23、 . 1 材料 Z R Y- 2 A型智能热原仪, 样品浸提 液制备同前,动物选用健康家兔。 2 . 7 . 2 方法与供试液接触的所有器具置电热干 燥箱内, 1 8 0 干烤2h 。用于热原检查的家兔,在试 验前3d预测体温,进行挑选。挑选试验的条件与检 查供试品的试验条件相同,但不注射药液,每隔3 0 mi n测量体温1次, 共测8次,体温均在3 8 . 0 3 9 . 6 的范围内,最高最低体温的差数均未超过 0 . 4 ,可供试验用。 试验方法:试验前2h停止喂食到试验完毕。禁 食2h后,将家兔装在固定器内,把Z R Y- 2 A型智能 热原仪上的探头插入家兔肛门,进行测温两次,间隔

24、0 . 5h ,将两次体温相差不超过0 . 2 的家兔进行试 验。自兔耳静脉缓缓注入温热至3 7 供试液,注射 剂量为1 0ml / k g ,注射后仪器自动测量体温,间隔 0 . 5h记录体温一次, 共记录6次。 2 . 8 致突变试验 9 2 . 8 . 1 材料试验菌株选用T A9 7 、 T A9 8 、 T A1 0 0 和T A1 0 2由本室提供。基因型鉴定, S 9 mi x及各种 试验用培养基均按标准执行。样品浸提液制备同前。 分别制成浸提原液, 1 / 5原液和1 / 2 5原液三种浓 度。 2 . 8 . 2 方法用平皿掺入法,各个浓度三个平皿, 在加 S 9mi x和不

25、加S 9mi x的情况下,用T A9 7 、 T A9 8 、 T A1 0 0和T A1 0 2四种菌株分别对样品三种 不同浓度进行Ame s试验,同时按照要求设二甲基 亚 砜 和 生 理 盐 水 为 阴 性 对 照 组,非 活 化 试 验 用 D e x o n做阳性对照组, 活化试验用二氨基芴作阳性 对照组,试验平皿在3 7 下培养4 8h ,计数每平皿 的回变菌落数。 3 结果 3 . 1 细胞毒性试验结果 C - C创面覆盖物细胞毒性试验结果见表1 。 表1 C - C创面覆盖物细胞毒性试验结果 T a b l e1 R e s u l t s o f t e s t f o rc

26、y t o t o x i c i t yo f C - CA r t i f i c i a l S k i nS u b s t i t u t e 组别样品数区域内情况( Z )细胞溶解( L ) R =Z / L 阴性样品 6 样品下细胞形态及着色良好。未见 0 / 0 检测样品 1 2 样品下细胞形态及着色良好。未见 0 / 0 阳性样品 6 样品下及周边平均3 . 3 mm处细胞全部脱色、圆缩。 2 5 %2 / 2 结果显示, C - C创面覆盖物与阴性样品的细胞 毒性反应无差异,即无细胞毒性,符合G B / T1 6 8 8 6 . 5 - 1 9 9 7标准规定。 3 . 2

27、 急性全身毒性试验结果 分别在4 、 2 4 、 4 8 、 7 2h观察期内, C - C创面覆盖 物组与对照组一般状况良好,活动、食欲正常,呼吸 平稳,无惊厥、瘫痪和死亡等毒性反应,动物体重日 渐增加趋势。试验前、后动物体重变化经S P S S软件 分析,结果见表2 。 表2对照组和样品组动物体重变化记录 T a b l e2 C h a n g e s i na n i ma l w e i g h t o f t h en e g a t i v ec o n t r o l g r o u pa n dt e s t s a mp l eg r o u p 分组动物数(只) 试验前(

28、 x - s ) ( g ) 试验后( x - s ) 2 4h 4 8h 7 2h 对照组 51 9 . 4 0 . 81 9 . 4 1 . 0 22 0 . 0 1 . 2 62 0 . 6 1 . 5 0 样品组* 51 8 . 6 1 . 21 8 . 6 1 . 2 01 9 . 6 1 . 6 22 1 . 0 1 . 4 1 *与对照组比较P 0 . 0 5 953 第2期姜华等。 C - C = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = =

29、 = = = = = = = = = = = = = = = = = = = 创面覆盖物生物学评价研究 结果显示, C - C创面覆盖物的急性全身毒性试 验合格,符合G B / T1 6 8 8 6 . 1 1 - 1 9 9 7的规定。 3 . 3 溶血试验结果 C - C创面覆盖物溶血试验各组吸光度值见表 3 。 表3 C - C创面覆盖物溶血试验结果 T a b l e 3R e s u l t so fh a e mo l o y s i st e s to n C - C A r t i f i c i a lS k i n S u b s t i t u t e 组别 吸光度值 1

30、瓶2瓶3瓶 平均值 阴性对照组 0 . 0 1 80 . 0 1 70 . 0 1 90 . 0 1 8 阳性对照组 0 . 7 0 40 . 6 9 40 . 7 1 00 . 7 0 3 试验样品组 0 . 0 3 30 . 0 3 40 . 0 3 80 . 0 3 5 结 果 显 示, C - C创 面 覆 盖 物 的 溶 血 率 为 2 . 4 8 %,符合G B / T1 6 1 7 5 - 1 9 9 6标准中溶血率不大 于5 %的规定。 3 . 4 致敏试验结果 C - C创面覆盖物贴敷物取下后1 、 2 4 、 4 8h观 察,未见红斑、水肿现象,与0 . 9 %生理盐水(阴

31、性对 照组)无明显差异,致敏率为0 %。而5 %甲醛溶液 组(阳性对照组)出现红斑、水肿,甚至出现硬结和焦 痂的现象,致敏率为1 0 0 %。结果显示, C - C创面覆 盖物无皮肤致敏反应,符合G B / T1 4 2 3 3 . 2 - 1 9 9 3的 规定。 3 . 5 原发性皮肤刺激试验结果 除去贴敷物后1 、 2 4 、 4 8 、 7 2h ,对照组和C - C创 面覆盖物组试验局部及周围皮肤组织均无红斑、水 肿反应,原发性刺激指数为0 。结果显示,C - C创面 覆盖物对皮肤无刺激性,原发性皮肤刺激试验合格, 符合G B / T1 6 1 7 5 - 1 9 9 6的规定。 3

32、 . 6 细菌内毒素试验结果 结果表明,阳性对照2管均为( +) ,阴性对照2 管均为( -) ,供试品2管均为( -) ,表明C - C创面 覆盖物内毒素限量不超过0 . 5 E U/ ml ,符合 G B / T 1 6 8 8 6 . 1 1 - 1 9 9 7的规定。 3 . 7 热原试验结果 C - C创面覆盖物热原试验结果见表4 。 表4 C - C创面覆盖物热原试验结果 T a b l e4 R e s u l t s o f p y r o g e nt e s t o nC - CA r t i f i c i a l S k i nS u b s t i t u t e 兔

33、号 ( #) 体重 ( k g ) 注射前体温( ) 12 平均 注射剂量 ( ml ) 注射后体温( ) 12 平均 温差 ( ) 12 . 1 03 9 . 2 03 9 . 1 03 9 . 1 52 1 . 03 9 . 2 03 9 . 2 03 9 . 2 00 . 0 5 21 . 9 53 9 . 2 03 9 . 1 03 9 . 1 51 9 . 53 9 . 5 03 9 . 6 03 9 . 5 50 . 4 5 31 . 9 03 9 . 3 03 9 . 3 83 9 . 3 41 9 . 03 9 . 0 53 9 . 3 03 9 . 3 00 . 0 0 结果

34、显示,三只家兔体温升高均在0 . 6 以下, 并且3只家兔体温升高总数为0 . 5 ,在1 . 4 以 下,该样品符合热原检查的规定。 3 . 8 致突变( A me s )试验结果 C - C创面覆盖物致突变( Ame s ) 试验结果见表 5 。 表5 C - C创面覆盖物致突变试验结果 T a b l e5 R e s u l t s o f A me s t e s t o nC - CA r t i f i c i a l S k i nS u b s t i t u t e 供试品 T A9 7 -S 9 mi x+S 9 mi x T A9 8 -S 9 mi x+S 9 mi

35、x T A1 0 0 -S 9 mi x+S 9 mi x T A1 0 2 -S 9 mi x+S 9 mi x 二甲基亚砜组 6 8 . 5 1 1 . 9 6 1 1 7 . 5 5 0 . 0 02 6 . 5 5 . 3 23 0 . 0 4 . 0 82 0 7 . 8 3 1 . 4 61 2 9 . 8 2 2 . 1 3 2 1 3 . 3 5 5 . 7 93 4 1 . 0 5 3 . 6 1 生理盐水组 7 7 . 6 8 . 0 5 1 1 4 . 0 3 1 . 4 12 6 . 5 2 . 8 93 8 . 0 7 . 1 21 9 3 . 0 1 0 . 9 5

36、1 7 6 . 0 4 2 . 0 7 2 6 9 . 8 4 2 . 1 13 0 1 . 3 2 5 . 2 9 1 / 2 5原液组9 2 . 0 1 3 . 8 1 1 7 . 0 5 2 . 8 53 0 . 4 6 . 1 23 8 . 0 3 . 3 71 8 6 . 7 2 4 . 5 21 8 1 . 5 3 4 . 4 5 2 9 5 . 0 5 3 . 0 62 7 6 . 8 1 7 . 6 9 1 / 5原液组7 7 . 6 8 . 8 8 1 2 1 . 3 3 1 . 3 43 0 . 2 5 . 8 94 2 . 5 8 . 2 72 0 2 . 4 1 8 .

37、 5 61 6 6 . 3 4 4 . 8 2 2 7 7 . 2 4 4 . 2 92 9 0 . 8 1 8 . 9 3 1 / 1原液组8 5 . 4 2 6 . 1 4 1 0 7 . 5 3 9 . 3 72 9 . 2 5 . 6 33 6 . 8 8 . 5 41 9 4 . 2 2 9 . 3 01 7 0 . 0 3 5 . 1 3 2 6 0 . 5 6 4 . 7 12 5 8 . 8 4 5 . 0 3 敌克松组 1 0 0 0 + 1 5 0 0 + 1 0 0 0 + 1 5 0 0 + 4 0 0 + 2 -氨基芴组1 5 0 0 + 2 0 0 0 + 8 0

38、0 +4 0 0+ 注: -S 9 mi x为不加S 9 mi x ; +S 9 mi x为加S 9 mi x 结果显示, C - C创面覆盖物浸提液及稀释的 1 / 5 、 1 / 2 5剂量组与阴性对照组在活化及非活化条 件下,回变菌落数无显著性差异( P0 . 0 5 ) ,而阳性 对 照组回变菌落数明显高于阴性对照组( P0 . 0 1 ) ,各剂量组间无量效反应关系。表明C - C创面覆 盖物在此试验条件下对鼠伤寒沙门氏菌无诱变作 用。 4 讨论 国外开展人工皮肤的研究较国内更早,目前人 063 生 物 医 学 工 程 学 杂 志第2 3 = = = = = = = = = = =

39、= = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = 卷 工皮肤研究已进入组织工程化产品阶段,以胶原硫 酸软骨素壳聚糖为主要组份制成各种人工真皮支 架,并与纤维细胞/表皮细胞复合培养形成组织工程 化皮肤 1 0 ,自1 9 8 7年美国科学家提出组织工程这 个概念后,目前已成为生命科学领域的研究热点,相 关的研究涉及到各个方面 1 1 。其核心是应用工程学 的原理和方法与生命科学相结合,发展能恢复、保持 或改善功能的生物替代品。近

40、年来组织工程皮肤已 取得可喜的进步并初步应用于临床 1 2 。所应用的组 织工程皮肤移植后并不引发临床可见的排斥反应。 但一般认为它将最终为受体自己的组织所取代;另 一方面,目前的体外培养过程周期仍较长,难以及时 满足临床需要,移植中也发现由于组织工程皮肤没 有血管系统供给营养,表面的上皮容易坏死脱落。 本项研究是将可吸收降解的医用生物材料“壳 聚糖-胶原“按照一定的比例关系,通过特定的工艺 制成一种具有透气性良好,并可降解吸收的具有三 维结构的创面覆盖物。并依据中华人民共和国对医 疗器械生物学评价的要求( G B / T1 6 8 8 6 . 1 - 1 9 9 7 ) ,选 择( 1 )细

41、胞毒性试验; ( 2 )急性全身毒性试验; ( 3 )溶 血试验; ( 4 )皮肤致敏试验; ( 5 )原发性皮肤刺激试 验; ( 6 )热原试验; ( 7 )遗传毒性试验对“ C - C创面覆 盖物“进行毒理学和组织相容性评价研究。结果显示 “ C - C创面覆盖物“ 的各项生物学性能指标,全部符 合国家标准要求,具有良好的生物相容性,为临床使 用提供了可靠的技术数据和安全保证。 参考文献 1Ya n g J , X i a o S C ,X i a Z F ;P r o g r e s si n t h e f i e l d o fb u r n d r e s s i n g . F

42、o r e i g n Me d i c a lS c i e n c e sB i o me d i c a lE n g i n e e r i n g F a s c i c l e ,2 0 0 1 ; 2 4 ( 5 ) :2 6 7 杨 郡,肖仕初,夏照帆.烧伤创面 覆盖物研究进展.国外医学生物医学工程分册, 2 0 0 1 ; 2 4 ( 5 ) : 2 2 6 2B i o l o g i c a l e v a l u a t i o no f me d i c a l d e v i c e s- P a r t 1 : E v a l u a t i o na n d t

43、 e s t i n g( I S O1 0 9 9 3 - 1 : 1 9 9 7 ) 医疗器械生物学评价-第一部分: 评价与试验.中华人民共和国国家标准G B / T1 6 8 8 6 . 1 - 1 9 9 7 3I n f u s i o n ,t r a n s f u s i o n ,i n j e c t i o ne q u i p me n t f o r me d i c a l u s e - P a r t 2 : B i o l o g i c a l t e s t me t h o d 医用输液、输血、注射器具检验方法- 第2部分:生 物试 验方 法 中 华人

44、民共 和国 国家 标准 G B / T 1 4 2 3 3 . 2 - 1 9 9 3 4Or g a n i cs i l i c o nma t e r i a lf o rme d i c a lu s e - B i o l o g i c a le v a l u a t i o n t e s t me t h o d s 医用有机硅材料生物学评价试验方法.中华人民 共和国国家标准G B / T1 6 1 7 5 - 1 9 9 6 5B i o l o g i c a le v a l u a t i o no fme d i c a ld e v i c e s- P a r

45、t4 :S e l e c t i o no f t e s t sf o r i n t e r a c t i o n s wi t hb l o o d ( I S O1 0 9 9 3 - 4 : 2 0 0 2 ) 医疗器械 生物学评价-第4部分:与血液相互作用试验选择 中华人民共 和国国家标准G B / T1 6 8 8 6 . 4 - 2 0 0 3 6B i o l o g i c a le v a l u a t i o n o fme d i c a ld e v i c e s- P a r t5 :T e s t sf o r c y t o t o x i c i t

46、 y : i nv i t r ome t h o d s( I S O 1 0 9 9 3 - 5 : 1 9 9 2 ) 医疗器械 生物学评价-第5部分:细胞毒性试验:体外法.中华人民共和 国国家标准G B / T1 6 8 8 6 . 1 - 1 9 9 7 7B i o l o g i c a le v a l u a t i o no fme d i c a ld e v i c e s- P a r t1 0 : T e s t sf o r i r r i t a t i o na n ds e n s i t i z a t i o n( I S O 1 0 9 9 3 - 1

47、 0 : 1 9 9 5 ) 医疗器械生 物学评价-第1 0部分:刺激与致敏试验.中华人民共和国国家 标准G B / T1 6 8 8 6 . 1 0 - 2 0 0 0 8B i o l o g i c a le v a l u a t i o no fme d i c a ld e v i c e s- P a r t1 1 : T e s t sf o r s y s t e mi ct o x i c i t y( I S O1 0 9 9 3 - 1 1 : 1 9 9 3 ) 医疗器械生物学评价- 第1 1部分:全身毒性试验.中华人民共和国国家标准G B / T 1 6 8 8 6

48、 . 1 1 - 1 9 9 7 9B i o l o g i c a l e v a l u a t i o n o f me d i c a l d e v i c e s - P a r t 3 :T e s t s f o r g e n o t o x i c i t y ,c a r c i n o g e n i c i t ya n dr e p r o d u c t i v et o x i c i t y( I S O 1 0 9 9 3 - 3 : 1 9 9 2 ) 医疗器械生物学评价-第3部分:遗传毒性、致 癌 性 和 生 殖 毒 性 试 验.中 华 人 民 共 和

49、 国 国 家 标 准 G B / T 1 6 8 8 6 . 3 - 1 9 9 7 1 0X i eJ L ,L i T Z . T h ep r o g r e s so f s t u d yo nt h eb i o l o g yb e h a v i o r o fe p i d e r ma ls t e m c e l la st h es e e dc e l lo ft i s s u ee n g i n e e r i n g s k i n . F o r e i g n Me d i c a l S c i e n c e s B i o me d i c a l E n g i n e e r i n g F a s c i c l e ,2 0 0 1 ; 2 4 ( 6 ) :2 5 2 谢举临,利天增.组织工程皮肤的 种子细胞-表皮干细胞的生物学行为研究进展.国外医学生 医学工程分册, 2 0 0