《HCVRNA POSITIVITY IN PERIPHERAL BLOOD MONONUCLEAR CELLS OF PATIENTS WITH CHRONIC HCVINFECTION DOES IT REALLY MEAN VIRAL REPLICATION.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《HCVRNA POSITIVITY IN PERIPHERAL BLOOD MONONUCLEAR CELLS OF PATIENTS WITH CHRONIC HCVINFECTION DOES IT REALLY MEAN VIRAL REPLICATION.pdf（7页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、POf h2 3 4 51 3 e i j h l g1 0 0 0 2 3 ( I m F a x0 0 8 6 1 0 6 5 8 9 1 R 9 3T e l0 0 8 61 06 5 8 9 1 9 0 1 E n 1 w q d p u b l i cb r a w do r g H C V - R N A p o s i t i v i t y i n 唰。黼翟。型譬琶黧翟。毒 嘶y r 礼t 2 0 0 1b yr h cW J GP f I s “1 0 0 7 9 3 2 7 p e r i p h e r a l b l o o d m o n o n u c l e a
2、rc e ll so f p a t i e n t sw i t hc h r o n i cH C V - i n f e c t i o n ：d o e si tr e a l l ym e a nv i r a lr e p l i c a t i o n ? V o l k e rM e i e r ，s a b i n eM m m ，P e r d i t aw i e t z k e B 阳u na n dG uJ i a n oR a m a d o r i 愆_ s j n S u b j e c th e a d i n g sh e p a t i t i sC l
3、i k ev i r u s e s ； h e p a t i t i sC c h r o n i c ；R N A ，v i r a l b l o o d ；v i r u s r e p l i c a t i o n ；n r o n o c y t e s ；i n t e r f e r o na l p h a t h e r a p e u t i c u s e ；p o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n 粼挑h mS , “5 霉”? ”“。H C V - t h R N Ap o s l t ：l V4winper “ I
4、 ：n e r aI O O dm o n or l u oe a rc e i I o fp a t i e n t sw i C h H G V E St n m n ： 2 f n 0 0 l f e c 州t 0 2 n ) ：2 2 ：d o e s 茹 ) e a U y m e a n 训r a 圳忙a t ”n ? 枷+ ，曲m 删 A D S t r a c t A I MT oa n a l y z et h ea s s o c i a t i o no fH C V - R N A w i t hp e r i p h e r a lb l o o dm o n o n
5、 u c l e a rc e l l s ( P B M C ) a n dt oa n s w e rt h eq u e s t i o nw h e t h e rH C V 一刚A p o s i t i v i t yi nP B M Ci sd u et ov i r a Ir e p l i c a t i o n M E T H O D SH C V R N Aw a sm o n i t o r e di ns e r u m a n dP B M Cp r e p a r a t i o n sf r o m1 5p a t i e n t sw i t h c h r
6、o n i cH C Vi n f e c t i o nb e f o r e ，d u r i n ga n da l t e r a nl F N - at h e r a p yu s i n gan e s t e dR T P C R t e c h n i q u e I nas e c o n da p p r o a c h ，P B M Cf r O m h e a l t h yd o n o r sw e r ei n c u b a t e di nH C Vp o s i t i v e p l a s m a R E S U I T SI nt h el F N
7、- ( xr e s p o n d i n gp a t i e n t s ， H C V - R N Ad i s a p p e a r e df i r s tf r O mt o t a IR N A p r e p a r a t i O n sO fP B M Ca n dt h e nf r O ms e r u m I n c o n t r a s t i n r e l a p s i n gp a t i e n t s ，H C V - R N A r e a p p e a r e df i r s ti ns e r u ma n dt h e ni nP B
8、M C A q u a n t i t a t i v ea n a l y s i s o ft h eH C V - 开N A c O n c e n t r a “o ni ns e r u mw a sp e r f o r m e db e f o r e a n da f t e rt r a n s i t i o nf r o md e t e c t a b l et on o n - d e t e c t a b l eH C V R N Ai nP B M C - R N Aa n dv i c e v e r s a W h e nH C V - 只N Aw a sd
9、 e t e c t a b l ei nP B M C p r e p a r a t i o n s 。t h eH C Vc o n c e n t r a t i o ni ns e r u m w a ss i g n i f i c a n t l yh i g h e rt h a nt h es e r u mH C V - R N A c o n c e n t r a t i o nw h e nH C V - R N Aj nP B M Cw a sn o t d e t e c t a b l e F u r t h e r m o r e ，a tn ot i m e
10、d u r i n gt h e o b s e r v a t i o n p e r i o d w a sH C V s p e c i f i c R N A o b s e r v e di nP B M C i fH C V R N Ai ns e r u mw a s u n d e rt h ed e t e c t i o n m i t 1 n c u b a t i o no fP B M C G e o r g 一U 目u s t U n i v e r s i t a t 9 6 t t i n g e n ， Z e n t r u mi n n e r em e
11、d i z i n A b t e i l u n gF U rG a s t r o e n t e r o l o g i eD a dE n d o k r i n o l O g i e ，R O b e r t K o c h - S t r a p e4 0 ，3 7 0 7 5G 6 t t i n g e n ，G e r m a n y $ t a p t ：o r t e db yag 瑚to fD 粘【娜4 0 2T e i l p r o j e l iC I ( H i h m ) ) a n db ya g r a n to f o f f m a n nL aR
12、o c h e ( 缸e n ；a e h w 帕细，G e t a w a y ) p a r to ft h e m ah a sb e e np r e s e n t e da 8p o s t ：“ a t ：t h e1 9 9 9E A - = e e t i u gi n N e a p l e s C o r r e s p o n d e n c et o ：O R a m a d o r l ，MD ，G e o r g A u g u s t U n i v e r s i l 自i t G 6 t t i n g e n ，Z e n t r u m1 n T l c
13、 r cm e d i z i n ，A b t c i l u u gF u rG a s r r o P n t e r o I o o U n dE n d o k n n o l o 矗e ，R o b e r t K o c h S w a f l c4 0 ，3 7 0 7 50 6 t t i n g u n ， G e r m a n y R l _ 0 0 4 9 0 5 5 1 - 3 9 6 3 0 1 F a x0 0 4 9 0 5 5 1 3 9 8 5 9 6 E n t a i l g r a m a d o r e e d u n ig o c t f i n
14、 g e nd e R e c e i v e d2 0 0 1 0 2 0 6A c c e p t e d2 0 0 1 0 3 0 1 f r O mh e a l t h yd o n o r sw i t hs e v e r a ld i l u t i o n so f H C Vp o s i t i v ep l a s m af o rt w oh o u r ss h o w e ds c o n c e n t r a t i o n - d e p e n d e n tP C R - p o s i t i v i t yf o rH C V - 只N Ai nr
15、e i s o l a t e dP B M C C O N C L U S l 0 NT h ed e t e c t a b i I l t yo fH C V - R N Ai n t o t a IR N Af r O mP B M Cs e e m st od e p e n do nt h e H C Vc O n c e n t r a t j O ni ns e r u m C o n t a m i n a t i o no r p a s s i v ea d s o r p t i o nb yc i r c u l a t i n gv i r u sc o u l d
16、b e t h er e a s o nf o rd e t e c t i o no fH C V - R N Aj nP B M C p r e p a r a t i o n so fc h r o n i c a l l yi n f e c t e dp a t i e n t s 1 N T R o D U C T I o N H e p a t i t i sCv i r u s ( H C V ) s l r a n d e d p o s i t i v e 。s t ，r ，a n d F l a v i v i r i d a e f a m i l y I t sa n
17、e n v e l o p e ds i n g l e - R N Av i r u so ft h e i st h e m a j o ra g e n t r e s p o n s i b l e f o r 、p a r e n t e r a l l y t r a n s m i t t e dn o n A 一 o n Bh e p a t i t i s2 1 A c u t ei n f e c t i o nw i t hI I C Vi s o f t e nc l i n i c a l l ya s y m p t o m a t i ea n dt h ，em
18、a j o r i t yo f p a t i e n t sd c v e l o pac h r o n i ch e p a t i t i s 。“T r e a t m e n t w i t hi n t e r f e r o n “( I F Nn ) i nc o m b i n a t i o nw i t h r i b a v i r i n as y n t h e t i cg u a n o s i n ca m d o g u e ，i sn o w t h er e g i m e no fc h o i c ef o rp a t i e n t sc h
19、 r o n i c a l l y i n f e c t e d w i t h H C V i 4 一D u r i n gd r u g a d m i n i s t r a t i o n H C V R N Am a yd i s a p p e a rb o t hj n s e r u ma n di np e r i p h e r a lb l o o dm o n o n u c l e a rc e l l s ( P B M C ) ”J ，b u t t h e p r o p o r t i o n o f p a t i e n t s r e s p o n
20、 d i n gt o t h i st h e r a p yi nt e r m so fas u s t a i n e d v i r o l o g i c a Ir e s p o n s ev a r i e da r o u n d4 0 ，A b o u t1 5 2 0 o fH C Vi n f e c t e dp a t i e n t sp r o g r e s st oe n d - s t a g e 1 i v e rd i s e a s ew i t hc i r r h o s i sa n da l s o h e p a t o c e l l u
21、 l a rc a r c i n o m a L “ A f t e r o r t h o t o p i c l i v e rt r a n s D l a n t a t i o n ，r e i n f e c t i o no ft h eg r a f tw i t h H C Vi st h er u l e “l Z J I th a sb e e nh y p o t h e s i z e dt h a t v i r u sr e p l i c a t i o nt a k e sp l a c ea te x t r a h e p a t i cs i t e
22、s P o s s i b l es i t e sa r et h ed i f f e r e n tc e l lf r a c t i o n s ( P B M C ，g r a n u l o c y t e s o rr e db l o o dc e l l s p e l l e t s ) o f t h ep e r i p h e r a lb l o o d 。1 3 1 “o rt i s s u c sl i k e l y m p h n o d e s ，p a n c r e a s ，_ a d l e n a l g l a n dt h y r o i
23、 d ，b o n e m a r r o wo rs p l e e n 。1 “I np a r t i c u l a r ，P B M C sh a v e b e a n s u g g e s t e d t of u n c t i o na sa u i m p o r t a n t c x t r a h e p a t i cr e s e r v o i r o ra sa p o s s i b l e s i t ef o r e x t r a h e p a t i c H C V r e p l i c a t i o n 【l b 一1 9 J h i s
24、a s s u m p t i o n w a sb a s e do nt h ed e m o n s t r a t i o no f n e g a t i v e s t r a n d H C V R N A t h e r e p l i c a t i v e i n t e r m e d i a t co fH C V i na s s o c i a t i o nw i t hP B M C f r o mH C Vi n f c c t e dp a t i e n t si nw l _ l o s es c r an e g a t i v e s t r a n
25、 dH C V R N Aw a sn o td e t e c t e d T h ep r e s e n c e 万方数据 M e i e rV ，e ta lP B M Cm a yn o tf u n c t i o na sar e s e r v o i rf o rH C V o f n e g a t i v e s t r a n d H C V R N Ai i l e x t r a h e p a t i c c o m p a r t m e n t sb a s e do nP C Rd e t e c t i o na s s a y sh a s b e e
26、n s u g g e s t e d i n m a n yr e p o r t s w i t h v e r y s i g n i f i c a n t l yd i f f e r e n td e t e c t i o nr a t e s ( f r o m0 t o 1 0 0 ) A ne x t e n s i v ea r t e f a c t u a ld e t e c t i o no f n e g a t i v e s t r a n dH C V R N Ad u et os e l f p r i m i n ga n d m i s p r i
27、m i n ge v e n t si sp o s s i b l yr e s p o n s i b l ef o rt h e s e d i f f e r e n c e sT h i si se s p e c i a l l yt r u ew h e na5 。一 n o n c o d i n g r e g i o np r i m e rp a i ri su s e d m 2 O t h e ra u t h o r sh a v ea l s os h o w nt h a tt h e p r e s e n c eo fH C Vs e q u e n c e
28、 si nP B M Ci sc o m p a t i b l e w i t hp a s s i v ev i r u sa d s o r p t i o nv i as p e c i f i cr e c e p t o r s o rw i t hc o n t a m i n a t i o nb y c i r c u l a t i n gv i r u sL “。 H C Vh a sb e e nf o u n dt ob i n dt o1 0 W d e n s i t y l i p o p r o t e i n s ( L D L ) a n dt h e r
29、 e f o r e ，e n t e rt h eP B M C v i aL D L r e c e p t o r 【2 4 一“”P r i e r ia n dc o l l e a g u e s d e m o n s t r a t e dt h eb i n d i n go fH C Vt oC D8 1 ，a2 5 k Dm o l e c u l eo ft h e t e t r a s p a n i ns u p e r f a m i l y e x p r e s s e di nv a r i o u se e l lt y p e si n c l u d
30、 i n gh e p a t o c y t e s a n dB l y m p h o c y t e s “ T h ep r e s e n t s t u d ya i m s t o a n a l y s et h e a s s o c i a t i o no fH C V ，R N Aw i t hP B M Ca n dt oa n s w e r t h eq u e s t i o nw h e t h e rH C V R N Ap o s i t i v i t yi nP B M C i sr e a l l yd u et ov i r a lr e p l
31、 i c a t i o n T h e r e f o r e ，H C V R N Ad e t e c t a b i l i t yw a ss e r i a l l ym o n i t o r e di nb o t h t h es e r u ma n dP B M Cp r e p a r a t i o n sf r o m1 5p a t i e n t s w i t hc h r o n i cH C Vi n f c c t i o nb e f o r e d u r i n ga n d a f t e rI F N dt h e r a p yI nf ls
32、 e c o n da p p r o a c h ，P B M C f r o mh e a l t h yd o n o r sw e r ei n c u b a t e df o ras h o r tt i m e i nH C V R N Ap o s i t i v e p l a s m a t oi n v c s t i g a t et h e p o s s i b i l i t yo fa na t t a c h m e n to fH C V t oP B M C M A T E R I A L SA N DM E T H o D S P a l i e n t
33、 s At o t a lo f 1 5p a t i e n t s ( 8w o m e na n d7m e n ；m e a n a g e5 7 0y e a r s ；a g er a n g e4 1 7 9y e a r s ) ( T a b l e1 ) i n f e e t e dw i t hH C Va sd i a g n o s e db yt h ep r e s e n c eo f a n t i H C Va n t i b o d i e sa n dH C V R N Ai ns e r u mw e r e s t u d i e dc o n s
34、 e c u t i v e l y A l lw e r ea n t i H C Va n dH C V R N Ap o s i t i v ef o ra t1 e a s ts i xm o n t h s T h cd e g r e eo f t h el i v e ri n j u r yw a se s t i m a t e dh i s t o p a t h o l o g i c a 儿v a c c o r d i n gt oe s t a b l i s h e dc r i t c r i a 【2 5 2 ，P a t i e n t sw i t h a
35、 c t i v eh e p a t i t i sBv i r u so rh u m a ni m m u n o d e f i c i e n c y v i r u si n f e c t i o na n dt h o s ew i t hc o n t i n u e da l c o h o lo r d r u ga b u s ew e r ee x c l u d e d T h ep a t i e n t sr e c e i v e da n l F N 吨t h e r a p y ( 3 1 0 0t o6 1 0 0I UI F N a 2 。t h r
36、e e t i m e sw c c k l yt o6 1 0 6I UI F N a 2 。d a i l y ，R o f e r o n A ，H o f f m a n nL aR o c h e ，B a s e l ，S w i t z e r l a n d ；d o s e s w e r ea d a p t e di n d i v i d u a l l yb a s e do nw e l l b e i n ga n d r e s p o n s ep a r a m e t e r s ) o v e r ap e r i o do f6t o1 7 m o n
37、 t h s B l o o ds a m p l e sw e r et a k e nt w i c eb e f o r et h e t h c r a p y ，m o n t h l yd u r i n gt h e r a p ya n da f t e rt h e r a p y S e r u ms a m p l e sa n dP B M Cp r e p a r a t i o n sw e r es t o r e d a t一8 0 0 c A d d i t i o n a l l y b l o o ds a m p l e sw e r e c o l l
38、 e c t e df r o mt h r e eh e a l t h yd o n o r s ( V I M ，N Na n d B S ) f o ri s o l a t i o no fH C Vn e g a t i v eP B M Ca n df r o m t h r e eu n t r e a t e dp a t i e n t s ( E Z ，S Ga n dU P ) w i t h c h r o n i cH C Vi n f c c t i o nf o ri s o l a t i o no fH C V p o s i t i v ep l a s
39、m a T h es t u d yw a sa p p r o v e db yt h e l o c a le t h i c sc o m m i t t e eo ft h e G e o r g - - A u g u s t - U n i v e r s i t y ，G 6 t t i n g e n ，G e r m a n y 1 a h l e1 C l i n i c M v i r o l o g i c a la n dt h e r a p e u t i cp a r a m e t e r so f1 2 p a t i e n t sw i t hc h r
40、 o n i cH C Vi n f e c t i o na n dt r e a t e dw i t h ? “啦a A L T ：a b m i n ct r a n s a n a i n a s e ；M ：n _ I a l e ：F ：f & n N e ；nd ：n o t d e t e r r n i n e d ；r e s l l m d ：r e s l x m d e r ；r e l a p s ：p e l a p s e r P r e p a r a t i o no fP 8 M c H u m a nP B M C sw e r ei s o l a
41、t e df r o mp e r i p h e r a lb l o o d b y F i c o l l d e n s i t yg r a d i e n t c e n t “f u e a t i o n l 川J R e s i d u a lr e db l o o dc e l l sw e r eh y p o t o n i c a l l yl y s e d a n dc e l l sw e r ew a s h e dt h r e et i m e sw i t hp h o s p h a t e b u f f e r e ds a l i n e (
42、P B S ) p H7 3 C c l lp r e p a r a t i o n s w e r er o u t i n e l ya s s e s s e df o rv i a b i l i t y ( 9 5 ) b y t r y p a nb l u ed y ee x c l u s i o n T y p i c a l l y aP B M C p r e p a r a t i o nc o n s i s t e do f 9 8 l y m p h o c y t e sa n d m o n o c yL o sa n d 2 g r a n u l o c
43、 y t e sa sd e t e r m i n c db y m o r p h o l o g y o fe e l l ss t a i n e d a c c o r d i n g t o P a p p e n h e i m 1 S O l a t i o no ft o l a Ic e l l u l a fR h I A P B M C so b t a i n e df r o m a p p r o x i m a t e l y 3 0m L p e r i p h e r a lb l o o dw e r et a k e nu pi 1 13m Lg u a
44、 n i d i n i u m i s o t h i o c y a n a t e ( G T C ) b u f f e r _ 、“T h cm a t e r i a lw a s s u b j e c t e dt os h e a r i n gf o r c e sb yd r a w i n gi tr i g o r o u s l y t h r o u g h ac a p i l l a r y n e e d l e S u b s e q u e n t l y ，t o t a l c e l l u l a rR N Aw a si s o l a t e
45、 db yc e s i u mc h l o r i d e ( C s C l ) d e n s i t yg r a d i e n t c e n t r i f u g a t i o n l 0 2 1a n dt h eR N A c o n c e n t r a t i o nw a sd e t e r m i n e dp h o t o m e t r i c a l l y D e t e c t i o na n dq u a n t i f i c a t i o no fs e r u mH C VR N A H C Vs p e c i f i cR N A
46、w a se x t r a c t e df r o ms e r u m s a m p l e s ( 1 4 0 ”L ) u s i n gQ l A a m pv i r a lR N AK i t ( O i a g e n ，H i l d e n ，G e r m a n y ) a c c o r d i n g t ot h c m a n u f a c t u r e r 7 s p r o t o c 0 1 F o r q u a l i t a t i v e d e t e r m i n a t i o no fH C Vs p e c i f i cR N
47、 Ao n ef i f t ho f t h ee x t r a c t e dm a t e r i a lw a ss u b j e c t e dt oan e s t e dR T P C Rp r o c e d u r ee s s e n t i a l l ya sd e s c r i b e d l j I F b rt h e q u a n t i t a t i v em e a s u r e m e n to fH C Vv i r a lR N At h e A m p l i c o rH C VM o n i t o rT e s tK i t ( H
48、 o f f m a n n ，L a 万方数据 枷l S S N l 0 0 7 9 3 2 7C N l 41 2 1 9 RW o r I dJ G a s t r o e n t e r oA p 州2 0 0 1V o I u n l e7N u m b e r2 R o c h eA G ，G r e n Z a c h W v h I e n ，G e r m a n Y ) w a su s e d a c c O r d i n 2I ot h cm a n u f a c t u r e rsp r o t o c 0 1 T e s t r e s u l t sl e
49、s st h a n6 ( ) 0c o n i e s m La r cb c l o wt h e 【o w e r 1 i m i to fa u a n t i f i c a t i o no f t h et e s ta n ds h o 吐l db e r e D o r t e da s“H C Vd e t e c I e d ， l e s st h a n6 0 0 c o p i e s m L ” D e ，e c f j O no fH c y 詹N Aj 几P B Cb yn e S ，e dR r P c R - D r o c e d u 悖 F o rt h eq u a l i t a t i v ed e t e c t i O no fH C Vs p c c i f i cR N A i nP