IL-1β基因在哮喘大鼠支气管肺泡灌洗液炎细胞中的表达.pdf

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1、现代中西医结合杂志 M o d e r n J o u r n a l o f I n t e g r a t e d T r a d i t io n a l C h i n e s e a n d We s t e r n Me d i c i n e 2 0 0 4 S e p , 1 3 ( 1 8 ) 2 4 0 3 I L 一 1 P 基因 在哮喘大鼠 支气管肺泡 灌洗液炎细胞中的表达 贾 玉萍 ， 林江涛 ， 高 春梅2 ， 于 一” ， 郭燕茹 3 ， 成立珠 ( i .中日友好医院， 北京 1 0 0 0 2 9 ; 2 . 河北医科大学第二医院， 河北 石家庄 0 5 0

2、0 0 0 ; 3 .中日友好临床 医学研究所， 北京 1 0 0 0 2 9 ) 摘要l 目 的 观察哮喘大夙支气管肺泡灌洗液( B A L F ) 中 炎细胞I L - 1 p m R N A的表达情况， 探讨I L - 1 在哮 喘发病中的作用。方法用卵白蛋白( O V A) 致敏并激发大鼠哮喘反应， 于激发后即刻、 1 h , 4 h和 1 6h 行支气管肺泡 灌洗。用地高辛配基标记的。 D N A探针检浏B A L F炎细胞 I L - 1 归 rn R N A的原位杂交水平。路果正常大鼠B A L F 炎细胞极少 表达I L - 1 p m R N A ， 过教原激发可诱导B A

3、L F炎细胞表达 I L 一1 p m R N A显著增加。给论哮喘大鼠 B A L F炎细胞表达I L - 1 p m R N A增加， 提示I L - 1 在哮喘发病中有一定作用。 关健词 哮喘; 支气管肺泡灌洗液; I L 一 1 p m R N A 中圈分类号 R一 3 3 文献标识码 A 文章编号 1 0 0 8 一 8 8 4 9 ( 2 0 0 4 ) 1 8 一 2 4 0 3 一 0 2 E x p r e s s i o n o f I L一1 p i n b r o n c h i a l p u l mo n a r y a l v e o l u s l a v a

4、g e f l u i d i n fl a mm a t i o n c e l l s o f a s t h ma t i c r a t s J I A Y u - p i n g ， L I N J i a n g - t a o ， G A O C h u n - m e i ， Y U Y i 3 ， G U O Y a n - ru 3 ， C H E N G L i - z h u l ( 1 . C h i n a 一 J a p a n F r i e n d s h i p H o s p i t a l , B e ij i n g 1 0 0 0 2 9 , C h

5、 i n a ; 2 . T h e S e c o n d H o s p i t a l o f H e b e i Me d i c a l U n i v e r s i t y , S h ij i - a z h u a n g 0 5 0 0 0 0 , H e b e i , C h i n a : 3 . C h i n a 一 J a p a n F r i e n d s h i p C l i n i c a l Me d i c a l R e s e a r c h I n s t i t u t e , B e ij i n g 1 0 0 0 2 9 ， C h

6、 i n a ) A b s t r a c t : O b j e c t i v e I t i s t o o b s e r v e t h e e x p r e s s io n o f I L 一1 (3 i n b r o n c h i a l p u l m o n a r y a l v e o l u s l a v a g e f l u i d i n f l a m m a t io n c e l l s o f a s t h ma t i c r a t s a n d t o d i s c u s s t h e a c t i o n o f I L一

7、1 o n a t t a c k o f a s t h ma . Me t h o d s Wi s t a r r a t s w e r e s e n s i t i z e d a n d e x c i t e d b y o v a l b u m i n ( O V A ) t o e s t a b l is h r a t a s t h m a m o d e l s . B r o n c h i a l p u l m o n a r y a l v e o l u s w a s l a v a g e d i m m e d i a t e l y , 1 h

8、, 4 h , a n d 1 6 h a f t e r O V A e x c i t e d . T h e p r i m o r d i a l h y b r i d i z a t io n l e v e l o f I L一1 日 m R N A i n B A L F i n f l a m m a t i o n c e l l s w a s m e a s u r e d w i t h d i g o x i g e n i n l a b e l e d c D N A p r o b e . R e s u l t s B A L F i n f l a m m

9、 a t i o n c e l l s d e r i v e d f r o m n o r m a l r a t s e x p r e s s e d l i t t l e I L 一 1 月 m R N A , a l l e r g e n e x c i t e m e n t c a n i n d u c e t h e i n c r e a s e o f I L 一 1 R m R N A e x p r e s s i o n i n B A L F c e l l s . C o n c l u s i o n T h e i n c r e a s e o f

10、 I L 一 1 (3 m R N A e x p r e s s i o n i n B A L F in f l a m m a t i o n c e l l s o f a s t h m a t i c r a t s s h o w s t h a t I L一1 h a s s o m e a c t i o n o n a t t a c k o f a s t h m a . K e y w o r d s : a s t h m a ; b r o n c h i a l p u l m o n a r y a l v e o l u s l a v a g e f l u

11、 i d ; I L 一 1 R m R N A 哮喘是一种慢性非特异性炎症性疾病， 有多种细胞因子 参与其发病。I L - 1 是多功能细胞因子， 可由参与哮喘的许 多炎症细胞以及气道结构细胞产生， 并可作用于这些细胞川。 为了解 I L 一1 在支气管哮喘发病中的作用， 笔者对哮喘大鼠 支气管肺泡灌洗液( B A L F ) 中炎细胞I L 一 1 p m R N A的表达情 况进行了研究， 现报道如下。 1 材料与方法 1 . 1 动物分组 I 雄性W i s t a : 大鼠5 0 只， 体质量2 2 0 - 2 5 0 9 ， 由中国医学科学院动物所提供。随机分为正常对照组、 激 发

12、即刻组、 激发 I h 组、 激发4 h 组、 激发 1 6 h 组， 每组 1 0 只。 1 . 2 模型制备 将鸡卵白蛋白( 美国s ig m a 公司提供) I m g , 氢氧化铝2 0 0 m g 加人 1 m L生理盐水中制成混悬液， 选取大 鼠腹部5 个部位皮下注射， 每处0 . 2 m L ， 同时用 6 x 1 0 1 2 L - 1 加热灭活的百日咳杆菌1 m L 腹腔内注射。于致敏后 1 2 - - 1 4 d ， 用1 0 %乌拉坦( 0 . 0 1 m L 馆) 腹腔内注射麻醉大鼠后， 气管 内滴人2 . 5 %鸡卵白蛋白0 . 1 m L ， 分别于致敏后即刻、 1

13、 h , 4 h , 1 6 h 行支气管肺泡灌洗( B A L ) 。对照组大鼠分别于腹腔皮 作者摘介1 贾玉萍( 1 9 6 5 -) ， 女. 主治医师， 硕士。 下及腹腔内注射生理盐水， 1 2 一1 4 d 后， 用0 . 1 m L生理盐水 气管内滴入。 1 . 3 支气管肺泡灌洗在环状软骨上用血管钳固定气管， 其 下做横行切口， 置人连接注射器的硅胶管， 分 5 次缓慢注人 3 7 的生理盐水5 0 m L 。每次灌注后立即回吸， 即得支气管 肺泡灌洗回收液。 1 . 4 制备 B A L细胞涂片将前述所获得的B A L F用 P B S ( p H 7 . 0 ) 离心( 1

14、5 0 0 r / m i n ) 洗涤, 1 0 m i n X 3 次， 计数B A L细 胞总数， 调细胞浓度为3 X1 0 9 L - ， 涂片， 稍干燥后9 5 %乙醇 脱水5 m i n ， 晾干， - 2 0 保存备用( 于1 个月内进行杂交) 。 1 . 5 B A L 细胞I L - 1 归 m R N A的原位杂交地高辛配基标 记探针( 随机引物法) 、 标记敏感性和杂交敏感性及标记探针 的定量按B o e h r i n g e r M a n n h e i m公司提供的试剂盒说明书检 测。将细胞涂片从 一2 0冰箱取出， 依次作如下处理: P B S 平衡1 0 m

15、i n , 0 . 5 m g / L的蛋白酶K于3 7 孵育4 m i n , P B S ( 含2 g / L 甘氨酸， p H 7 . 0 ) 冲洗2 次X 4 m i n , 4 %多聚甲醛固 定4 m i n , 0 . 1 m m o l 几 P B S 冲洗3 m i n X 2 次， 梯度乙醉脱水晾 干。每片5 0 IA L 预杂交液室沮孵育2 h ,预杂交液组成: 6 X S S G ( 2 a ) S S C 祝拐唱 神橄艘史幼一 翻. ,2 g , N a C l 1 7 5 . 3 g 加双燕 万方数据 2 4 0 4 现代中西医结合杂志 M o d e r n J o

16、 u r n a l o f I n t e g r a t e d T r a d i t io n a l C h i n e s e a n d We s t e r n M e d i c i n e 2 0 0 4 S e p , 1 3 ( 1 8 ) 水至1 0 0 0 m L , l m m o l / L N a C l 调p H = 7 . 0 ) , 4 5 %甲酞胺， l o x D e n h a r d t s 液( 5 0 x D e n h a r d t s 液的配制: 聚乙烯毗咯烷酮 5 g ， 牛血清白蛋白5 g , F i c o l l 4 0 0 5

17、 g ， 加双蒸水至 1 0 0 m L ) 。然 后向预杂交液中加人地高辛标记的I L 一 1 (3 c D N A , 探针浓度 均为0 . 2 5 p g / L 。 每片2 0 L L ( 5 ji g 探针/ 片) 被盖p a r a f ilm膜， 4 1 杂交 1 6 h ， 然后按试剂盒方法进行免疫学检测。在 1 5 0 I U / L 的 抗体结合物溶液中， 3 7 条件下孵育1 h ( 5 0 L / 片) ， 然后室温避光显色至少 6h ， 显微镜下观察结果， 最后用 0 . 5 %核固红染色2 m i n ， 再次观察结果。对原位杂交结果进行 光密度扫描， 吸光度值(

18、A ) 表示m R N A相对水平。 2 结果 B A L细胞原位杂交结果表明， 对照组大鼠B A L细胞表达 I L 一 1 p m R N A的量为1 . 3 4 0 士 0 . 3 2 8 ， 激发即刻组为1 . 5 4 4 土 0 . 2 9 6 ， 激发 1 h组为 9 . 5 2 0士1 . 5 8 7 ， 激发 4h组为 6 . 2 6 2 士 1 . 3 5 0 ， 激发 1 6 h 组为3 . 8 3 0 1 0 . 8 5 3 。过敏原激发后 I h , 4h 和1 6 h , B A L 细胞表达I L 一 1 p m R N A量均显著高于对照组和 即刻组( P均0 .

19、 0 5 ) 0 3 讨论 几乎所有的有核细胞均可产生 I L一1 ， 而激活的单核/ 巨 噬细胞是其主要来源。I L 一 1 p 是主要分泌形式， 在人类和啮 齿 类动物的细胞中， I L 一I p m R N A显著多于I L 一1 a m R - N A 2 1 o I L - 1 有多种生物学作用， 对多种细胞有刺激效应. 如 激活B 淋巴 细胞和单核细胞 3 - 4 1 o I L - 1 (3 能增加多种细 胞因子和钻附分子的合成、 表达和释放， 包括 I L 一 8 、 细胞间 猫附分子、 血管细胞猫附分子、 E一选择素， 可促使嗜酸粒细 胞和中性粒细胞募集并浸润至支气管薪膜。

20、在本研究中， 正常大鼠的B A L F 炎细胞表达极少量的I L - 1 Q m R N A ， 而过敏原激发致哮喘反应后大鼠B A L F炎细胞表 达I L 一 1 p m R N A增加， 而且除单核/ 巨噬细胞外， 中 性粒细胞 和嗜酸细胞以及淋巴细胞均可表达 I L 一 1 (3 m R N A 。过敏原 激发后1 h , I L - i 俘 m R N A表达即显著增加， 此时它们的表达 大部分来自 单个核细胞( 包括单核/ 巨噬细胞和淋巴细胞) ， 小 部分来自粒细胞( 主要是中性粒细胞， 很少一部分来自嗜酸粒 细胞) 。过敏原激发后4 h ， 随渗人气道的中性粒细胞增加， 它 们

21、也成为I L - 1 p m R N A的重要来源， 由此可以使过敏原激发 后B A L F 细胞较长时间表达较强的I L - 1 R m R N A 。到激发 后1 6 h , I L - 1 p m R N A的表达即明显减弱， 但仍显著高于正 常大鼠。总之， 本研究在基因水平为 I L一1 在大鼠哮喘反应 中起作用提供了依据。 参考文献1 1 贾玉萍， 于一， 林江涛， 等. 实验性大鼠哮喘反应模型的建立 ) l . 实用变态反应和哮喘杂志， 1 9 9 6 , 1 ( 1 ) ; 1 5 一 1 6 2 R o s e n w a s s e r L J . B io lo g i c

22、 a c t i v it ie s o f I L一 l a n d i t s r o l e i n h u m a n d is e a s e j . J A l le r g y C l in I m m u n o 1 , 1 9 9 8 , 1 0 2 ( 3 ) : 3 4 4 一 3 5 0 1 3 1 B o r is h L , R o s e n w a s s e r L J . U p d a t e o n c y t o k in e s J . J A l le r g y C l i n I mmu n o l , 1 9 9 6 , 9 7 -. 7 1

23、 9一7 3 4 4 1 L e v in e S J . B r o n c h i a l e p i t h e l ia l c e l l 一 。 y t o k i n e in t e r a c t io n i n a ir w a y i n f l a m m a t io n J . J I n v e s t Me d , 1 9 9 5 , 4 3 : 2 4 1 一 2 4 9 收稿日期 2 0 0 4 - 0 6 - 1 2 临床护理 呼吸衰竭的护理 周潇 ( 解放军第2 5 2医院， 河北 保定0 7 1 0 0 0 ) 关镇词 呼吸衰蝎; 护理 中圈分类号

24、R 5 6 3 . 8 ; R 4 7 文献标识码l B 文章编号 1 0 0 8 一 8 8 4 9 ( 2 0 0 4 ) 1 8 一 2 4 0 4 一 0 1 1 病情观察 密切观察患者神志、 血压、 呼吸、 脉搏、 体温、 尿量和皮肤 色泽等变化， 以及各类药物作用和不良反应( 尤其是呼吸兴奋 剂) 。注意监测动脉血气分析和各项化验指数变化。 2 一般护理 鼓励患者多进高蛋白、 高维生素食物( 安置胃管患者应按 胃管护理要求) 。保持病室整洁、 通风， 每日2 次。正确留取 各项标本。严格控制陪客和家属探望。 3 对症护理 保持呼吸道通畅， 鼓励息者咳嗽、 咳痰， 多更换体位和多 饮

25、水; 危重息者每2 一3 h .身拍背1 次. 协助排痰: 建立人工 气道者应加强湿化吸人; 神志清醒者可每日 做超声雾化吸人 2 - 3 次， 每次1 0 - - 2 0 m i n 。根据血气分析和临床情况合理给 氧。危重患者或使用机械通气者应做好特护记录单。使用鼻 罩或口 鼻面罩加压机械通气者， 做好该项护理有关事项。行 气管插管或气管切开者应按人工气道护理要求护理。接呼吸 机进行机械通气时应按机械通气护理要求护理。 4 位康指导 鼓励患者做缩唇腹式呼吸以改善通气; 适当做家务， 尽可 能下床活动。注意预防上呼吸道感染， 注意保暖， 少去公共场 所。戒烟， 如有感胃尽t就医， 以防感染加重。 收摘日 期 2 0 0 3 一 1 2 一 0 8 万方数据