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1、喹喔啉-羧酸检测方法 1仪器设备 带紫外分光光度检测器的高效液相色谱仪。 2试剂 除下述试剂外, 使用附录2所列试剂。 十八烷基甲硅烷基化硅胶小柱（500mg）：在内径89mm 的聚乙烯柱管中填充500mg 十八烷基甲硅烷基化硅胶或具有同等分离特性的物质。 强碱性阴离子交换小柱（360mg）：在内径89mm 的聚乙烯柱管中填充360mg三甲胺 丙烯酰胺聚合物甲硅烷基化硅胶或具有同等分离特性的物质。 水： 蒸留水。 无水硫酸钠：特级, 如含有对该农药等成分物质分析有干扰作用的物质时，用正己 烷等溶剂洗涤干净后再用。 磷酸缓冲液(pH2.5)：1.36g磷酸二氢钾溶解于800mL水中，用磷酸调整p
2、H为2.5，加 水至1000mL。 3标准品 喹喔啉2羧酸:含喹喔啉2羧酸99以上，分解点为208。 4检测溶液的制备 a 提取方法 肝脏：搅碎混合均匀后，称取其5.00g。 肌肉：尽可能除去脂肪层，搅碎混合均匀后，称取其5.00g。 加入100mL甲醇：0.3%偏磷酸溶液(3:7)的混合溶液，搅拌后，用涂布2cm厚硅藻 土的滤纸抽滤至磨口减压浓缩器中。 再用10mL乙醇： 0.3%偏磷酸溶液 (3:7) 的混合 溶液洗涤滤纸上的残留物，对洗液进行抽滤，合并滤液于磨口减压浓缩器中，45 以下浓缩至约30mL后，加入0.1mL磷酸。 b 净化方法 十八烷基甲硅烷基化硅胶柱色谱法 在十八烷基甲硅烷
3、基化硅胶小柱（500mg）中顺次注入5mL甲醇和10mL水，舍去 流出液。柱中注入a 提取方法所得的溶液后，注入20mL磷酸缓冲液(pH2.5)，舍去流 出液。注入10mL甲醇，收集流出液于磨口减压浓缩器中，40以下除去甲醇。残留 物中加入5mL水溶解。 强碱性阴离子交换树脂柱色谱法 在强碱性阴离子交换树脂小柱（360mg）中注入5mL水，舍去流出液。柱中注入 十八烷基甲硅烷基化硅胶柱色谱法所得的溶液后， 顺次注入2mL水、 10mL乙醇和5mL 水， 舍去流出液。 注入5mL 0.1mol/L盐酸， 收集流出液于50mL试管中， 加入3mL 3mol/L 盐酸和15mL乙酸乙酯，用振荡器激烈
4、振荡5分钟后，静置，乙酸乙酯层移入100mL三 角瓶中。水层中加入15mL乙酸乙酯，按上述同样操作，合并乙酸乙酯层于上述三角 瓶中。加入适量无水硫酸钠，不时振荡、混合，放置15分钟后，滤入磨口减压浓缩 器中，40以下除去乙酸乙酯。残留物中加入1.0mL乙腈：磷酸缓冲液(pH2.5) （2： 8）的混合溶液溶解，此为试验溶液。 5操作方法 a 定性试验 按下列操作条件进行试验，试验结果应与标准品的一致。 操作条件 柱填充剂：十八烷基甲硅烷基化硅胶(粒径5m) 柱：内径4.06.0mm，长150 mm的不锈钢管。 柱温： 40 检测器：吸收波长245nm 流动相：乙腈：磷酸缓冲液(pH2.5) (2：8) 的混合溶液。调整流速使喹喔啉2 羧酸约10分钟流出。 b 定量试验 根据与a 定性试验相同操作条件所得的试验结果，峰高法或峰面积法定量。