MC002对A-549、HT-1080荷瘤小鼠肿瘤生长抑制作用的研究.pdf

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1、1 1 9 6 中国药理学通报C h i n e s eP h a r m a c o l o g i c a lB u l l e t i n 2 0 0 8S e p ：2 4 ( 9 ) ：1 1 9 6 - 9 M C 0 0 2 对A 5 4 9 、H T 1 0 8 0 荷瘤小鼠肿瘤生长抑制作用的研究 金亚宏1 ，王意忠2 ，苏丹1 ，原桂东1 ，张毅1 ，郭姗姗，姜晶2 ，张玉杰3 ”，崔晓兰1 ( 1 中国中医科学院中药研究所，北京1 0 0 7 0 0 ；2 北京大学航天I 临床医学院，北京1 0 0 0 4 9 ； 3 北京美迪克斯生物技术有限公司，北京1 0 0 0 1

2、2 ；4 北京中医药大学，北京1 0 0 0 2 9 ) 中国图书分类号：R - 3 3 2 ；R2 8 4 1 ；R3 2 9 2 4 ；R7 3 4 2 ； R7 3 0 2 6 2 ；R9 7 9 1 文献标识码：A 文章编号：1 0 0 1 1 9 7 8 ( 2 0 0 8 ) 0 9 1 1 9 6 0 4 摘要：目的M C 0 0 2 是雷公藤内酯醇的半合成衍生物，本实 验主要观察和评价M C 0 0 2 对人肺腺癌A - 5 4 9 、人纤维肉瘤 H T 一1 0 8 0 小鼠模型的肿瘤抑制作用。方法用B a l b C 裸小 鼠接种人肺腺癌A - 5 4 9 瘤株和人纤维肉瘤

3、H T - 1 0 8 0 瘤株造 成小鼠肿瘤模型，以M C 0 0 2 对荷瘤小鼠的相对肿瘤增殖率、 瘤重、抑瘤率为指标评价M C 0 0 2 对小鼠的抑瘤作用。结果 对于两种不同瘤株，M C 0 0 2 各剂量组体积明显小于模型对 照组，瘤重均降低，在大剂量组1 5 ( m g k g “) 时T C 在 给药几次后均小于6 0 ( P 9 9 5 ，由北京美克迪斯生物技术有限公司 提供。注射用环磷酰胺：上海华联制药有限公司产 品，批号：0 5 0 4 0 5 。柠檬酸( C 。H 。O ，H ：O ) ：分子量 2 1 0 1 4 ，北京化学试剂公司产品，批号0 6 0 4 0 3 。

4、1 2 方法 1 2 1 肿瘤细胞悬液的制备和接种取对数生长 期的人肺腺癌A - 5 4 9 细胞株及人纤维肉瘤H T 1 0 8 0 细胞株，经0 2 5 胰蛋白酶室温下消化，离心去上 清，用无血清相应培养液离心洗涤2 次，细胞计数， 调整细胞密度，配制成约5 1 0 m L 1 个细胞的细 胞悬液，细胞存活率达9 5 以上。抽取配制好的细 胞悬液0 2 m l ( 约含1 1 07 个细胞) ，接种于B a l b C 裸小鼠右腋部皮下。 1 2 2 分组及给药待至2 4w k 肿瘤体积达1 0 0 m m 3 左右时，动物分组给药。称取9 7 1m gM C 0 0 2 ， 溶于1m l

5、2 0m m o l L 一柠檬酸溶液中，配制为2 0 m m o l L M C 0 0 2 溶液，轻轻搅拌至溶液澄清，再用 0 9 氯化钠溶液稀释为2m m o l L 。的储存液，过 滤除菌，分装后一2 0 储存。应用前室温溶化生理 盐水稀释至所需浓度。将接种成功的人肺腺癌裸小 鼠随机分为模型对照组、M C 0 0 2 高、中、低剂量组及 阳性对照组。M C 0 0 2 给药剂量为1 5 、0 7 5 、0 5m g k g 。每周给药3 次，连续3w k 腹腔注射。并用 3 0 只裸鼠重复实验1 次。接种成功的人纤维肉瘤 H T 一1 0 8 0 裸小鼠3 5 只，分组及给药剂量、给药

6、途径 同前。每周3 次，连续2w k 。应用3 8 只裸鼠重复实 验1 次。 1 2 3 肿瘤的观察、测量与评价标准定期观察动 物精神、饮食和排便。以开始给药时所测肿瘤体积 万方数据 中国药理学通报C h i n e s eP h a r m a c o l o g i c a lB u l l e t i n 2 0 0 8S e p ；2 4 ( 9 )11 9 7 为基准，每次给药前用游标卡尺测量肿瘤结节的最 长径( n ) 和最短径( b ) 。肿瘤体积( t u m o rv o l u m e ， ，I f 、r ) 的计算公式：V = 1 2 a b 2 ，根据测量结果计算出 相

7、对肿瘤体积( r e l a t i v et u m o rv o l u m e ，R T V ) ，R T v = v , v 0 。其中为给药前( 即d0 ) 测量所得肿瘤体 积，K 为每次测量时的肿瘤体积。抗肿瘤活性评价 指标为相对肿瘤增殖率r c ( ) 。 T C = 勰1 0 0 其中T R r I 、，为受试药物治疗组R T v ，C R T V 为 模型对照组R 1 。求R T V 平均值并绘制肿瘤生长 曲线。疗效评价标准：c 6 0 为无效； c 6 0 ，并进行统计学处理。末次给药后2 4h 处死各组动物，剥出的肿瘤并测量瘤重，计算各组平 均瘤重及抑瘤率。 抑瘤率( )

8、 = 塑譬熊籍鬻擎| 堑x 1 0 0 1 2 4 统计学处理数据以戈4 - s 表示，所有数据 经E x c e l 处理，多组计量资料进行方差分析，组间分 析用q 检验。 2 结果 2 1 对人肺腺癌A - 5 4 9 细胞株裸小鼠模型的抑瘤 作用 人肺腺癌A - 5 4 9 细胞株接种成功的裸小鼠 3 5 只。结果见T a bl 、2 、F i gl 。 F i g1T u m o rg r o w t hc u r v eo fM C 0 0 2 O HA - 5 4 9t u m o rc e l ll i n ei nn u d em i c e T a b1I n h i b i

9、 t i o no fM C 0 0 2o nA - 5 4 9x e n o g r a r t g r o w t hi nn u d em i c e ( z4 - s ，n = 7 ) D o s eT u m o rI n h i b i t i o n G r o u p ! ! 坚：虹! ! ! 韭! g 型! 丝 C i t i l ea c i d C T X 3 5 M C 0 f f 2I 5 O 7 5 0 5 1 3 94 - 0 2 8 0 5 4 0 2 I 6 0 7 O 3 84 - 0 1 9 7 2 3 0 5 94 - 0 1 6 5 7 1 1 0 5

10、 0 1 9 2 4 2 P 0 0 1 c i t r i ca c i d 一般状况：人肺腺癌A - 5 4 9 细胞株在裸小鼠中 生长相对缓慢，动物成瘤率1 0 0 。模型对照及低 剂量组各有1 只动物在面部出现转移瘤。实验结果 显示：给药7 次后，M C 0 0 2 在1 5 、0 7 5 、0 5m g k g 一剂龟时移植瘤重明显降低，与模型对照组比较 差异有显著性( P 0 0 5 ) 。1 5m g k g 。1 剂量的 M C 0 0 2 从给药第5 次起，1 0m g k g 一剂量的 。M C 0 0 2 从给药第6 次起移植瘤R T V 明显降低，与对 照组比较差异有显

11、著性( P 0 0 5 ) ，且1 5m g k g “剂量的M C 0 0 2T C 6 0 。说明M C 0 0 2 在 1 5m g k g 一剂量时可抑制人肺腺癌A - 5 4 9 细胞株 在裸小鼠体内的生长。 2 2 对人纤维肉瘤H T - 1 0 8 0 细胞株裸小鼠模型的 抑瘤作用结果见T a b3 、4 ，F i g2 。 r 喀2 T h et u m o r g r o w t ho B r v e o fM C 0 0 2o nH T - l t l 6 0 t u m o rc e l ll i n ei nU U l om i c e 一般情况：动物接种部位肿瘤生长状

12、况良好，成 瘤率1 0 0 ，动物未见明显活动迟缓、腹泻、厌食等 症状。实验过程中各组均有动物死亡情况，实验结 果显示：给药6 次后，M C 0 0 2 在1 5m g k g “剂量 时移植瘤瘤重明显降低，与模型对照组比较差异有 显著性( P 0 0 5 ) ，抑瘤率为5 8 6 。1 5 、0 7 5m g k g 1 剂量的M C 0 0 2 从给药第2 次起移植瘤R 1 明显降低，其中1 5m g k g 。1 剂量组从第2 次起与 对照组比较差异有显著性( P 0 0 5 ) ，且T C 6 0 。说明M C 0 0 2 在1 5m g k g 叫剂量时可抑制 人纤维肉瘤H T 一1

13、 0 8 0 细胞株在裸小鼠体内的生长。 3 讨论 作为一种被广泛应用的传统中药，雷公藤具有 抗炎及免疫抑制和抗肿瘤等作用，长期应用于治疗 类风湿性关节炎、肾病综合征、支气管哮喘、肿瘤等 多种疾病。雷公藤内酯醇是从雷公藤中提取到的主 要活性物质，系一种环氧二萜单体成分，具有很好的 万方数据 11 9 8 中国药理学通报C h i n e s eP h a r m a c o l o g i c a lB u l l e t i n2 0 0 8S e p ；2 4 ( 9 ) T a b2R e l a t i v et u m o rg r o w t hr a t eo fM C 0 0

14、2o nA - 5 4 9t u m o rc e l l f i n ei nn u d em i c e ( n = 71 DoseT C b B ) U D m g I , g I F i r s td o s eS e c o n dd o s eT h i r dd o s eF o u r t hd o s eF i f t hd o s eS i x t hd o s eS e v e n t hd o s eEJ i s h t hd o s e C i t r i ca c i d C T X 3 57 3 18 2 1 26 7 26 4 9 5 8 6 5 7 6 5 4

15、 7 5 3 5 M C 0 0 21 57 1 76 0 15 3 6 5 7 3 5 1 4 5 0 6 4 5 0 4 9 7 0 7 58 1 58 4 97 3 3 7 4 7 7 0 9 7 7 96 5 6 6 3 3 0 57 3 77 7 47 2 27 1 87 0 86 9 06 8 0 6 7 1 T a b4R e l a t i r em i n o rg r o w t h1 “ 8 t eo fM C 0 0 2o nl i T 1 0 8 0t u m o rc e l ll i n ei nn u d em i c e D o s e1 ，c ， G r o

16、 l l D n r a g k g 一1 F i r s td o s eS e c o n dd o s eT h i r dd o s eF o u r t hd o s eF i f t hd o s eS i x t hd o s e C i t r i ca c i d8一一一一一一 C T X M C 0 0 2 6 3 8 6 2 7 9 5 9 9 1 3 5 1 8 5 I 8 8 1 5 9 7 3 5 5 0 4 9 7 7 7 1 9 9 3 4 7 7 4 3 4 7 2 4 8 9 8 5 1 2 4 8 7 6 1 6 8 9 9 P ( 0 0 5 P 0 0

17、 1wc i t r i ca c i d 抗排异、抗生育及抗肿瘤作用，并因其广谱、高效的 抗肿瘤作用受到人们的广泛关注。本研究采用 雷公藤内酯醇的半合成衍生物M C 0 0 2 ，进入机体后 在酯酶的催化作用下生成雷公藤内酯醇而发挥细胞 毒作用。M C 0 0 2 是在雷公藤内酯醇的化学结构上 进行修饰，使其具有良好的水溶性，与雷公藤内酯醇 相比，在机体内发挥了相同的细胞毒作用，但它在制 剂和临床给药方面具有优势，因而具有更好的开发 前景。 文献报道，雷公藤内酯醇可以抑制人乳腺癌 M C F - 7 、人宫颈癌H c L a 、淋巴瘤R a j i 等多种细胞系 的增殖和生长1 2 一J 。

18、据吕秀红等“ o 研究报道，雷公 藤内酯醇对A 5 4 9 细胞系体外增殖抑制作用肯定， 且呈剂量及时间依赖性，其抑制及杀伤作用可能是 通过诱导细胞凋亡、坏死及特定周期阻滞途径产生 作用。但雷公藤内酯醇对人纤维肉瘤H T 1 0 8 0 的 肿瘤抑制作用还未见报道。我们前期的实验中发现 M C 0 0 2 在体外可以抑制多种肿瘤细胞的增殖。在 此基础上，我们从整体角度出发，进一步探讨了 M C 0 0 2 作用于人类肿瘤细胞免疫缺陷小鼠异种移 植模型的抑瘤作用，实验结果表明，M C 0 0 2 对人肺 腺癌3 5 4 9 细胞系和人纤维肉瘤H T 一1 0 8 0 细胞系药 效明显，M C 0

19、 0 2 大剂量时抑瘤率分别为7 2 3 和 5 8 6 ，均高于C T X 组的抑瘤率，对A - 5 4 9 荷瘤小 鼠从给药第4 次和第6 次起，试验评价标准T C 6 0 ，且与阴性对照组相比P 0 0 5 ，对H T 1 0 8 0 荷瘤小鼠从给药第3 次和第2 次起T C 6 0 ( P 0 0 5 ) ，随着剂量的增加肿瘤抑制作用增强。重 复实验亦获得相似结果。以上实验结果证明 M C 0 0 2 具有与雷公藤内酯醇相似的抗肿瘤作用。 伴随分子生物学的进展，越来越多的研究显示 雷公藤内酯醇的抗肿瘤作用是通过细胞凋亡信号转 导机制诱导肿瘤细胞凋亡而发生作用，雷公藤内酯 醇通过激活N

20、F K B 和E R K 2 的活性影响T R A I L ( T N F r e l a t e da p o p t o s i s - i n d u c i n gl i g a n d ) ，并且抑制 I L - l1 3 诱导的人B D 2 m R N A 表达等多种途径产生凋 亡矗J 。由此推测，M C 0 0 2 进人体内后可能发生相 似的抑瘤作用。我们将在今后的研究过程中深入探 讨M C 0 0 2 的抗瘤效应及分子作用机制，力求开发其 为一种新型抗瘤药物。 广矿J 删姒田如 7 8 7 7鲐邮 万方数据 中国药理学通报C h i n e s eP h a r m a c o

21、 l o g i c a lB u l l e t i n2 0 0 8S e p ；2 4 ( 9 ) 参考文献： 1 罗泳仪，何建猷雷公藤内酯醇抗肿瘤研究进展 J 现代肿瘤 医学，2 0 0 5 ，1 3 ( 4 ) ：附6 附8 1 L e oYY ，H eJY T h er e s e a r c hp r o g r e s so nt h ea n t i t u m o re f f e c t so f t r i p t o l i d e J M a dO n c o l ，2 0 0 5 ，1 3 ( 4 ) ：附6 一附8 2 汪少娟。曾叶，杨业金雷公藤内酯醇及与华蟾素

22、联合对人 乳腺癌M C F - 7 细胞生长影响的实验研究 J 现代中西医结合 杂志。2 0 0 6 ，1 5 ( 5 ) ：5 7 3 4 2 W a n gSJ ，Z e n gY ，Y a n gYJ E x p e r i m e n t a ls t u d yo ft r i p t o l i d eo n l y o rc o m b i n e dw i t hc i n o b u f o t a l i no nM C F - 7g r o w t ho fb r e a s tc a n c e r J M a dJI n t e g rT r a dC h i nW

23、e s tM e d ，2 0 0 6 ，1 5 ( 5 ) ：5 7 3 - 4 3 张纯，崔国惠，刘芳，等雷公藤内酯醇抑制脚i 细胞增殖 和迁移的体外实验研究 J 中国病理生理杂志，2 0 0 7 ，2 3 ( 2 ) ： 2 2 2 5 3 撕C ，C u iGH ，L i uF ，e ta 1 I n h i b i t o r ye f f e c t so ft z i p t o l i d eo n c e l lp r o l i f e r a t i o na n dm e t a s t a s i si nt h j ic e l l si nv i t r o J

24、C h mJ P a t h o p h y s i o l ，2 0 0 7 。2 3 ( 2 ) ：2 2 2 5 4 刘秋燕吕占军，何小波，等雷公藤内酯醇对人宫颈癌细胞的 凋亡诱导效应 J 中国肿瘤生物治疗杂志，2 0 0 4 ，I t ( 1 ) ：3 6 8 4 L i uQY ，L mzJ ，H eXB e ta i I n d u c t i o no fh u m a nc e r v i xc H n e e r c e l la p o p t o s i sb yt r i p t o l i d e J C h n aJC a n c e rB i o t h e r

25、，2 0 0 4 ，1 1 ( 1 ) ：3 6 8 5 吕秀红，郭瑞珍，刁路明，等雷公藤内酯醇对肺腺癌细胞系 A 5 4 9 的体外抑制作用的研究 J 中国药理学通报。2 0 0 7 2 3 ( 2 ) ：2 0 7 一l O 5 功xH G u oRz ，D i a nLM ，e ta 1 E 嵋o f t r i p t o l i d eo l lt h ep r o - l i f e r a f i o na n da p o p t o s i so fc e l l l i n eA 5 4 9i nh u m a nl u n ga d e n o c a r - e i n

26、 o m a J C h nP h a r m a c o lB u l l ，2 0 0 7 ，2 3 ( 2 ) ：2 0 7 1 0 6 F i d l e r 】M ，uK ，C h u n gc ，e ta 1 P G 4 9 0 - 8 8 ，ad e r i v a t i v eo ft r i p t 0 1 i d e c 8 u 蝴t u m o rr e g r e s s i o na n ds e n s i t i z e st l l m o r gt oc h e m o t h e r a p y J M o l e c u l a rC a n c e r

27、T h e r a p e u t i c s ，2 0 0 3 ，2 ( 9 ) ：8 5 5 6 2 7 L e eKY ，P a r kJs J e eYK ，e ta 1 T f i p t o I i d es e n s i t i z e sl u n gc a n c 口 c e l l st oT N F r e l a t e da p o p t o s i s i n d u c i n gl i g a n d ( T R A I L ) 一i n d u c e d a p o p t o s i sb yi n h i b i t i o no fN F x Ba

28、 c t i v a t i o n J E x p e v m e n “M o - 妇越盯M e d i c i n e ，2 0 0 2 ，3 4 ( 6 ) ：4 6 2 8 I S F r e s eS ，P i m i aF ，M i e s c h e rD ，e ta 1 P 9 4 9 0 m e d i a t e ds e n s i t i z a t i o n o fl u n ge a l l e e rc e l l st oA p 0 2 L T R A l L - i n d u c e da p o p t o s i sI E q u i l a c t

29、 i v a t i o no fE R K 2 J O n e o g e n e ，2 0 0 3 ，2 2 ( 3 5 ) ：5 4 2 7 3 5 9 J a n gBC ，L i mKJ ，C h o iIH e ta 1 T r i p t o l i d es u p p r e s s e si a t e d o n k i n lb e t a i n d u c e dh u m a nb e t a d e f e n s i n - 2m R N A e x p r e s s i o n t h o u g hi n h i b i t i o n o ft r a

30、 n s c r i p t i o n a la c t i v a t i o no fN F k a p p a Bi n A 5 4 9c e l i a J 加J M o e c M a d ，2 0 0 7 1 9 ( 5 ) ：7 5 7 6 3 A n t i - t u m o ra c t i v i t yo fM C 0 0 2o nm i c ew i t ht r a n s p l a n t e d h u m a nA 5 4 9a n dH T 1 0 8 0 J I NY a - h o n 9 1 ，W A N GY i z h o n 9 2 ，S U

31、D a n l ，Y U A NG u i d a n 9 1 ，Z H A N GY i l ，G U OS h a h s h a n l ，J I A N GJ i n 9 2 ， Z H A N GY u - j i e 3 _ C U IX i a o 1 柚1 ( 1 1 n s t i t t t t eo f C h i n e s eM a t e r i aM e d i c a ，C h i n aA c a d e m yo f C h i n e s eM e d i c a lS c i e n c e s ，咖曙1 0 0 7 0 0 ，C h n a ；2 S

32、p a c e f l i g 缸 C l i n i c a lM e d w a lC o l l e g eo f & 咖笞U n v e r s t y ，B e q n g 1 0 0 0 4 9 ，C h i n a ；3 B e q i a gM e d w s B i o t e c h n o l o g i e sC o 删，B e q n g1 0 0 0 1 2 ，C h i n a ；4 咖曙U n i v e r s i t yo f C h i n e s eM e d i c i n e ，讲昭1 0 0 0 2 9 ，C h i n a ) A b s t r

33、 a c t ：A i m T oo b s e r v ea n de v a l u a t et h ea n t i t u m o re f f e c to fM C 0 0 2 ，t h es e m is y n t h e s i z e dd e r i v a t i v e o ft r i p t o l i d e ，O i lh u m a nl u n ga d e n o c a r e i n o m aA - 5 4 9a n d h u m a nf i b r o s a r c o m aH T 1 0 8 0t u m o rm i c e M e

34、 t h o d s B a l b Cn u d em i c eo fh u m a nl u n ga d e n o c a r c i n o m aA 5 4 9a n dh u m a nf i b r o s a r e o m aH T 一1 0 8 0t u m o rm o d e l s w e r em a d et h r o u g hA 5 4 9a n dH T 一1 0 8 0e e H si n o c u l a - t i o n A n t i t u m o ra c t i v i t yo fM C 0 0 2w a se v a l u a

35、t e di n t e r m so fr e l a t i v et u m o rg r o w t hr a t e ，t u m o rw e i g h ta n d t u m o ri n h i b i t o r yr a t i o o fm i c et r a n s p l a n t e d R e s u l t s F o rt w ot u m o re e Ul i n e s ，i ne a c hM C 0 0 2d o s a g eg r o u p ， t h e i rt u m o rv o l u m ea n dt u m o rw e

36、 i g h tw e r es i g n i f i c a n t l y s m a l l e ra n dl o w e rt h a nt h o s eo ft h ec o n t r o lg r o u p I n t h eh i g hd o s eg r o u p ，a l lt h ev a l u e so fT C w e r el e s s t h a n6 0 s h o w i n gap o s i t i v ed o s e e f f i c a c yc o r r e l a t i o n C o n c l u s i o n sM

37、C 0 0 2s h o w e das i g n i f i c a n tr e s t r a i n i n g e f f e c to ng r o w t ho fA 5 4 9a n dH T - 10 8 0t u m o ri nm i c e I tc o u l db ed e v e l o p e di n t oaH e wp r o m i s i n ga n t i e a n c e r d r u gw i t hf u r t h e rs t u d i e s K e yw o r d s ：M C 0 0 2 ；a n t i t u m o ra c t i v i t y ；t r i p t o l i d e 欢迎投稿! 欢迎垂询! 万方数据