N-V蛋白酶体内外纤维蛋白溶解活性的实验研究.pdf

《N-V蛋白酶体内外纤维蛋白溶解活性的实验研究.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《N-V蛋白酶体内外纤维蛋白溶解活性的实验研究.pdf（4页珍藏版）》请在三一文库上搜索。

1、 9 7 6 中国药理学通报C h i n e s e P h a r m a c o l o g i c a l B u l l e t i n 2 0 0 6 A u g ; 2 2 ( 8 ) : 9 7 6 - 9 N - V蛋白酶体内外纤维蛋白溶解活性的实验研究 李奇， 迟秀梅， 石立红， 王艳萍， 洪 ( 吉林大学基础医学院生物化学与分子生物学 教研室， 吉 敏 林 长春1 3 0 0 2 1 ) 中国图书分类号: R - 3 2 2 ; R 3 4 5 . 6 3 ; R 4 4 6 . 1 1 ; R 5 4 3 ; R 7 4 3 . 3 3 ; R 9 7 3 . 3 ;

2、R 9 7 7 . 文献标识码: A 文章编号: 3 1 0 0 1 一 1 9 7 8 ( 2 0 0 6 ) 0 8一 0 9 7 6一 0 4 摘要: 目的研究 N - V蛋白酶对纤溶系统的影响。方法 采用纤维蛋白平板法， 观察 N - V蛋白酶体外溶解纤维蛋白 的活性。通过一次静脉给药后不同时间测定家兔纤维蛋白 原( F g ) , D 一 二聚体( D - D i m e r ) 的 含量及血浆优球蛋白 溶解时 间( E L T ) ， 观察N - V蛋白酶对正常家兔纤维蛋白溶解活性的 影响。通过测定家兔凝血酶原时间( P T ) 、 活化部分凝血活 酶时间( A P T r ) ，

3、 观察N - V蛋白酶对凝血功能的作用。结果 N - V蛋白酶具有体外溶解纤维蛋白的活性， 测定效价为 3 0 0 0 0 k U g - o N - V 蛋白 酶( 6 0 0 0 U k g - 体重， 1 5 0 0 0 U k g 一 体重) 可明 显 减少D - D i m e r , F g 含量， 缩短E L T ， 对P T , A P T T 无明显影响。结论N - V蛋白酶具有纤维蛋白溶解活 性， 对凝血功能未见有影响。 关键词: N - V蛋白酶; 纤溶活性; 凝血功能 N - V蛋白酶是由 我国北方沿海一种沙蚕生物体 内提取的蛋白酶， 其等电点为 p H 4 . 5 ，

4、 分子量为 3 1 0 0 0 u 1 ， 经 实验 证实， N - V 蛋白 酶有促进大鼠 颈 动脉 血栓的 溶解作用 。 本实验研究发现N - V蛋 白酶在体外具有高效、 快速溶解纤维蛋白 作用， 体内 能在短时间内 缩短优球蛋白溶解时间、 降低纤维蛋 白 原含量， 且不影响凝血功能， 无出血等并发症。本 实验为N - V蛋白酶的药理作用和使之开发成为新 收稿日 期: 2 0 0 6 - 0 4 - 1 9 ， 修回日 期: 2 0 0 6 - 0 6 - 1 0 基金项目: 吉林省科技厅发展资助项目( 2 0 0 4 ， 科技字， N o 0 0 4 0 ) ; 吉 林省计委资助项目(

5、2 0 0 4 ， 科技字， N o 0 7 1 0 ) 作者简介: 李 奇( 1 9 7 7 - ) ， 女， 博士生， 研究方向: 生物制药和蛋白 质工程， T e l : 0 4 3 1 - 5 6 1 9 4 7 4 , E - m a i l : j l l i g i y a h o o . c o m ; 洪 敏( 1 9 4 5 一 ) ， 男， 教授， 博士生导师， 研究方向: 药物 生 物化学、 蛋白 质化学， T e l : 0 4 3 1 -5 6 1 9 4 7 4 , E - m a i l : h o n g - m i n t 9 4 5 y a h o o .

6、 c o m 的溶栓、 降纤药物提供了有价值的基础研究资料。 1 材料 1 . 1 动物 健康大耳白兔， 体重2 - 2 . 5k g , 6 ， 购 自 吉林大学基础医学院实验动物中心。 1 . 2 药品 与 试剂 N - V 蛋白 酶( N - V P r o t e i n a s e , N - V P ) ， 由吉林大学基础医学院生物化学教研室制 备， 批号: 0 4 1 1 1 9 ， 白 色冻干粉针剂， 每瓶效价6 万单 位， 临用前以生理盐水溶解; 尿激酶( u r o k i n a s e , U K ) ， 哈尔滨市高科技集团白天鹅药业有限公司产 品， 批号: 0 5 0

7、 2 0 3 ， 每瓶效价1 0 万单位; 肝素( h e p a - r i n , H e p ) ， 中国医药集团上海化学试剂公司产品， 批 号: 0 0 1 0 2 1 ， 每瓶效价1 0 0 万单位; 纤维蛋白原、 凝血 酶， 购自中国生物制品检验所; 纤维蛋白原( F g ) 含 量、 D 一 二聚体( D - D i m e r , D - D ) 含量、 凝血酶原时间 ( P T ) 、 活化部分凝血活酶时间( A P T T ) 测定试剂盒， 均购自I n s t r u m e n t a t i o n L a b o r a t o r y ( U S A ) 公司。

8、2 实验方法 2 . 1 N - V蛋白 酶对纤维蛋白的溶解作用采用A s - tr o p 法 : 取 牛 纤 维蛋白 原 粉 加0 . 1 m o l L 一 P B , p H 7 . 4 ， 制成0 . 5 %纤维蛋白原溶液; 取凝血酶原粉加 0 . 1 m o l L 一 P B , p H 7 . 4 制 成 浓度为1 0 U ml一 的 溶液。 取直径1 0 c m玻璃平皿， 加人适量0 . 5 %纤维 蛋白 原溶液， 再加人1 / 1 0 体积凝血酶原溶液( 1 0 U m l 一 ) ， 使两种液体充分混匀， 制成厚度2 m m纤维 蛋白 平板。 纤维蛋白 溶解作用和活性检测

9、: 配制尿激 酶( 1 , 2 , 3 , 4 , 5 , 6 x 1 0 4 U m l 一 ) , N - V 蛋白 酶( 1 g L 一 ) 样品， 各 取5 闪点 在 平 板 表面， 于3 7 温 箱中 放 置2 0 m i n 后观察结果， 测量溶圈的2 个互为垂直的直 径， 以两个直径的平均值为直径计算溶圈面积 ( m in 2 ) ， 以 溶圈面积大小比 较活性的大小。 2 . 2 N - V蛋白 酶效价的测定 采用药典方法: 气泡 上 升 法 测 定 # 。 c e l l s f r o m ( 2 6 . 4 3士 2 . 0 )t o( 1 7 . 5 3士 0 . 4

10、4 ) ， i n - c r e a s e t h e r a t i o o f B c l - 2 / B a x f r o m ( 0 . 6 1 1 0 . 0 5 )t o ( 1 . 0 1 士 0 . 1 5 ) ， i n h i b i t t h e a c t i v it y o f C a N f r o m( 6 . 0 3 士 1 . 5 ) t o ( 3 . 4 7 土 0 . 9 6 ) ， a n d i m p r o v e t h e A T P l e v e l f r o m( 1 0 . 2 6 士 1 . 0 2 ) t o( 2 5

11、 . 6 5 土 3 . 4 5 ) . C o n c l u s i o n T h e n e u r o p r o t e c t i v e e f f e c t s o f a s p i r i n o n f o c a l c e r e - b r a l i s c h e m i a - r e p e r f u s i o n i n j u ry i n r a t s f o r 7 2 h m i g h t b e a t t r i b u t e d t o i t s e f f e c t s b y a n t i - a p o p t o

12、s i s ， i n c r e a s i n g t h e r a t i o o f B c l - 2 / B a x ， i n h i b i t i n g t h e a c t i v i t y o f C a N ， a n d i m p r o v i n g t h e e n e r g y m e t a b o l i s m . K e y w o r d s : a s p i r i n ; f o c a l c e r e b r a l i s c h e m i a - r e p e r f u - s i o n i n j u ry;

13、a p o p t o s i s ; B c l - 2 / B a x ; c a l c i n e u r i n ; a d e n - o s i n e 5 - t r i p h o s p h a t e 万方数据 中国药理学通报C h i n e s e P h a r m a c o l o g i c a l B u l l e t i n 2 0 0 6 A u g ; 2 2 ( 8 ) 9 7 7 2 . 3 N - V蛋白酶对家兔纤维溶解活性的影响、取 健康大耳白兔4 2只， 6 性， 随机分为6 组， 每组7 只。根据N - V蛋白酶的小鼠L D 5 。 值(

14、 3 0 万 U ) 和预 实验确定家兔给药的小、 中、 大3 个剂量， 即生理盐 水对照组( N S 组， 等体积生理盐水) ， 尿激酶组( U K 组， 1 5 0 0 0 U k g - ) 、 肝素组( H e p组， 1 5 0 U k g 一 ) , N - V 蛋白酶小剂量组( N - V P 组， 3 0 0 0 U k g - ) 、 N - V 蛋白 酶中剂量组( N - V P 组， 6 0 0 0 U k g 一 ) 、 N - V 蛋白酶大剂量组( N - V P 组， 1 5 0 0 0 U k g - ) o 3 % 戊巴 比 妥纳( 1 m l. “ k g -

15、 1 ) 静脉麻醉 后， 将家兔固定于兔台上， 颈部正中切口 分离左侧颈总 动脉， 结扎远心端， 于颈总动脉上剪一楔形口， 将采 血管由切口向近心端插入， 另一端夹闭， 固定采血 管。术后由耳缘静脉给予不同药物。分别于给药前 及给药后1 0 , 6 0 , 1 2 0 m i n 取血， 每次取血3 . 6 m l ， 置 于加有0 . 4 m l 构椽酸钠( 3 8 g L - 1 ) 的抗凝管中， 分离血浆( 3 0 0 0 r m i n 一 ， 离心1 5 m i n ) 。 取0 . 5 m l 血浆测定纤维蛋白原( F g ) 含量; 取0 . 0 1 m l 血浆用 生理盐水稀释

16、1 0 0 倍， 采用免疫比浊法测定 D 一 二聚 体( D - D ) 含量， 实验步骤按照试剂盒说明书， 用A C L 1 0 0 0 0 血凝仪( B e c k m a n C o u l t e r 公司) 测定。取血浆 0 . 5 m l 以 加钙法测定优球蛋白 溶解时间( E L T ) 5 o 其中因肝素为测定凝血功能的阳性对照药， 则肝素 组家兔血浆不测定F g , D - D , E L T 指标。 2 . 4 N - V蛋白酶对凝血功能的影响分别取上述 . 实验各组家兔血浆 0 . 5 m l ， 测定凝血酶原时间 ( P T ) 、 活化部分凝血活酶时间( A P T

17、T ) ， 按照试剂盒 说明书， 采用A C L 1 0 0 0 0 血凝仪( B e c k m a n C o u l t e r 公司) 测定。 2 . 5 统计学处理实验数据以无 土 、 表示， 统计方 法为双侧 t 检验。d 表示给药前后各项指标的差 值， 列在各表中。 3 结果 3 . 1 N - V蛋白酶对纤维蛋白平板的溶解作用及其 效价尿激酶和 N - V蛋白酶样品点于纤维蛋白平 板上， 3 7 C , 2 0 m i n 后， 纤维蛋白 均被溶解产生大小 不等的溶斑。结果表明， N - V蛋白酶和尿激酶相同， 对纤维蛋白有体外溶解作用， N - V蛋白酶( 1 g L - 1

18、 ) 与尿激酶( 3 0 0 0 0 k U L - 1 ) 的溶圈面积相等， 即N - V 蛋白 酶的 效价为3 0 0 0 0 k U g ， 同时采用 气泡上升法测定 N - V蛋白酶的效价也为3 0 0 0 0 k U 一1 .g o 3 . 2 N - V蛋白 酶对家兔纤维蛋白 溶解活性的影响 3 . 2 . 1 N - V蛋白酶对血装纤维蛋白原含量的影响 从T a b 1 结果可见: 给药后， 小剂量N - V蛋白酶和 对照组相比， 即可降低F g 含量， 中剂量、 大剂量N - V 蛋白 酶和尿激酶， 可以显降低 F g 含量， 同等剂量的 N - V蛋白酶和尿激酶相比， 纤维蛋

19、白原含量降低更 为明显， 二者有差异。 3 . 2 . 2 N - V蛋白酶对血装D 一 二聚体含量的影响 从T a b 2 可见， 给药后1 0 , 6 0 m i n 及 1 2 0 m i n , 3 个剂 量N - V 蛋白 酶及尿激酶与对照组相比， 均可降低的 D - D含量。 3 . 2 . 3 N - V蛋白酶对优球蛋白溶解时间的影响 从T a b 3 可见: 给药后 1 0 m i n ， 中剂量、 大剂量 N - V 蛋白酶及尿激酶和对照组相比， 有明显缩短E L T 作 用， 给药后1 2 0 m i n ， 仍有明显作用。 3 . 3 N - V 蛋白酶对凝血酶原时间、

20、活化部分凝血活 T a b 1 E ff e c t s o f N - V P r o t e i n a s e o n p l a s m a F g c o n t e n t s ( x 土 : , n = 7 ) D r u 岁P r e - d r u gP o s t - d r u g F g / m g L 一 235789拐 G r o u p N S UK N- V P F g / 6 0d F g / 6 0F g / 1 2 0 m i n d F g / 1 2 0 m i n 一3 9 6 . 8 0士 8 8 . 9 0 4 1 0 . 1 5士 6 9 .

21、2 3 1 5 0 0 0 3 5 5 . 8 611 0 7 . 6 6 3 3 3 . 2 7土 8 0 . 8 1 3 0 0 0 2 9 5 . 8 9士 7 1 . 2 7 2 5 2 . 4 0士 7 1 . 9 7 6 0 0 0 3 0 5 . 2 9土 7 9 . 6 2 2 3 6 . 5 4士 9 2 . 4 4 1 5 0 0 0 3 5 4 . 7 1 11 2 2 . 4 8 1 9 1 . 2 9士 6 4 . 7 5 1 3 . 3 5 1 2 0 . 6 7 2 2 . 5 8 士3 1 . 4 6 4 3 . 4 9士1 9 . 8 3 6 8 . 7 4士

22、 2 0 . 3 0 . 1 6 3 . 4 3 士 6 6 . 6 1 . * 3 8 6 . 6 2士 9 0 . 3 1 9 . 2 9 16 4 . . 1 1 t 6 2 . . 7 9 t8 1 . . 7 1 16 9 . 1 1 1 0 . 1 8士1 9 . 8 0 4 3 0 . 7 5士 8 8 . 2 6 3 6 . 5 7士 4 5 . 9 7 . 3 1 5 . 6 7 1 9 0 . 3 9 4 6 . 7 7士 3 1 . 0 9 2 6 8 . 1 0士 6 5 . 8 7 3 6 . 5 0 1 1 1 . 5 4 . 2 5 8 . 6 3士 7 2 .

23、3 0 1 2 6 . 0 1 土 印. 6 1 * * 0 2 3 2 . 7 1 士 7 0 . 5 2 3 3 . 9 5士 2 7 . 8 0 4 0 . 1 9 t 2 0 . 5 8 * * 2 7 . 7 9士1 9 . 3 9 * 4 6 . 6 6士 2 1 . 7 4 * 1 2 2 . 2 3 士 5 9 . 3 8 . * 脚268228 * P 0 . 0 5 ， . * P 0 . 0 1 “c o n t r o l ; “ P 0 . 0 5 v s U K T a b 2 E f f e c t s o f N - V P r o t e i n a s e

24、o n p l a s m a D - D i et e r c o n t e n t s ( x wt s , n 二 7 ) G r o u p N S U K N- V P D r u 岁P r e - d r u gP o s t - d r u g D - D / n g m l 一 I L 一 I D - D / 1 0 m i n d D - D / 1 0 m i n d D- D/ 6 0 mi n D-d D- D/ 1 2 0 mi n 29刀19 一3 1 0 . 9 7士 4 5 . 1 5 0 0 0 2 9 3 . 9 4士 2 1 . 3 0 0 0 3 0

25、3 . 5 4土 2 0 . 以 兀 幻2 7 7 . 呢 1 8 1 . 1 5 0 0 0 3 7 0 . 9 8士 9 2 . . 7 1 士 6 5 . 4 2 . 2 3士 2 5 . 7 5 . 8 9 12 6 . 1 4 . 3 5士 6 8 . 5 1 . 1 6士如 . 防 0 . 2 6士 5 . 6 7 1 9 . 7 1 士1 5 . 8 3 * * 3 2 1 . 5 6士 3 7 . 8 2 2 6 4 . 印 1 4 9 . 4 7 2 8 0 . 6 8士 2 5 . 4 5 2 5 7 . 7 8 士 8 2 . 2 9 * * 3 3 0 . 7 8土 %

26、. 4 9“ 一1 0 . 5 9土1 1 . D / 1 2 0 mi n . 6 7 t 5 7 . 4 6 . 3 5士2 8 . 3 4 4 0甲 . 8 6土 6 . 9 7 * 3 0 2 9 6 5士 6 . 7 3士1 7 . 3 011 2 . . 8 2士2 04 0 . 2 0士2 6 . 2 2 由 8 2- . 7 1 1 4 1 . 3 8 . 8 3 13 1 . 7 8 5 4 1 5 4 . 7 4 . 4 5 19 9 . 0 5 1 3 . 3 0士 8 . 4 7 3 0 . 2 3 1 2 2 . 5 0 二 3 6 . 7 1 土 2 2 . 6 5

27、 2 6 . 5 4土 2 8 . 7 7 印. 5 2土 3 1 . 7 1 * . 56.2621 310274期嘶341 63ro676549 * P 0 . 0 5 ， * . P 0 . 0 1 v s c o n t r o l 万方数据 9 7 8中国药理学通报C h i n e s e P h a r m a c o l o g i c a l B u l l e t i n 2 0 0 6 A u g ; 2 2 ( 8 ) T a b 3 E ff e c t s o f 玲V P r o t e i n a s e o n p l a s m a E L T ( x 士

28、s , n = 7 ) G ro u p N S U K N- V P D ru岁P re - d rug EL T / mi n P o s t - d r u g E L T / m i n l 0 mi n L T / 6 0 1 5 0 0 0 3 0 0 0 6 0 0 0 1 5 0 M 土3 5 . 土6 1 . 土4 2 . 土3 1 . 士2 7 士 5 4 . 2 3 士3 7 . 2 2 士3 3 . 6 7 12 1 . 3 8 士2 4. 3 7 一8 . 8 7士 9 2 . 6 . 8 1 . 1 4 3 . 1 0 . 3 7 5 2 . 6 7 士 7 . 8

29、 9 * 1 4 3 . 2 5 15 1 . 2 7 2 0 0 . 2 7士 4 6 . 3 4 * * 1 5 5 . 8 3士5 5 . 4 4 2 4 7 . 1 1士5 5 . 4 6 . * 1 1 0 . 6 6土3 9 . 1 7 7 0 . 5 7士3 3 . 4 1 1 5 . 4士1 7 . 4 7 3 6 . 0 3土2 7 . 8 6 * 一5 . 5 2士8 . 4 6. 6 4 . 8 6土2 1 . 9 4 1 2 5 . 3 6 1 4 4 . 5 2. E L T / 2 4 5 . 3 5 性6 8 . 8 4 2 5 8 . 2 7 性3 4 . 2

30、3 性0 2 . 3 5 B E L T / 1 2 0 mi n 士4 4 . 3 8 15 1 . 4 2 士4 9 . 3 6 t 3 4. 4 6 士4 3. 2 2 一1 6 . 6 8士2 6 . 4 2 2 3 . 0 2士1 8 . 7 4. 中 一1 6 . 6 8士2 6 . 4 2* 4 1 . 2 9土1 5 . 2 0 * * 9 3 . 5 8士3 6 . 3 3. 中 19487745 6786595293 、，1.1气、 2119241719 * P 0 . 0 5 ， * * P 0 . 0 1 v s 4 5 2 2 4 . 5 4 2 4 9 9 . 6

31、7 3 4 2 3 5 . 1 1 7 5 9 3 . 7 5 6 4 5 2 . 4 8 c o n t rol T a b 4 E ff e c t s o f N - V P r o t e i n a s e o n P T ( 云 士 : , n 二 7 ) G ro u pD r u g / U k g 一 I P r e - d r u g T T / s 7 . 0 010 7 . 0 0士0 7 . 1 4士0. 2 1 7 . 0 0士0 7 . 0 5士0. 1 7. ( 科 士0. 0 7 P o s t - d r u g TT/ s TT / 1 0而 n TT /

32、 6 0 mi nTT /1 2 0而 n 7 . 0 0士0 7 . 0 4士 0 . 0 7 4 9 . 1 1土 5 . 8 2 7 . 0 1士 0 . 0 3 * . 7 . 1 4士 0 . 2 0* 申 7 . 0 4 1 0 . 0 7 7 . 0 0士0 7 . 0 3士0 . 0 7 8 2 . 0 9士8 . 9 9 7 . 0 5士 0 . 1 0 * 7 . 1 1士0 . 2 1 . 晰 7 . 0 6 1 0 . 0 9二 7 . 0 210 . 0 4 7 . 0 7 10 . 1 0 7 1 . 0 9士8 . 3 8 7 . 0 7土 0 . 1 4二 7

33、. 1 7士 0 . 2 8 * . 7 . 1 1士 0 . 1 8. 申 00XX0 150巧拟60(50 NS UK H e p a r i n N- V P * * P 0 . 0 1 v s H e p a r i n T a b 5 E f f e c t s o f N - V P r o t e i n a s e o n A P T T ( x 士 : , n 二 7 ) D r u 扩 G r o u p P re - d r u g P o s t - d r u g A P TT/ s A P TI / i n m; . A P TT / 6 0 mi n A P TT

34、 / 1 2 0 mi n N S UK H e p a r i n N- V P 1 5 0 0 0 1 5 0 3 0 0 0 6 0 0 0 1 5 0 0 0 5 9 . 8 1士1 4 . 2 6 5 7 . 6 3士5 . 7 7 6 2 . 3 4 11 0 . 2 3 6 2 . 2 0士1 2 . 4 4 6 9 . 9 0士1 0 . 6 2 6 8 . 0 0士 6 . 2 2 6 4 . 0 3 1 8 . 4 4 6 0 . 3 5 14 . 6 7 9 0 . 2 7 f 1 8 . 1 5 5 6 . 6 3士1 0 . 1 7 * ， 6 3 . 1 0士 2

35、. 8 7* * 6 7 . 6 3 t 8 . 2 7二 5 6 . 4 7士 9 . 8 9 5 0 . 1 8士1 1 . 8 7 1 1 0 . 5 6土1 7 . 8 9 5 8 . 8 5士6 . 7 7 6 6 . 5 0士3 . 5 5 7 3 . 7 8 t 7 . 9 5* * 6 3 . 2 6士1 0 . 2 6 6 1 . 1 8士9 . 5 0 1 4 0 . 4 2土2 1 . 5 1 5 3 . 0 5 11 6 . 2 8. 中 6 3 . 7 1士 5 . 1 6 “* 7 3 . 6 3士 8 . 1 6二 * 中 P 0 . 0 1 v s H e p

36、a ri n 酶时间的影响从 T a b 4 , 5 结果可知: 给药后， N - V 蛋白酶3 个剂量及尿激酶的P T , A P T I ， 与对照组相 比 无明显差异， 肝素组则与对照组相比差异有显著 性。 4 讨论 我们以前的研究( 待发表) 表明， N - V蛋白酶的 酶学性质比较复杂， 它是一种氨基肤酶， 它有直接水 解纤维蛋白和纤维蛋白原的纤溶酶活性， 可能还具 有激活纤溶酶原的活性。本实验中观察到， N - V蛋 白酶对纤维蛋白平板具有直接溶解作用， 为观察 N - V蛋白酶在体内对纤维蛋白溶解活性的影响， 本实 验依文献 6 测定了3 个指标， 即 纤维蛋白 原( F g )

37、 含 量、 D 一 二聚体 ( D - D ) 含量、 优球蛋白溶解时间 ( E L T ) 。 结果表明， N - V蛋白酶及尿激酶均可使家 兔F g , D - D含量降低， E L T明显缩短。N - V蛋白酶 与尿激酶比较， 给药 1 0 m i n 后， 纤维蛋白原含量即 降至最低值， 小、 中、 大3 个剂量分别使F g 降低至 8 5 %, 7 5 %, 6 0 %左右， 在给药6 0 , 1 2 0 m i n 后逐渐回 复， 呈现出作用时间短， 易控制的特点; 而尿激酶在 给药1 0 m i n 后， 纤维蛋白 原含量逐渐降低， 至给药 1 2 0 m i n 降至最低点，

38、呈现作用缓慢， 作用时间长的 特点， 易引 起纤溶系统的激活， 产生出血等副作用。 在本实验中， 由于F g 含量降低， 我们预计其降解产 物应该升高。我们采用纤维蛋白原降解产物( F D P ) 试剂盒测定， 但可能灵敏度低或者特异性等原因， 未 检测到降解产物的变化。 D 一 二聚体是已交联的纤维 蛋白 被纤溶酶降解的特异性分子标记物， 为纤维蛋 白 降解产物中的最小片段， 是血栓被溶解的直接证 据。本实验是采用未造成血栓模型的正常动物， 在 给药前后进行测定， 故D - D含量不升高， 反而降低， 其值变化与纤维蛋白原的变化平行。值得注意的 是: 虽然尿激酶对纤维蛋白原降低作用强度低于N

39、 - V蛋白 酶， 但是其降低D - D 含量的作用强度却与N - V蛋白 酶非常相似; N - V蛋白酶和尿激酶均表现为 在给药1 0 m i n 后， E L T 降低至最低点， 1 2 0 m i n 后开 始恢复， 而小剂量的N - V蛋白 酶不影响E L T o 此外， 我们观察了N - V蛋白酶对凝血功能的影 响， 检测了P T , A P T I ， 两个指标， P T 为血浆凝血酶原 时间， 主要影响因子有纤维蛋白原、 凝血酶原及第 V, V ff , X因子， 可反映外源性凝血系统有无障碍; 万方数据 中国药理学通报C h in e s e P h a r m a c o l

40、 o g ic a l B u l l e t i n 2 0 0 6 A u g ; 2 2 ( 8 ) 9 7 9 A M 为活化部分凝血活酶时间， 影响因子主要为 第VI M因子， 可检测对内 源凝集途径的作用。结果 表明， N - V蛋白酶对 P T , A M均无明显影响， 说明 其不引起纤溶系统的激活， 尽管引起F g 下降， 但对 凝血功能没有造成明显影响， 未引发出血的副作用。 临床上不论动脉或静脉系统的血栓形成和血栓 栓塞都会造成严重的疾病或临床综合症， 尤其是肺 栓塞、 脑梗死和心肌梗死， 是引起患者致死、 致残的 重要因素。早期( 6 一 1 2 h 内) 的溶栓和降纤是

41、治疗 的 重要手段， 临床研究发现， 纤溶酶 和东菱克栓 酶 能明 显降 低纤维蛋白 原含量， 在治疗急性脑梗 死 9 取得良 好 效 果。 实践证实， 适当 减低纤维蛋白 原的含量， 对减少和降低新血栓的形成具有重要价 值。从本实验结果分析， 1 次给药， 小剂量的N - V蛋 白酶就能使纤维蛋白含量降低， 2 - 4h 就可恢复， 如果再减少剂量， 可能更易控制纤维蛋白原的含量， 从这个特征可见， N - V蛋白酶的优点是突出的。提 示N - V蛋白酶可开发为治疗脑梗塞的药物。沙蚕 纤溶酶的药物开发研究是国家高技术研究发展计划 ( 8 6 3 计划) 和国家重点基础研究发展规划( 9 7

42、3 规 划) 的资助项目， 做为创新性药物， 还要做很多研究 工作。 参考文献: 的实验研究 J . 吉林大学学报( 医学版) , 2 0 0 4 , 3 0 ( 3 ) : 4 0 1 - 4. 2 L i Q , H o n g M , F u H Y , e t a l . E x p e r i m e n t a l s t u d y o n a n t i c a g u l a b i l - i t y a n d a n t i t h r o m b o t i c a c t i v i t y o f t h r o m b o l y s i n J . J J i

43、 l in U n iv ( M e d E d i t i o n ) ， 2 0 0 4 , 3 0 ( 3 ) : 4 0 1 一 4 . 3 A s t r u p T , M u l l e r t z S . T h e fi b r i n p l a t e m e t h o d f o r e s t i m a t i n g f i - b r i n o ly t i c a c t i v it y J . A r c h B io c h e i n B i o p h y s , 1 9 5 2 , 4 0 : 3 4 6 一 5 1 . 4 国家药典委员会.

44、中 华人民 共和国药典 P , 2 0 0 5 年版， 二部: 2 7 9 . 4 S t a t e P h a r m a c o p o e i a C o m m i t t e e . C h i n e s e p h a r m a c o p o e i a P . 2 0 0 5 e d i t i o n , S e c o n d P a rt : 2 7 9 . 5 徐叔云， 卞如镰， 陈修主编. 药理实验方法学 M , 3 版， 北 京: 人民 卫生出版社， 2 0 0 0 : 1 2 7 3 . 5 X u S Y , B i a n R L , C h e n X

45、 . T e c h n o l o g i e s o f P h a r m a c o l o g i c a l e x - p e r i m e n t M ， B e ij i n g : T h e p u b l i s h i n g h o u s e o f p u b l i c h e a l t h , 2 0 0 0 : 1 2 7 3 . 6 中 华人民共和国 卫生部药政局。 新药( 西药) 临床前研究指导 原则汇编 S , 1 9 9 3 : 7 0 6 T h e b u r e a u o f d r u g a d m i n i s t r a t

46、i o n o f C h i n e s e M i n i s t ry o f P u b l i c H e a l t h . T h e i n s t r u c t i o n p r i n c i p l e o n p r e c l i n i c a l s t u d y o f n e w d ru g S , 1 9 9 3 : 7 0 . 7 彭旭， 黄文越 降纤酶治疗急性脑梗死的临床分析【 J . 中 国 现代医学杂志， 2 0 0 4 , 1 4 ( 5 ) : 3 6 - 8 . 7 P e n g X , H u a n g W Y . C l i n

47、 i c a l a n a l y s i s o f d e fi b r a s e i n j e c t i o n i n t r e a t m e n t o f a c u t e c e r e b r a l i n f a r c t i o n J .C h i n a J M o d M e d , 2 0 0 4 , 1 4 ( 5 ) : 3 6 一 8 . 8 李 艳， 曹丽华， 张丽君， 等. 东菱克栓酶对脑梗塞患者的血流 变指标的影响研究【 J . 中国血液流变学杂志， 2 0 0 4 , 1 4 ( 2 ) : 2 1 3一 4 . 8 L i Y ,

48、C a o L H , Z h a n g L J , e t a l . E ff e c t s o f b a t ro x o b i n o n h e m o r h e - o l o g y o f p a t i e n t s w i t h a c u t e c e r b r a l i n f a r c t i o n J . C h i n J H e m o - r h e o l , 2 0 0 4 , 1 4 ( 2 ) : 2 1 3一 4 . 9 F r i z z e ll J P . A c u t e s t ro k e : p a t h o

49、 p h y s i o l o g y , d i a g n o s i s , a n d t re a t - m e n t J . A A C N C l i n I s s u e s , 2 0 0 5 , 6 ( 4 ) : 4 2 1 一 4 0 . ljl 仁 2 张云龙， 崔佳乐， 付海英， 等. 溶栓素的分离纯化和特性鉴定 仁 J . 中国生 化药物杂志， 2 0 0 5 , 2 6 ( l ) : 1 8 - 2 1 . Z h a n g Y L , C u i J Y , F u H Y , e t a l . P u r if i c a t i o n a n d c h a r a c