《NY-T 725-2003 饲料中莫能菌素的测定 高效液相色谱法.pdf.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《NY-T 725-2003 饲料中莫能菌素的测定 高效液相色谱法.pdf.pdf（3页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、N Y / T 7 2 5 -2 0 0 3 月 U舌 本标准是在参阅了美国全国饲料协会( N F I A) 推荐的通用分析方法及国内外大量文献的基础上 根据我国技术发展水平研究制定的， 采用了高效液相色谱( H P L C ) 一 柱后衍生化法。 本标准由中华人民共和国农业部和全国饲料工业标准化技术委员会提出。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位: 国家兽药评价中心( 中国农业大学动物医学院) 。 本标准主要起草人: R,于明、 沈建忠、 张素霞、 袁建敏。 N Y / T 7 2 5 -2 0 0 3 饲 料 中 莫 能 菌 素 的 测 定 高 效 液 相 色 谱
2、法 1范围 本标准规定了检测动物饲料中莫能菌素含量的高效液相色谱( HP L C ) 方法 本标准适用于配合饲料、 浓缩饲料和添加剂预混合饲料中莫能菌素含量的测定。本方法检测限为 5 mg / k g 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日 期的引用文件， 其随后所有 修改单( 不包括勘误内容) 或修改版均不适合本标准， 然而， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可 使用这些文件最新版本。凡是不注 臼期的引用文件， 其最新版本适用本标准 G B / T 6 6 8 2 分析实验室用水规格和试验方法 G B / T 1 4 6 9 9 . 1 饲料采样
3、方法 3 方法原理 用甲醇一 水提取试样中的莫能菌素， 以甲醇一 冰乙酸一 水作为流动相、 香草醛为衍生剂， 用高效液相色 谱一 柱后衍生化一 紫外检测法分离测定。 4 试剂和溶液 除非另有说明， 本法所用试剂均为分析纯， 水为去离子水， 符合 G B / T 6 6 8 2 二级用水的规定。 4 . 2 试 样提取液: 仁 甲 醇( 色谱纯) +水 ( 9 0 +1 0 ) . 香草醛衍生液: 量取 5 m工浓硫酸， 缓慢加人到 2 5 0 mL甲醇中， 置冰水浴中， 缓缓加人 2 0 g香草 醛， 混匀， 脱气后避光保存， 临用现配。 4 . 3 4 . 3 . 莫能菌素标准液: 莫能菌素
4、标准贮备液: 准确称取莫能菌素标准品( 纯度)9 0 0 0 ) 0 . 1 0 0 0 g ， 置于1 0 0 m L 容量瓶 中， 用甲醇溶解， 定容， 其浓度为 1 0 0 0 p g / mL的储备液， 置 4 冰箱中保存。 4 . 3 . 2 醇稀释 、 莫能菌素标准工作液: 分别准确吸取一定量的标准贮备液( 4 . 4 . 1 ) , 置于1 0 m 工 一 容量瓶中， 用甲 定容， 配制成浓度为2 . 0 p g / m L , 4 . 0 p g / m 1 . , 6 . 0 Fa g / m L , 8 . 0 p g / m 1 _ , 1 0 . 0 p g / m L
5、 , 1 2 . 0 p g / m 1的 标准 工作液。 5 仪器和设备 实验室常用仪器、 设备。 5 . 1 高效液相色谱仪: 配柱后衍生化装置和紫外检测器 5 . 2 离心机。 5 . 3 振荡器。 5 . 4 玻璃具塞三角瓶( 2 5 0 m L ) 5 . 5 微量进样器。 5 . 6 微孔滤膜( 0 . 4 5 p m ) . N Y / T 7 2 5 -2 0 0 3 6 试样制备 按 G B / T 1 4 6 9 9 . 匀装人磨口瓶中备用 1 规定， 取有代表性的样品， 四分法缩减取约 2 0 0 g ， 经粉碎， 全部过 1 m m孔筛， 混 7 测定步骤 7 . 1
6、试样提取 称取一定量的试样( 1 0 . 0 g 配合饲料， 或5 . 0 g 浓缩饲料， 或 1 . 0 g 添加剂预混合饲料) ， 置于2 5 0 m L 玻璃具塞三角瓶中， 加人 4 0 mL试样提取液( 4 . 1 ) ， 往复震荡 3 0 m i n 。静止 1 0 m i n ， 过滤再向试样中 分别加人 3 0 m 1试样提取液( 4 . 1 ) ， 重复提取两次。合并三次提取液， 用试样提取液定容到 1 0 0 m L e 取 7 m 工用0 . 4 5 u m微孔有机滤膜过滤作为试样溶液， 供高效液相色谱分析 7 . 2 H P L C色谱条件 a ) 色谱柱 C i e 柱
7、， 长1 5 0 m m， 内径4 . 6 m m, 粒径5 E c m， 或相当者 b ) 柱温 : 室温。 C流动相: 甲醇 ， 冰乙酸 ， 水( 9 4: 3: 3 ) . d ) 流动相流速: 0 . 7 mL / m i n o e ) 衍生液流速: 0 . 7 mL / m i n o t ) 反应管 不锈钢长 1 0 m， 内径。 . 2 mm, 9 ) 反应温度 9 5 0C h ) 检测波长: 5 2 0 n mo i ) 进样体积: 2 0 I L , 7 . 3 H P L C测定 取适量试样溶液( 7 . 1 ) 和相应浓度的标准工作液( 4 . 3 . 2 ) ， 作单点或多点校准， 以色谱峰面积积分值 定 量 8 结果计算与表述 8 . 1 试样中莫能菌素的含量按式( 1 ) 计算: X=m X n 。 . . . . . . . 。 (1) 式中: X试样 中莫能菌素的含量， 单位为毫克每千克( m刀k 妙 ; 。一一H Y L C试样色谱峰对应的莫能菌素的质量， 单位为微克O H ) ; 二一试样质量 ， 单位为克( 刃 ; 、 稀释倍数。 8 . 2 测定结果用平行测定的算术平均值表示， 保留至小数点后一位。 9 允许 误差 两个平行测定的相对偏差不大于1 0 %