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1、SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 S N / T 1 3 8 2 -2 0 0 4 马流产沙门氏菌病凝集试验方法 P r o t o c o l o f a g g l u t i n a t i o n t e s t f o r e q u i n e s a l m o n e l l o s i s ( e q u i n e p a r a t y p h o i d ) 2 0 0 4 - 0 6 - 0 1 发布 2 0 0 4 - 1 2 - 0 1 实施 中华人民共和国 国家 质 量 监 督检 验 检 疫 总 局 发 布 S N/ T 1 3 8 2 -2 0 0
2、4 p li青 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位: 中华人民共和国山东出人境检验检疫局。 本标准主要起草人: 卢晓中、 焦宏强、 于红光、 郑雷、 马佐喜。 本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 S N/ T 1 3 8 2 -2 0 0 4 马流产沙门氏菌病凝集试验方法 范 围 本标准规定了马流产沙门氏菌病凝集反应试验方法。 本标准适用于进出境马马流产沙门氏菌病检疫。 2 原理 马在感染了马沙门氏菌病后， 血液中的凝集素升高. 能使抗原诊断液中的菌体产生凝集， 因此可根 据被检马血清对抗原的凝集价， 判定马是否感染该病。 3仪器设备 :. : 恒温培养箱。
3、 试管: 1 2 m mX 1 0 0 m m的标准试管。 移液管: 1 mL , 2 m L的标准刻度移液管。 试 管架 。 振 荡器 。 313233 4试剂 4 . 1 抗原 由兽医生物药品厂生产供应。本抗原只供马副伤寒性流产( 即马流产沙门氏杆菌病) 凝集反应诊断 用。静置时是白色或灰白色液体， 瓶底有少量灰白色沉淀物。振摇后即成均匀的混悬液。使用时作 2 0 倍稀释。有效期按照瓶签说明。 4 . 2 阳性血清 由兽医生物药品厂生产供应。为橙黄色或棕红色透明液体， 保存期以内的阳性血清， 可供鉴定抗原 和诊断时作对照之用。保存期超过一年的阳性血清， 经重检凝集价不低于 1 ， 1 6
4、0 0 ( +) 时， 可继续使 用半年， 供诊断时对照用， 但不能用于鉴定抗原。 4 . 3 阴性血清 由兽医生物药品厂生产供应， 为橙黄色或棕红色透明液体， 1， 2 0 0稀释对马流产抗原应无凝集反 应保存期为一年半， 期满复检如合格， 可继续使用一年。 4 . 4 0 . 5 %石炭酸生理盐水 称取 0 . 8 5 g 氯化钠( 分析纯) , 0 . 5 0 g石炭酸( 分析纯) ， 将蒸馏水加至 1 0 0 mL ， 溶解、 过滤， 高压灭 菌即成 。 5被检血清 对被检马按常规方法静脉采血并分离血清。被检血清必须为新鲜纯净， 不溶血或轻微溶血， 未腐败 变质者 6操作方法 6 .
5、1 工作抗原的稀释 将抗原的原液充分振摇均匀， 根据用量用0 . 5 %石炭酸生理盐水作 1 : 2 0 倍稀释 S N/ T 1 3 8 2 -2 0 0 4 6 . 2 被检血清的稀释 取标准小试管 5 支置试管架上， 第 1 , 2支管各加人 。 . 5 %石炭酸生理盐水1 . 8 mL ， 第3 , 4 , 5 管各加 人0 . 5 %石炭酸生理盐水 1 mL 。用 1 m L刻度移液管吸取被检血清0 . 2 m L加人第一管中混合均匀; 然 后吸取。 . 2 m L加人第二管中， 充分混合均匀后， 再由第二管吸取1 mL加人第三管中; 依次类推稀释到 第五管， 最后将第五管多余的1
6、mL吸出弃掉( 见表 1 ) e 表 1 操作术式表 试 管 号 12345 抗 原 对 照 血 清 稀 释 倍 数 1:1 01: 1 0 01:2 0 01 : 4 0 01:8 0 0 0 . 5 %石炭酸生理盐水/ mL 被检血清/ mL:. 玉: .: 玉 :.: 玉 :.: 玉 .: 水1.0(弃 掉 。 。 1: 2 0 抗原/ mL 1 . 01 . 01 . 01 . 01 . 0 血 清 最 终 稀 释 倍 数 1 :2 0 01 :4 0 01 : 8 0 01 :1 6 0 0 凝 集 条 件置3 7 0C - - 3 8 0C恒温箱中2 4 h 凝 集 度 6 . 3
7、 对照阳性、 阴性血清稀释 方法同6 . 2 。 6 . 4 加抗原 上述稀释完毕被检、 阳性、 阴性血清的第 2 管开始， 每管各加工作浓度抗原 1 m L， 充分振荡。 6 . 5抗原自凝对 照 于一支试管中加人。 . 5 %石炭酸生理盐水 1 mL ， 再加人工作浓度抗原 1 mL混合。 6 . 6感作 将试验管和对照管置于 3 7 0C -3 8 恒温培养箱中2 4 h后取出观察结果， 并填写表1 . 7 结果判定 7 . 1 对照试验检查 7 . 1 . 1 阳性血清对照管: 管底有多量紧密边缘整齐或不整齐的凝集物沉淀， 上部液体完全透明( 即 1 0 0 %的菌体发生凝集) 。振摇
8、后， 管底沉淀呈颗粒状分散在液体中。 7 . 1 . 2 阴性血清对照管: 管底无任何凝集， 液体完全混浊。 7 . 1 . 3 抗原对照管: 管底无任何凝集， 液体完全混浊。 7 . 2 凝集度标准记录 7 . 2 . 1 “ +” : 管底有多量紧密边缘整齐或不整齐的凝集物沉淀， 上部液体完全透明( 即 1 0 0 写的 菌体发生凝集) 。振摇后， 管底沉淀呈颗粒状分散在液体中。 7 . 2 . 2 “ +” : 管 底有7 . 2 . 1 所述沉淀， 唯上部液 体稍混浊( 7 5 %的 菌体发生凝集) 。 7 . 2 . 3 “ +” : 管底有中等量沉淀， 呈颗粒状， 液体呈中等程度混
9、浊( 即 5 0 %菌体发生凝集) ， 沉淀极易 摇碎。 7 . 2 . 4 “ +” : 管底有少量沉淀， 颗粒微细， 液体混浊( 2 5 %的菌体发生凝集) 。 7 . 2 . 5 “ 一” : 管底无任何凝集， 液体完全混浊 7 . 3 判定结果 所列对照试验成立， 如下进行判定: 1 ， 1 6 0 。出现“ +” 以上凝集反应者， 判定为阳性反应 1 ， 8 0 。 出现 +” 以上凝集反应者， 判定为可疑反应。 S N / T 1 3 8 2 -2 0 0 4 1 : 8 0 。 出 现“ 十” 以 下反应者， 判为阴性反应。 对初检为可疑的马匹， 间隔一周采血按照本操作规程复检; 复检结果为阳性或仍为可疑反应者， 判 为阳性马; 复检结果为阴性反应的， 再复检一次， 连续复检两次呈阴性反应， 且无临床症状表现者， 则判 为阴性 马。