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1、SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 S N / T 1 4 0 5 -2 0 0 4 进出口蜂产品中 1 0 - 轻基- a - 癸烯酸的检验方法毛细管电泳法 I n s p e c t i o n o f 1 0 - h y d r o x y - a - d e c e n o i c a c i d i n b e e p r o d u c t s f o r i m p o r t a n d e x p o r t - C a p i l l a r y e l e c t r o p h o r e s i s me t h o d 2 0 0 4 - 0 6 - 0 1
2、 发布 2 0 0 4 - 1 2 - 0 1实施 中华人民共和国 国家 质 量 监督 检 验 检 疫 总 局 发 布 S N/ T 1 4 0 5 -2 0 0 4 前言 本标准的附录 A为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准由中华人民共和国湖北出人境检验检疫局负责起草。 本标准主要起草人: 林雁飞、 孙保国、 胡小钟、 余建新、 曾静、 王鹏、 李晶。 本标准系首次发布的检验检疫行业标准。 S N/ T 1 4 0 5 -2 0 0 4 进 出口蜂产品中 1 0 - 经基- a - 癸烯酸的检验方法毛细管电泳法 范围 本标准规定了进出口蜂产品中1 0 - 经
3、基一 a - 癸烯酸( 1 0 - H DA ) 检验的抽样、 制样和毛细管电泳检验 方法 。 本标准适用于进出口蜂王浆及蜂王浆冻干粉中1 0 - 经基一 a - 癸烯酸( 1 0 - HD A ) 的检验。 2 抽样和制样 2 . 1 检验批 蜂王浆以不超过 1 0 0 0 k g 为一检验批， 蜂王浆冻干粉以不超过 2 5 0 k g为一检验批。 同一检验批商品应具有相同的特征， 如包装、 标记、 产地、 规格、 等级等。 2 . 2 抽样数且 抽样数量见表 1 , 表 ， 批量抽 样 量 单 位 为 件 1 - 5 0 5 1 - 1 0 0 1 0 0 2 . 3 抽样和制样方法 按
4、2 . 2规定的抽样件数随机抽取， 逐件开启， 从每件内抽取一罐( 袋) 作为原始样品， 将样品混匀后 分为两等份， 每份不少于2 0 g 。加封后， 标明标记， 一份留存， 另一份及时送交实验室。在抽样和制样的 操作过程中必须防止样品受到污染和发生含量的变化。 2 . 4 试样保存 试样于一1 8 以下冷冻保存。 试验方法 3 . 1 方法提要 在酸性条件下， 用乙醇提取试样中的1 0 - HD A， 经离心后， 取上清液与缓冲液混合后用毛细管电泳 仪测定， 内标法定量。 3 . 2 试剂和材料 除另有规定外， 试剂均为分析纯， 水为去离子水。 3 . 2 . 1 无水乙醇: 优级纯。 3
5、. 2 . 2 盐酸溶液: 。 . 0 3 mo l / L水溶液。 3 . 2 . 3 内标物: 对经基苯甲酸甲醋， 含量 9 9 . 0 0 0 , 3 . 2 . 4 内 标溶液: 取已 干燥过的对轻基苯甲酸甲醋约。 . 6 5 g ( 准 确至。0 0 0 2 g ) ， 加无水乙醇溶解并移 人 1 0 0 0 mL容量瓶中， 用无水乙醇稀 释至刻度 ， 摇匀。此溶液每毫升含内标 物约 0 . 6 5 m“ , :. :. : 十二烷基硫酸钠( S D S ) . 十水合四硼酸钠( 四硼酸钠) 。 S N/ T 1 4 0 5 -2 0 0 4 3 . 2 . 7 缓冲溶液( p H值
6、为9 . 2 ) : 称取2 . 8 6 g四硼酸钠( 3 . 2 . 6 ) , 0 . 7 1 8 g S D S ( 3 . 2 . 5 ) ， 用水溶解， 并用 水定容至 1 0 0 mL 。此溶液含四硼酸钠 0 . 0 7 5 m o l / L , S D S 0 . 0 2 5 mo l/ L。 3 . 2 . 8 1 0 - HD A标准品: ”. 。 %以上。使用前在放有浓硫酸的干燥器内减压干燥2 4 h , 3 . 2 . 9 1 0 - HD A标准溶液: 取干燥后的 1 0 - HD A标准品约 。0 2 5 g ( 准确至 。 . 0 0 0 2 g ) . 加无水乙
7、醉溶 解并移人2 5 m L 容量瓶中， 用无水乙醇稀释至刻度， 摇匀。 此溶液 每毫升含1 0 - H D A约1 m g , 3 . 3 仪器和设备 3 . 3 ， 1 毛细管电泳仪: 带紫外检测器。 3 . 3 . 2 超声波清洗仪。 3 . 3 . 3 涡旋混匀器。 3 . 3 . 4 离心机 : 4 0 0 0 r / mi n , 1 6 0 0 0 r / mi n , 3 . 3 . 5 离心管: 1 5 mL , 1 . 5 mL具塞离心管。 3 . 4 测定步骤 3 . 4 . 1 蜂王浆: 试样解冻至室温， 用玻璃棒充分搅匀。称取 。 . 5 g 样品( 准确至 。 .
8、0 0 1 g ) , 置于 5 0 mL 容量瓶中， 加人 2 mL盐酸溶液( 3 . 2 . 2 ) ， 置涡旋混匀器上混合使试样溶解。加人 3 0 mL无水乙醇 ( 3 . 2 . 1 ) ， 边加边轻轻摇动。再定量加人 1 0 . 0 mL内标溶液( 3 . 2 . 4 ) ， 用无水乙醉定容至刻度， 摇匀， 立 即在超声波清洗仪中超声 1 5 mi n ， 取出， 转人 1 5 m L离心管， 在3 0 0 0 r / mi n 离心 1 0 mi n 。准确取上清 液。 . 5 mL ， 转人 1 . 5 mL离心管， 加人。 . 5 m L缓冲溶液( 3 . 2 . 7 ) ,
9、混匀后在 1 6 0 0 0 r / mi n 离心 1 0 mi n 进行测定 。 3 . 4 . 2 蜂王浆冻干粉: 试样解冻至室温， 称取 0 . 1 5 . g ( 准确至0 . 0 0 1 g ) ， 置于 5 0 m L容量瓶中， 加人 2 0 m L 无水乙醇( 3 . 2 . 1 ) , 2 mL盐酸溶液( 3 . 2 . 2 ) , 置涡旋混匀器上混合使试样溶解。再定量加人 1 0 . 0 mL 内标溶液( 3 . 2 . 4 ) ， 用无水乙醇定容至刻度， 摇匀， 立即在超声波清洗仪中超声 1 5 mi n ， 取出， 转 人 1 5 mL离心管， 在 3 0 0 0 r
10、/ mi n离心 1 0 mi n 。准确取上清液0 . 5 m L ， 转人 1 . 5 mL离心管， 加人 0 , 5 m L 缓冲溶液( 3 . 2 . 7 ) , 混匀后在 1 6 0 0 0 r / mi n 离心 1 0 m i n 进行测定。 3 . 5 校正因子测定 定量移取0 . 5 mL , 1 . 0 mL , 2 . 1 0 mL 容量瓶中， 定量加人 2 . 0 m L 0 . 5 m L ， 加人 0 . 5 m L缓冲溶液( 3 . 弓 ( F=艺F , / 6 ) 0 m L, 3 . 0 mL , 4 . 0 mL和 5 . 0 mL 1 0 - HD A标准
11、溶液( 3 . 2 . 9 ) 至 内标溶液( 3 . 2 . 4 ) ， 用无水乙醇稀释至刻度， 摇匀。分别吸取此溶液 2 . 7 ) , 混匀后进行电泳分析。用峰面积计算， 求出平均校正因子 3 . 6 试样测定 每 个试样进样两次， 1 0 - H D A及内标物的保留时间 分别为1 7 . 9 m i n 和2 1 . 7 m i n ， 典型色 谱图参见 图 A. 1 色谱条件 毛细管柱: 7 5 k m( 内径) X5 7 c m未涂覆石英柱， 有效柱长5 0 c m 缓冲 溶液: 同3 . 2 . 7 ; 检测波长: 2 1 0 n m; 进样方式: 压力进样， 0 . 5 P
12、a ; 进样时间: 5 “ ; 柱温, 2 5 0C; 工作电压: 1 5 W . a)曰c)山e)幻妒 结果计算与表述 按式( 1 ) 计算校正因子: S N/ T 1 4 0 5 -2 0 0 4 A、 ，爪 (1 ) 式 中: 厂 校正因子; A . 标准溶液中内标物峰面积; A, 标准溶液中1 0 - HD A峰面积; m ; 内 标物质 量， 单位为 毫克( m g ) ; 二. 工 。 - HD A质量， 单位为毫克( m g ) . 按式( 2 ) 计算试样中 1 0 - HD A的含量: X 二 F A2 A:m: ， 1 0 0( 2 ) 式 中: X -1 0 - H D
13、A含量， 写; A , 试样中内标物峰面积; A 试样中1 0 - HD A峰面积; m , 内 标物质量， 单位为毫克( m g ) ; m , 试样质量， 单位为毫克( mg ) . 平行试验允许误差( 相对) : 蜂王浆不大于 2 0/ a ; 蜂王浆冻干粉不大于 1 %e S N / T 1 4 0 5 -2 0 0 4 附录A ( 资料性附录) 标准品色谱图 t 0- H DA 对 经 墓 苯 甲 硬 甲 醋 一一，一一一一一一一一一一一一，一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一，reses 1 0 15 20 2 5 图 A . 1 1 0 - HD A标准品色谱图