《TGF-β1在实验性矽肺大鼠肺组织中的表达及其意义.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《TGF-β1在实验性矽肺大鼠肺组织中的表达及其意义.pdf（2页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、4 2 医药论坛杂志2 0 0 6 年4月第2 7卷第7 期 T G F 一 甲 在实验性矽肺大鼠肺组织中的 表达及其意义 郝长付姚 武吴逸明 郑州大学公共卫生学院 郑州市 4 5 0 0 5 2 摘要目 的 研究转化生 长因 子田( T G F - 田) 在二氧化 硅所致矽 肺大鼠 肺组织中 的表达。 方法 4 0 只 S D大鼠， 分为矽肺组和正常对照组， 每组2 0 只， 雌雄各半: 砂肺组以气管灌注石英粉尘的方法造模， 对照组以 相 同 体积的生理盐水代替。 造模后4 5 天， 处死， 取出 肺组织， 固定、 包 埋， 用免疫组织化学方法进行测定T G F 一 甲 蛋白 的表达情况。结
2、果 矽肺模型组T G F 一 田的表达比正常对照组明显增强( 尸 0 . 0 1 ) 。 结论T G F 一 甲在 矽肺的发生和发展中可能起重要作用。 关键词实 验性砂肺 转化生长因 子0 1 ( T G F - (3 1 ) 二氧化 硅 中圈分类号: R一 3 3 2文献标识码: B文章编号: 1 6 7 2 - 3 4 2 2 ( 2 0 0 6 ) 0 7 -0 0 4 2 -0 2 E x p r e s s i o n o f T G F一 p 1 i n L u n g o f E x p e r i m e n t a l P n e u mo c o n i o s i s i
3、 n r a t s H A O C h a n 妙 ， Y A 0 W u ， W U Y i m i n g , e t a l C o l l e g e o f P u b l i c H e a l t h , Z h e n g z h o u U n i v e r s i t y , Z h e n g z h o u 4 5 0 0 5 2 ， C h i n a A B S T R A C T O b j e c t i v e T o s t u d y t h e e x p r e s s i o n o f T G F 一 R l i n e x p e r i m
4、 e n t a l p n e u m o c o n i o s i s o f r a t s . Me t h o d s T h e m o d e l g r o u p 4 0 S D r a t s w e r e d i v i d e d i n t o t h e m a l e a n d f e m a l e g r o u p ， 2 0 r a t s i n e a c h g r o u p ; T h e c o n t r o l g r o u p r a t s a l s o w e r e d iv i d e d i n t o t h e m
5、 a l e a n d f e m a l e g r o u p , 2 0 r a t s i n e a c h g r o u p . P n e u m o c o n i o s i s r a t m o d e l s w e r e e s t a b l is h e d b y i n t r a t r a c h e a l i n s t i ll a t i o n s i l i c o n d i o x i d e . 4 5 d a y s l a t e r ， t h e p a t h o l o g i c a l c h a n g e s w
6、 e r e o b s e r v e d， t h e e x p r e s s i o n o f T G F 一 0 1 i n t h e l u n g t i s s u e w a s v e r i - f i e d b y i m m u n o h i s c h e m i c a l a n a l y s i s . R e s u l t s T h e e x p r e s s i o n o f T G F 一 日 1 i n m o d e l g r o u p w e r e s i g n i f - i c a n t l y i n c r
7、e a s e d t h a n t h o s e o f n o r m a l g r o u p ( P 0 . 0 1 ) . C o n c l u s i o n T G F 一 0 1 m a y p l a y a n i m p o r - t a n t r o l e i n e x p e r i m e n t a l p n e u m o c o n i o s i s . K E Y WO R D S E x p e r i m e n t a l p n e u m o c o n i o s i s; T G F 一 p ， ; S i l i c o
8、n d i o x i d e 尘肺病是我国的职业病中发病率最高、 对工 人健康危害非常严重的一类疾病。据统计近年来 我国尘肺病例约占 职业病患者总人数的2 / 3 ; 煤工 尘肺作为尘肺病中最常见的一种， 占尘肺患者总 数的一半以上。 T G F 一 p ， 是一种同源双链的分子 量为2 5 K D的单一形式多肤， 由 1 1 2个氨基酸组 成， 主要是淋巴细胞及单核巨噬细胞合成释放。 T G F 一 0 ; 在肺中 广泛分布于支气管上皮细胞、 肺 泡巨噬细胞、 增生的n型肺泡上皮细胞及间质细 胞 等 仁】 。 1 材料和方法 1 . 1 动物分组和大鼠矽肺模型的建立选用河 南省实验动物中心
9、提供的清洁级( S P F ) 健康成年 雄性S D大鼠4 0只， 体重 1 8 5 - 2 1 2 g ， 健康状况良 好， 检疫一周后用于实验。随机分为矽肺组和正 常对照组， 每组2 0 只， 雌雄各半。矽肺组气管内 一 次性灌入 1 m l S i O 2 混悬液( 用生理盐水配制成 5 0 m g / m l 悬液， 加青霉素2 0 0 0 U / m l ) ， 对照组大 鼠注人等体积的生理盐水( 加青霉素2 0 0 0 U / m l ) a 4 5 d 后 处 死大鼠 用无 实 验 观 察。 1 . 2 病理学观察_ 取每只大鼠右下肺最大横径处 肺组织用于石蜡包埋切片， 常规行
10、H E染色进行病 理学观察。矽结节分级参照 K i n g 五级分类法分 类: I 级: 矽结节由细胞成份构成， 周围见少量成 纤维细胞包绕: II 级: 矽结节由细胞成份构成， 外 围见较多成纤维细胞包绕， 胶原可有可无: 1 Q 级: 矽结节以 胶原纤维为主， 细胞成份仍存在; N级; 矽结节以胶原纤维为主， 细胞成份很少; v级: 矽 结节已胶原纤维化并融合， 细胞成份极少或无。 J o u rn a l o f M e d i c a l F o r u m V o l . 2 7 N o .工 A p ri l 匹些 4 3 1 . 3 肺组织T G F - (3 ， 的免疫组化染色
11、 采用链 霉素亲生物素蛋白一 过氧化物酶复合技术进行 T G F 一 0 1 免疫组化染色。 抗T G F 一 0 ， 单克隆抗体 及S A B C 试剂盒购于武汉博士德生物工程有限公 司。 T G F 一 R ， 的免疫组化染色步骤按S A B C试剂 盒进行操作。每只大鼠的免疫组化标本随机选取 1 0 个视野4 0 0 倍光镜下进行观察。应用多功能彩 色图像分析系统对T G F一 0 ， 的蛋白表达进行分 析。阳性反应为胞浆呈棕褐色。用相对阳性面积 百分比来表示表达强度。 1 . 4 统计学分析应用 E x c e 1 2 0 0 0 对全部调查和 测定结果建立数据库， S P S S 1
12、 2 . 0 软件包进行数据 的统计分析。计量资料两组间比较采用 c 检验。 检验水准。 二 0 . 0 5 。 2 结果 2 . 1 病理改变染尘4 5 d 后2 0只矽肺模型组经 组织病理鉴定， 全部发生矽肺病变; 对照组大鼠均 未出现矽肺病变。正常照组大鼠双肺呈粉红色， 质地柔软; H E 染色光镜下观察， 肺组织结构清晰， 肺泡壁呈细线状， 肺泡内未见炎性细胞浸润。矽 肺模型组大鼠双肺体积略增大， 质地较硬， 表明可 见到乳白色针尖大小的点状病灶且触之较硬， 剖 开时有沙粒感; H E染色光镜下观察， 肺正常结构 被破坏， 细胞增生侵润明显， 可见明显的矽结节， 肺间质增厚， 纤维组织
13、增生。参照K i n g 五级分类 法进行分类， 矽结节病变均为I 级一n 级。 表1 肺组织T G F 一 日 ， 的免疫组化结果分析( x 士 s ) T G F 一 p 的 生物学活性十分广泛， 几乎作用于所有 细胞， 其主要作用是抑制细胞生长和活性， 但对某 些细胞可促进其增殖， 增强细胞活性。现已证实， T G F 一 R 主要有促进间质来源细胞的增殖、 分化和 移行等功能。它可促进成纤维细胞增殖并使其分 泌纤粘素和胶原等细胞外基质增多， 对巨噬细胞 等 有 趋 化作用 3 。 研究资料表明: T G F 一 0 ， 的 释 放和激活有助于生理状态下维持正常组织的结 构， 但它也可通
14、过多种作用参与多种原因导致的 肺纤维化过程4 ,5 。 在多种因素导致的肺纤维化 中均有T G F 一 0 ， 含量增高， 因而有学者推测T G F 一 0 ， 可能是尘肺发病过程中的关键性分子之 一 6 ,7 。 本实验结果显示， 矽肺模型组的T G F 一 0 1 表达与对照组相比， 矽肺组阳性区百分比( %) 、 平 均灰度、 阳性区平均灰度均显著高于对照组， 这表 明矽肺组肺组织中T G F 一 p ， 的表达范围广， 表达 的强度高， 提示实验大鼠接触S i 0 2 后， 肺组织受到 损伤， 可能促使T G F 一 R 1 蛋白的表达上调， 从而促 进成纤维细胞增殖并使其大量分泌纤粘
15、素和胶原 等细胞外基质， 导致肺组织纤维化， 最终形成矽 肺。因 此， T G F 一 p ， 蛋白的 异常高表达可能参与 了矽肺肺纤维化的发生和发展。 参考文献 对照组L P 阳性区百分比( %) 平均灰度 阳性区平均灰度 6 3 . 9士2 1 . 9 1 0 9 . 6士1 4 . 9 1 1 5 . 6土1 5 . 2 2 6 . 4士2 3 . 9 9 4 . 6士2 7 . 6 1 1 0 . 5士2 7 . 2 1 4. 0 4 0 5. 8 0 2 1 . 9 8 3 P 0 . 0 5 尸 0. 0 5 尸 0 . 0 5 2 . 2 肺组织T G F 一 团的免疫组化结果分
16、析 矽 肺组与对照组肺组织T G F 一 因的免疫组化分析结 果见表1 ， 矽肺组阳性区百分比( %) 、 平均灰度、 阳 性区平均灰度均显著高于对照组， 差异有统计学 意义( P 0 . 0 5 ) 。 3 讨论 矽肺是由于在生产过程中长期吸人游离二氧 化硅含量较高的粉尘而引起的以肺组织纤维化为 主的疾病。我国矽肺病例占尘肺总病例接近 5 0 %， 位居第一， 是尘肺中危害最严重的一种 2 1 0 但是矽肺病发病机制十分复杂， 尚未完全阐明。 但已经明确的是矽肺发生是肺组织纤维化的过 程， 肺纤维化由早期损伤、 炎症变化发展而来。 1 M a c h i d e M， N a k a m u
17、 r a T . T r a n s f o r m i n g g r o w t h f a c t o r ( T G F ) . N i p p o n R i n s h o , 2 0 0 5 , 6 3 ( S u p p l 8 ) : 9 3 - 9 8 2 金泰真， 孙贵范.职业卫生与职业医学. 5版. 北京: 人 民卫生出版社， 2 0 0 5 : 5 2 3 L i Y J , A z u m a A , U s u k i J , e t a l . E M 7 0 3 i m p r o v e s b l e o m y c i n 一 i n d u c e d
18、 p u l m o n a r y f i b r o s i s i n m i c e b y t h e i n h i b i t i o n o f T G F 一 b e t a s i g n a l i n g i n l u n g f i b r o b l a s t s . R e s p i r R e s , 2 0 0 5 ， 7 : 1 6 4 I s h i d a Y , T a k a y a s u T , K im u r a A , e t a l . G e n e e x p r e s s i o n o f c y t o k i n e
19、s a n d g r o w th f a c t o r s i n t h e l u n g s a f t e r p a r a q u a t a d - m i n i s t r a t i o n i n m i c e . L e g M e d ( T o k y o ) , 2 0 0 5 ， 8 ( 2 ) : 1 0 2 - 1 0 9 5 V a n d e n B r u l e S , M i s s o n P , B u h l i n g F , e t a l . O v e re x p r e s - s io n o f c a th e p
20、s in K d u r in g s i lic a 一 i n d u c e d l u n g f ib r o s i s a n d c o n t r o l 师T G F 一 b e t a . R e s p i r R e s , 2 0 0 5 , 6 : 8 4 6 L i c h t e n b e r g e r F J 3 r d , C h r i s t i n e M R , M e l i s s a H, e t a l . N A C a n d D T T p r o m o t e T G F一( b e t a ) 1 m o n o m e r
21、 f o r m a t i o n d e m o n s t r a t i o n o f c o m p e t i t i v e b i n d i n g . J 一 I n fl a m m( L o n d ) ， 2 0 0 5 , 3 ( 1 ) : 7 7 C h e n C M, C h o u H C r H s u H H , e t a l . T r a n s f o r m i n g g r o w t h f a c t o r 一 b e t a l u p r e g u l a t i o n i s i n d e p e n d e n t o f a n g i o t e n s i n i n p a r a q u a t 一 i n d u c e d l u n g fi b r o s i s . T o x i c o l o g y , 2 0 0 5 ， 2 1 6 ( 2 一 3 ) : 1 8 1 - 1 8 7 2 0 0 6 -0 1 - 1 2 收稿