UPAN对去卵巢大鼠神经元退行性变的作用.pdf

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1、中国药if学通报C h i P h a * m a c d o g ic a l B u l l e t i n 2 0 0 1 J u n ; 1 7 ( 3 ) : 2 8 5 -8 2 8 5 U P A N对去卵巢大鼠神经元退行性变的作用 杨 芳 王 蓬文，谭 宁 2 姬志娟 赵志炜 盛树力 ( 首都K科大学宣武K院北京脑老化研究实 验宝， 北京1 0 0 0 5 3 ) 中国图书分类号R - 3 3 2 ; R 3 2 2 . 8 5 ; R 3 9 2 . 1 1 ; R 3 4 7 . 9 1 3 ; R 7 1 3 . 6 文献标识码A文章编号1 0 0 1 - 1 9 7 8

2、 ( 2 0 0 0 ) 0 3 - 0 2 8 5 - 0 4 摘要目的通过观察 t 压 J八 N对卵巢切除大鼠学习、 记忆 功能， 海马神经元超微结构以 及有关蛋白 质表达的影响来证 实U P A N对神经元退行性变有改善作用。方法早大鼠、 行双侧卵巢切除手术造模， 并于6 w k 后皮下注射U P A N进 行治疗， 1 2 w k 后行水迷宫实验， 至1 3 w k 开始行灌注固定， 取脑组织作超薄切片进行电镜分析; 作冰冻切片进行雌激素 受体( E R a ) , 糖元合成激酶( G S K - 3 ) 、 细胞周期动态激酶 ( C D K - 5 ) , 蛋白 磷酸醋酶( P P

3、- 1 , P P 2 A及P P - 2 B ) 免疫组化染 色。 结果水迷宫检测卵巢切除组大鼠较正常组游完全程 所须时间明显延长及错误反应次数明显增多, 1 月 】A N治疗组 结果与正常组接近。去卵巢组大鼠 海马神经元超微结构明 显损害 E R . 表达增高, G S K - 3 , C D K - 5 , P P - 1 , P P 2 A及P P - 2 B 表达增高， 但以蛋白激酶G S K - 3 和( A K - 5 增高最为明显。 使用U P A N治疗后能明显改善海马神经元超微结构的损 害， 使上述有关蛋白 质的表达恢复到正常水平。结论去卵 巢大鼠存在着学习、 记忆功能障碍

4、， 海马神经元超微结构以 及有关蛋白 质的表达出现异常改变。U P A N能明显改善其 学习、 记忆功能， 维持海马神经元超微结构的完整性以及使 有关蛋白质表达恢复到正常水平。 关健词卵巢切除; 雌激素 受体; 蛋白激酶; 蛋白 磷酸酣酶 老年性痴呆( A i l ) 是老年人的常见病， 6 5 岁以 2 0 0 0 - 1 1 - 2 9收稿. 2 0 0 1 - 0 3 - 0 2再修回 北京市科委资助项目， N o 9 5 1 8 9 0 6 0 0 ， 首都医 科大 学病理学 救研室， 北 京 1 0 0 0 5 4 2 锦州市中 心 医院妇 产科 辽宁 1 0 0 0 2 1 作者

5、简介: 扬 芳， 女， 2 7 岁. 硕士 研究生 盛树力， 男, 6 4 岁 教授， 北京脑老化研究实验室首席专家 上妇女患老年性痴呆( AI ) 通常比年龄相匹配的男 性高2 - 3 倍 I 。 健 康老年 妇女从5 0 - - 6 0 岁开 始脑 体积减少， 主要影响海马和顶叶， 而男性要比女性的 脑萎缩至少要晚1 0 年。 8 5 岁以上高龄妇女， A 1 ) 患 病率可达3 0 %- - 5 0 %， 而且， 认知损害可能比男性 严重。因 此卵巢功能下降， 雌激素( E ) 缺乏就成为 A D的一种危险因素。 雌激素对神经元有许多作用， 包括以下几个方 面: 调节许多脑区( 包括下丘

6、脑多个核团和海马 等) 的 突触联结。增强胆碱能神经元的功能 2 1 减少A (3 的 产生， 增 加s A P P 。 的 产 生 3 1 ， 从而 维 持 神 经元的存活。能抗氧化应激a l 、 兴奋性毒性作 用 5 1 和(3 - A m y lo i d 的 毒 性 6 1 ， 对 神 经 细 胞 具 有 保 护 作用。雌激素通过化学反应直接清除自由 基， 保 护神经元。促进神经元和胶质细胞的分化和存 活。因 此， 雌激素对神经元的主要作用是神经营养 作用， 也可能是一种神经营养因子， 雌激素缺乏将造 成神经元退行性变。A l 最早出现认知功能障碍， 而 这种功能与海马结构、 基底前脑

7、胆碱神经元功能 减退有关， 胆碱神经元的功能依赖于神经营养因子 ( N T ) 的刺激。神经元纤维缠结( N F T ) 是A l 的一 个神经病理学特征， T a u 蛋白过度磷酸化形成成对 螺旋细丝， 继之糖化， 形成神经元纤维缠结。 但是， T a u 蛋白 磷酸化的程度取决于使蛋白质磷酸化的激 酶和 使蛋白 质 脱磷酸 化的 磷酸酷酶 之间的 平衡f 7 1 最近我们经过反复研究， 在A P P 6 9 5 中6 3 一 7 3 肤 段( 序列为I D T K E G I L Q Y C ) ， 具有神经营养作用 和 神经保护作用。 我们将这一肤段称为A P P N端 I I 肤( U

8、 n d e c a m e r P e p t i d e o f A P P N T e r m i n a l 沃I P - A N ) o U P A N对人S Y 5 Y神经母细胞瘤细胞生长有 m e c h a n i s m . ME T H O D S T h e a p o p t o t i c c e l l s w e r e d e t e c t e d b y T U N E L m e t h o d a n d t h e e x p r e s s io n o f 13 c l - 2 a n d b a x w e r e e x a m i n e d

9、 u s i n g i m r n u n o h is t o c h e - m i s t ry SP m e t h o d i n d i f f e r e n t t ime . R E S U L T S C i s p l a t i n r e s u l t e d i n t h e d e a t h o f MC F - 7 , b u t d i d n o t c a u s e t h e a p o p t o is o f MC F - 7 . P a c l i t a x e l c a u s e d t i m e d e p e n d e n

10、 t a n d c o n c e n t r a t io n - d e p e n d e n t i n c r e a s e s i n t h e a p o p t o t i c c e l l s . T rea t m e n t o f MC F - 7 c e l l s w i t h p a c l i t a x e l r e s u l t e d i n t i m e - a n d c o n c e n t r a t i o n - d e p e n - d e n t d e c r e a s e s i n b c l - 2 a n d

11、 i n c r e a s e d i n b a x p rot e i n s . C O N C L U S I O N T h e a p o p t o s i s i n d u c e d b y p a c l i t a x e l i s r e l a t e d t o t h e i n c r e a s e o f b a x p ro t e i n a n d t h e d e - c r e a s e o f b c l - 2 p rot e i n . K E Y WO R D S p a c l i t a x e l ; c i s p l a

12、 t i n ; MC F - 7 ; a p o p - t o s i s ; b a x ; b c l - 2 2 8 6 中国药 理学通报C h i - P h a r m a c o l o g ic a l B u l l e t i n 2 0 0 1 J u n ; 1 7 ( 3 ) 1 a b 1 F L I T - c o u r s e o d n m d n g t i m e ( s e con d G r o u p d l d 2 0 d 4 d 5 C OVX 1 甲A人十OVX 4 8. 5 0士3 5. 4 5 5 9. 5 5.3 4 . 8 0 5

13、9. 1 7士3 1 . 4 2 6 7 . 3 5士3 4 . 9 9 5 9 . 6 0士3 6. 0 5 5 8. 5 6士3 8. 1 0 6 2 . 2 5 士 3 4 . 3 3 8 6 . 4 5 1 3 7 . 5 1 5 3 . 6 1 士 3 0 . 2 4 - 3 2 . 0 5 士1 5 . 2 5 一 5 4 加 士3 2 . 即 2 7刀 士 ， .1 9 7 3 今 3 5 . 3 0 土1 3 . 6 5 : : 5 5 -2 5 . 2 0 6 1 . 1 4 . 3 2 “ P 0 . 0 5 , v s O V X g r o u p ; 尸 。0 1 ,

14、 v s O V X g r o u p Ta b 2 T he n uo b e r o f e r r ors r e c o rd e d G r o u p d l d 2 d 3 d 4 d 5 C OVX UY AV+OVX 0 . 9 5 士1 . 1 9 , 1 . 7 5士1 . 2 9 1 . 3 9士1 . 2 0 1 . 2 0士1 . 1 5 1 . 1 0士1 . 3 3 0. 8 3士1 . 1 5 0 . 8 5 土1 . 2 7 “ “ 2. 0 0土1 . 3 8 1 . 1 1 士1 . 2 3 0如 士 0 . 6 8 100 土1 0. 4 4士0:

15、: 0 . 3 5 士0 . 6 7 0 . 9 0士0 . 9 7 ( I 3 3 土 0 . 4 9 P 0 . 0 5 , v s O V X g m u p ; “ P 0 . 0 1 , V s O V X g ro u t 促进作用， 并能提高糖尿病小鼠水迷宫成绩， 使糖尿 病鼠 海马神经元神经营养因子( N G F ) 、 神经细丝纤 维蛋白( N F ) 和早老蛋白( P S - 1 ) 的表达以及坐骨神 经传导速度恢复正常( 未发表资料) 。本实验就是通 过研究U P A N对去卵巢大鼠学习、 记忆功能， 海马 神经元超微结构和有关蛋白质表达的影响进一步观 察U P A N对

16、改善神经退行变的可能性。 1 材料和方法 1 . 1 实验动物及动物模型制作W i s t a r 大鼠， 早， 鼠 龄8 w k ， 随机分3 组: 假手术组( C 组) 、 卵巢切除 对照组( O V X组) 、 U P A N实验组( U P A N+O V X 组) 。各组大鼠用3 . 0 m o l - L 一 水合氯醛腹腔注射 麻醉， C 组做假手术， O V X组和U P A N+ O V X组做 双侧卵巢切除术。成模后 C组 1 0只， O V X组 1 0 只， U P A N十 O V X组 1 1 只。U P A N由本室用固相 法合成， H P L C纯化。U P A

17、N+ o v x组在做卵巢切 除手术后6 w k 起给予皮下注射U P A N 2 0 m g “ L - 只一 d 一 ， 每周3 次， C 组和o v x组皮下注射生理 盐水0 . 1 m l ， 第1 2 w k 行水迷宫试验， 各组动物饲养 至1 3 w k 时处死。 1 . 2 方法 1 . 2 . 1 水迷宫.A N 试 成模后1 2 w k 行水迷宫测试， 实验水深4 0 c m ， 水温2 0 1C， 将大鼠 尾部朝向安全岛 方向放人起始区， 每天训练2 次， 训练5 d o d l 2 个 盲端， d 2 3 个盲端, d 3 , d 4 , d 5 4 个盲端， 以头部碰到

18、 盲端为1 次错误， 记录每只大鼠游完全程的时间及 错误反应次数， 以判断大鼠 学习、 记忆功能。 1 . 2 . 2 形态学观察大鼠用3 . 0 m o l “ L - 水合氯 醛腹腔注射， 待麻醉后开胸暴露心脏， 经左心室插管 快速灌注生理盐水， 同时剪开右心耳， 灌注 1 0 0 m l 后， 再用1 . 0 m o l “ L 一 1 多聚甲 醛固 定液快速灌注1 0 0 ml后， 再缓慢灌注3 0 m i n ， 至动物僵直。取鼠 脑海 马C A I 区组织投人电镜液 2h 后倒掉电镜液， 用 0 . 1 m o l “ L - 1 P B S缓冲液冲洗 3 遍， 每次 1 0 m

19、i n . 标本最后作超微结果观察。 1 . 2 . 3 免疫组织化学 1 . 0 m o l “ I 一 多聚甲醛灌注 固 定， 取出鼠脑后投人0 . 8 m o l “ L 蔗糖多聚甲醛 溶液中固定至脑下沉后， 行冰冻切片， 厚度为5 0 p m ， 进行E R a , G S K - 3 , C D K - 5 , P P - 1 , P P 2 A及P P - 2 B 免疫组化染色。G S K - 3 , C D K - 5 , P P - 1 , P P - 2 A 、 及 P P - 2 B 抗体为美国K . I g b a l 教授赠送， E R 。 抗体及 免疫组化试剂盒购自中

20、山生物技术公司。按说明书 进行实验， 阴性对照不加一抗， 以正常血清代替。免 疫组化定量分析: 每组动物各3 一5 只， 每只大鼠于 海马部位连续切片， 每隔2 张取 1 张， 共取 巧张切 片， 进行阳性细胞计数， 在2 0 倍物镜下， 计数相对应 海马区内 每高倍视野内E R a , G S K - 3 , C D K - 5 , P P - 1 , P P 2 A及P P - 2 B阳性神经元数。用奔腾V I S I L O G 5 图象分析软件对进行免疫组化标记的每张切片随机 选4 - - 6 个细胞， 测其胞浆或胞核阳性细胞平均灰 度， 以反应染色强度。 1 . 2 . 4 数据资料

21、处理数据用 云土， 表示， 显著性 检验用方差分析。 2 结果 2 . 1 水迷宫测试结果( 表 1 , 2 ) 水迷宫测试结果 表明， O V X 组与C 组比较游完全程的时间明显延 长， 错误反应次数明显增多， 均有显著性差异。U P A N + O V X组与C组结果近似， 说明( D V X组存在学 习、 记忆功能障碍, U P A N对雌激素缺乏所致的学 习、 记忆功能障碍有明显的改善作用。 2 . 2 形态学观察结果O V X组海马神经元线粒体 肿胀明显， 蜡断裂、 消失、 溶解， 粗面内 质网 有部分脱 颗粒， 毛细血管周围星形细胞足突肿胀明显。神经 毡中突触的轴突侧有肿胀， 内

22、有突触小泡， 树突侧变 化不太明显。微管排列比 较整齐， 变化不太明显， 局 部偶有断裂， 但轴内线粒体存在明显肿胀。U P A N 中国药理学通报Chin- P h -o l o x i c u l B u l k t i n 2 0 0 1 j =; 1 7 ( 3 )2 8 7 + O V X组海马神经元线粒体未见肿胀， 基质密度仅 有轻度增高， 毛细血管周围星形细胞足突正常或肿 胀较O V X组明显减轻。神经毡也较O V X组好， 突 触前终末小泡密集， 轴突终末未见肿胀。微管排列 比较整齐。 2 . 3 免疫组织化学结果( 表 3 , 4 ) T a b 3 T h e n u m

23、e r i c a l c o n p 叮.旧o f p o s i t i v e b砌血月 n e u ron s i n t h re e e a t s 日 M a w因雌 d i f f e re n t 皿U 加 川i n s f 加 i mmu n D k i A ac h u mi s t ry 曰Vx ERa GS K 一 3 CDK一 5 PP - 1 P P- 2 A PP 2 B 9 . 9 3 士3 . 7 7 - 1 0 . 8 0 1 3 . 1 2 二 1 0 . 9 3 士3 . 5 9 “ 2 0 . 2 0 ! 5 . 4 8 2 0 . 7 3 士9 .

24、 2 5 “ 2 4 . 2 0士9 . 2 2 . 4 4. 0 7土1 1 . 2 3 3 2 . 9 3士5 . 8 2 4 9. 2 0士6. 7 3 4 5即 士5 . 2 5 4 5 . 2 (士5 . 4 0 5 4. 0 7士6. 2 3 UP AN十Ovx 1 1 . 3 3 士4 . 6 9 “ 1 0 . 4 7 -3 . 9 3 ， 1 0 . 5 3 士 3 . 5 6 二 1 7 . 4 7 上 2 . 9 7 2 0 . 1 3 士 4 . 8 8 , 2 3 . 3 3 士8 . 0 1 “ P 0 . 0 1 v s O V X g mU F 2 . 3 .

25、1 E R a 抗体染色、 C 组大鼠 海马内几乎没有阳 性染色神经元， 而O V X组海马内阳性染色神经元 数目 多， 染色深， U P A N十 O V X组与C 组相似。 G S K 3 , C D K - 5 , P P - 1 , P P - 2 A和P P - 2 B抗体染 色， 均为C组大鼠海马内阳性染色神经元数目少， 染色浅， 而O V X 组海马内阳性染色神经元数目多， 染色深， 突起较长， 可见5 - - 6 级分支， U P A N十 O V X 组与C组相似。 f a b 4 t h e r p n p a r is o n i n g r e y s c a l e

26、o f t h e p o s i t i v e cel l s i n t h re e g rou p s o f m i ce u s i n g d i f f e r e n t a n t i b o d i e s f o r i n n o o n h i s t o r h L Y l 山仍 门VX ER- a GS K一 3 CDK- 5 P P - 1 PP - Z A PP - 2 B 9 8 . 2 1 14 . 2 9 二 9 2 . 5 2 士3. 5 4甘“ 9 1.3 2 士5 . 2 3 “ 9 2 . 6 3士5 . 6 5“ 叩 3 1 士1能 . 母

27、 9 3 . 4 5 士5 6 7 . 9 2 . 0 2士4 . 6 1 8 0 . 9 0士5 . 3 0 7 5 . 8 1 士4 . 4 9 8 4 . 4 5 士5 - 5 6 8 3 . 3 4 士4 . 5 0 8 4 . 3 2土6 . 7 6 UP AN+OVX 9 7 . 4 7 士9 . 4 3 9 1 . 9 8士5 . 6 1 二 9 0 . 2 2 士54 4 * 9 1 . 4 2士5 . 5 4 . 9 1肥 1 5 . 7 1 9 2 . 2 2士5 . 3 2 “ P0 . 0 1 v s( ) 、 叹 R T mp 2 . 3 . 2 蛋白激酶G S K

28、- 3 , C D K - 5 在去卵巢组海马 神经元阳性细胞数目 增加较磷酸醋酶P P - 1 , P P - 2 A , P P - 2 B 增加明显。其中: T a u 蛋白磷酸化有关激酶 O V X 组与C 组阳 性细胞数目比 值二 G S K - 3 为3 . 0 5 ; C D K - 5 为4 . 5 0 ; T a u 蛋白脱磷酸化有关磷酸醋酶 O V X组与C组阳性细胞数目比值: P P - 1 为2 . 0 7 ; P P - 2 A为2 . 1 3 ; P P - 2 B 为2 . 2 3 ; 激酶。 V X 组与C 组 阳 性细胞数目 平均比 值为3 . 7 8 ; 磷

29、酸醋酶。 V X组 与C组阳性细胞数目平均比值为2 . 1 4 ; 激酶尸 磷酸 醋酶1 . 7 6 0 3 讨论 A P P ( 3 1 9 -3 3 5 ) 1 7 肤是 s A P P a 的活性片段， 我 们已在3 种不同的动物模型( S Y Z 糖尿病鼠、 去卵巢 大鼠和半乳糖老化小鼠) 引起的脑神经元变性和体 外研究表明A P P 1 7 肤具有明 显的防 治作用s. 9 10)。 U P A N是另一段和A P P 1 7 肤无关的 肤段， 我们发现 U P A N对人S Y 5 Y神经母细胞瘤细胞生长有营养 作用， 并能提高糖尿病小鼠 水迷宫测试成绩， 恢复海 马神经元N F

30、, N G F 及P S - 1 的表达， 使糖尿病大鼠 坐骨神经传导速度恢复正常( 待发表资料) 。 本研究 发现U P A N能提高早大鼠 水迷宫测试成绩， 维持海 马神经元超微结构的 完整性以及恢复有关蛋白 质的 表达。去卵巢大鼠海马神经元雌激素受体表达增 高， 这可能是卵巢去势后由于雌激素缺乏， 引起雌激 素受体的上调。而去卵巢大鼠学习、 记忆功能的降 低以 及海马神经元超微结构出现异常改变说明卵巢 去势后存在着神经元的退行性变。神经元纤维缠结 ( N F T ) 是A L 的一 大神经病理学特征， T a u 蛋白过 度磷酸化形成成对螺旋细丝， 继之糖化， 形成神经元 纤维缠结。但是

31、， T a u 蛋白磷酸化的程度取决于使 蛋白质磷酸化的激酶和使蛋白 质脱磷酸化的磷酸酷 酶 之间的平衡。A T - 8 能特异识别微管相关蛋白 T a u 蛋白S e r z 12 / L h t z 0 5 位点的磷酸化， 去卵巢大鼠 海马神经元内存在着T a u 蛋自的过度磷酸化( 待发 表 资料) 。蛋白 激酶和磷酸醋酶在去卵巢时同时增 高， 但以 蛋白 激酶增高最为显著。 这可能是雌激素 缺乏引起的 蛋白 激酶增高， 出现T a u 蛋白的过度磷 酸化， 进而引起脱磷酸的磷酸醋酶的增高， 这种增高 可能是代偿性的， 不足以克服激酶的增高。当然， S e r z a / h h r2

32、0 5 位点并不在微管结合区( G I . - 2 4 4 - G ly -3 6 7 ) 的 位置上， 它与T a u 蛋白 稳定微管功能的 关系可能并不十分密切， 因此这种推测需要通过观 察T a u 蛋白其它位点的磷酸化， 特别是微管结合区 内 磷酸 化位点来进一步证实。我们发现s t r e p t o w - t o c i n ( S T Z ) 诱发的 糖尿病鼠 蛋白 激酶和磷酸醋酶均 为降低， 这说明糖尿病脑病和雌激素缺乏造成的神 经元变性的机制是不同的。经过 U P A N治疗后能 提高去卵巢大鼠 水迷宫测试成绩， 维持海马神经元 超微结构的 完整性以及使有关蛋白 质的 表达

33、恢复到 正常水平， 这说明U P A N具有改善由 于雌激素缺乏 所造成的神经元退行性变。 雌激素与E R结合， 可 能同 时激活 - r a f 和M E K - 1 而这2 种信息 转导途径 中的重要成份， 也正是神经营养因子和胰岛素I G F - 1 信息转导的成分， 这样雌激素就同时激活神经存 活因子的中下游信息转导。因此只要一个神经元同 时 存在E R和生长因子受体， 就可能使一种配体的 信息转导泛化和放大， 同 样生长因子也有籍此引起 2 8 8 中国药理学 通报G t i P h a r m a cn lo g i c a l B u l l e t i n 2 0 0 I J

34、tr n ; 1 7 ( 3 ) 雌激素的 基因 转录因子功能 u ) 。去卵巢大鼠海马 E R 表达增高， 这说明雌激素缺乏后代偿性的引起 雌激素受体的增高， 经过U P A N治疗后能使其表达 恢复到正常水平， 说明U P A N可能是通过其信息转 导途径与雌激素的信息转导途径相互对话而改善雌 激素严重不足引起的神经元退行性变。 参考文献 I H e n d e r s o n V W, B u c k w e l t e r J G. C o g n i t i v e d e f ic it s o f m e n a n d w w n e n w it h A l z h e i

35、m e r a - N翻 r o lo g y , 1 9 9 4 ; 4 4 : 9 0 - 6 2 G ib b s R B . I m p a i mr e n t o f b a s a l f o r e b r a in c h o li n e r g ic n e u tn n s 二 e i a t e d w i t h a g i n g a n d lo n g - t e r m lo s s o f o v a r ia n f u n c t i o n e x p . N e u - rol , 1 9 9 8 ; 1 5 1 : 2 8 9 -3 0 2 3

36、X u H X. G o u r a s G K, G r e e n f i e l d J P e t a 1 . E s t r o g e n R e d u c e s n e u - r o y a l g e n e r a t i o n o f A lz h e ia n e r P - s m y k u d p e p ti d e s . N a t u re M a d , 1 9 9 8 ; 4 : 4 4 7 - - 5 1 4 B e te l C , Wid r n a n n M, T r a p p T , H o l s b o e r F . 1 7

37、- (d - r a d io l p ro- t e c t s n e u ro n s f r o m i d = r iv e s t r e s s - i n d u c e d c e l l d e a t h i n ni t r e B ia o h e m B lo p h y s R e s C o t n mu m, 1 9 9 5 ; 2 1 6 : 4 7 3 -8 2 5 S i n g e r C A, F i g u e roa - Ma a o t X A, B a t c h e l o r R H, D u r s a D M. T h e M i t

38、 o g e n - a c ti v a t e d p ro t ei n k i n a s e p a t h w a y m e k a t e s e s t ro g e n n c u r o p ro t e c t io n a f t e r g l u t a m a t e t o x ic i t y i n p r im a r y c o r t ic a l n e u r o n s . J 乃 几 u mw i , 1 9 9 9 ; 1 9 ; 2 4 5 5 -6 3 G r id l e y K E , G r e e n P S , S im p

39、k i n s 州L o w c o n c e n t r a t io n s o f e s t r a d i o l r e d u c e f - a m y l o i d t o x ic i t y , l i p id p e ro x i d a ti o n a n d 目 u ti l iz a ti o n i n h u m a n S K - N - S H n e u rob la s t o n a c e ll s . B r u i n R e s , 1 9 9 7 ; 7 7 8 : 1 5 8 - - 6 5 R o c h J M, Ma s k

40、 a h E , R o c h - L e v e c 9 八 e . l . I n c 月 a s c o f s y n a p t ic d e n si t y a n d m e m o r y re t e n t i o n b y a p e p t i d e re p r e s e n t in g t h e t m p b ic d o m a i n o f t h e e m y lo id日 / A 4 p ro t e i n p r e c u r s o r . P n x N a t l A c a d S r iU S A, 1 9 9 4 ; 9

41、 1 : 7 4 5 0 -4 盛 树力 P 淀 粉 样肚前 体 蛋白 和P 淀 粉 样肤 进展 老年医 学 与 保健，1 9 9 9 ; 5 ( l ) : 4 -6 赵咏梅， 姬志娟， 赵志炜 e t a l搪尿病小鼠 脑组织超磷酸化及 其机理研究. 中 华内分泌代谢杂志， 1 9 9 9 ; 1 5 ( 1 ) : 3 8 - 4 0 钱玉英， 赵味梅， 姬志姆e t a l . A P P 1 7 肚对糖尿病小鼠学习、 记忆功能及海马N T - 3 . 胆碱乙酸化醉神经元表达的影响. 中华 老 年f, 学杂 志， 1 9 9 9 ; 1 8 ( 6 ) : 3 4 9 - 5 2 P

42、a t r o r uC ， Ma Z Q. P o l l io G e t a / . C r e s s c o u p li n g b e t w e e n in s u l i n a n d e s t r o g e n r e c e p t o r i n h u ma n n e u rob la s t o n :a c e l l s . Mo l E n d a e r i n o l , 1 9 9 6 00 : 4 9 9 E f f e c t o f U P A N o n b e h a v i o u r , h i p p o c a mp a l

43、u l t r a s t r u c t u r e a n d p r o t e i n e x p r e s s i o n i n o v a r i e c t o mi z e d r a t s Y A N G F a n g , WA N G P e n g - We n , T A N N i n g , J f Z h i - J u a n , Z H A O Z h i - We i , S H E N G S h u - L i ( B e ij i n g R e s e a r c h L a b o r a t o r y f o r B r a i n A

44、 g i n g , B e ij i n g X u a ， 二 H o s p i t a l ， B e ij i n g 1 0 0 0 5 3 ) A B S T R A C T A I M T o s t u d y t h e n e u ro p ro t e c t i v e e f - f e c t s o f U P A N o n l e a r n i n g a n d m e m o ry f u n c t io n o f o - v a r i e c t o n i z e d r a t s场 w a t e r m a z e t e s t ,

45、u l t r a s t r u c t u r e a n d t h e e x p r e s s o n o f p ro t e i n i n h i p p o c a m p a l n e u ro n s M E T H O D S A d u l t r a t s w e r e b i l a t e r a l l y o v a r i e c - t o m i z e d , a n d U P A N w a s i n j e c t e d a f t e r s i x w e e k s a s a c u r a t iv e . U P A N

46、 w a s s y n t h e s i z e d妙 s o l i d p h a s e m e t h o d i n o u r l a b o r a t o ry a n d p u r i f i e d b y I I P L C . T w e l v e w e e k s l a t e r , w a t e r m a z e t e s t i n g o f b e h a v io r w a s c o n d u c t e d ; t h e n t h e f i x a t i v e w a s in j e c t e d i n t o t

47、 h e r a t s . T i s s u e s p e c i m e n s f o r e a c h g ro u p w e r e r e m o r e d f r o m t h e h ip p o c a m p u s C A I a r e a f o r e l e c t ro n m i - c r o s c o p y s t u d i e s ; c ry o s t a t s e c t i o n s w e r e s t u d i e d b y i m- m u n o h i s t o c h e m i s t ry f o r

48、 E R a , G S K - 3 , C D K - 5 , P P - 1 , P P - 2 A a n d P P - 2 B . R E S U L T S ( 1 ) Wa t e r ma z e t e s t f o u n d t h a t f u l l - c o u r s e s w i m m i n g t i m e w a s c l e a r l y l o n g e r i n O V X g r o u p , a n d t h e n u m b e r o f e r ro r s c o m m i t t e d h ig h e r

49、 . I n t h e u s e o f A P P 1 7 - m e r p e p t i d e , t h e r e s u l t s w e r e s i m i l a r t o g ro u p C . ( 2 ) T h e h i p p o c a m p a l u l t r a s t r u c t u re h a s a b n o r m a l c h a n g e . I n t h e u s e o f A P P 1 7 p e p t i d e , i t c o t a i n e d t h e i n t e g r i t y o f h i p p o c a m - p a l u l t r a s t r u c t u r e . ( 3 ) I n g ro u p O