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1、只4 1 1 . 1 0 0 yy 中 华 人 民 共 和 国 医 药 行 业 标 准 Y Y / T 0 5 7 8 - 2 0 0 5 沙门、 志贺菌属琼脂培养基 S a l mo n e l l a - S h i g e l l a a g a r m e d i u m 2 0 0 5 - 1 2 - 0 7发布 2 0 0 6 - 1 2 - 0 1 实施 国家食品药品监督管理局 发 布 Y Y/ T 0 5 7 8 -2 0 0 5 月q舌 本标准全部技术条款为强制性 本标准是在参考 中华人民共和国药典 ( 2 0 0 5年版) 基础上， 结合中国国情及实际情况和要求而 制定 。
2、 本标准附录A为规范性附录。 本标准由国家食品药品监督管理局提出。 本标准由中国药品生物制品检定所归口。 本标准由中国药品生物制品检定所负责起草。 本标准主要起草人: 曲守方、 孙彬裕、 刘艳、 高尚先。 YY / T 0 5 7 8 -2 0 0 5 沙门、 志贺菌属琼脂培养基 范围 本标准规定了沙门、 志贺菌属琼脂培养基的质量要求、 检验方法、 使用说明、 标志、 标签以及包装、 运 输 、 贮 存 本标准适用于沙门和志贺菌属分离培养的沙门、 志贺菌属琼脂培养基。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注 日期的引用文件， 其随后所有 的修改单( 不包
3、括勘误的内容) 或修订版均不适用于本标准， 然而， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件， 其最新版本适用于本标准。 G B / T 1 9 1 包装储运图示标志 中华人民共和国药典( 2 0 0 5 年版) J J F 1 0 7 0 -2 0 0 。 定量包装商品净含量计量检验规则 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3 . 1 培养基c u l t u r e m e d i u m 由人工方法配合而成的， 专供微生物培养、 分离、 鉴别、 研究和保存使用的混合营养物制品 3 . 2 质控菌株q u a l i t y c o n
4、t r o l s t r a i n 质控菌株通常指用于培养基质量控制和性能测定的微生物。 3 . 3 菌落形 成单位 c o l o n y f o r m i n g u n i t , c f u 菌落形成单位是指在活菌培养计数时， 由单个菌体或聚集成团的多个菌体在固体培养基上生长繁 殖所形成的集落， 以其表达活菌的数量。 培养基配方 单位为 : g / Lo 蛋 白陈 硫代 硫酸钠 牛肉浸出粉 中性 红 乳糖 亮绿 牛胆盐 琼脂 构椽 酸钠 构椽 酸铁馁 5 . 0 g 8 . 5 g 5 . 0 g 0 . 0 2 5 g 1 0 . 0 g 0 . 0 0 0 3 3 g 8 .
5、 5 g 1 2 , 0 g -1 4 . 0 g 8 . 5 g 1 . 0 g YY/ T 0 5 7 8 -2 0 0 5 5质t要求 5 . 1 理化要求 5 . 1 . 1 外观 应为均一的淡紫红色至淡紫色粉末。 5 . 1 . 2 装t 应不低于标示量。 5 . 1 . 3 p H值 灭菌后， 2 0 0C 2 5 时， 该培养基 P H值应为 7 . 2 士。 . 1 e 5 . 1 . 4 干燥失重 应不超过 G . 。 %。 5 . 2生长试验 该培养基接种质控菌株， 生长情况应符合表 7 要求。 表 1 生长试验观察结果 质 控 菌种观 察 结 果 鼠伤寒沙门菌 福氏志贺菌
6、 粪 肠 球 菌 大 肠 埃 希 菌 生长良好， 无色菌落， 有黑心 生长良好， 无色菌落 抑制( 完全) 抑制( 部分至完全) ， 粉红至玫瑰红菌落 6检验 方法 6 . 1 理化检验 6 . 1 . 1 外 观 采用 目测法， 在自然光线明亮处目视， 应符合 5 . 1 . 1 的规定。 6 . 1 . 2 装f 按 J J F 1 0 7 0 -2 0 0 0 ， 测定装量， 应符合 5 . 1 . 2的规定 6 . 1 . 3 p H值 按使用说明配制培养基， 取 6 m1新鲜配制 的液体培养基， 加新鲜蒸馏水至 4 0 m L， 灭菌后， 在 2 0 0 C -2 5 时， 按 中华
7、人民共和国药典 ( 2 0 0 5 年版) P H值测定法测定， 应符合5 . 1 . 3的规定。 6 . 1 . 4 干燥失重 按 中华人民共和国 药典 ( 2 0 0 5 年版) 干燥失重测定法， 在6 0 时压力2 . 6 7 k P a ( 2 0 m m H g ) 以 下 干燥至恒重， 应符合 5 . 1 . 4 的规定。 6 . 2 生长试验 按附录 A试验方法进行， 结果应符合 5 . 2的规定 7使用说明 使用说 明至少应当具有下列 内容: a ) 产品名称、 规格; b ) 酉 己 方 ; 。 ) 用途 ; d ) 使用方法; 。 ) 注意事项; )贮存条件与失效期; YY
8、/ T 0 5 7 8 -2 0 0 5 9 ) 生产单位名称、 联系方式。 8标志与标签 标志与标签至少应当具有下列内容: a ) 执行标准号; b ) 产品注册证号; c ) 产品名称、 规格、 数量、 批号; d ) 制造厂名称、 商标和厂址; e ) 贮存条件和失效期 。 9 包装、 运输、 贮存 9 .1 包装 包装储运图示标志应符合GB / T 1 9 1的规定。包装容器应保证密封性 良好， 不易破碎。 9 . 2运输 培养基在运输过程中， 应防潮， 应防止重物堆压， 避免阳光直射和雨雪浸淋， 防止与酸碱物质接触， 防止内外包装破损。 9 . 3贮存 产品应置阴凉干燥处贮存 YY/
9、 T 0 5 7 8 -2 0 0 5 附录A ( 规范性 附录) 沙门、 志贺菌属琼脂培养基生长试验方法 A. 1 质控菌株 鼠 伤寒沙门菌( S u l m o n e l l a t y p h i m u r i u m) C MC C ( B ) 5 0 2 2 0 福氏志贺菌( S h i g e l l a f l e z n e r i ) C MC C( B ) 5 1 5 7 3 粪肠球菌( 粪链球菌) (E n t e r o c o c c u s f a e c a l i s ) C MC C ( B ) 3 2 2 2 5 大肠埃希菌( E s c h e r i
10、 c h i ac o l i ) C MC C ( B ) 4 4 1 1 3 培养基生长试验可采用上述菌株或其他等同的标准菌株， 所用的菌株传代次数不得超过 5 代( 从菌 种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第 。 代) ， 并采用适宜的菌种保藏技术， 以保证试验菌株的生物学 特性 。 不 应同时操作 2个 以上菌株 。 A. 2方法 A . 2 . 1 无菌操作要求 培养基生长试验应严格遵守无菌操作， 防止微生物污染 稀释液、 培养基、 实验器具等灭菌时， 应照 中华人民共和国药典 ( 2 0 0 5年版) 灭菌法的要求， 采用 验证合格的灭菌程序灭菌 A . 2 . 2 菌种复苏 启开鼠
11、伤寒沙门菌、 福氏志贺菌、 粪链球菌、 大肠埃希菌菌 种， 用0 . 9 % 无菌氯化钠溶液。 . 3 m L制 成菌 悬液， 加至7 m L 营养肉汤培养基中， 3 0 C - 3 5 培养2 4 h o A . 2 . 3 菌种传代 取 I ml上述复苏后的鼠伤寒沙门菌、 福氏志贺菌、 粪链球菌、 大肠埃希菌新鲜培养物， 加至 7 m I . 营养肉汤培养基中， 3 0 0C -3 5 培养 2 4 h o A . 2 . 4 菌种增菌培养 接种上述传代后的鼠伤寒沙门菌、 福氏志贺菌、 粪链球菌、 大肠埃希菌的新鲜培养物至营养肉汤或 营养琼脂培养基中， 3 0 0C -3 5 培养 1 8
12、 h -2 4 h o A . 2 . 5 菌悬液制备 将上述增菌培养后的鼠伤寒沙门菌、 福氏志贺菌、 粪链球菌、 大肠埃希菌的新鲜培养物分别用。 . 9 0 0 无菌氯化钠溶液制成每 I m 工 含菌数约相当于1 0 0 c f u -1 0 0 0 c f u 的 菌悬液。 A . 2 . 6 培养基接种 用蒸馏水或去离子水按说明上的浓度配制待检沙门、 志贺菌属琼脂培养基， 煮沸至完全溶解， 稍冷 后在每个平皿( 直径为9 0 mm) 中加人约 1 5 mL 2 0 m工 ， 待冷却至室温凝固后进行检测。 检测时， 每只平皿加人。 . I m L上述菌悬液。每种质控菌株接种 2只平皿， 并
13、用 I 个未接种的培养 基平皿做空白对照， 置 3 0 0C -3 5 培养 2 4 h -3 6 h ， 观察菌落生长情况， 并记录结果。结果应符合 5 . 2 的要求 YY / T 0 5 7 8 -2 0 0 5 参考文献 仁 1 G B 9 9 6 9 . 1 -1 9 9 8 工 业产品使用说明书 总则 2 陈天寿主编. 微生物培养基的制造与应用. 北京 中国农业出版社. 1 9 9 5 年 6 月 仁 3 U S P / N F ( A S I A N E D I T I O N ) 2 0 0 4 美国 药典( 2 0 0 4 年版) 促生长试验 4 1 WS / T 2 3 2 -2 0 0 2 商业性微生物培养基质量检验规程 质控菌种 仁 5 美国国家临床实验室标准委员会( NC C L S )商品微生物培养基的质量保证( M2 2 -A )