ΔNP73基因蛋白在食管鳞癌中的表达及其临床意义.pdf

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1、7 4 8 通j E 医药2 堂生垒旦筮垫鲞筮鱼塑旦! 地丛型趔塑型：婴垫堕：! 尘垫! ： A N p 7 3 基因蛋白在食管鳞癌中的表达及其 临床意义 张月峰张云杰李保庆单保恩范增林李勇 【摘要】目的应用流式细胞术( f l o wc y 蛔m e t r y ，F C M ) 检测食管鳞癌组织中N p 7 3 蛋白的表达，以探讨 它与食管鳞癌的临床病理特征的关系。方法选取2 0 0 5 年1 月至2 0 0 6 年1 2 月在我院胸外科住院手术的 食管癌患者4 7 例，制备单细胞悬液，采用间接免疫荧光标记法用N p 7 3 多克隆抗体对细胞进行染色，应用 F A C S - 4 2 0

2、型流式细胞仪进行分析。结果食管癌组织中N p 7 3 表达阳性率明显高于癌旁组织、正常组织 ( P 均 0 0 5 ) 。结论N p 7 3 基因的表达变化可能与食管 癌的发生发展有关。 【关键词】食管癌；A N p 7 3 蛋白；流式细胞术( F C M ) T i l ee x p r e s s i o no fA N p 7 3p r o t e i ni ne s o p h a g u ss q u m n o 惜c e l le a r d n m ma n di t sc l i n i c a l 菇g 商I l 嘲Z H A N G h 咖昭，Z H A N GY u ,

3、# i e ，厶B a o q i n g ，日a 1 D e p a n n m 堪o fT h o r a c i cS u r g e r y ，T h eF o u r t hH o s p i t a lo fH e b e iM e d i c a l U m t e r s ，劬莉砌埘w0 5 0 0 1 1 【A b s t r a c t 】O b j e c t i v e T od e t e c tt h ee x p r e s s i o no f N p 7 3p r o t e i ni ne s o p h a 目J s8 q u a m 0 1 k sc e

4、 l lc a r c i n o m au s i n g F l o wc y t o m e t r y ( F C M ) ，a n dt Oe x p l o r et h ec o r r e l a t i o nb e t w e e n N p 7 3a n dt h ec l i n i c a lp a t h o l o g i c a lc h a r a c t e r i s t i c so f e s o l 】I l a 罢阻C a l l o g r M e t h o d sAc o h o r to f4 7c a s e so fe s o p h

5、a g e a lc a l 【l c e rw e r es e l e c t e df r o mt h ed e p a r t m e n to ft h o r a c i c s u r g e r y , t h ef o u r t hh o s p i t a l o fH e b e iM e d i c a lU n i v e r s i t y M o n o p l a s ts u s p e m i o nw a sp r e p t ，a n dt h ec e l l sw e r e i r m u n o f l u o r e s c e n ts

6、t a i n e db yp o l y c l o n a la n t i b o d ya g a i n s tZ X N 0 7 3 F i n a l l y ，t h ec e l l sw e r ea n a l y s e db yF A C S - 4 2 0f l o w c y t o m e t e r R e s u l t sT h er a t i o so fZ X N p 7 3p o s i t i v ee x p r e s s i o ni nt h et i 截n l e so fe s o p h a g e a lc a n c e rw

7、e r eh i g h e rt h a nt h a to f p a r a c a n c e rt i s s u e sa n dn o l l l l a lt i s s u e s ( a l lP 0 0 5 ) C o n c l u s i o nT h ec h a n g eo fz 州p 7 3e x p r e s s i o nm a yh a v e8 0 m ec o r r e l a t i o n w i t ht h eo c c u n n c ea n dd e v e l o p m e n to fe s o p h a g e a lc

8、a r l o g r 【K e yw o r d s 】e s o p h a g e a lc a n c e r ；p r o t e i nA N p 7 3 ；f l o wc y t o m e t r y ( F C M ) 近年来，对参与肿瘤发生发展及转移的各种基因的研究取 得了许多成果。N p 7 3 基因被认为是一种致癌基因，可以负性 调控p 5 3 及全长型p 7 3 ( T A p 7 3 ) 的功能，它在多种恶性肿瘤发生 发展中起重要作用。本研究应用流式细胞术( f l o wc y t o m e t r y ， F c M ) 检测4 7 例食管鳞癌盐i p 7

9、3 蛋白的表达，以探讨它与食管 鳞癌的临床病理特征的关系。 1 资料与方法 1 1 一般资料选取2 0 0 5 年1 月至2 0 0 6 年1 2 月在我院胸外 科住院手术的食管癌患者4 7 例，其中男3 6 例，女1 1 例；年龄4 3 7 4 岁，平均年龄( 5 9 8 ) 岁。吸烟史 4 0 0 支年2 3 例， 5c n l1 4 例，5 锄3 3 例；分化程 度：高、中分化4 0 例，低分化7 例；淋巴结转移：无转移2 7 例，有 转移2 0 例；病理分期( 按1 9 9 7 年U I C C 的T N M 分期) ：I 、期 1 3 例，、期3 4 例。于术中离体0 5h 内取其癌

10、组织、对应的 作者单位：0 5 0 0 1 l 石家庄市，河北医科大学第四医院胸外科( 张 月峰、李保庆、李勇) ，科研中心( 单保恩) ；河北省磁县医院胸外科( 张云 杰、范增林) 论著 癌旁组织( 距肿瘤边缘约2c m ) 和正常食管组织( 距肿瘤边缘 5c m ) 置入7 0 的乙醇固定，保存于4 。C 冰箱。所有肿瘤组织均 经病理学确诊为鳞状细胞癌，正常食管组织经病理证实为炎症 或正常鳞状上皮。全部病例术前均未行放化疗。 1 2 方法留取标本经生理盐水充分冲洗后以搓网法制备单 细胞悬液，采用间接免疫荧光标记法用1 ：1 0 0 稀释的兔抗人 N p 7 3 多克隆抗体( 美国S a n

11、 t aC r u zB i o t e c h n o l o g y 公司产品) 对细 胞进行免疫荧光染色；3 7 水浴3 0m i n ，离心洗涤后加入羊抗兔 P B I g G ( 美国S a n t aC m zB i o t e c h n o l o g y 公司产品) 染色，3 7 水浴 3 0 m i n ，离心洗涤，4 0 0 目筛网过滤后检测。应用美国B D 公司 生产的F A C 5 - 4 2 0 型流式细胞仪，进行单参数分析；测定数据和 图形应用相应的软件程序进行资料处理。检测前以f l o w - c h e c k F l o u r o p h e r e s

12、 ( 1 0t u n ) 荧光微球( R E F6 6 0 5 3 5 9 B e c k m a nC o u l t e r 公 司) 作为标准样品调整仪器C V 值在2 以下。 1 3结果判定参照M o A v e 等提出的荧光指数( F l u o r e s c e n e eI n d e x ，r I ) 表示A N p 7 3 的相对含量。F I = ( 实验样品的荧光 强度一对照样品的荧光强度) 正常食管黏膜细胞的荧光强度。 定性分析以F I 1 0 为阳性表达，n 1 0 为阴性表达。 1 4 统计学分析所有数据经过S P S S1 3 0 版统计软件进行 型E 匿药至坚

13、生鱼旦筮垫鲞筮鱼塑丛盘iM 趟迥地型：地塑! ：型垫： 分析处理，计量资料以牙- 4 - s 表示，采用l 检验，计数资料以率 表示，采用1 2 检验及F i s h e r 精确检验，P 0 0 5 ，1 2 检验) 。见表1 。 表1A N p 7 3 在不同食管组织的表达情况比较 n = 4 7 注：与癌组织比较，P 0 0 5 ) ，见表3 。 3 讨论 最近研究发现，p 7 3 基因具有复杂的蛋白异构体形式，各种 异构体具有不同甚至截然相反的转录活化潜能和凋亡诱导活 性。缺失N 末端反式激活区域的p 7 3 剪接异构体T A p 7 3 的转 录活化功能完全丧失，从而成为全长p 7

14、3 功能的显性负性因 子，对p 7 3 的促凋亡功能具有拮抗的作用强J 】。其中对N p 7 3 的功能研究得最为深入。A N p 7 3 是缺失转录激活域的p 7 3 剪接 异构体，有研究发现其对0 5 3 和p 7 3 的转录活性、介导的内源靶 基因的产量及促凋亡活动均有抑制作用 4 5 】，而且可以影响细 胞的恶性转化过程哺1 。 N p 7 3 通过与p 5 3 竞争D N A 结合部位和与T A p 7 3 直接结 合，能够阻抑野生型p 5 3 和T A p 7 3 的功能，从而抑制凋亡H 8 1 。 7 4 9 表3 食管癌组织中Z 拭p T 3 蛋白的表达与病理资料的关系 病理资

15、料例数 n ( ，i s )阳性率 例( ) 肿瘤大小 5m 浸润深度 T 1 2 T 3 4 分化程度 高冲分化 低分化 删分期 I 、期 、期 淋巴结转移 2 l 拍 1 4 3 3 4 0 7 1 3 3 4 1 1 9 0 3 8 1 2 3 O 2 6 1 4 0 0 加 1 1 4 4 - 0 3 3 1 2 0 0 3 3 】2 8 O 盈 1 丝4 - 0 2 8 1 1 5 0 3 5 3 0 ( 7 6 2 ) 9 ( 鼹5 ) 1 4 ( 1 0 0 ) 2 5 ( 7 5 8 ) 3 3 ( 跎5 ) 6 ( 舒7 ) 1 3 ( 1 0 0 ) 2 6 ( 7 6 5

16、 ) 无 2 7 1 2 6 0 2 52 5 ( 8 9 3 ) 查垫! ：! ! ! ! ：翌! 型翌：2 S t i e w e 等b 1 发现，T A p 7 3 蛋白( 包括N p 7 3 蛋白) 的过表达可 导致N I H 3 T 3 成纤维细胞的恶性转化，1 1 A p 7 3 通过引发细胞内 信号串联导致细胞转化和肿瘤发生。“u 等 9 3 应用免疫组化技 术研究发现，Z 州p 7 3 蛋自在颈部鳞状细胞癌呈过表达，明显高 于正常组织，蛋白也呈过表达，鱼, 州p 7 3 蛋白的表达与肿瘤的 放疗敏感性呈负相关。R o b e r t 等【1 刚应用W e s t e r nb

17、l o t t i n g 方法研 究发现，A N y 7 3 蛋白在成神经细胞瘤中过表达。本研究对4 7 例 食管癌患者a N p 7 3 蛋白表达的F C M 分析，发现食管癌组织中 N p 7 3 蛋白表达F 1 值明显高于对应的癌旁组织和正常食管组 织，说明A N p T 3 蛋白在食管癌中可能起着与其他组织恶性肿瘤 相似的类似癌基因的作用。 通过对食管癌组织中N 7 3 表达阳性的标本分析发现，食 管癌浸润深度T I 一2 期食管癌患者在转录水平N p 7 3H 值比相 应的T 3 。期食管癌患者显著增高，提示随着食管癌浸润深度的 增加，N p 7 3 表达水平相应降低 。以上研究提

18、示，A N p 7 3 可 能在食管癌恶性演进的早期阶段发挥着重要角色。N p 7 3 表 达水平与食管癌组织的大小、癌细胞的分化程度、T N M 分期、有 无淋巴结转移以及患者的性别、年龄、吸烟史、饮酒史、家族史 等因素不存在相关性。 本研究还显示, 州p 7 3 基因的表达水平与食管癌的浸润深 度呈负相关。Y a s u h i r o 等“报道，, 州p 7 3 蛋白的表达与甲状腺 乳头状癌的浸润深度呈负相关，这与本研究结果一致。但他们 还发现, 州p 7 3 蛋白的表达与肿瘤大小和临床转移也呈负相关。 这与本研究结果不一致，笔者未发现N p 7 3 表达与肿瘤大小和 临床转移及其它临床

19、病理生理特征有关。考虑其原因可能与 组织特异性及样本例数大小有关。食管癌组织中N p 7 3 基因 表达增高的原因可能有2 种情况：( 1 ) 食管癌发生过程中N p 7 3 基因发生变化；( 2 ) 促进Z 州p 7 3 基因表达的因子的激活作用。 国外研究者发现，Z 州p T 3 基因可以通过与p 5 3 基因和T A p 7 3 基 因竞争下游的D N A 连接序列，从而对p s 3 基因和T A p 7 3 基因功 能发挥负调控作用引，在肿瘤细胞中A N p 7 3 基因发挥着一个 癌基因样促进肿瘤生长的作用，可以作为一个肿瘤分子治疗的 靶点。这是值得重视并需要进一步研究的问题。 参考

20、文献 1M o r k v e0 L a e r u mO D H o wc y t o m e t i cn x 螬羽n B n 蜘to fP 5 3p o r t e i nE x p r e s s i o na n dD N Ac o n t e n ti n 删ne m b e d e dt i s s u ef r o mB r o n c h i c a lc a r c i n o m a C y t o m e t r y ，1 9 9 1 ，1 2 ：4 3 8 - 4 4 4 2S t i e w eT “ l h e s e l i n gC C ，P u t r “

21、B M T n m s a c t i v a t i o n d e f i e i e n tD d t a T A p 7 3i n 7 5 0 塑j E 匿垫2 堂生鱼旦箜垫鲞筮垒翅丛! 匦丛堂查地趔：地2 塑：型垫： h i b i t sp 5 3b yd i r e c tc o m p e t i t i o nf o rD N Ab i n d i n g JB i dC h e m ，2 1 3 0 2 ，2 7 7 ： 1 4 1 7 7 1 4 1 8 5 3S t i e w eT ，Z i n a n e r m a n nS ，蹦U i 醒A ，e ta 1 T

22、r a n s a c t i v a t i o n - d e f i e i o n tA T A p 7 3 a c t s o f l e o g e n e C a n c e rR e s 。2 0 0 2 。6 2 ：3 5 9 8 3 6 0 2 4Z a i k aA I ，S i a d eN ，F a s t e rS H ，e la 1 1D e l t a N 0 7 3 ，ad o m i n a n t n e g a t i v e i n h i b i t o rd “ w i l d t y p ep 5 3a n d T A p 7 3i su p -

23、 r e g u l a t e di nh u m a nt u r l l o l B JE 印 M e d ，2 0 0 2 ，1 9 6 ：7 6 5 - 7 8 0 5P o 口a i a kC D ，R a d i n o v i eS ，Y a n gA ，e la 1 A n 锄t i a p o l M 址i cr o l ehl l l ep 5 3 f a m i l ym e m b e r ，p 7 3 ，d u r i n gd e v e l o p m e n t a ln e u r u nd e a t h S c i e n c e 。2 0 0 0 ，2

24、 8 9 ： 3 0 4 - 3 0 6 6F r a s c aF ，V e l l aV ，A l o i s iA ，e ta 1 0 7 3t r u e r - s u p p r e s s o ra c t i v i t yi si m p a i l e di n h u m a yt h y r o r d c 目C a n c e rR e s 。2 0 0 3 。6 3 ：5 8 2 9 - 5 8 3 7 7l s h i m o t o0 ，K a w a h a r aC 。E - i oK ，e ta 1 P o s s i b l eo n c o g e n

25、 i ep o t e n t i a l0 f D e l t a N p 7 3 ：an e w l yi d e n t i f i e di s o f o r mo f h u m a np 7 3 C a I l c e rR e s ，2 0 0 2 ，6 2 ： 6 3 6 6 4 1 8Z a i k aA I ，S i a d e N ，E r s t e r S H ，e la 1 D e i t a N p 7 3 ：a d o m i n a n t - n e g a t i v e i n h i b i t o r 0 fw i l d t y p ep 5 3

26、a n dT A p 7 3 ，i su p r 讪e di nh u m a nt u m o n JE 坤M e d ， 2 0 【】2 。1 9 6 ：7 6 5 7 8 0 9I j uS S ，C h a nK Y 。a l 朗gA N E x p r e s s i o n0 fI D c h N p 7 3a n dT A p 7 3 ( a l p h a ) i n d e p e n d e n t l ya s s e c h t e dw i t hr a d i o s e n s i t i v i t i a n dp m 可i nc e r v i c a l

27、s q u a r a o t me e l lc a r c i l l o n l a C l i nC a n c e rR e s 。2 0 0 6 1 2 ：3 9 2 2 3 9 2 7 1 0 R o b e r tC ，C a s t e l l i n o 。M a s s i m i l i a n oD B ，e la I M e d u U o - b l a s t o m a sO v e c e x p r e T A p 7 3a n d D e l t a N 0 7 3 P r o cA m e rA s s o eC a n c e r R e s ，2

28、0 0 6 ，4 7 ：7 吡7 9 8 1 l Y a s u h i r oI ，H i d e t a k aU ，K e i k oF ，e la 1 D e l t aN p 7 3e x p r e s s i o ni nt h y n 】i d n e o p l a s 耐g i n a t i l l gf r o mf o l l i c u l a rc e l l s J o m u dP a t h o l o g y ，2 0 0 6 ，3 8 ：2 0 5 2 0 9 1 2G r o b T J ，N o v a kU ，M a i s C ，e la 1 h

29、 m 哪7 3 础ad m m n a n tn e g a t i v e f e e d t m c kl o o pf o rT A p 7 3a n dD 5 3 C e l lD e a t hD i f f e r ，2 0 0 l ，8 ：1 2 1 3 - 1 2 2 3 ( 收稿日期：2 0 0 7 0 6 2 2 ) 间皮素与C A l2 5 作为子宫内膜癌肿瘤 标记物的研究 李梦轩范红伟 【摘要】目的研究间皮素( m e s o t h e l i n ，M S L N ) 和Q U 2 5 在子宫内膜癌患者及淋巴结中的表达情况。 方法采用免疫组织化学法检测3 0 例子宫

30、内膜癌患者的原发灶组织3 0 份及1 3 6 枚淋巴结中的M S L N 及 C A l 2 5 的表达。结果( 1 ) M S L N 、C A l 2 5 在子宫内膜癌的阳性表达率分别为6 7 ( 2 0 3 0 ) 、7 6 ( 2 3 3 0 ) 。( 2 ) I 、期子宫内膜癌M S L N 表达率分别为5 6 、1 0 0 、6 7 ，、期和I 期相比差异具有统计学意义 ( P 0 0 3 9 r 7 ) ，I 、期子宫内膜癌C A l 2 5 表达阳性率分别为6 1 1 、1 0 0 、8 8 9 ，差异有统计学意义 ( P 0 0 5 ) 。( 3 ) 有淋巴结转移组M S L

31、 N 、C A l 2 5 表达阳性率分别为9 4 ( 1 6 1 7 ) 、8 8 ( 1 5 1 7 ) ；无淋巴结转 移组，M S L N 、C A l 2 5 表达阳性率分别为8 4 ( 1 0 1 1 8 ) 、6 9 ( 8 1 1 6 ) 。结论M S l 2 、i 、C A l 2 5 有可能成为子宫 内膜癌的肿瘤标记物，M S L N 、C A l 2 5 都可能提示淋巴结微转移。M S L N 和C A l 2 5 的表达呈等级相关( P O 0 5 ) ，二者可能有功能的关联。 【关键词】子宫内膜癌；间皮素；C A l 2 5 ；免疫组织化学法 T h ed i a g

32、n o s t i cv a l u eo fm e s o t h e l i na n dc a n o e r a n f i g e n1 2 5e x p r e s s i o n 蛔e n d o m e t r i a lc a r d n o m aa n dt h e n f i c r o m e t a s t a s i so fl y m p hn o d e s1 2M e n g x u a n ，F A NH o n g u 庙T h eH o s p i t a lo fZ h e n g d n g ，H e b e ，z 鲥垤 0 5 0 8 0 0 【

33、A b s t r a c t 】O b j e c t i v e T oi n v e s t i g a t et h ee x p r e s s i o no fm e s o t h e l i na n dC A l 2 5i ne n d o m e t r i a lc a r c i n o m aa n d l y m p hn o d e s M e t h o d s T h ee x p r e s s i o no fm e s o t h e l i na n dC A l 2 5w e r ee x a n l e di nl o c a lt i s s u

34、 e so f3 0c a g e so f e n d o m e t r i a lc a r c i n o m aa n d1 3 6l y m p hn o d e sb yi m m u n o h i s t o c h e m i s t r y ( s p ) R e s u l t s ( 1 ) T h ep o s i t i v er a t e so fm e s o t h e l i n a n dC A1 2 5e x p r e s s i o ni ne n d o m e t r i a lc a r c i n o m aw e r e6 7 ( 2

35、0 3 0 ) a n d7 5 ( 2 3 3 0 ) r e s p e c t i v e l y ( 2 ) T h ep o s i t i v er a t e o fm e s o t h e l i ne x p r e s s i o ni ns t a g eI 。I Ia n d1 1 1w e T e5 6 ，1 0 0 ，7 6 r e s p e c t i v e l y T h e r ew a ss i g n i f i c a n td i f f e r e n c e i nm e s o t h e l i ne x p r e s s i o nb

36、 e t w e e ns t a g eIa n ds t a g eI I ，( P = 0 0 3 9 7 ) T h ep o s i t i v er a t eo fC A l 2 5e x p r e s s i o ni n s t a g eI ，I Ia n dI l lw e r e6 1 1 ，1 0 0 ，8 9 r e s p e c t i v e l y ，a n dt h e r ew a gs i g n i f i c a n td i f f e r e n c ei nC A l 2 5e x p r e s s i o n b e t w e e n

37、s t a g eIa n ds t a g e1 1 ，m ( 3 ) T h ep o s i t i v er a t eo fm e s o t h e l i ne x p r e s s i o nw a g9 4 ( 1 6 1 7 ) i nm e t a s t a t i cl y T n p h n o d e sg r o u p ，a n d8 4 ( 1 0 1J 8 ) i nn om e t a s t a t i cl y m p hn o d e sg r o u p T h ep o s i f v er a t eo f C A l 2 5e x p r

38、 e s s i o nw 硇8 8 ( 1 5 1 7 ) i nm e t a s t a t i cl y m p hn o d e sg r o u p ，a n d1 0 9 ( 8 1 1 1 6 ) i nn om e t a s t a t i cl y m p hn o d e sg r o u p C o l l d l l 茁o n M e s o t h e l i na n dC A l 2 5a r el i k e l yt ob e c o m et h en e wt u m o rm a r k e r si ne n d o m e t r i a lc

39、a r c i n o m aa n dm a yp r o g n o s t i c a t et h e m i e m m e t a s t a g i so fl y m p hn o d e s T h ep o s i t i v er e l a f i o m h i pbe | m r e e nm e s o t h e l i na n dC A l 2 5e x p r e s s i o nm a yb ea s s o c i a t e d w i t ht h e i rr e l a t e df u n c t i o n 【K e yw o r d s 】e n d o m e t r i a lc a r c i n o m a ；m e s o t h e l i n ；C A l 2 5 ；i m m u n o h i s t o c b e m i s t r y 作者单位：0 5 0 8 0 0 河北省正定县人民医院妇科( 李梦轩) ；河北医 科大学( 范红伟) 论著