三氧化二砷对人肝癌细胞黏附和侵袭影响的实验研究.pdf

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1、中 国 中 西 医 结 合 杂 志 2 0 0 4 生 1 0 韭 鱼 2 4 堂 签 1 0 M C J I T W M , O c to b e r 2 0 0 4 , 卒N o . 1 0 博 士之 窗 三氧化二砷对人肝癌细胞豁附和侵袭 影响的实验研究 华海清 秦叔这2 王锦鸿3 陈惠英“ 摘要目的探讨三氧化二砷( 亚砷酸， A S 2 0 3 ) 注射液是否具有杭肝癌细胞孙附和侵袭的作用及其相关 机制。方法选用人类肝癌细胞株 S MMC - 7 7 2 1 细胞及裸鼠人类肝癌转移模型为研究对象， 通过细胞运动 迁移实验、 细胞私附实验和免疫组化方法观察 A s 2 0 : 对S MMC

2、 - 7 7 2 1 细胞的运动迁移、 与纤维粘连蛋白 ( F N) 、 内皮细胞私附以及裸鼠人肝癌转移模型肝移植瘤表达 C D 4 4和 MMP - 2基因蛋白的影响。结果 A S 2 0 3 注射液可显著抑制S MMC - 7 7 2 1 细胞在F N上的迁移运动和S MMC - 7 7 2 1 细胞与F N 、 内皮细胞的私 附， 并能降低裸鼠肝移植瘤C D 4 4 , M M P - 2 的表达。结论 A S 2 0 : 具有杭肝癌细胞私附和侵袭的作用， 其机 制可能与A s 2 0 3 能降低肝癌细胞表达C D 4 4 和MM P - 2 有关。 关键词三氧化二砷; 肝癌细胞; 钻附

3、; 侵袭; C D 4 4 ; MMP - 2 S t u d y o n E f f e c t o f A r s e n i c T r i o x i d e o n A d h e s i o n a n d I n v a s i o n o f H u ma n H e p a t o c a r c i n o ma C e l l s i n V i t r o H UA H a i -p i n g ，Q I N S h u - k u i ，WA N G J i n - b o n g ，e t a l T h e G e n e r a l H o s p i t a

4、l o f N a n j i n g P L A A r e a ，N a n j i n g ( 2 1 0 0 0 2 ) O b j e c t i v e T o e x p l o r e t h a t t h e a r s e n i c t r i o x i d e i n j e c t io n ( A T I ) h a s t h e e f f e c t i n a n t a g o n i z i n g a d h e s io n a n d i n v a s i o n o f h u m a n h e p a t o c a r c i n o

5、 m a c e l l s ( H C C ) ， a n d i t s r e l e v a n t m e c h a n i s m. Me t h o d s H u m a n h e p a t o c e l l u l a r c a r c i n o m a c e l l l i n e S MMC - 7 7 2 1 a n d t h e h i g h m e t a s t a t i c n u d e m i c e h u m a n H C C i n s i t u t r a n s p l a n t a t i o n m o d e l w

6、 a s t a k e n a s t h e o b j e c t s o f s t u d y ， t h e e f f e c t s o f A T I o n t h e S MMC - 7 7 2 1 c e l l mo v e me n t a n d mi g r a t i o n , i t s a d h e - s io n w i t h f ib r o n e c t i n ( F N) a n d e n d o t h e l i a l c e l l ( E C ) ， a s w e l l a s t h e C D 4 4 a n d M

7、MP - 2 g e n e p r o t e i n e x p r e s s i o n i n t r a n s p l a n t e d t u m o r o f t h e m o d e l m i c e w e r e o b s e r v e d b y m e a n s o f c e l l m o v e m e n t a n d m ig r a t i o n t e s t ， c e l l a d h e - s i o n t e s t a n d i mmu n o h i s t o c h e mi c a l m e t h o d

8、 . R e s u l t s A T I c o u l d s i g n i f i c a n t l y i n h i b i t S MMC - 7 7 2 1 c e l l mo v e - m e n t a n d m i g r a t i o n o n F N， a d h e s io n w i t h F N a n d E C , a l s o c o u l d l o w e r C D 4 4 a n d MMP - 2 i n c a n c e r c e l l s . C o n - e l u s i o n A T I h a s t

9、h e e f f e c t s o f a n t a g o n i z i n g h e p a t o c a r c i n o m a c e l l a d h e s i o n a n d i n v a s i o n ， t h e m e c h a n i s m m a y b e r e l a t e d w i t h t h e a c t io n o f A T I i n l o w e r i n g C D 4 4 a n d MMP - 2 e x p r e s s i o n i n c a n c e r c e l l s . K e

10、 y w o r d s a r s e n i c t r i o x i d e ; h e p a t o c a r c i n o m a c e l l ; a d h e s i o n ; i n v a s io n ; C D 4 4 ; MMP - 2 肿瘤细胞的赫附和侵袭是肿瘤发生转移的重要步 骤， 抑制肿瘤的赫附和侵袭可以控制或降低肿瘤转移 的发生。作为传统中药砒霜的主要成分， 三氧化二砷 ( 亚砷酸， A s 2 0 3 ) 具有诱导肿瘤细胞分化、 凋亡及细胞 毒作用， 用于治疗急性早幼粒细胞白血病( A P L ) 取得 了突出的疗效 ， 。 通过一系列实验与临床

11、研究， 我们 发现该药对原发性肝癌亦有比较满意的疗效， 并且有 一 定的 抗肝癌 转移作用 一 。为了阐明A s 2 几抗肿瘤 转移的作用机制， 我们选用人类肝癌细胞株 S MMC - 7 7 2 1 细胞及裸鼠人类肝癌转移模型为研究对象， 观察 了A s 2 0 3 对 S M MC - 7 7 2 1 细胞的运动迁移、 与纤维粘 连蛋白( F N ) 和内皮细胞豁附以及裸鼠人肝癌转移模 型肝移植瘤表达 C D 4 4 , MMP - 2 基因蛋白的影响， 现将 研究结果报告如下。 材料与方法 基金项1 1 : 全军“ 十 H” 攻关课题( N o . 0 1 MB 0 2 8 ) 作者单位

12、: 1 . 南京军区南京总医院博士后科研工作站八一分站( 南 京 2 1 0 0 0 2 ) ; 2 . 南京八一医院全军肿瘤中心; 3 . 南京中医药大学 通讯作者: 华海清, T e l ; 0 2 5 一 8 0 8 6 4 0 4 9 , E - m a i l ; x h x h l 2 2 3 )1 6 3 . n e t 1 材料人类肝癌细胞株 S MMC - 7 7 2 1 细胞和 建株人脐静脉内皮细胞株( E C V 3 0 4 ) ， 均引自中国科学 院上海细胞生物研究所。A s 2 O : 注射液( 亚砷酸注射 液， 1 O m g / l O m l / 支) 为哈尔滨

13、伊达药业有限公司产品 ( 国药准字号 X 1 9 9 9 0 1 9 1 ) 0胰蛋白酶为美国 D i f c o 公 司产品。小牛血清系杭州四季青生物工程公司产品。 万方数据 中 国 中 西 医 结 合 杂 志2 0 0 4 年1 0 旦 笙翌 邂 兰 竺塑C J IT W M , O c to b e r 2 0 0 玉V . 丝 卫些 竺 鲤 0 . 1 卫 MT T试剂为美国F l u k a 公司产品。鼠抗人 C D 4 4单 克隆抗体 、 鼠抗人 MMP - 2 单克隆抗体、 超敏 S P ( 鼠) 试 剂盒为美国 Ma x i m B i o t e c h I n c . 产品

14、。液体 D A B酶底 物显色试剂盒为福建迈新生物技术开发公司产品。 2 方法 2 . 1 细胞培 养S MMC - 7 7 2 1细胞和 E C V3 0 4 细胞接种于无菌培养瓶中， 加人适量R P M I - 1 6 4 0 培养 液( 含 1 0 %的小牛血清、 青霉素 l 0 0 U / m l 、 链霉 素 1 0 0 1- tg / m l ) ， 于3 7 U、 5 % C 0 2 及饱和湿度的培养箱中 培养。细胞呈单纯贴壁生长， 每3 一5 天传代 1 次。传 代时用0 . 2 5 %胰蛋白酶消化 2 一3 m i n ， 用培养液吹打 制成细胞悬液， 按所需浓度接种。 2

15、. 2 S MMC - 7 7 2 1 细胞迁移实验参照文献方 法 (6 ) ， 取1 2 0 t.tg / m l 的F N包被6孔板， 每孔加入 0 . 5 m l ， 在超净台风干后放人4 冰箱中备用。实验时 用6 x 1 0 5 / m l 的S MM C - 7 7 2 1 细胞接种于6 孔培养板 中， 待细胞基本长满后， 在底部划出一条 l m m的无细 胞带， 用 P B S漂洗 3 次， 除去悬浮的细胞， 加人浓度为 2 r tg / m l 的A 82 0 3 I M I ， 对照组加入同等量的培养液继 续培养， 分别于 1 2 h , 2 4 h , 4 8 h在光镜下观察

16、细胞迁移 至无细胞带处的情况。每组做 3 复孔平行样。 2 . 3 S MMG7 7 2 1细胞与 F N的豁附实验取 7 0 tt g / m l 的F N包装%孔板， 每孔3 0 讨 ， 在超净台风干 后放人 4 冰箱中备用。实验时取 l xl 护/ m 的 S MMG7 7 2 1 细胞接种于已包被F N的% 孔培养板中， 每孔1 0 0 1 .1 ， 设4 复孔， 待细胞贴壁后( 4 一 5 h ) ， 加人浓度 分别为2 fi g / In l , 4 fi g / m l , 8 1 g / m l 的杨 q 注射液1 0 0 川， 对照加入1 0 0 川培养液， 置于3 7 C

17、, 5 %C q 的培养箱内 分别孵育 2 0 , 4 0 , 6 0 , 1 2 0 m i n ， 吸出培养液， 每孔加人 5 m g / m l 的M T T 2 0 川 ， 继续培养4 h ， 弃去全部上清， 每 孔 加人1 0 0 u 1 0 . 0 4 m o l / L 盐酸异丙醇， 微型振荡器振荡5 一 1 0 m i n ， 使结晶完全溶解， 在酶联仪波长5 7 0 n m处测出各 孔吸光度值( O D ) ， 以0 1 值代表豁附细胞数， 按下列公 式计算细胞勃附抑制率: 抑制率( %) -( 1 一( 加药孔平 均 O D值 一 空白孔平均 ( ) D值) / 对照孔平均

18、 O l ) 值 一 空 白孔平均0 1 ) 值) x 1 0 0 %. 2 . 4 S MMC - 7 7 2 1细胞与 E C V 3 0 4细胞赫附 参照孙蜻蜻等 7 的方法， S M M C-7 7 2 1 细胞传代后， 3 7 C , 5 % C 0 2 培养 箱内 孵育2 4 h ， 更换为 含3 H - T d R 5 p C i / m l 的培养 液， 标 记 3 6 h . H a n k s液洗涤 3次， 0 . 2 5 %胰酶消化， 制成细胞悬液供使用。将 1 x1 0 6 / m l 内皮细胞每孔1 0 0 rt 1 接种至9 6 孔板中， 设3 复孔， 待细胞生长至

19、融合， 吸出培养液， 每孔加人标记好的浓 度为2 . 5 x 1 0 5 / m l 的S MM C - 7 7 2 1 细胞 1 0 0 1 .1 , A s 2 q 组加人浓度分别为t u g / m l , 4 u g / m 1 , 8 u g / m l 的A s , 0 3 注射液每孔 1 0 0 u 1 ， 对照孔加人 1 0 0 u 1 培养液， 3 7 C . , 5 % C 0 2 孵箱中分别孵育2 0 , 4 0 , 6 0 和9 0 m i n 后， 倾去 培养液， P B S漂洗3次， 除去未豁附的细胞， 胰酶消化， 将细胞吸到4 9 # 醋酸纤维滤纸上， 晾干。W

20、a l l a c 液体 闪烁计数仪测定闪烁值( c p m ) 。细胞私附抑制率 ( 1 0 0 %) = ( 1 一( 加药孔平均 c p m值 一空白孔 c p m 值) / ( 对照孔平均c p m值一 空白 孔c p m ) ) x 1 0 0 %. 2 . 5 免疫组化检测将已构建的裸鼠人类肝癌 转移模型2 1 只裸鼠， 随机分为A S 2 0 3 高剂量治疗组 ( A s 2 0 3 注射液 3 . 5 m g / ( k g - d ) 组 、 低剂量治疗组 ( A s 2 0 3 注射液2 . O m g / ( k g “ d ) 组 和生理盐水对照组 各 7只， 于裸鼠肝

21、移植瘤块后第 1 1 天开始用药， 均腹 腔注射， 每天 1 次， 连续3 周， 于停药后次日 解剖裸鼠， 完整剥取肝移植瘤， 1 0 %甲醛固定， 石蜡包埋， 切片， 二 甲苯中脱蜡， 高温高压组织抗原修复， 按说明滴加一抗 和二抗， D A B显色， 苏木素复染， 中性树胶封固， 镜检。 采用已知阳性切片作阳性对照， 用 P B S代替一抗作阴 性对照， 观察裸 鼠人类肝癌转移模型肝移植瘤表达 C D 4 4 , MM P - 2 基因蛋白的情况。阳性判断标准 8 J : 以 胞浆和( 或) 胞膜呈棕黄色为阳性细胞。表达情况根据 细胞染色强度( A) 和染色细胞所占面积( B ) 两者积分

22、 之积来判断。染色强度积分为: 不染色 =0 ， 轻度染色 ( 浅黄色) =1 ， 中度染色( 棕黄色) 二2 ， 强染色( 棕褐 色) =3 ; 染色面积分为: - - 2 5 %细 胞染色二2 。若两种积分之积( Ax B ) 2 ， 则为表达阳 性， 0 . 0 5 ) . 表2 八 S, 味 作用不同时间对S MM C-7 7 2 1 细胞 与 F N附的抑制率( %， 厉士、 ) A s 2 0 3 浓度 ( fi g / m l ) 2 0 mi n 4 0 mi n 6 0 mi n1 2 0 mi n 1 7 . 9 7士1 . 8 5 2 1 . 4 3士1.6 7 2 2

23、. 2 3士1 . 8 5 2 7 . 6 3士3 . 7 2 2 7 . 5 7士1 . 8 5 3 0 . 8 7土7. 0 4 2 5. 0 0士3. 3 0 2 8. 3 3士1 . 6 5 3 0. 5 7士0. 9 8 2 9 . 4 712. 0 4 3 2. 6 3士0. 8 1 3 7. 5 3士0. 7 5 .件jq月q 伪乙件只 注: 相同浓度、 不同时间各组间两两比较， P 0 . 0 5 ) . 具体结果见表 3 0 表3 A s, 0 3 作用不同时间对S MM C - 7 7 2 1 细胞 与 E C V 3 0 4细胞的私附抑制率( %, x1s ) A 5 2

24、 0 1一 一 一 一 n 2 0 mi n 4 0 mi n 6 0 mi n 9 0 mi n ( p g / m l ) ，j内、 ，月， 8 3 0. 0 0士0. 0 0 1 0. 3 3士9. 7 6 2 3. 71士 1 4. 9 9 1 5 . 1 5士9. 4 1* 2 0. 9 3士5 . 3 3* 2 7 - . 71 士1 8. 0 6 1 4 . 0 6士1 . 4 5* 2 1 . 5 6士6 . 3 4* 2 0. 2 4士6 . 5 7 1 0. 5 4士8. 3 8* 2 2 . 8 2士1 0. 8 4* 2 9. 1 8士8 . 3 0 注: 与P l 浓

25、度2 0 m i n 比较， * P 0 . 0 5 ) 。具体结果见表4 0 表4 A s 2 0 : 对裸鼠肝移植瘤表达C D 4 4 , MMP - 2 基因蛋白的影响( 只) 组别 CD4 4 n一+ 表达率( %)n MM P- 2 十 表达率( %) 对照 A S 2 0 3 高剂量 A S 2 0 : 低剂量 1 0 0. 0 0 5 7 . 1 4* 71 . 4 2 8 3. 3 3 2 8 . 5 7 * 4 2. 8 6 注: 与生理盐水组比较， * P 0 . 0 5 侵袭是贯穿肿瘤转移全过程的重要步骤。肿瘤转 移始于恶性侵袭， 此后瘤细胞穿人、 穿出血管或淋巴 管，

26、侵入靶器官内 都是侵袭行为的 具体表现。 L io t t a 19 1 最早提出了侵袭过程的“ 三步” 假说: 私附、 降解与移 动; 即肿瘤细胞侵袭时， 胞体与基质成分豁附， 瘤细胞 伸出伪足， 并释放蛋白酶降解伪足前端的基质， 伪足进 一步突人基质的缺损空间， 肿瘤细胞与原基质脱豁附 并与前方新的基质结合， 细胞的豁附与运动祸连， 瘤细 胞便“ 履带式” 的向前运动， 由此而导致肿瘤发生侵袭 与转移。因此要控制肿瘤的转移， 首先必须控制肿瘤 的侵袭， 即必须抑制肿瘤细胞与基质或基底膜或宿主 细胞的豁附及对基质或基底膜 的降解 以及 自身的 运动。 F N为基底膜及细胞外基质的重要成分，

27、肿瘤细 胞从母体脱离后， 侵袭基底膜及细胞外基质， 通过膜表 面受体可豁附于 F N上而产生运动与迁移， 使肿瘤扩 散与 转移。 我们的 实验结果表明， A s 2 0 3 有抗S M M C - 7 7 2 1 细胞与 F N及内皮细胞赫附的作用， 并能抑制 S MMC - 7 7 2 1 细胞在F N上的迁移能力， 推测其作用可 能与A s 2 0 : 抑制了S MMC - 7 7 2 1 细胞的侵袭活力及改 变了细胞膜表面 F N受体的生化特性有关。 MMP - 2 , C D 4 4 均是与肿瘤侵袭与转移密切相关 的基因蛋白。MMP - 2是能够降解N胶原的一种特异 J胜蛋白水解酶。N

28、胶原是组成细胞外基质及基底膜的 主要结构蛋白， 肿瘤细胞通过分泌 MMP - 2或激活某 些诱导因子诱导或刺激宿主组织分泌 MMP - 2来水解 N胶原而突破基底膜， 侵入血道或淋巴道向远端转移。 C D 4 4 是存在于细胞表面的跨膜糖蛋白， 是介导转移 的主要赫附分子， 主要参与细胞与细胞、 细胞与基质之 间 的 特异性赫附 。 。为了进一步揭示A s 2 0 3 对这些 基因蛋白表达的影响， 以阐明A s 2 0 3 抗侵袭与转移的 作用机理， 我们选择了汤钊酞等 川 所构建的裸鼠人肝 癌高转移模型 L C I - D 2 0为研究对象， 该模型转移率高 ( 1 0 0 %) ， 表现为

29、肝内播散、 淋巴结和肺转移， 类似于临 床肝癌患者， 是目前研究人肝癌转移机理以及抗转移 治疗较为理想的转移模型。我们的实验结果表明， 加 人A s 2 O : 后 MMP - 2 , C D 4 4的表达率低剂量、 高剂量组 均下降， 提示A s 2 0 3 还可能通过调节肿瘤组织某些基 因蛋白的表达而发挥抗勃附和侵袭作用。 A s 2 几 是剧毒中药砒霜的主要成分， 自发现本品 对A P L有突出疗效后， 围绕其抗癌机制进行了大量的 研究， 特别是抗实体肿瘤的作用， 目前仍是研究热点。 J，J 111口月峥 万方数据 中 国 中 西 眯 结 合 杂 志2 0 0 4 年t 0 月 笙2 三

30、 鱼 1 0 担些 I T W M , O c t o b e r 2 0 0 4 , V o l . 2 4 , N o 四 9 2 5 本研究的结果提示， A S Z 0 3 除了有抑制肝癌细胞的运 动与迁移作用外， 还有抗肝癌细胞勃附和侵袭的作用， 这为临床A S 2 0 3 抗肿瘤转移的治疗提供了理论依据， 值得今后进一步加强研究与探索。 参考文献 1马军. 急性早幼粒细胞白血病的“ 靶向” 治疗. 中国肿瘤 1 9 9 9 ; 8 ( 2 ) : 8 0 Ma j .“ T a r g e t O r i e n t a t i o n “ t h e r a p y o f a c

31、 u t e p r o m y e l o c y t i c l e u k e mia . B u l l C h i n C a n c e r 1 9 9 9 ; 8 ( 2 ) : 8 0 . 2 张鹏， 王树叶， 胡龙彪， 等. 三氧化二砷治疗早幼粒细胞白 血病七年总结附 2 4 2例分析， 中华血液学杂志 2 0 0 饥 2 1 ( 2 ) : 6 7 -7 2 . Z h a n g P , Wa n g S Y , H u L B , e t a l . S e v e n y e a r s s u m m a r y o n t h e t r e a t m e t

32、o f a c u t e p r o my e lo c y t i c l e u k e mi a w i t h a r s e n i c t r i - o x i d e -A n a n a l y s i s o f 2 4 2 c a s e s . C h i n J H e ma t o l 2 0 0 0 ; 2 1 ( 2 ) : 6 7 -7 2 . 3陈红， 秦叔速， 陈惠英， 等. 三氧化二砷诱导人肝癌细胞株 S MMC - 7 7 2 1 凋亡的实验研究 肿瘤防治研究 1 9 9 8 ; 2 5 ( 5 ) 3 3 6 - 3 3 8. C h e n H,

33、 Q i n S K, C h e n H Y, e t a l . A p r e l i m i n a r y s t u d y o n a r s e n i c t r io x id e a s a n i n d u c e r o f a p o p t o s i s i n h u m a n h e p a t o c e l - l u l a r c a r c i n o m a c e l l l i n e . C a n c e r R e s P r e v T r e a t 1 9 9 8 ; 2 5 ( 5 ) : 3 3 6 -3 3 8 . 4钱

34、军， 秦叔逢， 何泽民， 等. 三氧化二砷治疗中晚期原发性 肝癌的临床研究. 中华肝脏病杂志 2 0 0 2 ; 1 0 ( 1 ) : 6 3 . Q i a n J ， Q i n S K, H e Z M, e t a l . A r s e n i c t r o x i d e f o r t h e t r e a t - me n t o f me d i u m a n d a d v a n c e d p r i ma r y l i v e r c a n c e r . C h i n J H e p a t o l 2 0 0 2 ; 1 0 ( 1 ) : 6 3

35、. 5 华海清， 秦叔逢， 陈惠英， 等. 三氧化二砷抗肿瘤血管形成研 究. 世界华人消化杂志 2 0 0 4 ; 1 2 ( l ) : 2 7 -3 2 . Hu a H Q, Q in S K， C h e n H Y, e t a l . E f f e c t o f a r s e n i c t r io x i d e o n t h e v a s c u l a r i z a t io n o f t u m o r . Wo r l d C h i n J D i g e s t o l 2 0 0 4 ; 1 2 ( 1 ) : 2 7 -3 2 6路艳艳， 周柔丽.

36、 整合素U6 R ; 增强人肝癌细胞侵袭性机制 的探讨 中华肿瘤杂志 2 0 0 0 ; 2 2 ( 4 ) : 2 8 7 -2 8 9 . L u Y Y , Z h o u R L . M e c h a n i s m o f e n h a n c e d i n v a s i v e n e s s o f h u m a n h e p a t o c e l l u l a r c a r c i n o m a b y i n t e g r i n a 6 p 。 . C h in J O n c o l 2 0 0 0 ; 2 2 ( 4 ) : 2 8 7 -2 8

37、9 . 7孙蜻靖， 周信达， 刘银坤 丹参对肝癌转移复发防治作用的 研究. 中国中西医结合杂志 1 9 9 9 ; 1 9 ( 5 ) : 2 9 2 -2 9 5 . S u n J J ，Z h o u X D , L i u Y K. S a l v i a e mi l t io r r h i z a e o n r e c u r - r e n c e a n d me t a s t a s i s o f l i v e r c a n c e r . C h i n J I n t e g r T r a d i t We s t Me d 1 9 9 9 ; 1 9 (

38、5 ) : 2 9 2 -2 9 5 . 8 黄颖， 黄建富， 殷凤峙. C D 4 4在原发性肝细胞癌中的表 达. 福建医科大学学报 1 9 9 9 ; 3 3 ( 2 ) : 1 2 7 -1 2 9 . H u a n g Y， H u a n g J F , Y i n g F Z . C D 4 4 e x p r e s s i o n i n p r i m a r y h e p a t o c e l l u l a r C a r c i n o m a . J F u j ia n Me d U n i v 1 9 9 9 ; 3 3 ( 2 ) : 1 2 7 - 1

39、2 9. 9 L i o t t a L A. Tu mo r i n v a s i o n a n d me t a s t a s i s r o l e o f t h e e x t r a c e l - l u l a r ma t r i x : Rh o a d s me mo r i a l a wa r d l e c t u r e . C a n c e r R e s 1 9 8 6 ; 4 6 : 1 -7 . 1 0 G u n t h e r t U，L o t r a i n e N, S u mme r E, e t a l . A r e C D 4 4

40、 v a - t r a n t i s o f o r ms i n v o l v e d i n h u ma n t u m o r p r o g r e s s i o n ? C a n c e r S u r v 1 9 9 5 ; 2 4 : 1 9 . 1 1孙防宪， 汤钊酞， 刘康达， 等. 裸鼠人肝癌原位移植转移模型 的生长特性及转移潜能. 中华医学杂志 1 9 9 5 ; 7 5 ( 1 1 ) : 6 7 3 - 6 7 5. S u n F X, T a n g Z Y, L i u K D, e t a l . G r o w t h p a t t e r n

41、 a n d m e t a s t a t ic b e h a v io u r o f o r t h o t o p ic a l l y m e t a s t a t ic m o d e l o f h u - m a n h e p a t o c e l l u l a r c a r c i n o m a i n n u d e m i c e . N a t l Me d J C h i n a 1 9 9 5 ; 7 5 ( 1 1 ) : 6 7 3 -6 7 5 . ( 收稿 : 2 0 0 3 一 0 4 一2 6 修回: 2 0 0 4 一 0 7 一0 5

42、) 冉.峰医粉全集) ( 3 卷) 定 价3 6 0 . 0 0 优 惠价2 8 0 . 0 0 冉 雪 峰 先 生 ， 六 世 医 传， 早 在2 0 世 纪3 0 年 代， 医 坛 已 有 “ 南 冉 北 张 ” ( 南 冉 : 冉 雪 峰 ， 北 张 : 张 锡 纯 ) 之 誉 。 冉 先 生 七 十 年 如 一 日 ， 潜 心 中 医 学 术， 放 近 世 中 医 学 界 ， 影 响 深 远 。 本 书 由 其 子 冉 先 德 率 同 门 下 高 足 ， 合 数 十 人 之 力 ， 费 时3 年 ， 将 冉 先 生 的 全 部 遗 著 加 以 整 理 ， 精 心 订 正 ， 仔 细 核

43、 对 ， 完 成 此 书 。 全 书 约3 0 0 万 余 言 ， 纳 医 经 、 ( 方 药 、 ( 6 证 3 册 。 秦伯未医学名粉全书 定价1 5 8 . 0 0 优惠 价1 3 6 . 0 0 理论高深说理透彻临床实用思路开阔 上 篇 增 补 谦 斋 医 学 讲 稿 ( 新 增 3 1 篇 ) 中 篇 谦 裔 专 普 汇 编 治 疗 格 律 ( 中 医 人 门 、 中 医 临 证 备 要 、 内 经 类 证 清 代 名 医 医 案 精 华 、 ( 金 匾 要 略 杂 病 浅 说 清 代 名 医 医 话 精 华 、 内 经 知 要 浅 解 下 篇 谦 裔 医 案 荟 苹 内 科、 妇

44、科、 儿 科、 膏 方 谢 海 洲 医 学 文 集 定价9 6 . 0 0 元优惠价: 8 0 . 0 0 元 全 书 共 分 八 篇， 其 中 “ 医 药 丛 谈 篇 ” 包 括 医 学 丛 论 、 方 药 漫 谈 等 ; “ 专 病 论 治 篇 ” 包 括 脑 髓 病 论 治 和 神 志 病、 痹 证 及 杂 证 论 治 ; “ 医 案 医 话 ， 篇 收 载 5 6 种 病 证 医 案 和 3 2 则 医 话 ; 方 药 纵 横 篇 ” 包 括 中 药 选 注， 良 方 选 注 ， 常 用 中 成 药 及自 选良 方 四 大 部 分 。 涉 及 医 药 领 域 的 各 个 方 面， 全

45、面 反 映 谢 老 深 邃 的 医 药 理 论 、 丰 富 的 临 床 经 验、 独 特 的 学 术 见 解 和 曲 折 的 从 医 轨 迹 。 感 业 圣典 震 撼悟 千 年 医 3 里 中 医 四大 经 典 示 范 教 学 每门课程 1 5 0 0元 优惠价 1 0 5 0 元 全套 V CD 4 0 0 0 仿来击( 7 0盆) 内 砚( 7 7 盘) 金a 要略( 8 0 盘) 遥病学( 7 2盘) 北 京 中 医 药 大 学 等 七 所 院 校 相 关 学 科 带 头 人 主 讲， 配 有 中 文 字 幕 课 堂 学 术 氛 围 浓 厚 ， 闪 光 点 频 频 进 发， 看 光 盘 如 身 临 其 境， 亲 耳 聆 听 知 名 教 授 、 名 师 妙 趣 横 生 的 讲 授 。 邮购办法: 免费邮寄， 汇款地址: 北京3 9 支局三想医药书店( 北京五棵松 解放军医学图书馆内) 。邮编: 1 0 0 0 3 9 ; 联系人: 张岩: 咨询电话: ( 0 1 0 ) 6 8 2 3 4 5 0 3 , 6 8 2 3 4 5 0 4 ( 传真) ; 6 6 9 3 1 8 6 0 ， 备有书店详细书目( 万余种医学图书可供选购) ， 函索即寄。 万方数据