体外培养大鼠骨髓间充质干细胞成骨基因表达谱的检测.pdf

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1、第2 l 卷第7 期 2 0 0 8 年7 月 医学研究生学报 J o u m a lo fM e d i c a lP o s t g r a d u a t e s V 0 1 2 1N o 7 J u l 2 0 0 8 论著 体外培养大鼠骨髓问充质干细胞 成骨基因表达谱的检测 赵东明1 ， 昊 华1 ， 杨 勇1 ，黄飞1 ，赵文春2 ，黄珊珊3 ( 1 华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科，湖北武汉4 3 0 0 3 0 ；2 海军工程大学电气与信息 工程学院，湖北武汉4 3 0 0 3 3 ；3 华中科技大学同济医学院组胚教研室，湖北武汉4 3 0 0 3 0 ) 摘要： 目的：

2、探讨体外培养大鼠骨髓问充质干细胞( M S C ) 成骨相关基因的表达谱，明确体外培养大鼠骨髓M s c 的成骨潜能。方法：体外培养s D 大鼠骨髓M s C ，取第3 代细胞提取总核糖核酸( R N A ) ，制备杂交探针，并运用 S u p e r A m y 公司提供的大鼠0 l i g oG E A r r a y 骨再生基因芯片( 每张芯片可测1 1 3 种基因) 进行杂交，化学发光检测， 通过x 线胶片或台式扫描获得化学发光的芯片图像，使用网上提供的综合型G E A 玎y 表达分析配套软件( G E J 恤y E 】p 瞅瞎i A n a l y s i sS u i t e )

3、进行完整的芯片数据分析。 结果：检测体外培养大鼠骨髓M s C 的1 1 3 种成骨相关的 基因，其中有3 1 种基因表达强度较低，4 5 种基因呈中等强度表达，3 7 种基因表达强度较高。结论：体外培养大 鼠骨髓M s c 具有部分成骨细胞基因表型特征，但成熟成骨细胞的特征基因表达量较低，提示大鼠M s c 是具有较 强成骨细胞分化潜能的成纤维样细胞。 关键词：骨髓间充质干细胞；成骨基因；骨再生基因芯片 中图分类号： R 3 3 1 文献标识码： A 文章编号：1 0 0 8 - 8 1 9 9 ( 2 0 0 8 ) 0 7 删5 9 r 7 J D 5 D e 删伽o ft h eo S

4、 I e o g e n e s i sg e 耻饯p r e s s i 佃o fr a tb o 玳m a r r o wm e 鼬n c h y m a ls t e m 吣i n gg e m 咖p Z H A OD o n g - m i n 9 1 ，mH u a l ，Y A N GY o n 9 1 ， H U A N GF e i l ，Z H A OW e n c h u n 2 ，H U A N GS h 粕s h 龃3 ( 1 D e P 口厅砒m 旷D ，删泐，乃，l 鲥月却如以，乃，匆i 脓矗记击c o Z 妇e ，黼昭踟矗胛毋矿S c 切黜 口蒯死如，l o 锄，

5、耽舰n4 3 0 0 3 0 ，日z 搬，吼i m ；2 c o Z 姆e 矿E 施廊口以坳册口砌n 西酒，聊矗昭， M 掣如哪砂矿E 蟛袱再昭，耽舰n4 3 0 0 3 3 ，胁舭i ，C 讹；3 脚口r t 玎娜t 旷胍幻铆口蒯E 舶矿 D z D g y ，乃，l 彬胍胁捌c o Z 如酽，枞，l g 砂矿5 ；c 如，黜口以l I l ，l o 姗) ，眦肌4 3 0 0 3 0 ，肌搬， G h i ，m ) A b s t 隗c t ：蝴西P ：T oi n v e s t i g a t et h e t g e n i sg e n e se x p 陀s s e di nm

6、tb o n em 锄帅rm e 鸵n c h y I I I a l 8 t e mc e u s ( M S C ) 锄di d e n 曲t l l e i r 叫e n t i a lo fo s t e o g e n 骼i 8 胁班D 出：S Dr a tb o n e 姗WM S C 8 w e r ei s o l a t e d 觚dc u l t u r e d 胁西，D 觚dt o t a lR N Ae x t r a c t e d 趿dp u r i f i e dl 而mt h em i r d p 8 8 s a l r ec e U s n ep m b ew

7、 鹊s y n t l l e s i 孺d 粕dt h eg e n ep r o d ! i l eo ft h eM S C se x 锄i n e db yu 8 i n gt h em to l i g o t e o g e n e s i s m i c m 栅y w h i c hc o n t a i n e d1 1 3g e n 鹤i n v o l v e di nt l l er e g u l a t i o no fo g t e o 鼬n i cd i H e r e n t i a t i o n T h eh y b r i d i 勰t i o ns i

8、g n a l sw e 陀a c q u i r e du s i n gX r a yf i l mb yc h e I I I i l u m i n e e n td e t e c t i o n 锄dt h ed a t 8o b t a i 埘e d w e 陀a 瑚I y z e dt I l f o u g I lt h ew e b k 嘲耐c o m p k t e l yi n t e 帮纳e dG E A 瑚yE x p l l e s 8 i o nA 瑚b s i sS u i t e 收稿日期 基金项目 作者简介 通讯作者 2 0 0 7 明2 7 ；修订日期：

9、2 0 0 7 1 1 2 l 国家自然科学基金面上项目资助( 批准号：5 0 4 7 7 0 4 3 ) 赵东明( 1 9 7 8 - ) 。男。山东临沭人医学博士研究生，从事骨科专业。 吴华( 1 9 6 1 ) ，男，湖北武汉人主任医师，教授，医学博士，博士研究生导师，从事骨科专业。 万方数据 6 9 8 医学研究生学报2 0 0 8 年7 月第2 l 卷 足P 跚融：A m o n gl h e1 13o s t e o g e n e s i sg e n e s ，3 1e x p r e s 鸵dl o w I y ，4 5m o d e r a t e l ya n d3 7h

10、 i g h l y ( 0 加 c 缸s l 扫以：S o m eo s t e o b l a s tm a r k e rg e n e sw e r ee x p r e s s e di nt h em tb o n em a r r o wM S C s ，b u tw “hal o we x p r e s s i o no ft h em a t u r eo s t e o b l a s tm a r k e rg e n e s ，w h i c hi n d i c a t e st h a tr a tb o n em a r r o wM S C sh a v et

11、 I I ep o t e n t i a lo fo s t e o b l a s td i f l f e r e n “a t i o n K e yw o r d s ： B o n em a r m wm e s e n c h y m a ls t e mc e U ； O s t e o g e n e s i sg e n e ；O l i g oo s t e o g e n e s i s m i c r o 蝴y O 引言 骨髓间充质干细胞( m e s e n c h y m a ls t e mc e l l s ， M S C ) 是骨髓基质细胞中具有多向分化潜能

12、的干细 胞，它可以向骨、软骨、肌组织、脂肪和神经等多种组 织分化【l 。J 。与其他干细胞相比，M S C 以其无可比 拟的优越性成为骨组织工程种子细胞的理想来源， 故成为干细胞研究的热点。深入研究M S C 有关成 骨的生物学特性，对于更好地运用组织工程骨治疗 骨缺损、骨不连等骨科疾病具有重要意义。本研究 用细胞培养与基冈芯片技术检测体外培养的M s C 成骨相关基冈的表达谱，为进一步研究M S C 在骨组 织工程应用中的生物学特性奠定基础。 1 材料和方法 1 1 主要试剂及仪器试剂包括D M E M - F 1 2 ( H y c 1 0 n e 公司，美国) ，优质胎牛血清( H y

13、c l o n e 公司) ， 胰蛋白酶、小鼠抗大鼠C D 4 4 ( A m e r s c o 公司) ，T R - I Z O L 试剂( I n v i t m g e n 公司，美国) ，人骨再生基因 表达谱芯片、T r u e L a b e l i n g - A M P 线性R N A 扩增试 剂盒、S u p e r A 眦yA 眦y G r a n d ec R N A 纯化试剂盒、 G E A h y b 杂交液、化学发光检测试剂盒( S u p e r A r I - a y B i o s c i e n c e 公司，美国) ，G E A m y 表达分析配套软 件

14、( G E A n a yE x p r e s s i o nA n a l y s i ss u i t e ) 。主要仪器 包括倒置相差显微镜( O L Y M P U S ，日本) 。台式微型 离心机、冷冻桌面离心机( E p p e n d o r f 公司) ，芯片扫 描仪( A m e r S h a mP h a 肿a c i aB i o t e c h 公司) ，恒温杂交 箱( S h e l l a b 公司) ，紫外分光光度计( B e c k m 锄C o u l t e r 公司) 及凝胶成像仪( V i l b e r 公司) 等。 1 2 实验动物s D 大鼠4

15、 只，4 5 周龄，体质量 1 0 0 一1 2 0 9 ，雌雄不限，由同济医学院实验动物中心 提供。 1 3 M s C 的分离和体外培养将大鼠颈椎脱臼处 死后，用7 5 的乙醇浸泡1 0 m i n ，在无菌操作台上分 离双侧股骨与胫骨。去除股骨周围肌肉组织，剪去 包括骺板在内的两骺端。用l Om 1 注射器抽取1 0 D M E M F 1 2 ( 具体成分见表1 ) 培养液冲洗骨髓腔， 用3 K l 一8 型离心机，以l0 0 0r m i n 离心5m i n ( 离 心半径为8 c m ) 后，弃去上清。加入适量含l O 胎 牛血清的培养液，将冲洗液反复吹打制成骨髓细胞 悬液，计数

16、并调整细胞密度约5 1 0 6 个r I l l 后直接将 其接种于5 0m l 的培养瓶内，置入3 7 、5 C 0 2 、饱 和湿度的细胞培养箱中培养，接种后约3d 首次换 液，以后每3 4 d 进行全量换液。培养7 一1 0 d ，当细 胞铺满单层时，用0 2 5 的胰蛋白酶消化，进行l ：2 传代培养，并于倒置显微镜下观察细胞培养全过程。 表lD M E M F 1 2 成分 T a b l el I n g r e d i e n t so fD M E M F 1 2 成分含量( r r L )成分含量( m g L ) 无水氯化钙 1 1 6 6 I ，半胱氰酸盐酸盐 1 7 5

17、 6 五水硫酸铜 O 0 0 1 3 L 器氨酸 7 3 5 九水硝酸铁 0 0 5 L 脯氯酸 1 7 2 5 七水硫酸亚铁 O 4 1 7 L 色氰酸 9 0 2 氯化钾3 1 1 8I 。酪氰酸 3 8 4 氯化镁 2 8 6 4L 缬氯酸5 2 8 5 无水硫酸镁 4 8 8 4 D 葡萄塘 31 5 I 氯化钠 69 9 9 5H E P E S35 7 4 5 无水磷酸二氢钠 5 4 3 5 次黄嘌呤 2 磷酸氢一钠 7 1 0 2 亚油酸 O 0 4 2 七水硫酸锌 O 4 3 2 硫辛酸 0 1 0 5 L 精氡陵盐酸盐 1 4 7 5 酚红 8 1 L 胱氨酸盐酸盐 3 1

18、2 9 1 4 - 丁二胺二盐酸盐 0 I l ，谷氰酰胺3 6 5丙酮酸钠 5 5 甘氨酸1 8 7 5维乍索l f 0 0 0 35 L 组氰酸盐酸盐 3 1 4 8 D 泛酸钙 2 2 4 L 异亮氨酸 5 4 4 7 氯化朋碱 8 9 8 L 凑氰酸5 9 。0 5叶酸 2 6 5 L 赖氨酸盐酸盐 9 I 2 5 i 肌醇 1 2 6 L 蛋氯酸 1 7 2 4 娴酰胺 2 0 2 L 苯丙氨酸3 5 4 8盐酸吡哆醛 2 L 丝氨酸 2 6 2 5 盐酸吡哆酵 0 0 3 1 L 广苏氨酸 5 3 4 5 核黄索 O 2 1 9 L 丙氨酸 4 4 5 盐酸琉胺 2 1 7 L 天

19、门冬酰胺 7 5 胸骨 0 3 6 5 坠玉 釜基墼! ：箜丝尘耋! 1 21 ：堡 1 4M S C 的鉴定 1 4 1 免疫细胞化学法鉴定第3 代细胞的细胞爬 片：P B S 液冲洗，室温风干，室温下丙酮同定3 0m i n ， 冲洗；室温下4 多聚甲醇浸泡3 0 “n ，冲洗；滴加正 常血清，室温下封闭2 0I T l i n ，甩去多余液体；滴加第一 抗体工作液( 小鼠抗大鼠C D 4 4 ，S a n t aC m z ) ，4 过 夜，P B S 冲洗；滴加生物素化二抗，3 7 2 0 m i n ，P B S 液 洗；滴加S A B c ，3 7 2 0 m i n ，P B S

20、 液洗；用D A B 试剂盒 室温下显色；脱水、透明、中性树胶封同。 1 4 2 干细胞的特性鉴定干细胞的特性之一是 具有多向分化潜能，骨髓M S C 利用合适的诱导剂， 万方数据 第7 期赵东明，等体外培养大鼠骨髓间充质干细胞成骨基因表达谱的检测 可诱导细胞分化成骨、脂及神经等，可逆向推断该细 胞是骨髓M s C 。向成骨细胞分化：取第3 代细胞， 用成骨性诱导培养液( 含D M E M F 1 2 、1 0 胎牛血 清、l O 。m o L L 地塞米松、5 0 斗g f I l l 维生素c 、l O m m o L LB 甘油磷酸钠) 孵育1 4d ，用细胞化学染色 法检测细胞内碱性磷

21、酸酶。向脂肪细胞分化：取第 3 代细胞，用成脂性诱导培养液( 含D M E M H G 、 1 0 胎牛血清、l O m o L L 地塞米松、O 5 m o L L 异 丁基甲基嘌呤、1 0 彬r I l l 胰岛素、l 斗m o L m l 吲哚美 辛) ，孵育1 4 d 后用油红0 染色观察脂滴形成。向 神经细胞分化：取第3 代细胞，用成神经性诱导培养 液( 含D M E M - F 1 2 、2 0 胎牛血清、lm m o L L 巯基乙 醇) 孵育2 4 h 后，P B s 液洗脱，用无血清的诱导培养 液( 含D M E M - F 1 2 、5m m o y L 巯基乙醇) 孵育6

22、h ，观 察细胞形态变化。 1 5 总R N A 的提取及鉴定取生长良好的第3 代 细胞，用lI I I l ，I R I Z O L 试剂一步法分别提取总R N A ， 用紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测其纯度和 完整性。 1 6 探针合成和芯片杂交采用逆转录标记法，按 照探针标记杂交试剂盒的操作说明进行探针合成和 标记。基因芯片经预杂交后，弃去杂交管中的预杂 交液，加入含探针的G E 从y b 混合液至杂交管中，杂 交过夜。 1 7 化学发光检测基因芯片杂交洗膜后，弃去洗 液，按照化学发光检测试剂盒操作说明依次处理芯 片，然后用X 线胶片曝光。 1 8 数据转换和分析X 线胶片曝光后，将

23、胶片上 的图像用扫描仪扫描并转换为灰度r r I F F 格式的图 片文件，使用网上提供的综合型G E A r r y 表达分析 配套软件进行完整的芯片数据分析，将灰度1 I F F 格 式图片的点阵转化为数字。 表2R N A 质量检测 T 曲l e2R N Ad e t e n n i n a t i 壁曼旦婴竺旦堡塑竺堕塑! 旦堕塑坠垒堕壅! 坠堑出! l3 5 0 2 7 1 7 6 7 31 9 81 4 琼脂糖凝胶电泳定性分析结果均可见清晰的 2 8s 和1 8s 的R N A 条带( 见图5 ) 。证明R N A 未降 解，纯度较高，符合实验要求。 图5R N A 变性胶电泳图

24、F i g I l r e5R N Ad e n a t I l r i l l ga g a r eg e le l e c t m p h o D 皓i s 2 3 大鼠骨再生基因芯片杂交结果杂交后的基 因芯片见图6 。以阴性对照点( P U C l 8 D N A 和空白 点) 的平均强度加2 倍方差作为背景强度，原始数 据进行去背景运算，并使用管家基因P p i a ( 平均表 达强度为4 95 6 4 ) 进行表达强度标准化忙J 。对芯片 杂交结果进行分析，经管家基因标准化均衡后以标 准值 均值的3 7 种基因视为表达强度较高基因 ( 见表4 ) ；标准值介于0 0 5 和O 4 3

25、 22 1 1 之间的4 5 种基因视为表达强度中等基因( 见表5 ) 。 2 结果 2 1 鉴定结果 2 1 1 免疫细胞化学结果培养的细胞C D 4 4 免 疫组化染色呈阳性表现( 细胞质呈黄褐色染色) 。 图1 ，见后插页。表明该细胞不属于造血干细胞，属 于M S C 。 2 1 2 干细胞特性鉴定结果在特定的诱导培养 液的作用下，该细胞可定向分化为成骨细胞、脂肪细 胞和神经细胞( 图2 4 ，见后插页) 。 2 2总R N A 质检结果 T R I z O L 试剂提取样本总 R N A ，经紫外分光光度计检测A 枷A 瑚为1 9 8 ( 见 图6 样本芯片x 线片扫描图片 表2 )

26、。 F i g u r e6x 。阳yi f n a g es c a no f t l I es 锄p l e 万方数据 7 0 0 医学研究生学报2008年7月 第2 l 卷 。 一 表3 表达强度较低的基因 T a b I e3 I ye x p r e s s e dg e n e s _ ：一 一 上学熹裟 黑坚穹掣尝攀! 堕燮二二壁三亘! 二二亟巫互二 jN 翌- 0 1 3 0 5 9 A I p l o 0 2 38 8 8 4 0 x M 一2 2 3 1 2 4n o u a g e n ，茜p eI x a l p l aI o 0 2 94 6 l 4 N M o J

27、2 9 0 0A m b no 0 0 31 0 8 4 7 N M - 2 0 3 4 9 3。D r 二；I 。 o 0 4 10 5 6 N M 0 1 3 4 1 4 B d a p 2 o 0 0 49 2 94 8 N M - 0 1 2 7 9 0 D s 品 o 0 2 78 4 8 x M - 5 7 3 8 1 4 B m p I o 0 0 25 3 I s 6N M 0 5 3 4 2 9 F 玉o 0 2 95 9 4 9 N M _ 0 1 7 1 7 8 B m p 2o 0 4 l3 3 86 2 N M 1 7 8 8 6 6 I 萄 o 0 4 I2 0 5

28、 1 2 N M _ 0 1 7 1 0 5 B m p 5o 0 0 96 86 4 N M - 0 3 1 5 I l I 砬o 0 2 24 6 7 1 3N M o J 3J 0 7 B m p 6 o 0 0 25 0 96 8 N M - o J 2 7 I l I t 葫o 0 3 24 3 6 1 4 x M - 3 4 2 5 9 l B m p 7 o 25 9 8 7 lN M - 0 1 3 1 3 0 s 二0 lo 0 2 73 7 4 1 5 N M - 0 3 0 8 4 9 B m p r l a O 0 1 94 4 87 2 N M - 0 1 3 0 9

29、 5S m a 1 30 0 1 01 0 l 1 6 N M 瑚l 讹5 9 B m p r l b 一啪p P e d 0 7 6N M l3 8 8 7 2S m a d 9 O 0 4 27 5 9 1 8 N M 0 5 3 8 1 6c a l c rO 0 4 ( ) 4 0 9 7 7 N M 瑚1 0 0 8 3 3 2c 0 1 4 a 4O 0 3 66 0 9 1 9 N M - 0 3J 5 6 JC d 3 6 0 咖6 1 58 0 N M J 3 3 5 f 4 M m D I OO 0 2 52 2 2 l x M j 4 5 1 1 3c o l l o a

30、 lo 0 0 94 89 6 N M 0 3 0 5 8 4s 矗l o 0 3 l5 9 2 2 4 X M _ 2 3 5 3 叫1 4 a l p r e d i c l e d 0 0 0 82 3 7 l l lN M - 0 1 7 0 5 8 V d rO 0 2 66 6 3 L 型剑塑当：! 丝一一Q ：坐2 丝 表4 表达强度高的基因 T a b l e4H j g h l ye x p r e s s e dg e n 髑 _ = = ：- 一一 坠! ! 兰!壁! ：! 竺!壁! ! 堕竺!c e r 【i n e dV a l u e P * i t i o nc

31、e n e R a n k G e n eN 涨一；磊鬲瓦i ：一 塑型1 9 4 0 f I 啦o 2 4 90 51 0 5 N M 1 7 2 5 6 啦r 3o 1 3 64 5 5 7 1 蔓_ 0 1 9 3 0 6 兀t l o 0 8 35 8 71 0 6 N M - 0 1 2 6 7 5i l l f ；I 夏5 ； 婴盟罂3 7 5 G d n o o 0 9 41 3 21 0 7 x M 瑚2 4 4m l - p M 酬 面4 为 翼! 蔓- 0 1 2 5 8 7 I b s po 3 8 59 61 0 8 N M - 0 5 3 5 3 0磊i s l l

32、i ：0 8 6 ；1 8 翼! 塑- 0 5 2 8 0 7 I g nr o 3 7 02 2 1 0 9N M 0 2 1 6 9 lT w i 啦 i 0 9 7 ；i 篓：竺_ 3 簟! 誓 I f g a 2 o 0 8 58 9 6 1 1 2N M 二0 3 1 8 3 6 v e 画 ii 玉；。 垒z苎丛王璺Q S 坠 I 卿一p m d i c t e d o 0 7 l2 2 l 一。 。 万方数据 第7 期 赵东明，等体外培养大鼠骨髓问充质干细胞成骨基冈表达谱的检测 7 0 1 3 讨 论 目前检测基因表达的方法主要有N o r t h e m 、R T P c R

33、、m R N A 差异显示、c D N A 代表性差异分析等，这 些方法都只能对少数几个基因的表达进行分析。但 生物体是一个复杂的网络，只对少数几个基因的表 达进行研究显然是不够的。基因芯片技术则能从基 因组水平上高通量、平行化地研究各种组织或细胞 中核酸的表达，具有微量化、自动化、低成本的 特点。引。 1 9 8 8 年M a n i a t o p o u l o s 等“ J 首次报道鼠骨髓 M S C 在体外培养能形成钙化的骨样组织，经X 射 线衍射分析确定，形成的钙化物具有羟基磷灰石结 构，证明体外培养骨髓M s c 具有成骨能力。近年 来，对M S C 成骨特性的研究成为研究的热点

34、。充 分了解M S C 中关于成骨基因的表达特点，可为其 在骨组织工程和基因治疗的研究中提供有力的理 论依据。 本研究发现，在1 1 3 种检测基因中，A 叫、8 唧l 、 B 啦、B m p 5 、8 啦、B 耐、涮1 、s m 口d 3 、脚1 0 等 3 1 种基因呈较低水平表达；励印3 、搿、魄尹、凡弧 胁印8 、蜊、露M ，砬、5 翮、殆痨1 、比咖等4 5 种基 因呈中等水平表达；而B ，叫、删、c o f l 口l 、c o f 3 口l 、 c o 饵口l 、c D f 5 口1 、胁印2 、胁印1 3 、珞皿、聊3 、坛驴、 魄咖等3 7 种基因呈高水平表达。 A l p l

35、 是成骨细胞的一种细胞表面标记性酶，随 着成骨分化程度的增加，碱性磷酸酶表达增强。 蚴的表达在细胞向成骨细胞分化过程中起重要 作用【8J 。B m p 2 是骨形成的重要诱导因子，不仅能促 进成骨前体细胞转化为成骨细胞，而且能诱导成骨 细胞分化一J 。本研究显示A 纠、5 撇奶和口唧2 等基 因在M S C 中呈低水平表达，提示早期体外培养的大 鼠M S C 同时表达部分成骨细胞的细胞外基质，不具 有成熟的成骨细胞特性。而尺砒2 基因在M S C 有较 高表达，作为成骨细胞早期分化的特异性转录因子， R u n x 2 在M S C 向成骨细胞分化过程中具有关键作 用【1 0 1 1 】，表明

36、大鼠M S C 在离心收集条件下具有向成 骨细胞分化的早期特异性转录基因表达。M a d h 7 作 为成骨细胞分化的特异性信号分子2 1 在T G F B B M P 的信号转导中具有双向调节作用。在大鼠M s C 中胍t 砒7 基因呈较高水平表达，提示大鼠M S C 具有 向成骨细胞分化的必要生长因子与信号转导分子。 作为成骨细胞分化的负调节因子，E g E g f 系统 具有稳定细胞表型，有抑制细胞分化的作用引，M s c 中E 矿和E 加的较高表达表明其同时具有保持成纤 维细胞表型的基因表达。而聊、懈、脚基因在 大鼠M S C 均呈中等强度表达。提示该细胞具有较强 的体外增殖能力，同时

37、可维持其体外多分化潜能【I4 | 。 生长因子中如咖、忱驴呈高水平表达，表明M s c 大 量表达促进血管再生的基因5 f 。 以往研究表明，大量分泌m 型胶原是成纤维细 胞的特点，软骨细胞能特异性合成型和X 型胶原， 成熟的成骨细胞能合成I 型胶原，不能合成型胶 原。本研究显示，大鼠M S C 中c o Z l 口l 、c D f l n 2 和 c o 乃口l 基因呈高水平表达，而c D 纪口1 和c 扰1 0 口l 基 因呈低水平表达，提示该细胞表达成纤维细胞和成 骨细胞的细胞外基质的基因。 其他在大鼠M S C 中较高表达或较低表达的基因 是否对大鼠M S C 具有特殊的生物学特性还有

38、待进一 步研究。 4 结语 本研究利用基因芯片技术检测了体外培养的大 鼠M S C 成骨相关基因的表达，从基因表达谱层面揭示 了大鼠M s C 是具有较强成骨潜能的成纤维样细胞，为 进一步深入研究M S C 的成骨特性奠定了基础。 参考文献： 【I F r i e d e n s I e i nA J c o 惜k a j aJ F ，K u l a g i n aN N ，d 口z F i b 呻b I a 或p 陀 c u r 璐抽n o m a la n di n 训i a t e d 删鸵h e m 砒o p o i e I i co 唱叭“J E x pH e m a m I 。1

39、9 7 6 。4 ( 5 ) ：2 6 7 - 2 7 4 2 粱雪。粟永萍孔佩艳，等人骨髓间充质千细胞体外培养及 鉴定 J 医学研究生学报，2 0 0 7 ，2 0 ( 5 ) ：4 5 9 4 6 2 3 】 李亮华，李奇骨髓间充质干细胞分化成软骨的研究进展 J 医学研究生学报。2 0 0 6 1 9 ( 2 ) ：1 6 l 1 6 4 4 苗莉，何国祥，景涛。等骨髓间充质干细胞与血管平滑肌 细胞直接接触培养后的分化及超微结构改变 J 1 医学研究 生学报。2 0 0 7 ，2 0 ( 4 ) ：3 7 4 - 3 7 7 【5 R e ；眦倦M s t a l j 砒i c a la

40、n a l y s i s0 fm i c 咖m yd 越a J A d d i c t 戳o l ，0 5 ，l O ( 1 ) ：2 3 - 3 5 6 s c h e 瑚M ，s h a l D ，D a v i sR w ，甜“Q u t i 协t i v em 仰i t 丽I l go f g e n ee x p 嗍i p 舭e m s 埘mac 伽p l e m 明t a r yD N AI n i c m a m y 【J s c i e n c e ，1 9 9 5 ，2 7 0 ( 5 2 3 5 ) ：4 6 7 幸7 0 7 M 蛐i a l 叩叫l o sc ，s o

41、 d e kJ ，M e l c h e rA H B o n ef o r 啦t i 仰i nv i 咖 b ys t 删m a lc e l l 8o 蛐n e df 汹b o 眦m a n u w0 fy 仙| ga d u l tI a t B 【J 】c e uT i eR ，1 9 8 8 ，2 5 4 ( 2 ) ：3 1 7 3 3 0 8 王运涛。吴小涛，郑启新，等转化生长因子B l s 咖l d 3 促进大 鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的实验研究 J 医学研究生 学报，2 0 0 7 ，2 0 ( 7 ) ：6 8 9 J 6 9 2 ( 下转第7 1 2 页) 万方数据 7

42、 1 2 医学研究生学报 2 0 0 8 年7 月第2 1 卷 对照组，两组比较差异有显著性统计学意义 ( J P 0 0 5 ) 。尽管地诺前列酮组和对照组剖宫产率 相同，从本研究的临床观察结果显示，产妇对地诺前 列酮的依从性优于缩宫素，这可能是由于该药临产 发动早、缩短待产时间、置取方便，产妇在用药过程 中可自由走动，使之易于接受，从而减少了因社会心 理因素造成引产失败的概率，在一定程度上降低了 剖宫产率。增加了经阴道分娩的可能。 3 4 对足月妊娠产妇引产的安佥l 生本研究中，地 诺前列酮对产妇耐受性好，无一例发生恶心、呕吐、 腹泻、心动过速及血压过低等不良反应。有2 例 ( 5 ) 发

43、生宫缩过强，与文献报道的0 6 6 相 符【6 】，但不增加剖宫产率。若用药后发生宫缩过 强，立即取出药物，3 0m i n 后官缩可恢复正常，因地 诺前列酮带有可复性装置，保证了其使用的安全性。 因宫缩过强引起的胎心增速也随之恢复，胎儿娩出 后A p g a r 评分正常，无一例新生儿窒息，新生儿出生 情况好，表明应用地诺前列酮对新生儿比较安全。 值得注意的是：地诺前列酮组有5 例胎儿宫内窘迫， 均发生在1 2h 内临产进入活跃期后，与梁影虹1 等 报道的结果相似，因本研究样本量小，尚无法说明胎 儿宫内窘迫与地诺前列酮应用的相关性。 3 5 注意事项地诺前列酮应用过程中应严格掌 握其适应证和

44、禁忌证，放置时应严格无菌操作，避免 外源性感染，放置位置恰当，以免滑脱。置药后产妇 需卧床休息3 0m i n ，观察有无不良反应。用药期间 加强监护，专人管理，监测胎心和宫缩的频率、持续 时间和强度，若出现强直性宫缩、胎儿宫内窘迫及恶 并发症的发生。 本研究比较了地诺前列酮和缩宫素两种药物的 安全性及有效性。我们认为，地诺前列酮对足月妊 娠产妇能有效地促进宫颈成熟，引产成功率较高，作 用优于传统的缩宫素。而且阴道后穹窿放置地诺前 列酮栓剂是一种安全有效、用药便捷的引产方式，尤 其对促进官颈成熟和缩短临产发动时间有着重要意 义。故对于足月妊娠需要引产而无引产禁忌证的产 妇，若宫颈条件不成熟，应

45、优先选用地诺前列酮阴道 栓剂，促宫颈成熟和诱导引产。 参考文献： 1 曹泽毅，郎景和董悦，等中华妇产科学 M 北京：人民 卫生出版社。2 0 0 4 ：9 5 5 - 9 6 I 2 刘琦，吴无赭，稽晓红，等妊娠合并功能损害致凝血功能障 碍产后出血治疗体会 J 医学研究生学报，2 0 0 6 ，1 9 ( 1 1 ) ： 1 0 5 3 1 0 5 4 【3 w I t e rF R P r 0 8 t a g l 蛐d j nE 2P 陀p a 厢t i o nf o rp 陀i n d u c t i 佣c e r v i c a l r i p e n i n g J C l i n0

46、嘛e tG ”e c o l ，2 0 0 0 ，4 3 ( 3 ) ：4 6 9 4 7 4 4 】王英兰，张建平，王蕴慧，等普贝生用于促宫颈成熟和引产 4 0 例分析 J 中山医科大学学报，2 0 0 2 2 3 ( 5 5 ) ：6 7 击8 5 】盖铭英，张建平，李扬，等控释前列腺素E 2 栓剂一普贝生 用于足月引产的临床研究 J 】巾华妇产科杂志。2 3 ，3 8 ( 4 ) ：2 l O - 2 1 2 6 C 咖eJ M ，B e n n e nK A Am e t a - 柚a l y e i 8o fc t r o l I e d - 陀l e a 眈p r 睁 k I g

47、l 锄d i nf 打c e r v i c a lr i p e n i n g 卸dI a b o u ri n d u c t i o n J 】Js O c c 。 2 0 0 0 。2 2 ( 9 ) ：6 9 2 _ 6 9 8 7 梁影虹，张晓静，方玉兰，等控释前列腺素E 2 用于促宫颈成 熟和引产效果 J 中国计划生育学杂志，2 0 0 5 。1 3 ( 1 0 ) ：6 l l 6 1 2 心、呕吐等不良反应时需及时终止给药，以防止母婴 ( 责任编辑：张锐；英文编辑：唐文杰) 专 牵寺夺争专t 夺寺孛夺孛牵专t 争 争争寺争争寺孛夺夺- 争夺夺辱争专夺争t 争t 争辛- 夺 ( 上接第7 0 l 页) 1 3 】 9 谭祖键，李起鸿B M P 及其诱导的分子生物学基础 J 中华 骨科杂志1 9 9 6 ，1 6 ( 9 ) ：9 - 1 1 1 0 z i 嘲P G ，G i lA P ，G e o 学k o p o u kT 1 1 1 eb o 舱- 8 p e c 近c 飘 眈r i p t i o n