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1、三重融合! “ #法构建感染性辛德毕斯嵌合病毒$ % 后细 胞发生病变。间接免疫荧光检测到病毒蛋白的表达。提取#次传代后细胞上清中病毒 * +， 4 . % U H H : G N H C J H N， H G K D J） 纯化回收。 第$ $卷第$期 $“/年(月 病毒学报 : ! 7 : 7 : : : ; : ; 7 7 : : 7 ! : ! ? ? = =3 2 “8 9 ; : 7 : 7 ! ! ! ; ; 7 7 : 7 ; ! ; ; ! : ; : 7 ! ; ! ! : ; ! 7 ; ; : ; ! ，8($D W预变性 W D Q P !D “ + U为克隆载 体，
2、 完成嵌合病毒1 T L 7的克隆和扩增。 ( % D*Q 7 : V N L D ! Q2 ( “ 3 + 1 ( ) 0 2 ) / 3 5 EF ) 2，7 * # ) / 3，7 , + 2 ) 3，! % M） 制备体外转录体H L 7： 在? B($ 反应体系中加入? ( $; ! 溶液； 反应混合物在 B($， 用H L 7提取试剂盒 （ N 7 “ * 0 !ab ) ( “ $ H L 7Q ) 3 ) F ) 2， N 7 ; D L） 提取病毒H L 7， 用 下游引物 H8 9 ; ! ! ; : ! : ; 7 ; （2） W预变性 W D Q!D “ + U载 体，
3、 在大肠杆菌T V 8 )中扩增， 然后进行序列测定鉴定病毒。 / 融合片段及嵌合病毒# $ % ; ? : 4 2 = = : : 5 ; 3 7 6 ?! ( ) *，; ? 2 ? 6 = : 6 B C 5 6 6 D C 7 6 ? 2 3 6 5 H 6 5；# E “!“#$ %；! E “ 7 = 8 9 : A 9 ? A 9 C : : C D= * 2 3 , 4 !A 9 ; ; 5 ? 9 A 5 A C 7 : 5 = ? 8 C 6 B 9 ? 8 C 6 B 9 ? ? A BCD 6 ? A 9 E AF A = A G H E 4 ? ) ; . D ? ; E B H * = . = ? ; ; I * ; ; * 0 ? 6 ? ) ? / O R ； ) ; ；O G # “O 4 . / ?；J 70 4 H O . = . 1 % & 7，? + ：S L 7 8 L K 9 7 8 7 : U； A “ $ ：7 1 $ “ & 7 !4 % # A “ $ EB % A K77 :期 王力华等： 三重融合A B C法构建感染性辛德毕斯嵌合病毒O G # “克隆