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1、第 !“ 卷第 ! 期 !#$ 年 $ 月 纺织学报 %#?“A文献标识码： 9 文章编号： #!“;B? （!#$） #!B#“B#! 园盘电泳法是聚丙烯酰胺凝胶电泳的一种， 电 泳时缓冲液的 :C 值、 离子组成、 凝胶浓度等是非连 续性的。通常是在直径为 “ DD 的电泳玻璃管内合 成制备凝胶分离柱， 然后进行电泳分离。分离柱由 试料凝胶、 粗孔凝胶和细孔凝胶 ; 种凝胶层组成。 电泳时试料先进入试料凝胶， 经粗孔凝胶浓缩后， 进 而在细孔凝胶中进行分离， 其电泳原理 如图 所示。 图 园盘电泳原理示意图 在羊毛防毡缩整理中， 主要用于羊毛细胞间填 充物!蛋白质成分的分析。在电泳过程中，
2、 其泳动 速度主要取决于蛋白质分子的大小和带电状况。为 了消除蛋白质带电状况对电泳速度的影响， 电极槽 中所使用的缓冲溶液选用迁移速度大的阴离子即 E+F。此时， 在特定条件下蛋白质的电泳速度只取 决于蛋白质分子的大小， 从而达到分离蛋白质的 目的。 实验 试料及主要药品 试料： !G、!C、 HIB!G、 HIB!C； 药品： 丙烯酰胺、 亚甲 基双丙烯酰胺、 888J8J四甲基乙二胺 （-KLKM） 、 乙氨酸、 过硫酸铵 （9HM=） 、 三羟甲基甲胺、 尿素、 蔗 糖、 NHN （蓝色色素） 、 酸性黑 #N、 醋酸。 !分离柱的制备 !:C 为 ?“ 的尿素凝胶原液组成凝胶原液 的组
3、成见表 。 !分离用凝胶溶液组成:C 为 ?“、 丙烯酰胺 “OP， 其组成见表 !。 表 凝胶原液组成 药品 #8 CEG （DG） 三羟甲基 甲胺 （Q） -KLKM （DG） #L 尿素 （DG） 丙烯酰胺 （Q） 亚甲基 双丙烯 酰胺 （Q） 9 液 #7!$7A#7AAFF N 液 #7!$7$“!#7!;AFF E 液 FFFAOO 表 ! 分离用凝胶溶液组成 9 液 （DG）E 液 （DG） OL 尿素 （DG）9HM= （DQ） 第 液O7#$7“F 第 ! 液FF7!“ !;浓缩用凝胶溶液组成:C 为 ?“、 丙烯酰胺 “$P， 其组成见表 ;。 表 ; 浓缩用凝胶溶液组成
4、N 液 （DG）E 液 （DG） OL 尿素 （DG）9HM= （DQ） 第 液;7A;7A“7AF 第 ! 液FFA7#?7# !$分离柱的制备方法将内径为 “ DD、 长度 为 O# DD 的电泳玻璃管洗净后， 固定在凝胶制备台 上； 并在离上管口 ! DD、 !# DD 处做上标记。制备 细孔凝胶时， 将分离用凝胶溶液混合后注入玻璃管 内， 使液面达到第一刻度线， 然后在分离凝胶溶液上 方注入 “ DD 高度的蒸馏水。凝胶化过程在室温下 进行， 约 $“ R A# D1)； 制备粗孔凝胶时， 将浓缩用凝 胶溶液混合后， 在分离凝胶上方注入到第二刻度线 后， 注入蒸馏水， 室温、 约 #
5、5。 ;试料层溶液组成 试料层溶液组成及用量见表 $。 表 $ 试料层溶液组成及用量 组成 #8 CEG （DG） 三羟甲基甲胺 （Q） #L 尿素 （DG） ;#P蔗糖 （Q） 蒸馏水 总量 （G） 用量!7#O#;#适量7# !$电极槽用缓冲液的配制 缓冲液的组成及用量见表 “， :C 值为 O“。万方数据 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkR to remove the watermark 表 ! 缓冲液的组成 组分 三羟甲基甲胺 （“） 乙胺酸 （“） #$ %、!耗时 #3?2=(发生了化学反应， 分
6、子量变 大使得泳移速度变慢的缘故。 3.3提取物的电泳图 试料通过电泳仪电泳， 经染色、 脱色， 拍摄成照 片后的电泳图如图 3 所示。 图 3 聚丙烯酰胺凝胶园盘电泳图 由图 3 可知： 在 相同的条件下用甲酸 处理所得到的提取物 !和 012!， 其电泳图 差别很大。! 为： 整 个凝胶分离柱都为色 谱带， 表明蛋白质呈 分散状存在， 在其下 方 有 一 段 浓 色 的 谱 带， 表明在此谱带区 蛋白质含量较高。而 只有这部分谱带在 012!的电泳图中才会出现， 从 而可以说明经整理的羊毛用甲酸处理后， 其细胞间 填充物的损失较少。 !%的情况和!相似， 整个凝胶分离柱都为色谱 带， 在色
7、谱带的下方也有一段浓色的谱带， 表明此领 域蛋白质浓度较高。而 012!%凝胶分离柱中没有色 谱带， 则说明整个凝胶分离柱中没有蛋白质存在， 因 此可以认为： 该部分细胞间填充物与 3 官能度的预 聚体整理剂发生了化学反应， 存留在羊毛细胞间接 合部， 从而证明聚氨酯预聚体整理剂整理羊毛后， 起 到了保护羊毛细胞间填充物的功能。 6结论 #*聚丙烯酰胺凝胶园盘电泳法， 用于羊毛细胞 间填充物蛋白质成分的分析是一种有效的分析方 法， 其电泳图图像清晰、 结果直接明了。 3*作为聚丙烯酰胺凝胶园盘电泳法最核心的技 术是凝胶分离柱的组成与制备， 本试验所制备的凝 胶分离柱能很好的用于羊毛细胞间填充物
8、蛋白质成 分的分析。 6*由电泳结果可知： 当羊毛用整理剂整理后， 其 细胞间填充物与 3 官能度的预聚体发生了化学反 应， 存留在羊毛细胞间接合部而呈现颜色， 从而证明 聚氨酯预聚体整理剂整理羊毛后， 起到了保护羊毛 细胞间填充物的功能。 参考文献 #AB:CDE FAC9;GEG“H*电泳法大全实技篇*日本医牙药出版社， ! I )-* 3陆必泰等*稳定性聚氨酯预聚体对羊毛细胞间填充物的保护*日 本福井大学学报， #8 （3)） ： ,# I ,* 3!【】纺织学报 3+- 年第 3 期 万方数据 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkR to remove the watermark