兰州地区汉族人群HLAA、B和DRB1等位基因多态性分析.pdf

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1、 群体遗传学研究 兰州地区汉族人群 HLA-A、 B 和 DRB1 等位基因多态性分析 李彩丽唐朝晖方丽华李元荣苏海翔魏虎来 【摘要】 目的分析兰州地区汉族人群 HLA-A、 B 和 DRB1 位点等位基因多态性特点。方法采用序 列特异性引物聚合酶链反应技术对兰州地区 200 名健康无血缘关系的汉族个体 HLA-A、 B 和 DRB1 基因座 进行分型， 并与西北、 北方和南方汉族、 西北回族、 维吾尔族和藏族人群进行比较。结果兰州汉族人群中 HLA-A 基因座共检出 14 个等位基因， 以 A*02， A*11， A*24， A*33， A*30， A*01 和 A*31 基因最常见； HL

2、A-B 基因座共检出 32 个等位基因， 以 B*40， B*15， B*46， B*13， B*51， B*60， B*58 和 B*44 基因最 为常见； HLA-DRB1 基因座共检出 13 个等位基因， 最多见的基因依次为 DRB1*09， DRB1*15， DRB1*12， DRB1*04，DRB1*11， DRB1*07， DRB1*08 和 DRB1*14， 接近北方汉族而与南方汉族有差异， 与西北回族 无明显差异， 但与西北维吾尔族和藏族差异有统计学意义。结论兰州地区汉族人群 HLA-A、 B 和 DRB1 位点等位基因多态性与南、 北汉族人群存在不同程度的差异， 与西北维吾尔

3、族和藏族差异显著。 【关键词】人类白细胞抗原-A、 B、 DRB1； 等位基因； 基因多态性 The analysis of HLA-A， B and DRB1 allelic polymorphism in Han race population in Lanzhou region of China LI Cai-li1， 2， TANG Zhao-hui2， FANG Li-hua2，LI Yuan-rong2，SU Hai-xiang1， WEI Hu-lai1. 1 （Laboratory Center for Medical Science， Lanzhou University，

4、Lanzhou，Gansu，730000 P . R . China） ； 2 （The Red Cross Blood Center of Gan- su Province， Lanzhou， Gansu， 730046 P . R . China） Corresponding author：WEI Hu-lai， Email：weihulailzu . edu . cn 【Abstract】 ObjectiveTo investigate the HLA-A，B and DRB1 allele polymorphism of the Han race population in Lanzh

5、ou area. MethodsPolymerase chain reaction-sequence specific primer was used to detect HLA-A，B and DRB1 alleles in 200 unrelated heathy Han individuals from Lanzhou region，Northwest China，and the results were com- pared with those of Han populations in North，South and Northwest China，and Hui，Uigur an

6、d Tibetan population in China. ResultsFourteen of alleles were detected and identified for HLA-A；32 for HLA-B；and 13 for HLA-DRB1. HLA- A*01，A*02， A*11， A*24，A*30，A*31，A*33；HLA- B*13，B*15，B*40，B*44，B*46，B* 51，B*58，B*60；HLA- DRB1*04， . DRB1*07，DRB1*08，DRB1*09，DRB1*11，DRB1*12，DRB1*14 and DRB1*15 were

7、the most common alleles. The frequencies of HLA-A，B and DRB1 genes of Lanzhou Han race were close to that of North China Hans and Hui population in Northwest China，and a little different to that of South China Hans. The HLA-DRB1 alleles were significantly different to those of Uigur and Tibetan race

8、 population of China. Con- clusionThe allelic polymorphism of HLA-A， B and DRB1 loci of Han race population in Lanzhou area was between North and South Han race of China，close to Northwest China Hui，and markedly different to Northwest China Uigur and Tibetan race populations. 【Key words】 human leuko

9、cyte antigen-A，B，DRB1； alleles； gene polymorphism 人类白细胞抗原 （human leukocyte antigen， HLA） 系统是迄今 最复杂的人类遗传体系， 具有高度的遗传多态性 1-3。兰州地 区汉族人群 HLA 多态性分布迄今尚未见系统调查。我们采用 序列特 异 性 引 物 聚 合 酶 链 反 应 （polymerase chain reaction -se- quence specific primer， PCR-SSP） 技 术 研 究 兰 州 地 区 汉 族 人 群 HLA-A、 B 和 DRB1 等位基因多态性， 以确定兰州地

10、区汉族人群 不同等位基因的分布情况。 1对象与方法 1.1对象随机选择 200 名无血缘关系的兰州籍汉族健康人， 作者单位： 730000 兰州大学医学实验中心 （李彩丽、 苏海翔、 魏虎 来） ； 甘肃省红十字血液中心 （李彩丽、 唐朝晖、 方丽华、 李元荣） 李彩丽和唐朝晖为并列第一作者 通信作者： 魏虎来，Email：weihulai 平均年龄 （30 10） 岁。静脉采血 2 mL， 0.5 mol/ L EDTA 抗凝。 1.2基因组 DNA 提取采用血液基因组 DNA 提取试剂盒在 常温下快速提取血液基因组 DNA， DNA 测定 A260/ A280 1.8， 浓 度 75 1

11、25 ng/L， - 70保存备用。 1.3PCR-SSP 分型采用 PEL-FREEZ PCR-SSP 试剂盒， 按照试 剂盒要求操作。PCR 扩增条件为： 95 25 s； 65 50 s； 72 45 s； 循环 30 次， 72延长 2 min 后冷却至 4。2% 琼脂糖凝胶， 8 V/ cm， 电泳 30 min， 凝胶成像分析系统中观察， 根据特异性扩增 带判定结果， 并成像分析。 1.4HLA 基因命名和特异性HLA 基因命名采用 WHO HLA 因子命名 委 员 会 2002 年 发 布 的 命 名 原 则 4， HLA 特 异 性 按 “HLA 字典 2004” 将 HLA

12、基因转换为对应的 HLA 抗原型 5。 1.5统计学分析直接计算基因频率， 组间频率比较用x 2 检 验法 6。 98中华医学遗传学杂志 2006 年 2 月第 23 卷第 1 期Chin J Med Genet，February 2006，Vol. 23，No. 1 2结果 2.1兰州地区汉族的 HLA-A、 B 和 DRB1 等位基因频率分布 200 名兰州地区汉族人群中共检出 HLA-A 基因 14 个， B 基因 32 个， DRB1 基因 13 个， 以 A*02、 B*40 和 DRB1*09 最多见， 基 因频率分别为 31.5%、 16.75%和 14.0%， 其次分别为 A*

13、11， A *24， A*33， A*30， A*01， A*31， A*03， A*26， A*32 等； B* 15， B*46， B*13， B*51， B*60， B*58， B*44， B*35， B*54 和 B*48 等； DRB1*15， DRB1*12， DRB1*04，DRB1*11， DRB1* 07， DRB1*08， DRB1*14， DRB1*03 和 DRB1*13 等 （表 1） 。 2.2兰州地区汉族与我国南、 北汉族人群 HLA-A、 B 和 DRB1 等位基因频率比较兰州汉族 HLA-A 和 HLA-B 位点的各个等 位基因与西北和北方汉族的差异较小， 与

14、南方汉族有显著性差 异的基因座位数最多 （P 0.05） 1， 2； HLA-DRB1 等位基因频率 与南、 北汉族、 西北汉族和西北少数民族比较 3， 与西北回族差 异最小， 其次为北方汉族、 西北汉族和南方汉族，与西北维吾 尔族和藏族差异有统计学意义 （表 2，P 0.05） 。 表 1兰州地区汉族人群 HLA-A， B 和 DRB1 基因频率分布 （% ） 等位基因特异性表现数基因频率等位基因特异性表现数基因频率 A*01A1174.25B* 40B40369.00 A*02A212631.50B60 （40） 256.25 A*03A3143.50B61 （40） 61.50 A*11

15、A118621.50B* 41B4110.25 A*23A2310.25B* 42B4200 A*24A246917.25B* 44B44194.75 A*25A2500B* 45B4530.75 A*26A26123.00B* 46B464310.75 A*29A2941.00B* 47B4710.25 A*30A30194.75B* 48B48143.50 A*31A31153.75B* 49B4920.50 A*32A3271.75B* 50B5030.75 A*33A33246.00B* 51B51297.25 A*34A3400B* 52B52112.75 A*36A3600B* 5

16、3B5300 A*43A4300B* 54B54153.75 A*66A6610.25B* 55B5592.25 A*68A6851.25B* 56B5620.50 A*69A6900B* 57B5761.50 A*74A7400B* 58B58205.00 A*80A8000B* 59B5900 B*07B7123.00B* 67B6730.75 B*08B830.75DRB1* 01DR1112.75 B*13B13389.50DRB1*03DR17 （3） 246.00 B*14B1420.50DRB1* 04DR44310.75 B*15B15328.00DRB1* 07DR7399.

17、75 B62 （15） 143.50DRB1* 08DR8307.50 B75 （15） 61.50DRB1* 09DR95614.00 B70 （71） 10.25DRB1* 10DR10123.00 B*18B1800DRB1* 11DR114010.00 B*27B2741.00DRB1* 12DR124611.50 B*35B35174.25DRB1* 13DR13133.25 B*37B3771.75DRB1* 14DR14297.25 B*38B3892.25DRB1* 15DR154711.75 B*39B3982.00DRB1*16DR16102.50 表 2 兰州地区汉族与不

18、同人群 HLA-DRB1 等位基因频率比较 等位基因 兰州汉族 （n = 200） 北方汉族 1 （n = 2258） 南方汉族 1 （n = 4707） 西北汉族 3 （n = 183） 西北回族 3 （n = 169） 西北维族 3 （n = 200） 西北藏族 3 （n = 188） DRB1*012.752.690.992.764.1011.250.80 DRB1*036.001.202.474.644.372.000.80 DRB1*0410.7511.4611.6913.9310.3820.5024.47 DRB1*079.7510.844.7913.1012.5723.755.8

19、5# DRB1*087.506.838.143.83#4.6406.38 DRB1*0914.0013.5915.8912.0212.021.259.30# DRB1*103.001.901.772.732.190.251.10 DRB1*1110.006.266.305.197.106.7513.03 DRB1*1211.5010.9412.9412.578.746.75#13.30 DRB1*133.256.10#4.738.745.4610.007.71 DRB1*147.256.007.053.55#7.107.508.51 DRB1*1511.7516.1914.0813.6610.

20、938.005.32 DRB1*162.502.314.71#3.282.462.0015.96 #P 0.05；P 0.01 09中华医学遗传学杂志 2006 年 2 月第 23 卷第 1 期Chin J Med Genet，February 2006，Vol. 23，No. 1 3讨论 HLA-A、 B 和 DR 等位基因多态性分型研究在人类 （民族） 起 源、 进化、 迁徙、 融合等人类遗传学研究， 法医学个体识别， 干细 胞和器官 （组织） 移植以及疾病相关性研究等诸多方面有较大 的应用价值和重要意义 1-3， 6。我们采用微量 PCR-SSP 技术对 兰州地区汉族人群 HLA-A、

21、B 和 DRB1 等位基因进行多态性分 析， 并与国内南、 北和西北汉族群体进行了比较， 同时分析了兰 州汉族 HLA-DRB1 等位基因与西北回族、 维吾尔族和藏族人群 的差异。研究结果显示兰州汉族 HLA-A 位点等位基因较常见 的为 A*02， A*11， A*24， A*33， A*30 和 A*01， 与国内西 北、 北方和南方汉族人群等位基因有不同程度的差异， 但总体 接近北方汉族的特点；HLA-B 位点等位基因较常见的依次是 B *40， B*15， B*46， B*13， B*51， B*60 和 B*58， 比较接近西 北和北 方 汉 族， 与 南 方 汉 族 有 显 著 性

22、 差 异 的 基 因 座 位 数 较 多 1， 2。兰州汉族 HLA-DRB1 位点等位基因较常见的依次是 DRB1*09， DRB1*15， DRB1*12， DRB1*04， DRB1*11， DRB1* 07 和 DRB1*08， 与南、 北汉族均有一定的差异 1， 3； 兰州汉族 HLA-DRB1 等位基因多态性与西北维吾尔族和藏族人群有较显 著的差异， 但与西北回族非常接近 3。这说明 HLA-DRB1 等位 基因人种和民族间差别远大于地域间差别。 国内研究普遍认同中国汉族群体存在南北两个聚类。兰 州虽然地处西北、 地域上属北方， 但位于我国版图的地理中心， 是一个移民城市， 因此其

23、汉族人口的构成上较为特殊。本研究 也证实兰州汉族人群 HLA 有其自身的分布特点， 如 A*11 出现 频率高于北方汉族而低于南方汉族； B*15、 B*40 高于国内其 它汉族人群， DRB1*13 低于北方而接近南方汉族， 并且 DRB1 基因座与西北维吾尔族和藏族差异显著、 而与西北回族差异很 小， 这与兰州所处的地理位置、 人口构成特点、 以及与回族关系 密切相符合。本研究资料为研究兰州地区汉族的遗传背景、 器 官 （干细胞） 移植和疾病关联等提供了有价值的参考资料。 志谢感谢甘肃省红十字血液中心潘登、 李国英和杜宇平在本实 验中所做的工作 参考文献 1Wu GG，Deng ZH，Ga

24、o SQ，et al . Study of HLA polymorphism in the 6965 Han bone marrow registry donors. Chin J Hematol，2004，25:473-477. 吴 国光， 邓志辉， 高素青， 等 . 6965 名汉族骨髓供者 HLA 多态性分析 . 中华血液学杂志， 2004， 25:473-477. 2Zhang HB，Lai JH，Zhao JH，et al . Analysis of HLA-A，B local haplotype among Han population in Northwest China. J

25、Xian Jiaotong Univer（ Med Sci） ，2003， 24:555-557. 张洪波，赖江华，赵钧海， 等 . 西北地区汉 族 HLA-A， B 基因座单元型 分析 . 西 安交 通大 学学 报 （医学 版） ， 2003， 24:555-557. 3Lai SP，Ren HM，Hu HT，et al . HLA-DRB alleles polymorphism in Han， Hui，Uygur and Tibetan populations in Northwestern China. Acta Genetica Sinica，1999， 26:447-457. 赖淑

26、苹， 任惠民， 胡海涛， 等 . 中国西北地 区汉、 回、 维、 藏民族 HLA - DRB 基 因多 态性 的研 究 . 遗传 学报， 1999， 26:447-457. 4Marsh SG，Albert ED，Bodmer WF，et al . Nomenclature for factors of the HLA system，2002. Hum Immunol，2002， 63:1213-1268. 5Schreuder GM，Hurley CK，Marsh SG，et al . The HLA Dictionary 2004：a summary of HLA-A，-B，-C，-DRB

27、1/3/4/5 and -DQB1 alleles and their association with serologically defined HLA-A，-B，-C，-DR and -DQ anti- gens. Tissue Antigens， 2005，65:1-55. 6Li D，Liu HY，Xi B，et al . Study on the genic polymorphism of HLA- DRB1 in a population in the north of China. Chin J Med Genet，2003，20: 325-327. 李丹， 刘海燕， 郗斌，

28、等 . 中国北京人群 HLA-DRB1 基因多 态性的研究 . 中华医学遗传学杂志， 2003，20:325-327 . （收稿日期： 2005-04-21） （本文编辑刘华） 临床细胞遗传学 连续三代罗伯逊易位一家系 李永赞李小英 先证者男， 13 岁， 为第 3 胎， 足月顺产， 出生体重 4.4 kg。 表型正常， 发育良好。因智力低下就诊。父母非近亲结婚， 无 有害物接触史。 细胞遗传学检查： 常规外周血淋巴细胞培养、 制片、 G 显 带。计数 30 个分裂相， 分析 10 个细胞核型， 先证者的核型为 45， XY， t （13； 14）（13qtercen14qter） 。 家系调

29、查： 先证者父母表型正常， 其母智力正常， 其父智力 稍差， 共生育 2 男 1 女， 其母、 兄、 姐染色体核型正常， 其父亲的 核型为 45， XY， t （13； 14）（13qtercen14qter） 。先 证 者 的 祖 父母表型智力正常， 祖母孕7次， 自然流产2次， 生育3男2女， 作者单位： 830001 乌鲁木齐， 新疆维吾尔族自治区人民医院妇产科 遗传室 其中 2 个男孩在 4 岁时夭折， 原因不明。祖母核型正常， 其祖 父核型为 45， XY， t （13； 14）（13qtercen14qter） 。两个姑姑在 外地未能做染色体核型检查。 讨论罗伯逊易位又称着丝粒融合

30、， 是染色体整臂平衡易 位的一种形式， 由于该易位保留了两条染色体的整个长臂， 只 缺失了两条短臂， 故表型、 智力可正常。根据遗传规律， 非同源 染色体的罗伯逊易位在理论上可产生 6 种不同的配子， 与正常 配子结合形成 6 种不同的合子， 其中仅一种正常， 一种为表型 正常的携带者， 其余为单体和三体， 从而引起流产或死胎。先 证者的智力低下， 是否与连续 3 代的罗伯逊易位有关， 有待进 一步探讨。 （收稿日期： 2005-06-02） （本文编辑刘华） 19中华医学遗传学杂志 2006 年 2 月第 23 卷第 1 期Chin J Med Genet，February 2006，Vol. 23，No. 1