不同煎煮时间银翘散及银翘散加玄参对造模小鼠免疫调节功能的影响.pdf

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1、逦j 丝生医垫! Q 生至旦筮丝鲞箍至羽旦! 鲢i 婴塑：坠型型垫! Q ：! 丛! 至：塑Q ：2 不同煎煮时间银翘散及银翘散加玄参 对造模小鼠免疫调节功能的影响 刘亚娴李悦霍炳杰 ( 河北医科大学第四医院中医科，河北石家庄0 5 0 0 1 1 ) 【摘要】 目的观察不同煎煮时间银翘散及银翘散加玄参对造模小鼠免疫调节的影响。方法将7 2 只小鼠随机分为9 组，即空白对照组、模型组、银翘散煮沸3m i n 治疗组、银翘散煮沸6m i n 治疗组、银翘散煮 沸1 2r a i n 治疗组、银翘散加玄参煮沸3r a i n 治疗组、银翘散加玄参煮沸6r a i n 治疗组、银翘散加玄参煮沸 1

2、2 m i n 治疗组、银翘散加玄参煮沸2 0m i n 治疗组。除空白对照组外均腹腔注射环磷酰胺制备免疫抑制模型， 各治疗组分别予相应中药灌胃，7d 后测定游泳耐力时间、吞噬指数K 、吞噬系数a 、脾脏指数、胸腺指数。结 果与模型组比较，银翘散煮沸3m i n 治疗组、银翘散加玄参煮沸3m i n 治疗组、银翘散煮沸6m i n 治疗组、银 翘散加玄参煮沸6m i n 治疗组游泳耐力时间均延长( P 0 0 5 ) ，银翘散煮沸3r a i n 治疗组、银翘散加玄参煮沸 3m i n 治疗组脾脏、胸腺指数明显升高( P O 0 5 ) 。结论银翘 散煮沸3m i n 免疫调节作用最强，加入玄

3、参后无增强免疫调节作用。 【关键词】银翘散；玄参；免疫活性；疾病模型；动物；巨噬细胞 【中图分类号】R 一3 3 2 ；R2 1 9 5 ；R ：3 9 2 1 1 2 ；R 2 8 3 6 6 1 【如蜊棚】A 【文章缩号】l o 吃一2 田( 姗皿一啷o l E m p i r i c a ls t u d yo fL o n i c e r a ea n dF o r s y t h i a ea n dL o n i c e r a ea n dF o r s y t h i a eP o w d e ri n c l u d i n gk a l m d af i g w o r t

4、 r o o tu n d e rd i f f e r e n td e c o c t i o nt i m eO ni m m u n o l o g i c a lr e g u l a t i o no fm o d e l 均担U UY a x i a n ，1 2Y u e ，H U OB i n i e F o u r t hA f - f i t i a t e aH o s p i t a lo fH e b e iM e d i c a lU m v e r s l t y ，l t e b e i ，S h i i a z h u a n g0 5 0 0 11 【A

5、b s t r a c t 】 O b j e c t i v e T oi n v e s t i g a t et h ee f f e c to fL o n i e e r a ea n dF o r s y t h i a ea n d 【肌i c e r a ea n dF o r s y t h i a eP o w d e r i n c l u d i n gk a k u d af i g w o r tr o o tu n d e rd i f f e r e n td e c o c t i o nt i m eO ni m m u n o l o g i c a lr

6、 e g u l a t i o no fm o d e lr a t s M e t h o d s 7 2 m a l er a t sw e r er a n d o m l yd i v i d e di n t o9g r o u p s ，i e ，n o r m a lc o n t r o lg r o u p ，m o d e lg r o u p ，L o n i c e r a ea n dF o r s y t h i a eP o w - d e rb o i l e da f t e r3m i n u t e sg r o u p ，L o n i e e r a

7、 ea n dF o r s y t h i a eP o w d e ra d d e dk a k u d af i g w o r tr o o tb o i l e da f t e r3m i n u t e s g r o u p ，L o n i c e r a ea n dF o r s y t h i a eP o w d e rb o i l e da f t e r6m i n u t e sg r o u p ，L o n i e e r a ea n dF o r s y t h i a eP o w d e ra d d e dk a k u d a f i g w

8、 o r tr o o tb o i l e da f t e r6m i n u t e sg r o u p ，L o n i e e r a ea n dF o r s y t h i a eP o w d e rb o i l e da f t e r1 2m i n u t e sg r o u p ，L o n i e e r a ea n d F o r s y t h i a eP o w d e ra d d e dk a k u d af i g w o r tr o o tb o i l e da f t e r1 2m i n u t e sg r o u p ，L o

9、 n i e e r a ea n df 缸y t I l i 北P o w d e ra d d e d k a k u d af i g w o r tr o o tb o i l e da f t e r2 0m i n u t e sg r o u p T h e r ew e r e8r a t si ne v e r yg r o u p E x c e p tf o rn o r m a lc o n t r 0 1 r a t sw e r e p o n di m m u n i t ys u p p r e s s i o nm o d e lb ye y e l o p

10、h o s p h a m i d e A f t e rl a v a 百n gL o n i c e r a ea n dF o r s y t h i a eP o w d e rt o r a t sf o r7 d a y s ，i n d e x e so fp h a g o c y t e s i s ，s w i m m i n ge n d u r a n c ea n dt h ew e i g h ti n d e x e so fi m m u n eo r g a no fr a t sw e r e d e t e r m i n e d R 矗m l t sT

11、h es w i m m i n ge n d u r a n c ea b i l i t yo fr a t si nL o n i e e r a ea n dF o r s y t h i a eP o w d e rb o i l e da f t e r3m i n u t e sg r o u p ， 1 o n i e e r a ea n dF o r s y t h i a eP o w d e ra d d e dk a k u d af i g w o r tr o o tb o i l e da f t e r3m i n u t e sg r o u p ，L o

12、n i e e r a ea n dF o r s y t h i a eP o w - d e rb o i l e da f t e r6m i n u t e sg r o u p ，L o n i e e r a ea n dF o r s y t h i a eP o w d e ra d d e dk a k u d af i g w o r tr o o tb o i l e da f t e r6m i n u t e s g r o u pw e r er a i s er e m a r k a b l yi nc o m p a r i s o nw i t ht h a

13、 ti nc o n t r o lg r o u p ( P 0 0 5 ) T h y m u sa n d s p l e e ni n d e xi nL o n i e e r a ea n dF o r s y t h i a eP o w d e rb o i l e da f t e r3m i n u t e sg r o u p ，I _ o n i e e r a ea n dF o r s y t h i a eP o w d e ra d d e d 通讯作者：天津市和平区中医医院，天津3 0 0 0 5 0 k a k u d af i g w o r tr o o

14、 tb o i l e da f t e r3m i n u t e sg r o u pW a Sr a i s e d r e m a r k a b l y ( P O 0 5 ) C o n - 萎! 耋圭二竺妻羔烹? 西医结铮临床、教学、科研工作0 研c 心咄b I l i c 咄锄dF o n 咖i 舱P 0 w d e rl l a sd l en 叫州枷 究方向：中医药治疗肿瘤。 。 i m m u n o l o g i c a lr e g u l a t i o nb o i l e da f t e r6m i n u t e s ，1 o n i e e r a ea

15、 n d 万方数据 扭j E 主匡垫! Q 生至旦箜丝鲞筮至期丛! 墅旦丛：垒些婴垫! Q ：y Q ! 丝：盟壁：兰 F o r s y t h i a eP o w d e ri n c l u d i n gk a k u d af l g w o r tr o o th a sn oi m p r o v e de f f e c t 【K e yw o r d s 】L o n i c e r a ea n dF o r s y t h i a eP o w d e r ；K a k u d af i g w o r tr o o t ；I m m u n o l o g i c a

16、 la c t i v i t y ；M a c r o p h n g e 银翘散是清代著名温病学家吴鞠通所创方剂，温病 条辨称之为“辛凉乎剂”，用以治疗温病以及杂病属邪在 卫分、上焦证。温病条辨中银翘散方后记载煎煮方法为 “香气大出，即取服，勿过煮”，相关的实验研究发现煮沸 3r a i n 最宜【I 2 J 。我们在以往实验研究的基础上设计本实 验，以进一步探讨不同煎煮时间银翘散对免疫抑制造模小 鼠免疫调节功能的影响，以及方中加入玄参是否可增强免 疫调节功能，为临床应用提供依据。 1 材料与方法 1 1 实验材料 1 1 1 实验动物雄性清洁级昆明小鼠7 2 只，体质量 1 8 2 2g

17、 ，购自河北医科大学实验动物中心，许可证号： S C X K ( 冀) 2 0 0 3 1 0 0 3 。 1 1 2 药物及试剂银翘散的组成药物：金银花、连翘、桔 梗、淡豆豉、生甘草、淡竹叶、荆芥、薄荷、牛蒡子、芦根，玄 参，均由石家庄市乐仁堂医药有限公司提供；注射用环磷 酰胺( 山西普德药业有限公司，国药准字H 1 4 0 2 3 6 8 6 ，生产 批号：2 0 0 7 0 8 0 6 ) ，以0 9 氯化钠注射液稀释至 1 2 5 叫m L ；一得阁极品墨汁由北京一得阁工贸中心 提供。 1 1 3 实验仪器7 2 1 分光光度计( 上海欣茂仪器有限公 司) ；电子分析天平( J A 5

18、 0 0 3 型，上海精科实业有限公司) 。 1 2 方法 1 2 1 动物分组7 2 只小鼠随机分为9 组，即空白对照 组、模璎组、银翘散煮沸3w i n 治疗组、银翘散煮沸6m i n 治 疗组、银翘散煮沸1 2m i n 治疗组、银翘散加玄参煮沸3v a i n 治疗组、银翘散加玄参煮沸6m i n 治疗组、银翘散加玄参煮 沸1 2m i n 治疗组、银翘散加玄参煮沸2 0m i n 治疗组，每组 8 只。 1 2 2 造模方法除空白对照组外，各组于第l 、3 、5 、7d 予注射用环磷酰胺2 5m e , 蝇体质量o 腹腔注射制备免疫 抑制模型。 1 2 3 中药煎剂的制备银翘散( 金

19、银花、连翘、淡竹叶、 荆芥、牛蒡子、淡豆豉、薄荷、生甘草、桔梗、芦根组成) 以及 玄参，全方中各药剂量均为1 0g 4 】，为达浓度将各药轧成细 面后混匀。在5 0 0m L 烧杯中加入2 0 0m L 水，2 0 0g 药面( 有 玄参对照组2 2 0m L 水，2 2 0g 药面) 。用电磁炉( G C 一2 0 3 3 型，珠海格力电器股份有限公司) 设定温度1 6 0 加热，当 药汁温度达到1 0 0 。C 时开始计时，分别煎煮至3 、6 、1 2 、 2 0m i n ，4 保存。 1 2 4 给药方法各治疗组自造模后开始每日给药 0 4I r I 罐胃，连续7d 。空白对照组和模型

20、组每日均以蒸 馏水0 4m L 灌胃。 1 3 观察指标 1 3 1 游泳耐力时间取备用清洗干净的透明玻璃缸，加 入蒸馏水深度2 0e m ，温度控制在1 5 1 6 。末次给药后 3 0m i n 取各组小鼠，小鼠尾根部负荷质量为5g 的铅丝，置 水游泳，用秒表记录，从把小鼠置入水中到小鼠头入水为 止为耐力时间，头入水5s 时取出并记录时间口j 。 1 3 2 吞噬指数K 及吞噬系数O t 取一得阁极品墨汁，反 复振摇至均匀，用1 明胶液稀释4 倍。末次给药后2 4h ， 于鼠尾静脉注入稀释的墨汁0 O lm L g 。注入墨汁后3 08 及6r a i n 用取血吸管从小鼠眶后静脉丛取血0

21、 0 2 5m L ，立 刻吹入0 1 碳酸钠( N a ：C O ，) 溶液2m L 中，并反复吸入、 吹出，充分洗出吸管壁附着之血液，校零，于7 2 1 分光光度 计上6 7 5n m 处比色，按下式计算吞噬指数K 及吞噬系数 ( 校正吞噬指数) 瑾 K = ( 1 9 C l l g C 2 ) ( T 2 一T t ) O t = W ( K ) 1 3 W L S 公式中c 为血中炭粒浓度，T 为时间，W 为体质量， W I S 为肝、脾质量之和【6 J 。 1 3 3 脾脏、胸腺指数小鼠称取质量后处死，无菌条件 下取脾脏、胸腺，称取质量后计算脾脏、胸腺指数。公式为： 脾脏或胸腺指数

22、= 脾脏或胸腺质量( 哪) 体质量( g ) 1 0 0 【引。 1 4 统计学方法采用S P S S l 3 0 统计学软件，数据用均 数标准差( i s ) 表示，采用完全随机设计的方差分析 比较，组间两两比较使用S N K q 检验法。 2 结果 2 1 各组游泳耐力时间比较见表l 。 表1 各组游泳耐力时间比较s ，it s 与空白对照组比较，P 0 0 5 ) ；与 模型组比较，银翘散煮沸3m i n 治疗组、银翘散加玄参煮沸 3r a i n 治疗组、银翘散煮沸6m i n 治疗组、银翘散加玄参煮 沸6m i n 治疗组游泳耐力时间均延长( P 0 0 5 ) 。 万方数据 2 2

23、 各组吞噬指数K 及吞噬系数O t 比较见表2 。 表2 各组吞噬指数K 及吞噬系数a 比较i t ， 与空白埘照组比较。P 0 0 5 ) 。 2 3 各组脾脏、胸腺指数比较表3 。 表3 各组脾脏、胸腺指数比较 i t ， 与空白对照组比较，P 0 0 5 ；与模型组比较， P 0 0 5 ) 。 3 讨论 以往的实验研究结果表明，银翘散煮沸3m i n 治疗组 与煮沸6m i n 治疗组疗效均优于银翘散煮沸1 2m i n 治疗 组，证明银翘散煎煮时间不宜过长，以煮沸3m i n 为佳1 。 ：温病条辨原著中，有银翘散“去元参”、“倍元参”等条 文，历代医家多有争议，为探究玄参是否可增强

24、银翘散免 疫调节功能，我们在实验中增加了银翘散加玄参煮沸3 、 6 、1 2m i n 组，且玄参苦、甘、咸，寒，归肺、胃、肾经，功效为 清热凉血，滋阴解毒，煎煮时间短恐难以发挥效用，所以 增加银翘散加玄参煮沸2 0m i n 组。 腹腔注射环磷酰胺造成小鼠的免疫抑制模型是较为 经典的免疫抑制动物模型之一，重现性好，简单易行。从 小鼠游泳耐力时间推测免疫调整功能”1 ，结果表明模型 组、银翘散煮沸1 2m i n 治疗组、银翘散加玄参煮沸1 2m i n 治疗组、银翘散加玄参煮沸2 0m i n 治疗组游泳耐力时间 均缩短( P 0 0 5 ) ；与模型组比较，银翘散煮沸3m i n 治疗组、

25、银 翘散加玄参煮沸3r a i n 治疗组、银翘散煮沸6r a i n 治疗组、 银翘散加玄参煮沸6m i n 治疗组游泳耐力时间均延长 ( P 0 0 5 ) 。 单核细胞及由单核细胞演变而来的具有吞噬功能的 巨噬细胞，称为单核吞噬细胞系统( m o n o n u c e a rp h a g o c y t i c s y s t e m ，M P ：s ) 。单核细胞发生于骨髓的多能干细胞，循环 于血液中，穿透血管内皮进入组织内，转变为巨噬细胞。 单核吞噬细胞系统在体内分布广，细胞数量多。当M P S 的生理功能失调时，可引起多种疾病。些能摄入活体 染料的网状细胞、内皮细胞以及巨噬细胞

26、，被称为单核巨 噬细胞系统( r e t i c u l o e n d o t h e l i a ls y s t e m ，R E S ) ，当静脉注 入特定大小的惰性炭颗粒后，即可被R E S 细胞迅速吞噬 而从血流中廓清。因此，借助测定血流中炭粒的消失速 度能反映R E S 吞噬异物的能力旧J 。炭粒廓清指数表示在 一定范围内，小鼠清除进入机体炭粒的速率，是非特异性 免疫功能的指标。实验表明各治疗组吞噬指数K 及吞噬 系数O t 均增高( P 0 0 5 ) 。 胸腺为初级淋巴器官，游走的造血干细胞进入胸腺 原基，在此分化增殖成T 淋巴细胞，与细胞免疫有关。脾 脏为次级淋巴器官，免疫

27、活性细胞移行于此，并在此处因 受免疫过程中异体抗原刺激而进一步增殖分化和成熟， 脾脏中有T 淋巴细胞和B 淋巴细胞以及巨噬细胞，与体液 免疫、细胞免疫均有密切关系。免疫抑制剂可使胸腺、脾脏 明显萎缩，免疫增强剂则使胸腺和脾脏增加质量。实验 表明与空白对照组比较，除银翘散煮沸3m i n 治疗组、银翘 散加玄参煮沸3m i n 治疗组外各组脾脏、胸腺指数均明显 减少( P 0 0 5 ) 。 本实验结果表明，银翘散煮沸3m i n 免疫调节功能最 强，而且加入玄参后未增强免疫调节功能，故临床常规治 疗温病以及杂病属邪在卫分、上焦时不需加入玄参，辨证 兼有阴虚火旺证候时再酌情加入。 万方数据 塑j

28、 E 生匿至Q ! Q 生至旦筮墼鲞箜2 翅丛! 鲢i 堑丛：坠坠型婴垫! Q ：! Q ! 墼：塑里：2 不同剂量黄连素对心肌缺血大鼠的抗氧化损伤作用 王燕凌苗智慧牛丽静王惠娟朱远生夏晓红 ( 河北省疾病预防控制中心医学研究所，河北石家庄0 5 0 0 2 1 ) 【摘要l目的研究不同剂量黄连素( 盐酸小檗碱) 对实验性心肌缺血大鼠抗氧化损伤作用。方法 加只雄性W i s t a r 大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组、黄连素低剂量组 5 0m s ( k g d ) 、黄连素高 剂量组 1 5 0m s ( k g d ) ，每组8 只，除正常对照组和假手术组外，均采用心脏冠脉结扎法

29、建立大鼠心肌缺 血模型，各组灌胃治疗7d 。心脏取材后观察心脏组织病理变化，检测组织中超氧化物歧化酶( S O D ) 活性和丙 二醛( M D A ) 含量改变。结果与正常对照组比较，模型组S O D 活性和M D A 含量显著增加( P 0 0 5 ) ；与模 型组比较，黄连素高、低剂量组M D A 含量均显著降低( P 0 0 5 ) ，黄连素高剂量组降低更为显著( P O 0 1 ) ；黄连素低剂量组S O D 活性显著增加，黄连素高剂量组无显著增加。结论黄连素可减轻心肌缺血大 鼠心肌的氧化损伤而对心肌起到保护作用，其作用与浓度有一定依赖关系，黄连素高、低剂量组的作用机制和 途径可能不

30、同。 【关键词】小檗碱；大鼠；疾病模型；动物；心肌缺血；抗氧化荆 【中图j 类号】R 一3 3 2 ；R 3 6 3 ；K 5 4 Z2 1 5 3 ；R 2 8 4 1【j i t 纠瘃识码】A 【； j 阜 绵号】I 1 1 2 2 6 1 9 ( 2 0 1 0 ) 0 2 一0 2 6 7 0 3 2 6 7 E f f e c t so fb e r b e r i n eo nM D Aa n dS O Do fm y o c a r d i a li s c h e m i ah e a r tt i s s u e so fr a t sW A N GY a r d i n g

31、 ，M I A OZ h i h u i ，N I U 蛳n g ，e ta 1 H e b e iC e n t e r f o rD i s e a s eC o n t r o la n dP r e v e n t i o n ，H e b e iP r o v i n c e ，S h i i a z h u a n g0 5 0 0 2 1 【A b s t r a c t 】 O b j e c t i v e T oi n v e s t i g a t et h ee f f e c t so fb e r b e r i n eo nt h eo x i d a t i v

32、 ed a m a g eo fm y o c a r d i a li s e h e m i a i nr a th e a r t M e t h o d s4 0m a l eW i s t e rr a t sw e r er a n d o m l yd i v i d e di n t o5g r o u p s ：c o n t r o lg r o u p ，s h a mg r o u p ，m o d e l g r o u p ，l o w d o s e 5 0m s ( k g d ) g r o u pa n dh i g h d o s e 1 5 0m s (

33、 k g d ) g r o u p E x c e p tr a ti nc o n t r o lg r o u p ， m y o c a r d i a li s c h e m i am o d e l so fr a tw e r ee s t a b l i s h e db yc a r d i a cc o r o n a r yl i g a t i o n B e r b e r i n ew a sg i v e nb ym o u t hi nl o w d o s eg r o u pa n dh i s h d o s eg r o u pf o r7d a y

34、s 7d a y sl a t e r 。t h ea n i m a lw e r ea n e s t h e t i z e dw i t hp e n t o b a r b i t a ls o d i u m ( 5 0m s k s ，i p ) ，t h ep a t h o l o g i c a lc h a s e so fh e a r tt i s s u e sw e r eo b s e r v e d ，M D Aa n dS O Dw e r ed e t e r m i n e db yu s i n g k i t R e s u l t sC o m p

35、 a r e dw i t hc o n t r o lg r o u p ，S O Da c t i v i t ya n dM D Ac o n t e n ti nh e a r tt i s s u e sw e r ei n c r e a s e di nm o d e l g r o u p ( P 0 0 5 ) C o m p a r e dw i t hm o d e lg r o u pM D A i nl o w d o s eg r o u pa n dh i g I l d o s eg r o u pw a sd e c r e a s e d ( P 0 0 5

36、 ，P 0 0 1 ) S O Da c t i v i t yi nl o s e d o s eg r o u pw a si n c r e a s e dc o m p a r e dw i t hm o d e lg r o u p ( P 0 0 5 ) C o n c l u s i o nB e r b e r i n eC a l lr e s i s to x i d a t i v ed a m a g eo fm y o c a r d i a li s c h e m i aa n dp r o t e c th e a r tt i s s u e 【K e yw

37、o r d s 】B e r h e r i n e ；M y o c a r d i a li s c h e m i a ；R a t ；S O D ；M D A ；O x i d a t i v ed a m a g e 项目来源：河北省中医药管理局科研计划( 编号：2 0 0 6 0 2 1 ) 作者简介：王燕凌( 1 9 7 2 一) ，女，助理研究员，硕士。研究方向：心 血管病生理。 黄连素( 盐酸小檗碱) 在临床上常作为广谱抗生素使 用，近年来研究发现，黄连素可增加心肌收缩力，明显改 善心功能，对心力衰竭的发生和心肌的能量代谢也有良 参考文献 1 刘亚娴，霍炳杰，张莉，等银翘散在

38、不同煎煮时间下对致热 大鼠体温及下丘脑c A M P 含量的影响 J 】中华中医药学 刊，2 0 0 8 ，2 6 ( 2 ) ：2 4 5 2 4 8 2 刘弧婀霍炳杰，贾喜花，等银翘散在不同煎煮时间下对小 鼠网状内皮系统对血流中惰性炭粒的吞曦廓清能力和游泳 耐力的影响 J 陕西中医，2 0 0 8 ，2 9 ( 8 ) ：1 8 0 1 1 8 0 3 3 黄瑞松，叶琦莉，陈超树，等壮药土垅垃大白蚁菌圃水提醇 溶物对小鼠免疫功能的影响 J 中国中医药科技，2 0 0 5 ，1 2 ( 6 ) ：3 8 2 3 8 3 4 段富津方剂学 M 6 版上海：上海科学技术出版社， 2 0 0 3

39、：2 8 王克芳，徐长庆，李志超，等冬虫夏草抗小鼠运动性疲劳的 作用及机制研究 J 哈尔滨医科大学学报，2 0 0 3 ，3 7 ( 4 ) ： 3 l l 一3 1 4 S t u a r tA E ，H a b e s h a wJ A ，D a v i d s o nA E P h a 9 0 c y I e 8i nv i t r o M L a c h m a n nP L ，H o b a r tM J ，W e i rD M H a n d b o o ko fe x p e r i m e n t a li m m u n o l o g y 3 r dE d n O x f o r d ：B i a c k w e l lS c i e n t i t i c P u b l i c a t i o n s 。1 9 7 8 ：31 凌学静，张海石，黄岩西红花对小鼠免疫增强作用的研究 J 中国中医基础医学杂志，1 9 9 8 ，4 ( 1 2 ) ：2 8 2 9 陈奇中药药理研究方法学 M 2 版北京：人民卫生出版 社，2 0 0 6 ：7 5 9 ( 收稿1 3 期：2 0 0 9 0 2 2 7 ) 1 J 1-1J 1 J 陋 口 隅 万方数据