人mGluR1基因mRNA实时荧光定量PCR方法的建立.pdf

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1、中国 实用神经疾病杂志2 0 0 5 年1 月第1 1 卷第1 期 c h in e s e J o u r n a l o f p r a c t i c a l N e r v o u s D i s e a s e s J a nZ 0 0 8 ， v o l l l N o 1 1 1 预后及治疗应用关系密切。 P T E N是一种新发现的抑癌基因， 它不仅有抑癌 基因的特性， 还有磷酸酶的活性， 在细胞内信号传导路 径调控中起关键作用。通过对此通路的调控， 可抑制 细胞周期的进展， 介导细胞凋亡。本研究发现P T E N 在正常脑组织中均阳性表达， 而在人脑星形细胞瘤各 级组中的阳性

2、率表达随恶性程度的升高而降低( 尸 0 . 05) ， 表达的标记指数与病理分级的关系呈负相关 ( r : =一0 . 6 1 8 ， 尸 0 . 0 5 ) 。表明P T E N的失活或介导 细胞调亡等特性在人脑星形细胞瘤发生中起关键作用。 本研究发现S k p Z 与P T E N在人脑星形细胞瘤中 的表达呈负相关( : : =一0 . 4 87， 尸 0 . 0 5 ) 。肿瘤抑制 蛋白P T E N是一个多功能磷酸酶， 它通过磷脂酞肌醇 3 一 激酶( PI3 一 激酶) 通路抑制细胞的生长、 控制细胞周 期 G l / 5的转换等， 其中P 27是关键下游靶图。最近， M a m i

3、 l l a p a l l i 等 3 研究发现胚胎干细胞p T E N缺失引 起 P 27 蛋白水平下调， 伴随 S k p Z 蛋白表达的增加。 相反， 在人类胶质母细胞瘤， P T E N蛋白过表达导致 P 2 7 聚集， 伴随 S k p Z 表达的减少; 单纯 S k p Z的过表 达可逆转 P T E N诱导的 P 27 的聚集， 恢复 cyclin/ C D K Z 激酶的活性， 克服 P T E N诱导的G l 期细胞周 期阻滞; 重组 S k PZ 蛋白能使加人 PI3 一 激酶抑制剂的 细胞提取物中的 P 27 泛素化。在人前列腺癌组织研 究中也发现S k p Z 蛋白表

4、达与P 27 及 P T E N蛋白表达 分别呈负相关4j。 这些结果及本研究结果表明在脑星 形细胞瘤中P T E N低表达或缺失， 可能导致 S k p Z 高 表达， 从而降低P 27 的表达， 提示S k p Z 蛋白过表达可 能是发生和发展的一个重要原因。这也提示 S k p Z 可 能是 P T E N / PI3 一 激酶通路调节 P 27 蛋白表达的一个 重要成分。 综上所述， S k p Z 和P T E N蛋白参与人脑星形细 胞瘤发生、 发展过程细胞周期的调控， 而且互为影响。 本实验表明上述两个基因可作为人脑星形细胞瘤的诊 断和恶性程度评估的参考指标， 可能成为脑星形细胞

5、瘤治疗的新靶点， 可以开发以此分子为靶点的药物。 参考文献 H a r a d aK， S u p r i a t n o ， K a w a g u c h i S ， e t a l . H i g he x P r e s s i o no f S p h a s e k i n a s e- a s s o c i a t ed p rot e i nZ ( S k p Z ) i sas t ron gp ro g n o s t i c m a r k e r i n o r a l s q u a r m o u s c e 1 l c a r c i n o m a p a t

6、 i e n t s t r e a t e db yU F 1 ， i n c o m b i n a t io n w i t hra d ia t i o n J . A n t i can c e r R e s ， 2 0 0 5 ， 2 5 ( 3 c ) ; 2 4 7 1 2 4 7 5 G o t t s c h a l kA R ， B a s i l a D， Wo n gM， e t a l . P 2 7 K I P l i s r e q u i r e df o r P T E N- i n d u c e d G l g row t ha r re s t J

7、. C a n ce r R e s ， 2 0 0 1 ， 6 1 ( 5 ) : 2 1 0 5 2 1 1 1 Ma m i l l a p a l l i R ， G a v r i l o v a N， Mi h a y l o v aV T ， e t a l .P T E Nr e g u - l a t e st h eu b i q u i t i n 一 d e p e n d e n td e g r a d a t i o no ft h eC D K i n h i b i t o r P 2 7 ( K I P I ) t h r o u g h t h e u b

8、 i q u i t i n E 3 l i g a s e SCF ( S k p Z ) J . C u r r Bio l ， 2 0 0 1 ， 1 1 ( 4 ) : 2 6 3 一2 6 7 Y a n g G， A y a l a G， D e Ma rz oA， e t a l .E l e v a t eds k p Z p r o t e i ne x - p r e s s i o ni nh u m a np r o s t a t e c a n c e r : a s s o c i a t i o nw i t hl o s s o f t h e c y - c

9、 l i n 一 d e p e n d e n t k i n a s e i n h i b i t o r P 2 7a n dP T E N a nd w i t hr e d u c e d r e c u r r e n c ， f r e e s u r v i v a l J . C l i nC a n c e r R e s ， 2 0 0 2 ， 8 ( 1 1 ) : 3 4 1 9 3 4 2 6 ( 收稿 2 0 0 7 一 1 0 一 2 6 ) 人 mG luR I 基因mR N A实时荧光定量 P C R方法的建立 刀筱芳 ， 伍雪英2) 李宁 ， 徐亚欧1)

10、 何进宇助 龚玉来2) 高晋健2 ， 1)西南民族大学生命科学与技术学院成都6 1 004 1 2)成都三六三医院神经内科成都6 1 0041 摘要1 目的 建立代谢型谷氨酸受体1 ( m G l u R I ) 基因m R N A表达水平的T a q M a n r e a l一 t i m e P C R检测方法。 方法以归 - ac ti n 为内 参基因， 根据G enB ank 中人m Glu R I 及p 一 ac t in基因序列， 分别设计了两套特异性引物和T aqM an探针， 接着对反应的退 火温度、 引物浓度、 探针浓度、 M g “ + 浓度进行优化， 然后以优化的条件

11、建立相对定量标准曲线， 并对该方法的稳定性进行分析。 结果 m Glu R I 及任 ac ti n 基因的re al 一 ti m e P C R 扩增效率分别为99. 7 %和10O . 。 纬; 相对定量标准曲 线的C T值线性范围分别为8.1 一 30. 9 和n. 9 一32. 1 ， 相关系数分别为。 . 9 99及 1 . 0 00; 批内及批间变异系数6 . 4 %。结论本研究所建立的针对 m Glu R l m R N A 表达水平的T aqm an r eal 一ti m e P C R检测方法具有扩增效率高、 稳定性好等特点， 为进一步探索 m G hi R I 的功能及

12、其m R N A表达 水平的变化和各种疾病发生、 发展的相关性提供了方法学基础。 L 关键词 代谢型谷氨酸受体; T a q M a n 探针; r e a l- t i m e P C R ; m R N A 1 中田分类号I R 一 3 3 文献标识码 A 文章编号1 1 6 7 3 一 5 1 1 0 ( 2 0 0 8 ) 0 卜 0 0 1 1 一 0 4 E s t a b l i s h m e n t o f r e a l 一 t i m e P C Ra s s a yfOr q u a n t i t a t i v e a n a l y s i s o f m G l

13、 u R l m R N Ai nh u m a n a 夕 乞 n g ， L I Ni n g ， e t a l .C o l l e g e o fL 艺 fe s c i e n c e a n dTec h n o l o g 少 ， s o u t h wes t Un: v e r s i t 少for Na t i o n a l i t i e s ， D a o Xi a o fan g ， W“ Xu - Che n g d u6 1 0 0 4 1 A bs t r a c t 1 O bj e c t i v e 墓金项目: 四川省应用基础项目( 2 。 。 6 J

14、 1 3 一 。 0 6 一 05) 通讯作者: 伍雪英， E 一 m a il : h a n i 3 6 3 1 6 3 c o n l a s s a y f o r q u a n t i t a t i v e T oe s t a b l i s haT a q Ma nr e a l 一 t i m eP C R a n a l y s i s o f h u ma n mG l u R l m R N A 万方数据 l 2 中国实用神经疾病杂志2 0 0 8 年 1 月第 1 1 卷第 1 期C h i n e s e J o u r n a l o f P r a c t i

15、 c a 1 N e r v o u s D i s e a s e s J a n . 2 0 0 8 ， V o l. l l N o . 1 e x P r e s s i o n . P r l ef s I ner s a M e t h o d s A c c o r d i n g t o t h e s e q u e n c e s o f m G l u R 1 a n d p 一 a c t i n g e n e s ( a s a r e f e r e n c e c o n t r o l ) in G e n B a n k ， t w o s e t s o

16、l T a q Ma np r o b e s w e r e d e s i g n e d . S u b s e q u e n t l y ， P C Rc o n d i t i o n s ， i n c l u d i n g a n n e a l i n g t e m p e r a t u r e ， c o n c e n t r a t i o n o f p r im - ， p r o b e s a n dM g ， +w e r e o p t i m i z e d . Ar e l a t i v e q u a n t i t a t i v e s t

17、 a n d a r d c u r v e w a s e s t a b l i s h e d a n d r e p e a t a b i l i t y o f t h e a s s a y w a s a l s o e v a l u a t e d . R es u l ts P C Re f f i c i e n c y o f m G l u R l a n d 汗 a c t i nw a s 9 9 . 7 %a n dl o o . 0 %r e s p e c t i v e l y ， t h e l i n e a r r a n g e o f s t

18、a n d a r d c u r v e r e l a t i v e q u a n t i f i c a t i o nw a s s . 1 3 0 . ga n dl l . 9 一3 2 ， 1 ， t h e c o r r e l a t i o nc o e f f i c i e n t w a s o . 9 9 9a n dl . 0 0 0r e s p e c t i v e l y .I n t r a 一 a s s a y i n t e r a s s a y c o e f f e c i e n c y v a r i a t i o n fo r

19、b o t h g e n e s w e r e l e s s t h a n 6 . 4 % t h i s s t u d yh a v e a d v a n t a g e s o f h i g h P C Re f f i c i e n c y a n dg o o d c o n s i s t e n c y ， .C o n c 1 usi o n T h er e a L t i me P C Rf o r mG 1 u R le s t a b l i s h e di n a n d w i l 1 p r o v i d e u s e f u l m e t

20、h o d o l o g i c a l b a s i s for u n d e r s t a n d - 1 叱 f u n c t i o n s o f m G l u R 1 a n d c l a r i f y i n gr e 1 a t i o n s h i pb e t w e e nm R N Ae x p r e s s i o n l e v e l a n d o c c u r r e n c e ， d e v e l o p m e n t o f c e r t a i n d i s e a s 已 K e y w o rds 】 Me t a b

21、 o t rop i c g l u t a m a t e r e c e p t o r ; T a q Ma np rob e ; R e a l 一 t i m e P C R ; m R N A 谷氨酸受体分为离子型受体( i o n o t r o p i c g l u t a - m a t e r e c e p t o r s ， i G l u R s ) 和代谢型受体( m e t a b o t r o p i c g l u t a m a t e r e c e p t o r s ， m G l u R s ) 两大类， 其中m G l u R I 是m Glu

22、 R s 的一个亚型1j。由于该受体与癫殉、 帕金 森综合征等多种中枢神经系统疾病的发生、 发展有密 切关系2 一叼 ， 因此受到广泛关注。 研究m GIu R I 的表达水平在各种神经性疾病中 的动态变化， 对于了解其在这些疾病的致病机缸中所 起的作用有着十分重要的意义。例如， 研究表明 m G fu R I 数量的变化与癫病的发生有着很大的相关 性图。目 前对人m G fu R I 进行定量分析的手段主要是 采用R T 一 P C R 、 原位杂交以及免疫组化等方法， 然而， 这些方法在不同程度上存在着定量不准确、 操作烦琐 等不足， 因此， 建立一种定量准确、 高效的m Glu R I

23、定 量分析方法非常必要。 实时荧光定量 P C R ( r e a l 一 t i m e P C R ) 是上世纪 9 0 年代发展起来的新技术， 能对m R N A表达水平进行准 确的定量分析5j， 从而在医学、 遗传学等各学科中得到 广泛应用。在神经疾病研究领域， 已应用此技术对 5 经色胺受体( 5 一 H T R )s 、 谷氨酸转运蛋白G L A S T及 G L T 一 11 7 等基因的m R N A表达水平与人类精神分裂 症、 癫病等疾病发生的相关性进行了研究。但目前未 见人m G l u R l r e a l 一 t i m e P C R的研究报道。本研究的 目的即建立

24、m G l u R I 的r e a l 一 t i m e P C R定量检测方法， 为进一步阐明m G luR I 在各种神经性疾病发生、 发展 中的作用机制提供方法学基础。 上游引物: 5 一A T T C C C T T A C A A A C G C C T C - C AG 一 3 1 材料与方法 1 . 1 实验材料为难治性癫殉患者进行开颅手术时 取下的脑组织。 1 . 2 引物设计及合成参考 G enB a n k中人 m G luR I 基因( N M 一 0 0 0 8 3 8 ) 和p 一 a c t i n ( N M_ 0 0 1 1 0 1 ) 基因的核 昔酸序列，

25、 在保守区域分别设计特异性引物和探针， m G l u R I 扩增片段长度为1 2 o b p ; 日 一 a c t i n 扩增片段长 度为85b p 。引物、 探针由大连宝生物公司合成， 两个 基因的引物、 探针序列分别如下。 mGl u RI : 下游引物: 5 一 C C T C G C C A A C A A T G G T C G T C- 3 ， T a q Ma n探针: 5 一 ( F A M)T G C C T C C T C C A C - C A C C G C C T C C( E c l i P s e ) 一 3 夕 日 一 a c t i n : 上游引物:

26、 5 一 G A C T A C C T C A T G A A G A T C C T - C AC C一 3 下 游 引 物:5 一 T C T C C T T A A T G T C A C G - C AC GATT一 3 T aqMa n探针: 5 一 ( F A M)C G G C T A C A G C T - T C A C C A C C A C G G C( E c l i P s e ) 一 3 夕 1 . 3 R N A的提取与 。 D N A的合成采用 R N A i so R ea gent试剂( T a K a R a 公司) ， 按说明提取人脑组织中 R N A

27、， 接着按 E x s c r i p t T MR T r e a g e n tK i t试剂盒 ( T a K a R a 公司) 的说明合成。 D N A 。 1 . 4 实时荧光定最 P C R条件的优化采用 T aqMan 探针法， 在 i C y c l e r i Q T M 荧光定量P C R仪( B i o 一 R a d 公 司) 上进行扩增和数据分析， 以得到最小 C T值和最大 荧光值( R n)为标准， 分别对退火温度、 引物浓度、 探 针浓度进行优化。优化顺序为: 首先按照E x T aq试 剂( T a K a R a 公司) 推荐的体系， 在其他条件相同的情

28、况下， 对退火温度( 5363) 进行优化; 然后以优化 的退火温度， 在其他条件不变的情况下， 对引物浓度 ( 0 . 2 一1 . 0 林 m o l ) 进行优化; 最后以 优化的退火温度、 引物浓度， 在其他条件不变的情况下， 对探针浓度(0. 1 一 0 . 5 拜 m o 1) 进行优化， 确定最佳扩增条件。 1 . 5 标准品的制备及扩增效率评价以总 R N A反 转录的c D N A为模板， 利用上述的引物对 m G luR I 和 牙 a c t i n 基因进行普通 P C R扩增， 反应在 T g r a d i e n t p C R仪( B i o m e t r a

29、 公司) 上进行。 反应体系为5 0 拼 1 ， 包 括: 1 0 XP C RB u f f e r s 拼 1 ， 2 5 m MMg C I : 4 拼 1 ， 2 . s m M d N T pMi x t u r e 4 拼 1 ， S U 扭I T a q D N A聚合酶0 . 5 拼 1 ， 1 0 拜 m o l / L上、 下游引物各 2 拌 1 ， c D N A模板 2 拼 1 ， d d H Z O2 6 5 拼 1 。 循环条件为: 9 5 ，C6 0 5 预变性， 随后 进行 3 5 个 9 5 2 0 5 ， 5 9 oC 3 o s 的循环。P C R产物经

30、万方数据 中国实用神经疾病杂志2 0 0 8 年 1 月第 1 1 卷第 1 期C h i n e s e J o u r n a l o f P r a c t i c a l N e r v o u S D i s e a s e S J a n2 o o 8 ， V o l . 1 1 N o . 1 1 3 2 环的琼脂糖凝胶电泳， 利用A xyp r e p T M D N AG e 1 E x - t r a o ti on Kit 试剂盒按说明进行胶回收纯化， 并进行连 续 10倍稀释， 以各稀释度为模板， 采用优化的反应条 件进行 r eal 一 ti m e P C R ，

31、分别构建两基因的相对定量标 准曲线， 并根据曲线斜率对各自的P C R扩增效率进行 计算。 1 . 6 稳定性评价以同一个 c D N A样品及 1 个阴性 对照样品在同一次扩增中进行 5 次重复测定， 计算每 个样品反应管之间的变异系数( C V %) ; 对同一样品进 行 5 次测定( 各相隔7 d)， 计算同一样品多次测定结果 之间的变异系数( C V%) 。 2 . 3 稳定性评价结果m G luR I 的批内和批间变异 系 数 分别为0. 5 % 一 。 . 7 % 及1 . 4 % 一 6 . 1 %; 日 一 ac t in的 批内和批间变异系数分别为0 . 7 %一1 . 0

32、%及 1 . 4 %一 6 . 4 %， 表明该方法具有良好的稳定性。 2 结果 2 . 1 实时荧光定量P C R的条件优化结果分别对反 应的退火温度、 引物浓度及探针浓度进行优化， 获得 m G l u R I 和p 一 a c t i n 基因r e a l一 t i m e P C R的最佳反应体 系和条件， 最佳反 应体系为: 总体系25川中 包括10X p C RB u f f e r Z 5 拼 1 ， 2 5 m MM g C 1 2 2 拌 1 ， 2 s m Md N T p Mi x t u r e Z 拜 1 ， S U 扭I T a q D N A聚合酶0 2 5 拜

33、 1 ， 1 0 拜 m o l / L上、 下游引物各2 拼 1 ， 1 0 拜 m o l / LT a q M a n 探针 1 拜 1 ， c D N A模板2 拼 1 ， d d H Z Ol l . 2 5 拌 1 。最佳反应条件为: 9 4 6 0 5 预变性， 9 5 oCZ O s ， 5 9 3 0 5 ， 共4 5 个循环。 2 . 2 扩增效率评价结果对 10倍系列稀释的模板进 行re al 一 ti m e P C R反应， 得出相对定量标准曲线， 根据 曲线斜率， 计算得出两基因的re a 卜 ti m e P c R扩增效 率， 见图1 、 2 、 3 、 4 。

34、 一4钾伽猛.!沙卜争场 绒 浮 碑 一 羹 麒娜多 毋一 附神吩 之.匕叼价.，J. 图l m G l u R I 基因的 扩增 曲线 图Z m G l u R I 基因的 标准曲线 消介狡杭梢林 尸腼杨沁沁标卜 一 矛 扮 件 图3 日 一 a c t i n 基因的 扩增 曲线 图4 p 一 a c t i n 基因的 标准曲线 3 讨论 功能基因mR N A表达水平的变化， 可进一步影响 到发挥生物学功能的蛋白质表达量的改变， 最终导致 不同的生理及病理过程。因此， 在各种生理及病理状 态下对基因表达水平进行研究， 将为进一步了解基因 的功能、 疾病的发生、 发展提供有用的信息。m G

35、 lu R I 是一种广泛分布于中枢神经系统的兴奋性神经递质受 体， 是G蛋白偶联受体超家族中的一个成员。谷氨酸 与m G lu R I 结合后通过第二信使的信号传递， 调节细 胞内C a “ + 的释放， 在神经元可塑性、 神经元发育、 神经 元变性、 神经元敏感性等方面发挥重要作用闭。采用 大鼠癫痢模型以及猴子帕金森综合征模型对m G lu R I m R N A在上述病理状态下的表达水平进行研究后表 明， m G lu R l m R N A表达水平的异常变化与上述疾病 的发生等有着密切的相关性比 3 。因此， 定量研究人 的m G lu R I 在不同组织、 不同发育阶段、 不同病理状

36、 态下m R N A的表达水平， 对进一步了解m G luR I 的生 ， 物学功能及其在疾病发生中的作用有重要意义。 就方法学而言， 过去对m Glu R I 及其m R N A表达 水平的定量分析普遍采用的是原位杂交、 免疫组化、 R T 一 P C R等方法， 而这些方法在一定程度上均存在着 定量不准确、 操作烦琐等问题。近年发展起来的 r eal - ti m e P C R为基因m R N A表达水平的准确定量提供了 新途径， 由于其无可比拟的诸多优点而得到广泛应用。 因此， 本研究建立了基于 T aqMan 探针技术的人 m G l u R I 基因r e a l 一 t i m

37、e P C R检测方法， 旨 在为研究人 m Glu R I 基因的生理功能以及m R N A表达水平异常 在不同疾病特别是神经性疾病的发生、 发展过程中的 作用提供有用的技术手段， 为筛选和评价药物( 如抗癫 病药) 的作用效果提供新的工具。从本研究的结果可 以看出， 所建立的m G lu R I 及份 ac t in内 参基因的re al - ti m e P C R均具有良好的扩增效率、 线性范围和稳定 性， 并且两基因的扩增效率很接近， 分别为99. 7 %和 1 。 。 %， 所以在进行相对定量分析时可采用2 一 cT法进 行计算川， 保证了定量分析的准确性。 参考文献 可见， m

38、G I o 1 基因和内参基因的扩增效率分别 为9 9 . 7 %和10O . 。 %， 相对定量标准曲线的c T值线 性范围分别为8 . 1 一30. 9 和 11. 9 一32. 1 ， 相关系数分 别为 。 . 9 99 和 1 . O 0 0 ， 表明可采用 2 一 (:T法计算 n ， Gl u R I 的相对表达量。 1 P i nJ P ，D u v o l a 、 nR .T h em e t a b o t r o p i。g l u t a m a t 。r 。 s t r u c t u r e a n d f u n c t io n s J ， N e u r o p

39、 h a r m a c h o l o g y ， 1 9 又 1 一 2 6 仁 2 C h e nJ ，L a r i o n o vS ，P i t 、 c hJ ，e ta l .E x p r e s s i o na n a l y s m e t a b o t r o p i c g l u t a m a t e r e c c p t o r l a n d3i n咖 u s e s t rai n s t e n 万方数据 中国实用神经疾病杂志2 0 0 8 年 1 月第 1 1 卷第 1 期C h in e s e J o u r n a l o f P r a c

40、t i c a l N e r v o u s D i s e a s e s J a n . 2 0 0 8 ， V o l . 1 1 N ol l o b e e p i l e p s y J .N e u r o s c j L e t t ， 2 0 0 5 ， 3 7 5 ( 3 ) : 1 9 2 1 9 7 4ra 上 3 K a n e d a K， T a c h i b a n a Y ， I m a n i s h i M， e t a l .D o w n 一 r e g u l a t i o no f m e t a b o t r o p i cg l u t

41、 a m a t er e c e p t o r1 a l p h ai ng l o b u sp a 1 l i d u sa n d s u b s t a n t ia n i g r ao f p a r k i n s o n ia nm o n k e y 、 仁 J .E u r JN e u r o s c i ， 2 0 0 5 ， 2 2 ( 1 2 ) :3 2 4 1 3 2 5 4 N a k a oH， N a k a oK， K a n oM， e t a l .Mc t a b o t r o p i c g l u t a m a t e r e - c

42、e p t o r s u b t y p 合 1i se s s e n t i a l f o r m o t o r c o o r d i n a t i o ni nt h ea d u l t c e r e b e l l u m J .N e u r o s c i R e s ， 2 0 0 7 ， 5 7 ( 4 ) : 5 3 8 5 4 3 D u s s a u l t A A， P o u l i o t M.R a P i da n ds i m p l ec o m p a r i s o no f m e s - s e n g e r R N Al e v

43、e l 。 u s i n g r e a l 一 t i m e P C R J . Bi o I P r o c e d . O n l i n e ， 2 0 0 6 ， 8 ( 1 ) :1 一 1 0 C a s t e n s s o nA， E m i l s s o nL ， S u n d b e 啥R， e t a l .D e c r e a s e o f s e r o - t o n i nr e c e p t o r 2 Ci n s c h i z o p h r e n i a b r a i n s i d e n t i f i e d b y h i

44、g h 一 r e s o l u - 7 4 8 5 9 6 t i o nm R N Ae x p r e s s i o na n a l y s i s J 。B i o 1 P s y c h i a t r y ， 2 0 0 3 ，5 4 : 1 2 1 2 1 2 2 1 牛廷献， 罗晓红， 史智勇. T aqMan探针定量 P C R对癫病大鼠脑 组织 G L A S T、 G L T 一 1 表达变化的研究 J .中国比较医学杂志， 2 0 0 6 ，1 6 : 5 2 3 一5 2 8 N a k a n i s h i S ， N a k aj i m a Y， Ma

45、s uM， e t a l .G l u t a m a t er e c e P t o r s : b r a i nf u n c t io na n d: ig n a l t r a n s d u c t i o n J B r a i nR e s B r a i nR e s R e v ，1 9 9 8， 2 6 : 2 3 0 2 3 5 K e n n e t hJ .L i v a k ， T h o m a s D .S c h 而t t g e n .A n a l y s i s o f r e l a t i v e g e n ee x p r e s s i

46、 o nd a t au s i n gr e a l 一 t i m eq u a n t i t a t i v eP C R a n dt h e 2 一 c T m e t h o d J .E l s e v i e r s c i e n c e ， 2 0 0 1 ， 2 5 : 4 0 2 4 0 8 ( 收稿 2 0 Q 7 一 1 1 一 0 8 ) 糖尿病自主神经病变临床分析 胡逢来 北京航天总医院内分泌科池京1 0 0 0 7 6 【 摘要】 目的探讨糖尿病自主神经病变与脑血管病变、 血糖、 糖尿病肾病病变关系。方法测定65 例糖尿病患者的心率变 异性， 据此将患者分为

47、自主神经病变组 20 例和无自主神经病变组45 例， 2 组患者均接受经颅多谱勒检查， 并检验糖化血红蛋白、 高 敏 C R P和尿微量白蛋白。结果自主神经病变组脑血管顺应性下降， 脑血流减慢， 血糖、 尿微量白蛋白及高敏 C R P升高。结论 糖尿病自主神经病变与血糖控制有关， 与炎症和糖尿病肾病相关， 可能是促进糖尿病脑血管病变的危险因素之一。 【 关键词】 糖尿病自主神经病变; 脑血管病变; 心率变异性; 经颅多谱勒; 高敏C反应蛋白; 微量白蛋白尿; 糖化血红蛋白 【 中图分类号】 R 5 8 7 . 1 ; R 7 4 31 文献标识码】 A【 文章编号】 1 6 7 3 一 5 1

48、 1 0 ( 2 0 0 8 ) 0 1 一 0 0 1 4 一 0 3 C l i n i cs t u d yo f d i a b e t i ca u t o n om i cn e u r o P a t h yH u F e n g l a i . D e P a r t m e n t 。 fE n d o c 八 n o l o g 少 ， B e ij i n g A e ro s P a c e Gen e ral Ho s P t a l ， B e i 少 i n g1 0 0 0 7 6 A b s t r a c t 】 O bj e c t i v eT o s

49、t u d y t h e r e l a t i o n s h i p s a m o n g t h e d i a b e t i c a u t o n o m i c n e u r o p a t h y ( D A N ) a n d t h e c e r e b r o v a s c u l a r d 5 - e a s e . G H b A I 。 ， h s 一 C R Po r u r i n e m i c r o a l b u m i n . Me th o ds T h e h e a r t r a t e v a r i a b i l i t y H R V ) w a s m e a s u r e d i n 6 5 c a s e s o f t y p e Z d i a b e - t e s .A l l p a t i e n t s w e r e