吗啡成瘾和正常大鼠的前额叶皮质表达蛋白质组变化的初步研究.pdf

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1、吗啡成瘾和正常大鼠的前额叶皮质 表达蛋白质组变化的初步研究 杨摇 烨员， 张春燕员， 王摇 斌圆， 林海英猿， 邬丽莎猿 （员援 泸州医学院生物化学教研室， 圆援 泸州市人民医院心内科， 猿援 泸州医学院生理学教研室， 四川 泸州摇 远源远园园园） 收稿日期： 圆园员园 原园圆 原圆怨， 修回日期： 圆园员园 原园源 原园缘 基金项目： 四川省教育厅资助课题 （晕燥 园园缘月园员远） 作者简介： 杨摇 烨 （员怨苑圆 原 ） ， 女， 硕士生， 副教授， 研究方向： 神经系 统分子病理生理学， 栽藻造： 园愿猿园鄄猿猿苑苑缘园怨，耘鄄皂葬蚤造： 造葬灶凿葬燥园园苑 岳员远猿援 糟燥皂； 邬丽莎

2、 （员怨缘苑 原 ） ， 女， 硕士， 教授， 研究方向： 神经生理学， 通讯作者， 耘鄄皂葬蚤造： 造葬灶凿葬燥园园苑岳员远猿援 糟燥皂 中国图书分类号： 砸鄄猿猿圆； 砸 猿圆圆援 愿员； 砸 猿怨源援 圆； 砸 苑源怨援 远员； 砸 怨苑员援 圆 文献标识码： 粤 文章编号： 员园园员 原员怨苑愿 （圆园员园） 园远 原园苑苑远 原园源 摘要： 目的摇 建立和比较吗啡成瘾与正常大鼠前额叶皮质 （孕云悦） 蛋白质双向电泳图谱， 寻找和鉴定吗啡成瘾大鼠 孕云悦 中的差异蛋白表达谱。方法摇以固相 责匀 梯度等电聚焦为 第一向和垂直 杂阅杂鄄孕粤郧耘 为第二向， 分别对正常对照大鼠和 吗啡成瘾大

3、鼠的 孕云悦 蛋白质样品进行二维分离， 圆鄄阅耘 图谱 经 陨皂葬早藻酝葬泽贼藻则 圆阅 孕造葬贼蚤灶怎皂 增缘郾 园 软件分析， 选取 源 个差异蛋 白点用基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱 （酝粤蕴阅陨鄄 栽韵云鄄酝杂） 进行鉴定。结果摇 通过对 圆鄄阅耘 图谱蛋白斑点的匹 配及对比分析， 与吗啡成瘾相关的差异表达蛋白斑点为 愿苑 个； 经质谱鉴定出 圆 个有意义的差异表达的蛋白斑点： 杂灶葬责圆缘 亚型 鄄杂灶葬责圆缘 突触相关蛋白 圆缘、 鄄肌动蛋白。结论 摇 吗啡成瘾组与正常对照组大鼠 孕云悦 蛋白表达存在差异； 初步鉴定了大鼠前额叶皮质中与吗啡成瘾相关的差异蛋白， 其表达的变化可

4、能通过多种途经影响 孕云悦 神经元功能， 为 我们研究阿片类物质依赖作用机制提出了新的思路和方向。 关键词： 吗啡； 成瘾； 双向凝胶电泳； 表达蛋白质组 摇 摇 药物成瘾是由于滥用药物与大脑奖赏系统相互 作用产生的慢性、 复发性脑疾病， 有着极其复杂的机 制。其主要原因就是形成了成瘾记忆 员。因此， 了 解有成瘾特征化的学习和记忆机制对探求成瘾的本 质具有重要意义。月藻则噪藻 等的研究发现 员 耀源， 前额 叶皮层 （责则藻枣则燥灶贼葬造 糟燥则贼藻曾， 孕云悦） 等多种神经元回路参 与药物成瘾有关的学习和记忆过程， 并与已知的记 忆储存相关通路有很多相似之处。因此， 在对成瘾 记忆机制的阐

5、明中， 这些部位将为成瘾研究打开重 要的突破口， 并为其治疗开辟新的途径。 摇 摇已有研究表明： 孕云悦 参与了物质成瘾相关的认 知、 行为和情绪的变化的调节和控制 缘。功能的改 变， 必然涉及蛋白的改变， 本研究采用 “蛋白质组 学” 的研究方法， 通过双向凝胶电泳、 质谱分析和生 物信息学等技术方法， 获得吗啡成瘾大鼠与正常大 鼠 孕云悦 蛋白质图谱。通过对这些图谱进行蛋白质 表达差异分析并结合 郧藻灶月葬灶噪 数据库资料， 确定与 吗啡成瘾相关的 孕云悦 蛋白质成分的表达改变， 为进 一步研究吗啡成瘾机制提供实验基础。 员摇 材料与方法 员援 员摇 材料和仪器摇蛋白定量和双向电泳所用试剂

6、 均购自 月蚤燥鄄砸葬凿 公司。主要实验仪器包括： 组织匀 浆器 （北京鼎国公司） ， 匀藻则葬藻怎泽 公司 蕴葬遭燥枣怎早藻 源园园砸 冷冻离心机。孕砸韵栽耘粤晕 陨耘云 悦耘蕴蕴 陨耘云 电泳仪 （月蚤燥鄄 砸葬凿） ， 孕砸韵栽耘粤晕 酝怎造贼蚤鄄悦藻造造 垂直电泳系统 （月蚤燥鄄 砸葬凿） ， 凝胶图像扫描仪 孕燥憎藻则 蕴燥燥噪 员员园园 （哉酝粤载） ， 源苑园园 串联飞行时间质谱仪 （美国 粤月陨） 。 员援 圆摇 双向电泳分离大鼠 孕云悦 总蛋白 员援 圆援 员摇 实验动物摇 成年健康 杂贼则葬早怎鄄阅葬憎造藻赠 （杂阅） 大鼠 圆园 只， 质量 员愿园 耀圆圆园 早。由泸州医

7、学院动物科 提供。随机分为注射吗啡组和生理盐水组各 员园 只援 清洁级动物实验室分笼饲养， 自由饮水进食。 员援圆援 圆摇 吗啡成瘾大鼠模型建立摇采用背部皮下递 增注射盐酸吗啡方法建立大鼠吗啡成瘾模型， 连续 注射 缘 凿， 每日药量依次为 缘、 员园、 圆园、 源园、 缘园 皂早 噪早 原员， 猿 次凿原员 （愿 颐 园园， 员圆 颐 园园， 员远 颐 园园） ， 对照组按 同样方式注射生理盐水。末次注射吗啡 圆 澡 后， 动 物腹腔注射 圆 皂早噪早 原员的纳洛酮进行催促戒断， 记 录 员 澡 内动物出现的可数戒断症状如直立、 理毛、 湿 狗样抖动、 伸展、 舔阴、 喷嚏、 齿颤的次数，

8、给予评分。 员援圆援 猿摇 观察指标摇本实验观察戒断症状主要以可 数症状为主。在观察期内直接记录次数， 每次记 员 分， 其中症状每持续 猿园 泽 加记 员 分， 最后以 员 澡 内所 有戒断症状分数的总和作为戒断症状的评分 远。 员援圆援 源摇 蛋白样品制备及双向电泳摇根据催促戒断 反应验证吗啡成瘾大鼠成功建立， 两组各取 缘 只大 鼠迅速断头处死， 参照大鼠脑立体定位图谱， 冰台上 迅速分离 孕云悦 脑组织， 去除脑膜， 预冷三蒸水洗去 血渍援 滤纸吸去多余液体， 移入匀浆器， 加入细胞裂 解液 源园园 造， 源益震荡 猿园 皂蚤灶。源益， 员圆 园园园 则皂蚤灶 原员 远苑苑中国药理学通

9、报摇 悦澡蚤灶藻泽藻 孕澡葬则皂葬糟燥造燥早蚤糟葬造 月怎造造藻贼蚤灶摇 圆园员园 允怎灶； 圆远 （远） ： 苑苑远 耀怨 离心 员 澡， 收集的上清液即为蛋白质提取物。用 月则葬凿枣燥则凿 法测定各样品的总蛋白含量， 分装，原 愿园益 保存， 备用。采用 员苑 糟皂 的线性 陨孕郧 预制干胶条 （ 责匀 源 原 苑） ， 每根胶条上样量 员园园 早， 按照参考文 献 苑进行第一向固相 责匀 梯度等电聚焦， 总伏时数 约为愿园 园园园。随后按常规方法进行第二向 杂阅杂鄄 孕粤郧耘。 员援 猿摇 数据分析及质谱鉴定摇采用银染法对双向电 泳后的凝胶进行染色。采用 陨皂葬早藻酝葬泽贼藻则 圆阅 孕

10、造葬贼蚤鄄 灶怎皂 增缘郾 园 分析软件进行蛋白质的差异分析， 初步筛 选出实验组与对照组差异表达的蛋白质。取实验组 表达量增高达 圆 倍 愿以上的蛋白斑点 源 个， 胶内酶 切， 进行基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱 （酝粤蕴阅陨鄄栽韵云鄄酝杂） 鉴定， 获得 圆 个蛋白斑点的肽指 纹图谱。再结合这些蛋白斑点的 责陨 和 酝宰 等信息， 使用肽指纹图谱匹配软件 酝葬泽糟燥贼 检索匹配 郧藻灶月葬灶噪 数据库进行蛋白斑点的鉴定。 员援 源摇统计学方法摇数据用珋曾 依 泽 表示， 采用 杂孕杂杂 员员郾 缘 统计软件进行统计分析， 两组间比较用 贼 检验。 圆摇 结果 圆援 员摇 动物模型的

11、建立摇 栽葬遭 员 显示了成瘾组和对照 组大鼠经催促戒断反应的评分结果。表中可见， 对 照组的总分为 猿郾 怨园 依 园郾 圆缘， 成瘾组的总分为 源愿郾 缘园 依苑郾 源员， 两者之间差异有显著性 （孕 约园郾 园员） ， 证明吗 啡成瘾大鼠模型成功建立。 栽葬遭 员摇 郧则葬凿藻 燥枣 增葬则蚤燥怎泽 憎蚤贼澡凿则葬憎葬造 泽赠皂责贼燥皂泽 遭藻贼憎藻藻灶 灶燥则皂葬造 葬灶凿 皂燥则责澡蚤灶藻鄄葬凿凿蚤糟贼藻凿 则葬贼泽 杂赠皂责贼燥皂 郧则葬凿藻 悦燥灶贼则燥造 早则燥怎责酝燥则责澡蚤灶藻鄄葬凿凿蚤糟贼藻凿 早则燥怎责 宰藻贼 凿燥早 泽澡葬噪藻泽园援 远苑 依园援 缘圆愿援 猿猿 依

12、园援 苑缘 宰则蚤贼澡蚤灶早园愿援 源园 依圆援 员园 郧则燥燥皂蚤灶早员援 员员 依园援 猿园猿援 源园 依园援 猿园 砸藻葬则蚤灶早员援猿猿 依园援 缘圆怨援 源园 依圆援 苑园 允怎皂责蚤灶早园援 远苑 依园援 缘圆员援 园园 依园援 远圆 栽藻藻贼澡 糟澡葬贼贼藻则蚤灶早园缘援 愿猿 依员援 员园 孕藻灶蚤造藻 造蚤糟噪蚤灶早园援 远苑 依园援 愿圆员远援 猿园 依猿援 缘园 栽燥贼葬造猿援怨园 依园援圆缘源愿援 缘园 依苑援 源员 摇 摇 孕 约园郾 园缘，孕 约园郾 园员 增泽 糟燥灶贼则燥造 圆援圆摇 成瘾组和对照组大鼠 孕云悦 蛋白质双向电泳图 谱分析摇 比较成瘾组和对照组的双

13、向电泳图谱， 可 见其表达蛋白质组图谱发生了明显的改变， 主要表 现为双向电泳图谱中蛋白斑点数量的增减和灰度值 的变化。通过 陨皂葬早藻酝葬泽贼藻则 圆阅 孕造葬贼蚤灶怎皂 增缘郾 园 软件对 圆鄄阅耘 图谱的蛋白斑点进行自动检测， 共检获蛋白斑 点 圆愿苑 个。经蛋白斑点的匹配和对比分析， 差异表 达 （增高或降低） ） 的蛋白斑点总数为 愿苑 个， 绝大多 云蚤早 员摇 圆鄄阅耘 皂葬责泽 燥枣 责则燥贼藻燥皂藻 枣则燥皂 孕云悦 燥枣 皂燥则责澡蚤灶藻鄄葬凿凿蚤糟贼藻凿 葬灶凿 灶燥则皂葬造 则葬贼泽 粤： 酝燥则责澡蚤灶藻鄄葬凿凿蚤糟贼藻凿； 月： 悦燥灶贼则燥造 数集中于 责匀 源援

14、 圆 耀远援 愿 的偏酸性区域， 相对分子量 介于 猿园 耀员员园 噪怎 （云蚤早 员） 。 圆援 猿摇蛋白斑点的质谱鉴定摇通过 陨皂葬早藻酝葬泽贼藻则 圆阅 孕造葬贼蚤灶怎皂 增 缘郾 园 软件匹配及对比分析， 筛选出成瘾组 表达量增高达 圆 倍以上的蛋白斑点共计 源 个进行质 谱检测鉴定， 获得了 圆 个蛋白斑点的肽指纹图谱 （云蚤早 圆） 。采用 酝葬泽糟燥贼 软件将各蛋白斑点的肽指纹 图谱与 郧藻灶月葬灶噪 数据库中已知蛋白的标准肽指纹 图谱相比对， 获得各蛋白斑点的鉴定结果 （云蚤早 员粤， 栽葬遭 圆） 。 猿摇 讨论 摇 摇孕云悦 作为与药物成瘾相关的重要中枢， 必然在 吗啡成瘾

15、的过程中发生适应性的病理改变。利用蛋 白质组学技术研究不同个体不同时间的中枢神经系 统蛋白质表达变化， 已经成为神经功能研究的重要 方向。 摇 摇 大量研究证实利用大鼠模型研究药物依赖性的 苑苑苑中国药理学通报摇 悦澡蚤灶藻泽藻 孕澡葬则皂葬糟燥造燥早蚤糟葬造 月怎造造藻贼蚤灶摇 圆园员园 允怎灶； 圆远 （远） 栽葬遭 圆摇 孕则燥贼藻蚤灶泽 凿蚤枣藻则藻灶贼蚤葬造造赠 藻曾责则藻泽泽藻凿 遭藻贼憎藻藻灶 灶燥则皂葬造 葬灶凿 皂燥则责澡蚤灶藻鄄葬凿凿蚤糟贼藻凿 则葬贼泽 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤藻凿 遭赠 酝杂 葬灶葬造赠泽蚤泽 杂责燥贼 晕燥援郧蚤孕则燥贼藻蚤灶 灶葬皂藻酝葬贼糟澡 泽糟燥则藻酝

16、葬贼糟澡 责藻责贼蚤凿藻 栽澡藻燥 酝宰 （阅葬） 栽澡藻燥 责陨耘曾责 酝宰 （阅葬）耘曾责 责陨 员源远猿怨苑苑圆缘 杂灶葬责圆缘 陨泽燥枣燥则皂 鄄杂灶葬责圆缘 燥枣 杂赠灶葬责贼燥泽燥皂葬造鄄葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿 责则燥贼藻蚤灶 圆缘 缘苑缘圆猿猿员缘源援 远远圆缘远怨怨源援 愿怨 圆源远猿怨苑苑猿源粤糟贼遭 粤糟贼蚤灶， 糟赠贼燥责造葬泽皂蚤糟 员远缘苑源员苑猿远缘援 圆怨源愿怨怨猿缘援 愿员 云蚤早 圆摇 孕藻责贼蚤凿藻 皂葬泽泽 枣蚤灶早藻则责则蚤灶贼蚤灶早 燥枣 圆 责则燥贼藻蚤灶 泽责燥贼泽 枣则燥皂 圆鄄阅耘 皂葬责 燥枣 皂燥则责澡蚤灶藻鄄葬凿凿蚤糟贼藻凿 早则燥怎责 摇

17、 摇 粤： 泽责燥贼 员； 月： 泽责燥贼 圆 分子机制是可行的 怨。本实验通过对成瘾大鼠 孕云悦 蛋白样品双向电泳图谱分析、 酝粤蕴阅蕴鄄栽韵云鄄酝杂 及生 物信息学分析鉴定， 并结合种属特异性在 郧藻灶月葬灶噪 数据库中鉴定了 圆 个与吗啡成瘾相关的差异表达蛋 白斑点。包括： 杂灶葬责 圆缘 亚型 鄄杂灶葬责 圆缘 突触相关 蛋白 圆缘 （杂灶葬责圆缘 陨泽燥枣燥则皂 鄄杂灶葬责 圆缘 燥枣 杂赠灶葬责贼燥泽燥皂葬造鄄 葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿 责则燥贼藻蚤灶 圆缘） 。是突触前胞膜蛋白， 在 孕云悦 和其他脑区的神经细胞中高度表达， 是胞吐装置 杂晕粤砸耘 核心复合体的组成成分， 介导突触囊

18、泡的锚 定和融合， 在神经递质的释放中起重要作用， 并参与 突触可塑性的调节 员园， 员员。 鄄肌动蛋白 （粤糟贼遭 葬糟鄄 贼蚤灶， 糟赠贼燥责造葬泽皂蚤糟 员） 。是帮助形成细胞骨架的结构蛋 白， 用于维持细胞结构和强度。 摇 摇 赵艳梅等 员圆通过 宰藻泽贼藻则灶 遭造燥贼 测定吗啡处理不 同状态下 鄄杂晕粤孕 的蛋白表达结果发现， 慢性吗啡 依赖大鼠尾壳核内 鄄杂晕粤孕 蛋白表达上调约 员郾 圆源 倍 （孕 约 园郾 园缘） 。鄄杂晕粤孕 和 鄄杂晕粤孕 均属于 杂晕粤孕泽 蛋白家族， 参与细胞内膜的融合和囊泡移动。越来 越多的研究表明， 杂晕粤孕泽 在钙依赖的胞吐机制和神 经递质释放

19、过程中发挥重要作用。本研究中已鉴定 的成瘾组差异表达蛋白斑点员 即为 鄄杂晕粤孕， 说明吗 啡成瘾引起该蛋白表达上调， 在成瘾相关的神经细 胞生长、 分化、 信号转导、 轴突生长和突触形成过程 中发挥重要作用。孕则燥糟葬糟糟蚤燥 等 员猿研究发现大脑细 胞中结构蛋白鄄鄄肌动蛋白的突变体与耳聋及肌张 力障碍相关。突变体由于蛋白质的构象的改变不能 结合 粤栽孕， 引起细胞受损和死亡， 最终导致大脑神经 组织的损害。本研究中已鉴定的成瘾组差异表达蛋 白斑点 圆 即为 鄄肌动蛋白， 说明吗啡成瘾大鼠神经 组织 鄄肌动蛋白可能发生突变， 导致神经细胞的供 能障碍， 与成瘾相关的神经细胞能量代谢变化相关。

20、 另外， 杨琨等 员源研究表明 鄄肌动蛋白能抑制 责猿愿 激 酶 （简称 责猿愿） 的自磷酸化活性， 并抑制 责猿愿 对其底 物 粤栽云圆 的磷酸化作用。责猿愿 参与了炎症、 应急、 细 胞生长与凋亡、 细胞周期调控等多种生理、 病理过程 中的信号转导， 提示 鄄肌动蛋白与 责猿愿 的结合在成 瘾大鼠 孕云悦 内可能产生一种负反馈作用， 调节 责猿愿 通路的信号转导， 从而调节与成瘾相关的神经细胞 的生长与凋亡。总之， 上述已鉴定的与吗啡成瘾差 异表达相关的蛋白质涉及神经细胞生长、 凋亡、 分 化、 信号转导、 轴突生长和突触形成、 细胞能量代谢 等方面， 将有助于更好的阐明阿片类药物依赖形成

21、 的分子机制。 参考文献 员 摇月藻则噪藻 允 阅， 匀赠皂葬灶 杂 耘援 粤凿凿蚤糟贼蚤燥灶， 凿燥责葬皂蚤灶藻， 葬灶凿 贼澡藻 皂燥造藻糟怎造葬则 皂藻糟澡葬灶蚤泽皂泽 燥枣 皂藻皂燥则赠 允 援 晕藻怎则燥灶， 圆园园园， 圆缘： 缘员缘 原猿圆 圆 摇 匀赠皂葬灶 杂 耘， 匀赠皂葬灶 杂 耘， 酝葬造藻灶噪葬 砸 悦援 粤凿凿蚤糟贼蚤燥灶 葬灶凿 贼澡藻 遭则葬蚤灶： 贼澡藻 灶藻怎则燥遭蚤燥造燥早赠 燥枣 糟燥皂责怎造泽蚤燥灶 葬灶凿 蚤贼泽 责藻则泽蚤泽贼藻灶糟藻 允 援 晕葬贼 砸藻增 晕藻怎则燥泽糟蚤， 圆园园员， 圆： 远怨缘 原苑园猿 猿 摇月燥藻灶蚤灶早 允 粤援 晕

22、藻怎则燥遭蚤燥造燥早赠 燥枣 葬灶 葬凿凿蚤糟贼蚤燥灶 皂藻皂燥则赠 允 援 晕藻怎则葬造 栽则葬灶泽皂， 圆园园员， 员园愿： 苑缘缘 原远缘 源 摇 晕藻泽贼造藻则 耘 允援 晕藻怎则燥遭蚤燥造燥早赠 贼燥贼葬造 则藻糟葬造鄄贼澡藻 皂藻皂燥则赠 燥枣 葬凿凿蚤糟贼蚤燥灶 允 援 愿苑苑中国药理学通报摇 悦澡蚤灶藻泽藻 孕澡葬则皂葬糟燥造燥早蚤糟葬造 月怎造造藻贼蚤灶摇 圆园员园 允怎灶； 圆远 （远） 杂糟蚤藻灶糟藻， 圆园园员， 圆怨圆： 圆圆远远 原苑 缘 摇阅葬增蚤凿泽燥灶 砸 允， 允葬糟噪泽燥灶 阅 悦， 运葬造蚤灶 晕 匀援 耘皂燥贼蚤燥灶， 责造葬泽贼蚤糟蚤贼赠， 糟燥灶鄄

23、 贼藻曾贼， 葬灶凿 则藻早怎造葬贼蚤燥灶： 责藻则泽责藻糟贼蚤增藻泽 枣则燥皂 葬枣藻糟贼蚤增藻 灶藻怎则燥泽糟蚤藻灶糟藻 允 援 孕泽赠糟澡燥造 月怎造造， 圆园园园， 员圆远 （远） ： 愿怨园 原怨园怨援 远 摇 杨春晓， 杨宝峰， 张摇辉援 悦悦运鄄愿 对吗啡成瘾大鼠戒断症状及 尾核内 糟鄄躁怎灶 蛋白表达的影响 允 援 中国药理学通报， 圆园园愿， 圆源 （怨） ： 员员远远 原苑园援 远 摇再葬灶早 悦 载， 再葬灶早 月 云， 在澡葬灶早 匀援 粤责责造蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 责则燥贼藻燥皂蚤糟泽 蚤灶 贼澡藻 泽贼怎凿赠 燥枣 皂燥造藻糟怎造葬则 皂藻糟澡葬灶蚤泽皂 燥枣 皂燥

24、则责澡蚤灶藻 凿藻责藻灶凿藻灶糟藻 允 援 悦澡蚤灶 孕澡葬则皂糟燥造 月怎造造， 圆园园愿， 圆源 （怨） ： 员员远远 原苑园援 苑 摇 赵摇 欣， 蒲小平， 耿兴超援 松果菊苷对帕金森病模型小鼠黑质 纹状体蛋白表达影响的双向电泳分析 允 援 中国药理学通报， 圆园园愿， 圆源 （员） ： 圆愿 原猿圆援 苑 摇 在澡葬燥 载， 孕怎 载 孕， 郧藻灶早 载 悦援 耘枣枣藻糟贼泽 燥枣 藻糟澡蚤灶葬糟燥泽蚤凿藻 燥灶 责则燥贼藻蚤灶 藻曾鄄 责则藻泽泽蚤燥灶 枣则燥皂 泽怎遭泽贼葬灶贼蚤葬 灶蚤早则葬 葬灶凿 泽贼则蚤葬贼葬造 贼蚤泽泽怎藻 蚤灶 皂燥怎泽藻 酝孕栽孕 皂燥凿藻造 燥枣 孕

25、葬则噪蚤灶泽燥灶泽 凿蚤泽藻葬泽藻 遭赠 怎泽蚤灶早 圆鄄凿蚤皂藻灶泽蚤燥灶葬造 藻造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽 葬灶葬造赠泽蚤泽 允 援 悦澡蚤灶 孕澡葬则皂糟燥造 月怎造造， 圆园园愿， 圆源 （员） ： 圆愿 原猿圆援 愿 摇 苗摇 兰， 刘建勋， 李欣志援 中国实验小型猪冠心病模型的心肌 组织蛋白质组学研究 允 援 中国药理学通报， 圆园园怨， 圆缘 （苑） ： 愿愿园 原猿援 愿 摇 酝蚤葬燥 蕴， 蕴蚤怎 允 载， 蕴蚤 载 在援 孕则燥贼藻燥皂蚤糟泽 则藻泽藻葬则糟澡 燥灶 皂赠燥糟葬则凿蚤葬造 贼蚤泽泽怎藻泽 燥枣 悦澡蚤灶藻泽藻 藻曾责藻则蚤皂藻灶贼葬造 皂 蚤灶蚤鄄责蚤早

26、皂 燥凿藻造 憎蚤贼澡 糟燥则燥灶葬则赠 澡藻葬则贼 凿蚤泽鄄 藻葬泽藻 允 援 悦澡蚤灶 孕澡葬则皂糟燥造 月怎造造， 圆园园怨， 圆缘 （苑） ： 愿愿园 原猿援 怨 摇 杨海玉， 蒲小平援 蛋白质组学在吗啡依赖分子机制研究中的应 用 允 援 中国药理学通报， 圆园园愿， 圆源 （圆） ： 员源员 原猿援 怨 摇 再葬灶早 匀 再， 孕怎 载 孕援 粤责责造蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 责则燥贼藻燥皂蚤糟泽 蚤灶 贼澡藻 泽贼怎凿赠 燥枣 皂燥鄄 造藻糟怎造葬则 皂藻糟澡葬灶蚤泽皂 燥枣 皂燥则责澡蚤灶藻 凿藻责藻灶凿藻灶糟藻 允 援 悦澡蚤灶 孕澡葬则皂糟燥造 月怎造造， 圆园园愿， 圆源 （圆

27、） ： 员源员 原猿援 员园在澡葬灶早 匀 酝， 杂怎 匝， 蕴怎燥 酝援 栽澡赠则燥蚤凿 澡燥则皂燥灶藻 则藻早怎造葬贼藻泽 贼澡藻 藻曾责则藻泽鄄 泽蚤燥灶 燥枣 杂晕粤孕鄄圆缘 凿怎则蚤灶早 则葬贼 遭则葬蚤灶 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼 允 援 酝燥造 悦藻造造 月蚤燥鄄 糟澡藻皂， 圆园园愿， 猿园苑 （员辕圆） ： 员远怨 原苑缘援 员员 郧葬则遭藻造造蚤 砸， 陨灶增藻则葬则凿蚤 云， 酝藻凿蚤糟蚤 灾援 匀藻贼藻则燥早藻灶藻燥怎泽 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 杂晕粤孕鄄圆缘 蚤灶 则葬贼 葬灶凿 澡怎皂葬灶 遭则葬蚤灶 允 援 悦燥皂责 晕藻怎则燥造， 圆园园愿， 缘园远 （猿）

28、： 猿苑缘 原愿远援 员圆赵艳梅， 吴摇 宁， 李摇锦援 慢性吗啡依赖及戒断对大鼠不同脑 区 晕杂云 附着蛋白表达的影响 允 援 中国药理学通报， 圆园园愿， 圆源 （缘） ： 远员远 原圆员援 员圆在澡葬燥 再 酝， 宰怎 晕， 蕴蚤 允援 耘枣枣藻糟贼泽 燥枣 皂燥则责澡蚤灶藻 凿藻责藻灶凿藻灶糟藻 葬灶凿 憎蚤贼澡鄄 凿则葬憎造 燥灶 杂晕粤孕泽 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 蚤灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 遭则葬蚤灶 则藻早蚤燥灶泽 燥枣 则葬贼泽 允 援 悦澡蚤灶 孕澡葬则皂糟燥造 月怎造造， 圆园园愿， 圆源 （缘） ： 远员远 原圆员援 员猿孕则燥糟葬糟糟蚤燥 灾， 杂葬造葬扎葬则 郧， 韵灶

29、燥 杂援 粤 皂怎贼葬贼蚤燥灶 燥枣 遭藻贼葬鄄葬糟贼蚤灶 贼澡葬贼 葬造贼藻则泽 凿藻责燥造赠皂藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 凿赠灶葬皂蚤糟泽 蚤泽 葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿 憎蚤贼澡 葬怎贼燥泽燥皂葬造 凿燥皂蚤灶葬灶贼 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼葬造 皂葬造枣燥则皂葬贼蚤燥灶泽， 凿藻葬枣灶藻泽泽， 葬灶凿 凿赠泽贼燥灶蚤葬 允 援 粤皂 允 匀怎皂 郧藻灶藻贼， 圆园园远， 苑愿 （远） ： 怨源苑 原远园援 员源杨摇 琨， 姜摇 勇， 韩家淮援 肌动蛋白在体外与 责猿愿 激酶结合并 抑制其激酶活性 允 援 中国科学， 圆园园圆， 猿圆 （源） ： 猿源苑 原缘源 员源再葬灶早 运， 允蚤葬灶早 再，

30、匀葬灶 允 匀援 栽澡藻 遭蚤灶凿蚤灶早 燥枣 葬糟贼蚤灶 贼燥 责猿愿 酝粤孕运 葬灶凿 蚤灶澡蚤遭蚤贼蚤灶早 蚤贼泽 噪蚤灶葬泽藻 葬糟贼蚤增蚤贼赠 蚤灶 增蚤贼则燥 允 援 杂糟蚤 悦澡蚤灶葬， 圆园园圆， 猿圆 （源） ： 猿源苑 原缘源援 栽澡藻 责则蚤皂葬则赠 泽贼怎凿赠 燥灶 糟澡葬灶早藻泽 燥枣 藻曾责则藻泽泽蚤增藻 责则燥贼藻燥皂藻 燥枣 贼澡藻 责则藻枣则燥灶贼葬造 糟燥则贼藻曾 遭藻贼憎藻藻灶 灶燥则皂葬造 葬灶凿 皂燥则责澡蚤灶藻鄄葬凿凿蚤糟贼藻凿 则葬贼泽 再粤晕郧 再藻员，在匀粤晕郧 悦澡怎灶鄄赠葬灶员， 宰粤晕郧 月蚤灶圆， 蕴陨晕 匀葬蚤鄄赠蚤灶早猿， 宰哉 蕴

31、蚤鄄泽澡葬猿 （员援 阅藻责贼 燥枣 月蚤燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠， 蕴怎扎澡燥怎 酝藻凿蚤糟葬造 悦燥造造藻早藻， 圆援 阅藻责贼 燥枣 悦葬则凿蚤燥造燥早赠， 贼澡藻 孕藻燥责造藻 匀燥泽责蚤贼葬造 燥枣 蕴怎扎澡燥怎， 猿援 阅藻责贼 燥枣 孕澡赠泽蚤燥造燥早赠， 蕴怎扎澡燥怎 酝藻凿蚤糟葬造 悦燥造造藻早藻， 蕴怎扎澡燥怎， 杂蚤糟澡怎葬灶摇 远源远园园园， 悦澡蚤灶葬） 粤遭泽贼则葬糟贼： 粤蚤皂摇 栽燥 燥遭贼葬蚤灶 贼憎燥鄄凿蚤皂藻灶泽蚤燥灶葬造 早藻造 藻造藻糟贼则燥鄄 责澡燥则藻泽蚤泽 皂葬责泽 燥枣 贼澡藻 责则藻枣则燥灶贼葬造 糟燥则贼藻曾 （孕云悦） 责则燥贼藻蚤灶泽 燥枣

32、 灶燥则皂葬造 葬灶凿 皂燥则责澡蚤灶藻鄄葬凿凿蚤糟贼藻凿 则葬贼泽 枣燥则 蚤凿藻灶贼蚤枣赠蚤灶早 贼澡藻 凿蚤枣藻则藻灶贼蚤葬造造赠 藻曾责则藻泽泽藻凿 责则燥贼藻蚤灶泽 蚤灶 贼澡藻 葬凿凿蚤糟贼藻凿 则葬贼泽援 酝藻贼澡燥凿泽摇 砸葬贼 皂燥凿藻造泽 燥枣 皂燥则责澡蚤灶藻 葬凿凿蚤糟贼蚤燥灶 憎藻则藻 藻泽鄄 贼葬遭造蚤泽澡藻凿援 栽澡藻 责则燥贼藻蚤灶泽 蚤灶 贼澡藻 孕云悦 怎灶凿藻则憎藻灶贼 贼憎燥鄄凿蚤鄄 皂藻灶泽蚤燥灶葬员 早藻造 藻造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽 憎蚤贼澡 蚤皂皂燥遭蚤造蚤灶藻 责匀 早则葬鄄 凿蚤藻灶贼 蚤泽燥藻造藻糟贼则蚤糟 枣燥糟怎泽蚤灶早 葬泽 贼澡

33、藻 枣蚤则泽贼 葬灶凿 增藻则贼蚤糟葬员 杂阅杂鄄 孕粤郧耘 葬泽 贼澡藻 泽藻糟燥灶凿 凿蚤皂藻灶泽蚤燥灶援 粤灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 圆鄄阅耘 皂葬责泽 憎葬泽 怎泽藻凿 贼燥 凿藻贼藻则皂蚤灶藻 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬造 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶泽 燥枣 责则燥鄄 贼藻蚤灶泽 遭藻贼憎藻藻灶 贼澡藻 贼憎燥 早则燥怎责泽 遭赠 陨皂葬早藻酝葬泽贼藻则 圆阅 孕造葬贼蚤鄄 灶怎皂 增缘郾 园，葬灶凿 枣燥怎则 责则燥贼藻蚤灶 泽责燥贼泽 藻曾责则藻泽泽藻凿 凿蚤枣枣藻则藻灶贼造赠 憎藻则藻 责蚤糟噪藻凿 怎责 枣燥则 枣怎则贼澡藻则 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 遭赠 酝粤蕴阅陨鄄 栽韵云鄄酝杂

34、援 砸藻泽怎造贼泽摇酝葬贼糟澡藻凿 葬灶凿 糟燥皂责葬则藻凿 憎蚤贼澡 贼澡燥泽藻 燥枣 糟燥灶贼则燥造 早则燥怎责， 愿苑 责则燥贼藻蚤灶 泽责燥贼泽 澡葬凿 遭藻藻灶 凿藻贼藻则皂蚤灶藻凿 憎蚤贼澡 凿蚤枣枣藻则藻灶贼造赠 藻曾责则藻泽泽蚤增藻 造藻增藻造泽 蚤灶 皂燥则责澡蚤灶藻 葬凿凿蚤糟贼蚤燥灶 早则燥怎责援 月赠 酝粤蕴阅陨鄄栽韵云鄄酝杂，贼憎燥 责则燥贼藻蚤灶 泽责燥贼泽 燥枣 贼澡藻皂 澡葬凿 遭藻藻灶 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤藻凿 葬泽 杂灶葬责圆缘 陨泽燥枣燥则皂 鄄杂灶葬责 圆缘 燥枣 杂赠灶葬责贼燥泽燥皂葬造鄄葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿 责则燥贼藻蚤灶 圆缘 葬灶凿 粤糟贼遭 粤糟贼

35、蚤灶， 糟赠鄄 贼燥责造葬泽皂蚤糟 员援 悦燥灶糟造怎泽蚤燥灶泽摇 栽澡藻则藻 蚤泽 燥遭增蚤燥怎泽 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 蚤灶 藻曾责则藻泽泽蚤增藻 责则燥贼藻燥皂藻泽 蚤灶 孕云悦 遭藻贼憎藻藻灶 灶燥则皂葬造 葬灶凿 皂燥则责澡蚤灶藻鄄葬凿凿蚤糟贼藻凿 则葬贼泽援 栽澡藻 枣怎灶糟贼蚤燥灶泽 燥枣 贼澡燥泽藻 蚤凿藻灶贼蚤鄄 枣蚤藻凿 责则燥贼藻蚤灶泽 葬则藻 蚤灶增燥造增藻凿 蚤灶 糟藻造造 早则燥憎贼澡， 葬责燥责贼燥泽蚤泽， 凿蚤枣鄄 枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶， 泽蚤早灶葬造 贼则葬灶泽凿怎糟贼蚤燥灶， 葬曾燥灶 早则燥憎贼澡 葬灶凿 糟藻造造怎鄄 造葬则 藻灶藻则早赠 皂藻贼葬遭燥造蚤泽皂， 泽燥 责则燥贼藻燥皂蚤糟泽 糟葬灶 泽藻则增藻 葬泽 葬 灶藻憎 葬责责则燥葬糟澡 蚤灶 贼澡藻 泽贼怎凿赠 燥枣 皂燥则责澡蚤灶藻 凿藻责藻灶凿藻灶糟藻 贼燥 凿蚤泽糟燥增藻则 灶藻憎 贼澡藻则葬责藻怎贼蚤糟 贼葬则早藻贼泽援 运藻赠 憎燥则凿泽： 皂燥则责澡蚤灶藻； 葬凿凿蚤糟蚤贼蚤燥灶； 贼憎燥鄄凿蚤皂藻灶泽蚤燥灶葬造 早藻造 藻造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽； 藻曾责则藻泽泽蚤增藻 责则燥贼藻燥皂藻 怨苑苑中国药理学通报摇 悦澡蚤灶藻泽藻 孕澡葬则皂葬糟燥造燥早蚤糟葬造 月怎造造藻贼蚤灶摇 圆园员园 允怎灶； 圆远 （远）