《四种不同高血压大鼠模型形成过程中血清抗AT1A受体自身抗体的检测.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《四种不同高血压大鼠模型形成过程中血清抗AT1A受体自身抗体的检测.pdf（5页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、9 0 A c t a P h y s i o l o g i c a S i n i c a , F e b r u a ry 2 5 , 2 0 0 6 , 5 8 ( 1 ) : 9 0 - 9 4 h t t p : / / w w w .a c t a p s . c o m . c n t e c t i o n o f a u t o a n t i b o d i e s a g a i n s t A T . - r e c e p t o r d u r i n g t h e o f t h e f o u r t y p e s o f h y p e r t e n
2、s i v e r a t m o d e l s C H E N R o n g - F a n g , W A N G J i n 2 , J I A O X i a n g - Y i n g 2 , L I U H u i - R o n g 2 , Z H A O R o n g - R u i2 , Z H I J i a n - M i n g 3 ,* ， D e p a r t m e n t o f T o x i c o l o g y , t h e S e c o n d Mi l i t a r y Me d i c a l U n i v e r s i ty ,
3、 S h a n g h a i 2 0 0 4 3 3 , C h i n a ; z D e p a r t m e n t o f P h y s i o l o g y , S h a n x i Me d i c a l U n i v e r s i ty , T a i y u a n 0 3 0 0 0 1 , C h i n a ; D e p a r t m e n t o f P h y s i o l o g y , S c h o o l o f M e d i c a l S c i e n c e s , S h a n g h a i J i a o t o n
4、 g U n i v e r s i ty , S h a n g h a i 2 0 0 0 2 5 , C h i n a A b s t r a c t : U s i n g t w o - k i d n e y o n e - c l i p r e n a l h y p e r t e n s i v e ( 2 K l C g r o u p ) , s t r e s s - i n d u c e d h y p e r t e n s i v e ( n e u r a l g r o u p ) , D O C A - s a l t t r e a t e d h
5、y p e r t e n s i v e ( D O C A g r o u p ) a n d s p o n t a n e o u s l y h y p e r t e n s i v e r a t s ( S H R g r o u p ) , t o i n v e s t i g a t e t h e c h a n g e i n A T 1A r e c e p t o r a u t o a n t i b o d i e s ( A T , A A A s ) d u r i n g t h e d e v e l o p m e n t o f t h e f o
6、 u r t y p e s o f h y p e r t e n s i o n . T h e b i o l o g i c a l a c t i v i t i e s o f A T 1A A A s w e r e e x a m i n e d . I t w a s s h o w n t h a t t h e f r e q u e n c y o f o c c u r r e n c e a n d t i t r e s o f A T 1A A A s i n c r e a s e d s i g n i f i c a n t l y d u r i n g
7、 t h e d e v e l o p m e n t o f h y p e r t e n s i o n . I n t h e f o u r h y p e rt e n s i v e g r o u p s s t u d i e d , t h e o c c u r r e n c e o f A T 1A A A s w a s m o s t p r o m i n e n t i n S H R , 2 K I C a n d n e u r a l g r o u p s . T h e b i o l o g i c a l e f f e c t s o f A
8、 T 1 A A A s w e r e s h o w n t o i n c r e a s e t h e b e a t i n g f r e q u e n c y o f c u l t u r e d n e o n a t a l m y o c a r d i a l a n d v a s c u l a r c o n t r a c t i l e t e n s i o n . I t i s s u g g e s t e d t h a t a u t o i m m u n e m e c h a n i s m s a r e i n v o l v e d
9、 t h e p a t h o g e n e s i s o f d i f f e r e n t t y p e s o f h y p e rt e n s i o n a n d t h e A T 1 A - A A s m a y b e o n e o f t h e m e c h a n i s m s l e a d i n g t o c a r d i a c h y p e rt r o p h y . K e y w o r d s : r e c e p t o r , a n g i o t e n s i n , t y p e 1 ; a u t o a
10、 n t i b o d y ; h y p e rt e n s i o n ; r a t 四 种不同 高 血 压大鼠 模型 形成过 程中 血清 抗A T I 、 受 体自 身 抗 体的 检 测 陈蓉芳 ，王 瑾2 ，焦向英2 ，刘慧荣2 ， 赵荣瑞2 ，支建明3 ,* 1_ 第二军医大学卫生毒理学教研室，上海2 0 0 4 3 3 ; 2 山西医科大学生理学教研室，太原0 3 0 0 0 1 ; 上海交通大学医学院生 理学教研室，上海2 0 0 0 2 5 摘 要: 本实验采用不同 的 方法复 制两肾 一夹 ( t w o - k i d n e y o n e - c l i p r
11、e n a l h y p e rt e n s i v e , 2 K I C ) 、 神经性、 D O C A 一 盐高 血 压和 自 发 性 高 血 压 大鼠 模 型 ， 观 察A T l、 受 体自 身 抗 体 ( A T IA r e c e p to r a u to a n t ib o d i e s , A T IA A A s ) 在 不 同 高 血 压 发 病的 变 化 规 律 ，同 时 对自 身 抗 体 生 物 活 性 进 行 分 析。 实 验 结 果 表明 ， 在 高 血 压 发 病 过 程中A T 1A A A s 的 阳 性 率 和 滴 度 均明 显 增 加， 在
12、四 种 模 型 中 ，自 发 性 高 血 压 组 最明 显， 2 K l C 和 神 经 性 组 次 之。 A T 1A - A A s 的 生 物 活 性 显 示， 可 增 加 培 养的 新 生鼠 心 肌 细 胞 跳 动 频 率 和 血 管 收 缩 张 力。结 果 提 示，自 身 免 疫 机 制 参 与了 高 血 压 的 形 成， A T 1A - A A s 可 能 与 心 肌 肥 厚 有 关。 关 键词: A T , 、 受体;自 身 抗体; 高血压; 大鼠 中图 分类号: Q 4 6 3 ; R 3 3 1 . 3 6 I n r e c e n t y e a r s , t h e
13、 i n v o l v e m e n t o f i m m u n e m e c h a n i s m s i n t h e p a t h o g e n e s i s o f c a r d i o v a s c u l a r d i s e a s e s h as a t t r a c t e d i n c r e a s i n g l y m o r e a t t e n t i o n s b y m a n y i n v e s t i g a t o r s . F u e t a l . E l l a n d R o b e r t s e t
14、a l . 12 1 d e mo n s t r a t e d t h e e x i s t e n c e o f A T , - r e c e p t o r a u t o a n t i b o d i e s ( A T , - A A s ) i n p a t i e n t s w i t h m a - l i g n a n t h y p e r t e n s i o n a n d p r e e c l a m p s i a a n d s u g g e s t e d t h a t t h e s e a u t o a n t i b o d i
15、e s 而g h t b e i n v o l v e d i n t h e p a t h o g e n e s i s o f h y p e r t e n s i o n . T h e A T , - A A s fr o m p r e e l a m p t i c p a t i e n t s i n c r e a s e d t i s s u e f a c t o r e x p r e s s i o n i n v a s c u l a r s m o o t h m u s c l e c e l l s “ I. D e c h e n d e t a
16、 l . 1 1 s u g g e s te d t h a t A T ,- A A s t h r o u g h a c t i v a t i o n o f N A D P H o x i d a s e c o u l d c o n t r i b u t e t o R O S p r o d u c t i o n a n d i n fl a m m a t o ry re s p o n s e s . A c c o r d i n g l y , R e c e i v e d 2 0 0 5 - 0 4 - 2 6 A c c e p t e d 2 0 0 5
17、- 1 2 - 0 5 T h i s w o r k w a s s u p p o r t e d b y t h e E d u c a t i o n a l B u r e a u S c i e n c e F o u n d a t i o n o f S h a n x i P r o v i n c e ( N o . 2 0 0 1 3 9 ) . C o r r e s p o n d i n g a u t h o r . T e l : + 8 6 - 2 1 - 6 3 8 4 6 5 9 0 - 7 7 6 4 4 6 ; F a x : + 8 6 - 2 1
18、- 6 3 8 4 6 5 9 0 - 7 7 6 4 7 6 ; E - m a i l : j y z h ij ms h s m u .e d u .c n C H E N R o n g - F a n g e t a l : D e t e c t i o n o f S e r u m A u t o a n t ib o d i e s a g a i n s t A T , , - r e c e p t o r 9 1 d e t e c t i o n o f A T , - A A s c a n a l s o b e a n i n d i c a t i o n f
19、 o r a s s e s s - i n g t h e r e l a t i o n s h i p b e t w e e n R A S a n d h y p e rt e n s i o n . S o f a r , w h e t h e r A T , - A A s i s g e n e r a t e d d u r i n g t h e d e v e l o p m e n t o f h y p e rt e n s i o n h a s n o t b e e n r e p o rt e d y e t . I n t h i s s t u 勿 w
20、e d e t e c t e d t h e o c c u r r e n c e a n d c h a n g e s o f AT,; A A s d u r i n g t h e d e v e l o p m e n t o f h y p e rt e n s i o n i n d i f f e r e n t h y p e r - t e n s i v e r a t mo d e l s . 1 MATERI ALS AND METHODS 1 . 1 P r e p a r a t i o n o f a n i m a l m o d e l s H e a
21、l t h y a l b i n o Wi s t a r r a t s 功a l e , i n i t i a ll y w e i g h i n g 1 4 01 6 0 g , S h a n x i M e d i c a l U n i v e r s i ty ) w e r e r a n d o m l y d i v i d e d i n t o t h r e e g r o u p s : t w o - k i d n e y o n e - c l i p ( 2 K I C ) h y p e rt e n s i v e g r o u p ( n =
22、1 0 ) a n d i t s c o n t r o l g r o u p ( n = 1 0 ) ; s t r e s s - i n d u c e d ( n e u r a l ) h y p e r t e n s i v e r a t g r o u p ( n = 1 0 ) a n d i t s c o n t r o l g r o u p ( n = 1 0 ) ; D O C A - s a l t t r e a t e d h y p e rt e n s i v e r a t g r o u p ( n = 1 0 ) a n d i t s c o
23、 n t r o l g r o u p ( n = 1 0 ) . I n a d d i t i o n , s p o n t a n e o u s l y h y p e rt e n s i v e r a t s ( S H R g r o u p , n = 1 0 ) a n d i t s c o n t r o l Wi s t a r - K y o t o r a t s ( WK Y g r o u p , n = 1 0 ) w e r e p u r c h as e d fr o m S h a n g h a i I n s t i t u t e o f
24、H y p e rt e n s i o n . 1 . 2 H y p e r t e n s i o n m o d e l s 1 . 2 . 1 2 K 1 C h y p e r t e n s i o n T h e r a t s w e r e a n e s t h e t i z e d w i t h s o d i u m p e n t o b a r b i t a l ( 3 0 m g / k g , i .p . ) a n d t h e l e ft r e n a l a rt e ry o f e a c h a n i m a l w a s i s
25、 o l a t e d t h r o u g h a fl a n k i n c i s i o n , a s l i v e r c l i p w i t h a g a p s i z e o f 0 .2 5 m m w a s p l a c e d o n t h e r e n a l a rt e ry . T h e r i g h t r e n a l a rt e ry a n d k i d n e y w e r e i n t a c t . S h a m - o p e r a t e d r a t s s e r v e d a s c o n t
26、 r o l s ( c o n t r o l 1 ) . 1 . 2 .2 N e u r a l h y p e r t e n s i o n T h e r a t s w e r e p u t i n d i v i d u a l l y i n t o t h e c a g e s w i t h g r i d fl o o r t h r o u g h w h i c h e l e c t r i c f o o t - s h o c k s o f 1 1 0 V a n d 6 0 m s d u r a t i o n w e r e d e li v e
27、r e d fr o m a s t e a d y v o l t a g e p o w e r a t a n i n t e r v a l o f 2 0 s v a r i e d a t r a n d o m a n d c o n t r o l l e d b y a c o m p u t e r . Wh e n t h e e l e c t r i c f o o t - s h o c k s w e r e g i v e n , t h e a n i m a l s w e r e fr i g h t e n e d 勿b o t h s o m a t
28、i c a n d m e n t a l s t r e s s . I n o r d e r t o e n h a n c e t h e me n t a l s t r e s s a n d a v o i d t o o mu c h s o m a t i c s t i m u l a t i o n , a n o i s e ( 9 09 8 d b , 6 0 ms ) p r o d u c e d b y a b u z z e r w a s c o m b i n e d s y n c h r o n o u s l y t o f o r m a c o
29、n - d i t i o n e d r e fl e x . T h e a n i m a l s r e c e i v e d t h e s t r e s s t w i c e d a i l y ( 2 h x 2 ) , w h i c h l a s t e d 4 w e e k s . A n o t h e r g r o u p o f r a t s , a s a c o n t r o l g r o u p , r e c e i v e d t h e s h a m s t r e s s , w e r e p u t i n t o t h e s
30、 a m e c a g e a t t h e s a m e t i m e , b u t w i t h o u t a n y f o o t - s h o c k s a n d n o i s e ( c o n t r o l 2 ) . 1 .2 . 3 D O C A - s a l t h y p e r t e n s i o n T h e r a t s w e r e i n d u c e d b y t r e a t i n g u n i l a t e r a l l y n e p h r e c t o - m i z e d w i t h D
31、O C A a t a c o n c e n t r a t i o n o f 1 5 0 m g / k g , a d - m i n i s t e r e d v i a a s u b c u t a n e o u s s i l as t i c i m p l a n t , a n d 1 % N a C l t o d r i n k i n s t e a d o f t a p w a t e r . C o n t r o l s h a m - t r e a t e d r a t s w e r e a l s o r i g h t u n i n e p
32、 h r e c t o m i z e d a n d r e c e i v e d a s u b c u - t a n e o u s w i t h o u t D O C A - s i l a s t i c t u b e a n d d r a n k t a p w a t e r ( c o n t r o l 3 ) . 1 . 3 Me a s u r e m e n t o f b l o o d p r e s s u r e S y s t o li c b l o o d p re s s u r e a n d h e a rt r a t e w e r
33、 e m e as u r e d w e e k l y w i t h a t a i l - c u ff b l o o d p r e s s u r e r e c o r d e r . B o d y w e i g h t w as m e a s u r e d w e e k l y d u r i n g t h e e x p e r i m e n t . B l o o d s a m p l e s w e r e t a k e n b y c u t t i n g t h e t a i l b e f o r e a n d 1 , 2 , 4 , 6
34、, 8 , 1 0 , 1 2 , 1 4 a n d 1 6 w e e k s a f t e r e x p e r i m e n t . S e r a w e r e s e p a - r a t e d a n d s t o r e d a t - 7 0 0 C f o r u s e . 1 .4 E L I S A ( e n z y m e l i n k e d i m m u n o a b s o r b e n t a s s a y ) F o r d e t e c t i o n o f A T , ,4 A A s , a p e p t i d e
35、c o r r e s p o n d i n g t o t h e s e q u e n c e o f t h e s e c o n d e x t r a c e l l u l a r l o o p s o f r a t A T , A r e - c e p t o r ( I - H - R - N - V - Y - F - I - E - N - T - N - 1 - T - V - C - A - F - H - Y - E - S - R - N - S - T - L ) f l w a s s y n t h e s i z e d u s i n g t
36、h e s o l i d p h a s e m e t h o d d e v e l o p e d 勿Me r r i f i e l d . T h e p e p t i d e s w e r e u s e d as a n t i g e n s t o d e t e c t A T , A A A s b y u s i n g S A - E L I S A m e t h o d a n d q u a li ty c o n t r o l a s d e s c r i b e d p r e v i o u s l y t6 l . 1 . 5 C u l t
37、u r e o f n e o n a t a l b e a t i n g c a r d i o m y o c y t e s C a r d i o m y o c y t e s w e r e p r e p a r e d f r o m t h e v e n t r i c l e s o f 1 - t o 2 - d a y o l d Wi s t a r r a t s b y e x p e r i m e n t w i t h a 0 .0 8 % s o l u - t i o n o f c r u d e t ry p s i n a n d w e r
38、 e c u l t u r e d a s p r e v i o u s l y d e - s c r i b e d I l . T h e c e l l s w e r e c u l t u r e d f o r 3 t o 4 d a t 3 7 0 C . O n t h e d a y o f e x p e r i m e n t , t h e c u l t u r e m e d i u m w a s r e p l a c e d b y f r e s h s e r u m - c o n t a i n i n g m e d i u m a n d t
39、 h e c e l l s w e r e i n - c u b a t e d a t 3 7 0 C f o r 2 h . T h e c u l t i v a t i o n fl a s k s we r e t h e n t r a n s f e r r e d t o t h e h e a t e d s t a g e o f a n i n v e rt e d m i c r o s c o p e , s e v e n t o t e n s e l e c t e d c e l l s o r s y n c h r o n o u s l y c o
40、n t r a c t i n g c e l l c l u s t e r s p e r fl a s k w e r e c o u n t e d f o r 3 0 s . T h i s p r o c e - d u r e w a s r e p e a t e d t w i c e i n d i f f e r e n t c u l t u r e s t o y i e l d r e - s u l t s r e p r e s e n t i n g a t o t a l o f u p t o 3 0 c e ll s f o r e a c h s a
41、m p l e A T , - r e c e p t o r a g o n i s t A n g 1 1 ( t h e u l t i m a t e c o n c e n t r a t i o n 0 . 1 F u n o l / L ) , A T , - r e c e p t o r s p e c i f i c a n t a g o n i s t l o s a r t a n ( 1 p m o l/ L ) , A T , r e c e p t o r s p e c i f i c a n t a g o n i s t P D 1 2 3 3 1 9 (
42、 1 E u n o n) , a , - r e c e p t o r s p e c i fi c a n t a g o n i s t p r a z o s i n ( 0 .5 p u n o l / L ) a n d p ,- r e c e p t o r s p e c i fi c a n t a g o n i s t p r o p r a n o l o l ( 1 p m o l/ L ) ， A T , A A A s p o s i t i v e s e r a ( 1 : 1 6 0 , 1 0 N l ) a n d p e p t i d e o f
43、 A T , A - r e c e p t o r ( 0 . 1 p m o l/ L ) w e r e a d d e d s i n g l y o r c u m u l a - t i v e l y as i n d i c a t e d . 1 .6 C o n t r a c t i l i t y o f v a s c u l a r r i n g p r e p a r a t i o n s A ft e r i n d u c i n g g e n e r a l a n e s t h e s i a w i t h i n t r a p e r i t
44、 o n e a l p e n - t o b a r b i t a l ( 5 0 m g / k g ) ， r a t s u n d e r w e n t a m e d i a n s t e rn o - t o m y w i t h r a p i d r e m o v a l o f t h e t h o r a c i c a o r t a . T h e a d v e n - t i t i a w as r e m o v e d , b u t t h e e n d o t h e li u m w a s l e ft i n t a c t . T
45、 h e r i n g w a s t h r e a d e d o n t w o s t e e l p r o n g s a n d s u s p e n d e d i n o r g a n b a t h c h a m b e r c o n t a i n i n g K r e b s s o l u t i o n a n d m a i n - t a i n e d a t 3 7 a n d c o n t i n u o u s l y b u b b l e d w i t h a m i x t u r e o f 9 2 A c t a P h y s
46、 i o l o g i c a S i n i c a , F e b rua r y 2 5 , 2 0 0 6 , 5 8 ( 1 ) : 9 0 - 9 4 9 5 %0 : 一 5 % C 0 2 r e s u l t i n g i n a p H o f 7 .4 . R e s t i n g t e n s i o n o f t h e t h o r a c i c a o r t a r i n g s w as m a i n t a i n e d a t 1 .0 g . V e s s e l s w e r e e q u i l i b r a t e d
47、 f o r 3 0 m i n a n d t h e n t e s t e d w i t h A T , A A A s a n d a n g i o t e n s i n II I5 l . 1 .7 S t a t i s t i c a l a n a l y s i s T h e a v e r a g e o f t h e a n t i b o d y t i t r e w a s e x p r e s s e d a s g e o - m e t r i c m e a n 士S D , o t h e r s w e r e e x p r e s s e
48、 d a s m e a n 士 S D a n d s t a t i s t i c a l a n a l y s i s w a s p e r f o r m e d b y u s i n g t - t e s t a n d x 2 - t e s t . V a l u e s o f P 0 .0 5 w e r e c o n s i d e r e d t o d e n o t e s t a - t i s t i c a l s i g n i f i c a n c e ; v a l u e s o f P 0 .0 1 w e r e c o n s i d
49、 e r e d a s h i g h l y s i g n i fi c a n t . 2 RES UL TS 2 . 1 C h a n g e s i n t h e f r e q u e n c y o f o c c u r r e n c e a n d t i t r e s o f A T , A - A A s A l l r a t s e x c e p t i n g S H R g r o u p , t h e f r e q u e n c y o f o c c u r - r e n c e a n d t h e t i t r e s o f A T , A A A s w e r e i n v e ry l o w l e v e l b e f o r e e x p e r i m e n t . A f t e r e x p e r i m e n t , h o w e v e r , t h e f r e - q u e n c y o f o c c u r r e n c e o f A T ,A A A s a l l i n c r e a s e d s i g n i f i - c a n t l y t o d i f f e r e n t d