哺乳动物氨基酰TRNA合成酶的研究.pdf

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1、生命科学 C h i n e s e B u l l e t i n o f L i f e S c i e n c e s 第1 8 卷 第3 期 2 0 0 6 年6 月 V o l . 1 8 , N o . 3 J u n . , 2 0 0 6 哺乳动物氨基酰- t R N A 合成酶的研究 王恩多 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室上海 2 0 0 0 3 1 文章编号 1 0 0 4 - 0 3 7 4 ( 2 0 0 6 ) 0 3 - 0 2 0 9 - 0 5 收稿日期2 0 0 6 - 0 5 - 0 8 基金项目国家自然科学基

2、金委重点项目( 3 0 3 3 0 1 8 0 ) 作者简介王恩多( 1 9 4 4) 女研究员博士生导师中国科学院院士 基金动态 1氨基酰 - t R N A 合成酶及哺乳动物细胞中氨基酰 t R N A 合成酶的特点 1 . 1氨基酰- t R N A 合成酶催化的反应 氨基酰- t R N A 合成酶家族( a a R S ) 参与生物体中 的遗传解码过程它们催化氨基酸与其对应的 t R N A 之间的酯化反应生成氨基酰 - t R N A参与蛋 白质的生物合成它反应的专一性确保了蛋白质生 物合成的精确性氨基酸与其对应的 t R N A之间的 反应发生在t R N A 的3 - 末端腺苷

3、酸核糖的2 或3 羟 基上 1 根据a a R S 一级序列中的特征结构花式( m o t i f s ) 以及催化功能域拓扑结构a a R S被分为两类每 类有1 0 种a a R S 2 本文用氨基酸单字符或三字符后 缀R S 代表专一于某一氨基酸的氨基酰- t R N A 合成酶 1 . 2哺乳动物细胞中氨基酰- t R N A 合成酶的特点 1 . 2 . 1两套蛋白质翻译系统在哺乳动物细胞中 存在着两套蛋白质翻译系统一套存在于细胞质 中负责细胞绝大多数蛋白质的翻译另一套则位 于线粒体中负责一部分线粒体蛋白质的翻译两 套翻译系统均有自己独立的一套 a a R S 及 t R N A 从

4、 进化的角度而言线粒体 a a R S 与原核生物 a a R S 相 似度较高而相对细胞质 a a R S不保守这一现象 与线粒体的内共生起源假说也是相符的这种翻译 系统的二重性使得很多以原核生物a a R S 为靶点设计 的药物具有线粒体毒性从而给这类药物的设计与 筛选增加了困难 1 . 2 . 2末端延伸肽段随着生物的进化 在高等真 核生物中的细胞质a a R S 的催化核心的N - 端或者C - 端多数存在着疏水的延伸结构域这类结构域在原 核生物当中往往是不存在的 3 现在这些结构域被 认为主要有以下三方面的功能: ( 1 ) 某些这样的结构域 是t R N A 结合结构域它们可以帮助

5、a a R S 在相对复 杂的真核细胞环境内更好的识别相应的t R N A 4 ; ( 2 ) 这些结构域帮助a a R S 构建一个大的复合物这一点 将在下一部分讨论 ( 3 ) 这些附加的结构域还赋予了 许多高等真核生物的a a R S 除催化以外的新功能现 在已经发现在哺乳动物当中许多a a R S 都具有催化 活性以外的新活性哺乳动物的 W R S和 Y R S可以 通过蛋白酶水解激活或抑制血管生成因子 5 7 人获 得性免疫缺陷病毒( H I V ) 毒粒可以通过与K R S 相互作 用抑制 t R N A L y s的氨基酰化 而 t R N A L y s是 H I V 病毒 R

6、 N A反转录的引物因此这一作用有可能影响 H I V 病毒基因组的复制 8 9 人Q R S 能在谷氨酰胺存 在的情况下与凋亡信号调控激酶1 ( A S K 1 ) 相互作用并 抑制其导致的凋亡这可能是早先发现的谷氨酰胺 抗凋亡的分子机制 1 0 人M R S 可以在细胞受到某些 细胞因子如胰岛素成纤维生长因子( F G F ) 血 小板源生长因子( P D G F ) 的刺激下进入细胞核 并能促进 r R N A 的合成 1 1 此外人们还发现了一 些a a R S 可以和延伸因子的成员相互作用 1 2 1 3 总而 言之高等真核生物的a a R S 很多具有催化以外的一 些新功能而在这些

7、新功能当中最引人注目的是 一个巨大的a a R S 复合物( a a R S c o m p l e x ) 的形成 1 . 2 . 3细胞质中a a R S 复合物在高等真核生物中 九种 a a R S和三种辅助因子共同构成了一个巨大的 a a R S 复合物其中一种是具有双功能的单链酶它 们是M R SR R SL R SI R SD R SQ R S K R S以及双功能 E P R S 三个辅助因子分别被命名 为 p 1 8 p 3 8 p 4 3 虽然这个复合物在 2 0 世纪 7 0 210生命科学第1 8 卷 年代后期就已经在许多哺乳动物的组织中被发现 3 但直到近十年针对它的深

8、入研究才出现较大进展 复合物中的 9 个酶相对于它们在原核生物中的形式 均具有明显的 N - 端或 C - 端延伸在这些疏水性的 延伸中存在着几个多次重复出现的明显具有结构性 的功能结构域它们被认为可能参与了复合物的组 装 1 4 1 6 近期两项不同的研究分别用体内和体外实 验证明了 p 3 8 在这个复合物当中可能起着结构上的 骨架作用 1 7 1 8 在p 3 8 基因敲除的小鼠中检测不到 复合物的存在而且许多复合物成员酶的表达量以 及氨基酰化水平均有明显的下降这说明了这个复 合物对于其成员酶的催化反应以及表达水平的稳定 具有某种机制尚不明确的促进作用也说明了这个 复合物可能具有目前还未

9、发现的有高度组织性的整 体功能最近发现的复合物成员与延伸因子的相互 作用说明了这个复合物可能参与翻译延伸的整体调 控并有可能在先前发现的通道机制中发挥 重要的作用 1 3 , 1 9 此外a a R S复合物中的三个辅助因子各自也 具有非常重要的细胞功能p 4 3 通过蛋白酶水解可 以产生一种血管内皮单核细胞活化肽( E M A P I I ) 通 过活化丝裂原激活蛋白激酶( M A P K ) 和核因子 B ( N K - B ) 进而活化一系列下游效应分子导致单 核细胞的黏附和血管内皮细胞的凋亡 2 0 2 3 p 3 8 可 以通过泛素化的途径降解 c - m y c 的转录活化因子远

10、上游元件结合蛋白( F B P ) 从而下调c - m y c 表达对 它的基因敲除导致小鼠的肺泡不发育 2 4 p 1 8 最近 被发现能通过与复制检查点激酶通路( A T M / A T R 通 路) 的相互作用促进 p 5 3基因的表达参与 D N A修 复损伤从而可能具有较强的肿瘤抑制作用对它 的基因敲除显示一个p 1 8 拷贝的失活都将导致小鼠 的肿瘤发生频率大幅度的增加 2 5 可见这三个因 子除了参与或组织整个复合物外还具有重要的细 胞功能只是目前还不清楚这些细胞功能是否也和 a a R S复合物具有一定的关系 1 . 2 . 4线粒体中t R N A 与某些疾病有关与细胞质 a

11、 a R S 相比线粒体a a R S 及其相应的t R N A 由于进化 上比较保守且形式上比较古老因此到目前并没 有发现它们有在催化功能之外的新功能但是近年 来的研究发现在迄今为止发现的近 2 0 0 个致病性 线粒体 D N A突变中接近一半都位于编码线粒体 t R N A ( h m t R N A ) 的基因上而 2 2 种 h m t R N A 基因的 总长度仅占线粒体基因组大小的 1 0 % 但很少有报 道显示细胞质 t R N A基因的突变与疾病相关造成 这种情况的原因主要是细胞质t R N A 基因一般具有多 个拷贝而一个拷贝的突变一般不会对生命体的健 康构成明显影响但 h

12、 m t R N A 基因全部是单拷贝基 因任何一个 t R N A基因上的突变都将直接影响到 线粒体翻译系统的稳定性而且编码 t R N A的基因 上的任何一个点突变对活力都可能有致命影响不 像蛋白质基因那样可以通过密码子的摇摆性和三级 结构上的代偿可以在一定程度上抵消单点突变的影 响h m t R N A与人类疾病之间的高度相关性吸引 了众多科学家的研究兴趣尽管 h m t R N A 基因突变 导致疾病的分子机理还不清楚但越来越多的证据 显示致病性突变会对 h m t R N A 的结构和功能造成 严重的破坏系统地研究 h m t R N A的结构和功能特 性不但有助于我们了解线粒体中特

13、殊的t R N A 氨基 酰化系统还能帮助人们解释相关疾病发生的分子机 理甚至可能催生出新的诊断和治疗疾病的方法 2哺乳动物细胞某些氨基酰- t R N A 合成酶及其相关 t R N A 的研究 2 . 1人线粒体亮氨酰- t R N A 合成酶( h m L e u R S ) 与致 病 t R N A L e u的研究 2 . 1 . 1得到高活力的h m L e u R S 与h m t R N A 不同的 是哺乳动物的线粒体a a R S 均由核基因组编码前 体输入线粒体并切除前导肽后才能正常行使功能 尽管核基因组中编码线粒体a a R S 的基因序列早已确 定但由于尚未确定它们进入

14、线粒体后的成熟形式 因此对于线粒体中氨基酰化系统的研究一直难以开 展我们关于 a a R S 的研究便是从这个角度入手的 早在1 9 9 4 年 h m L e u R S 的c D N A 就已经从人胎 儿脑组织c D N A 库中分离出来为了研究h m L e u R S 本实验室将其 c D N A进行克隆并把一段带有 6个 组氨酸( 6 譎i s ) 的标签融合到h m L e u R S 的C - 末端 利 用昆虫病毒表达载体我们在昆虫细胞内表达了 h m L e u R S 在昆虫细胞中h m L e u R S 在胞质表达 并专一地定向进入昆虫线粒体用 N i - N T A 纯

15、化的 h m L e u R S的 N -端序列为 I Y S A T G K W T K E Y T L 通 过与已知的由 c D N A 推导出的 h m L e u R S 前体序列相 比较表明 h m L e u R S前体输入到线粒体后其 N - 端的S e r 3 9 和I l e 4 0 残基之间的肽键被蛋白水解酶切 断产生成熟状态的 h m L e u R S 与先前其他实验 室报道的 h m L e u R S 2 6 相比 用这种方法得到的 h m L e u R S 氨基酰化大肠杆菌( E s c h e r i c h i a c o l i , E . c o l i

16、 ) t R N A L e u的比活力提高 8 倍 2 7 2 1 1第3 期王恩多哺乳动物氨基酰 - t R N A合成酶的研究 在此基础上我们将编码成熟形式的 h m L e u R S 的基因片段重组到E . c o l i 的表达质粒中 通过转化 E . c o l i 受体菌高表达并纯化了成熟形式的h m L e u R S 用此方法得到的h m L e u R S 氨基酰化E . c o l i t R N A L e u 的比活力达到1 2 7 . 7 单位/ 毫克这是目前报道的具 有最高比活力的 h m L e u R S 2 8 此高比活力的 h m L e u R S 为

17、研究疾病相关线粒体 t R N A L e u突变体的 致病机理带来方便 2 . 1 . 2人线粒体t R N A L e u ( U U R ) 致病点突变体的氨基 酰化活力降低线粒体性脑肌病乳酸中毒和中风 样发作综合征( M E L A S 症) 是线粒体遗传病的常见类 型有报道指出位于编码人线粒体t R N A L e u( U U R ) 基因中的五种点突变与 M E L A S症相关它们分别 是A 3 2 4 3 G A 3 2 5 2 G C 3 2 5 6 T T 3 2 7 1 C 和T 3 2 9 1 C 我们构建并转录获得了这些 t R N A突变体通过体 外的氨基酰化实验

18、测定了这些点突变对 t R N A接 受茎活力的影响结果显示和野生型 t R N A相 比带有这五种点突变的t R N A L e u( U U R ) 转录子的氨 基酰化水平都有不同程度的降低暗示 M E L A S症 的发生与线粒体 t R N A L e u( U U R ) 氨基酰化能力受损有 关进一步的热稳定性实验显示氨基酰化水平最 低的A 3 2 4 3 G 突变体和 T 3 2 9 1 C 突变体的结构不稳 定我们还发现T 3 2 9 1 C突变体能够竞争性地抑 制野生型 t R N A的氨基酰化推测携带该突变的 t R N A 可能作为一种抑制剂存在于线粒体内 2 9 2 .

19、1 . 3发现人线粒体亮氨酸 t R N A的 C U N 等受体 ( h m t R N A L e u ( C U N ) ) T - 茎上的碱基滑动现象人线粒 体亮氨酸 t R N A 的 C U N 等受体( h m t R N A L e u( C U N ) ) 负 责解码线粒体蛋白质编码系统中使用频率最高的密 码子目前有六个致病性点突变被定位于它的基因 内部体外实验显示和野生型的 hmtRNA Leu ( C U N ) 转录子相比疾病相关的T 1 2 3 1 1 C ( U 4 8 C ) 突 变体的氨基酰化水平明显升高动力学实验也证实 U 4 8 C 突变使 t R N A

20、更容易被氨基酰化二级结构分 析和结构探测实验均显示野生型 hmtRNA Leu ( C U N ) 具有比U 4 8 C 突变体更为灵活的结构这种结 构柔性使野生型 t R N A 的 T - 茎能够在两种潜在的配 对方式之间发生滑动人为构建了一系列具有特定 T - 茎环结构的 h m t R N A L e u( C U N ) 突变体 用来模拟 T - 茎滑动到不同阶段时 t R N A 的分子构象通过研 究这些突变 t R N A的结构和功能我们发现这种特 殊的 T -茎滑动现象不但能够改变 t R N A的分子构 象还可以调节 h m t R N A L e u ( C U N ) 的

21、接收茎活力 推测这可能是一种t R N A 分子调节其自身结构和功能 的新方式分别将不同的 t R N A分子固定在微球表 面以此筛选人线粒体中能够和特定构象的 t R N A 相结合的蛋白质 S D S - P A G E 电泳图谱上蛋白质的 差异条带提示我们T - 茎滑动受阻影响了 t R N A 与 某些配体分子的结合这些发现为我们探索相关疾 病的分子机理提供了新研究角度 3 0 2 . 2人胞质氨基酰- t R N A 合成酶的研究 在对几种人胞质 a a R S的研究中我们也取得 了一些有意义的结果 2 . 2 . 1人细胞质内两种精氨酰t R N A 合成酶( h c A r g

22、R S ) 由同一条 m R N A翻译产生哺乳动物细胞内存在两 种形式的 h c A r g R S 一种参与 a a R S 复合物的形成 另外一种以游离形式存在相比游离形式的 A r g R S ( N h c A r g R S ) 参与复合物形成的A r g R S ( h c A r g R S ) 在其 N - 末端多出了 7 2 个氨基酸的延伸肽段这两 种A r g R S 是如何产生的有人提出是由翻译后蛋白 水解酶转移酶切得到但是证据不足我们在 E . c o l i 中表达了编码h c A r g R S 和 N h c A r g R S 的基因 它们在E . c o l

23、 i 中以可溶状态存在 而且N h c A r g R S 的表达量和氨基酰化活力都比 h c A r g R S 要高利用 N h c A r g R S 的抗体进行W e s t e r n 印迹分析在三种 人体细胞中都发现了两种形式的A r g R S 对h c A r g R S 的 c D N A进行分析发现在其编码的开放阅读框内 存在三个起始密码子其中两个对应编码全长和去 掉 N - 端 7 2 个氨基酸残基的 A r g R S 另一个位于编 码h c A r g R S 的m R N A 的5 非翻译区并且与h c A r g R S 基因翻译具有不同的阅读框分别突变三个起始密

24、 码子并将相应的克隆转染 2 9 3 T 细胞根据两种 形式的 A r g R S 表达量的改变证实两种 A r g R S 由同 一条 m R N A经过不同的翻译起始产生并且由于上 游起始密码子的存在促进了编码 N h c A r g R S 基 因的表达 3 1 2 . 2 . 2人胞质亮氨酰- t R N A 合成酶( h c L e u R S ) 延伸肽 段的功能我们将编码h c L e u R S 的基因( h c l e u s ) 和缺 失 C -末端 8 9个氨基酸残基的 h c L e u R S的序列 ( C h c l e u s )连接入经过改造的含有编码6 譎i

25、s 标签 序列的昆虫病毒载体 然后感染T r i c h o p l u s i a n i B T I - T n - 5 B 1 - 4 ( T n 5 ) 昆虫细胞以表达h c l e u s 和C h c l e u s 产生带有H i s 6标签的h c L e u R S 和C h c L e u R S 并利 用 Ni-NTA亲和层析纯化了这两种酶测定了 h c L e u R S 和C h c L e u R S 的动力学性质热稳定性及 细胞定位发现C - 末端结构域的缺失对酶的性质几 212生命科学第1 8 卷 乎没有影响进一步研究了这两种酶与人胞质精氨 酰t R N A 合

26、成酶( h c A r g R S ) 和缺失N - 末端的h c A r g R S ( N h c A r g R S ) 的相互作用证明了h c L e u R S 的C - 末 端结构域与 h c A r g R S相互作用这种作用通过 h c A r g R S 的N - 末端结构域进行讨论了这种相互作 用在 a a R S 复合物组装中的功能 3 2 2 . 2 . 3人胞质甲硫氨酰- t R N A 合成酶( m c M e t R S ) N - 端延伸肽段的功能研究我们对真核生物胞质 M e t R S 的 N - 末端延伸的进化的研究结果表明一 个保守的真核生物特有的九肽对

27、于 h c M e t R S 的活 性中心的构成至关重要缺失这个九肽的 h c M e t R S 完全失去了氨基酰化活力证明了在进化中出现的 末端延伸可能参与酶的活性中心的构建为更明确 地阐释真核生物 a a R S 的进化提供了新的证据 2 . 2 . 4哺乳动物细胞a a R S 复合物中非a a R S 蛋白质 组分的功能研究p 4 3 p 3 8 和 p 1 8 是 a a R S 复合物 中重要的结构蛋白质我们克隆了这三种蛋白质的 基因并对它们进行了表达和纯化研究了它们对 h c L e u R S 和 C h c L e u R S h c A r g R S 和 N h c

28、A r g R S N-末端缺失的人胞质甲硫氨酰 -tRNA合成酶 ( N h c M e t R S ) 以及不同种属来源的 L e u R S 的活力影 响第一次用体外实验证明了这三种辅助因子对 a a R S s 的活力具有促进作用这种促进作用和延伸 的末端结构域并无必然关系并且三种因子对 L e u R S 的促进作用还具有种属专一性这些结果对 我们进一步了解复合物的功能具有重要意义 参考文献 1 I b b a M , S 鰈l D . A m i n o a c y l - t R N A s y n t h e s i s . A n n u R e v B i o c h e

29、m , 2 0 0 0 , 6 9: 6 1 7 6 5 0 2 E r i a n i G , D e l a r u e M , P o c h O , e t a l . P a r t i t i o n o f t R N A s y n t h e t a s e s i n t o t w o c l a s s e s b a s e d o n m u t u a l l y e x c l u s i v e s e t s o f s e q u e n c e m o t i f s . N a t u r e , 1 9 9 0 , 3 4 7( 6 2 8 9 )

30、: 2 0 3 2 0 6 3 M i r a n d e M . A m i n o a c y l - t R N A s y n t h e t a s e f a m i l y f r o m p r o k a r y o t e s a n d e u k a r y o t e s : s t r u c t u r a l d o m a i n s a n d t h e i r i m p l i c a t i o n s . P r o g N u c l e i c A c i d R e s M o l B i o l , 1 9 9 1 , 4 0: 9 5 1

31、 4 2 4 F r a n c i n M , K a m i n s k a M , K e r j a n P , e t a l . T h e N - t e r m i n a l d o m a i n o f m a m m a l i a n L y s y l - t R N A s y n t h e t a s e i s a f u n c - t i o n a l t R N A - b i n d i n g d o m a i n . J B i o l C h e m , 2 0 0 2 , 2 7 7( 3 ) : 1 7 6 2 1 7 6 9 5 W

32、a k a s u g i K , S c h i m m e l P . T w o d i s t i n c t c y t o k i n e s r e l e a s e d f r o m a h u m a n a m i n o a c y l - t R N A s y n t h e t a s e . S c i e n c e , 1 9 9 9 , 2 8 4( 5 4 1 1 ) : 1 4 7 1 5 1 6 W a k a s u g i K , S l i k e B M , H o o d J , e t a l . A h u m a n a m i n

33、 o a c y l - t R N A s y n t h e t a s e a s a r e g u l a t o r o f a n g i o g e n e s i s . P r o c N a t l A c a d S c i U S A , 2 0 0 2 , 9 9( 2 6 ) : 1 7 3 1 7 7 7 赵明炜, 王恩多. 两种具有调节血管生成作用的氨基酰- t R N A 合成酶. 生物化学与生物物理进展, 2 0 0 3 , 3 0( 5 ) : 6 8 9 6 9 3 8 S t a r k L A , H a y R T . H u m a n i m

34、 m u n o d e f i c i e n c y v i r u s t y p e 1 ( H I V - 1 ) v i r a l p r o t e i n R ( V p r ) i n t e r a c t s w i t h L y s - t R N A s y n t h e t a s e : i m p l i c a t i o n s f o r p r i m i n g o f H I V - 1 r e v e r s e t r a n s c r i p t i o n . J V i r o l , 1 9 9 8 , 7 2( 4 ) : 3

35、0 3 7 3 0 4 4 9 C e n S , J a v a n b a k h t H , K i m S , e t a l . R e t r o v i r u s - s p e c i f i c p a c k a g i n g o f a m i n o a c y l - t R N A s y n t h e t a s e s w i t h c o g n a t e p r i m e r t R N A s . J V i r o l , 2 0 0 2 , 7 6( 2 4 ) : 1 3 1 1 1 1 3 1 1 5 1 0 K o Y G , K i

36、 m E Y , K i m T , e t a l . G l u t a m i n e - d e p e n d e n t a n t i a p o p t o t i c i n t e r a c t i o n o f h u m a n g l u t a m i n y l - t R N A s y n - t h e t a s e w i t h a p o p t o s i s s i g n a l - r e g u l a t i n g k i n a s e 1 . J B i o l C h e m , 2 0 0 1 , 2 7 6( 8 ) :

37、6 0 3 0 6 0 3 6 1 1 K o Y G , K a n g Y S , K i m E K , e t a l . N u c l e o l a r l o c a l i z a t i o n o f h u m a n m e t h i o n y l - t R N A s y n t h e t a s e a n d i t s r o l e i n r i b o s o - m a l R N A s y n t h e s i s . J C e l l B i o l , 2 0 0 0 , 1 4 9: 5 6 7 5 7 4 1 2 N e g r

38、 u t s k i i B S , S h a l a k V F , K e r j a n P , e t a l . F u n c t i o n a l i n t e r a c t i o n o f m a m m a l i a n v a l y l - t R N A s y n t h e t a s e w i t h e l o n - g a t i o n f a c t o r E F - 1 i n t h e c o m p l e x w i t h E F - 1 H . J B i o l C h e m , 1 9 9 9 , 2 7 4( 8

39、) : 4 5 4 5 4 5 5 0 1 3 L e e J S , P a r k S G , P a r k H , e t a l . I n t e r a c t i o n n e t w o r k o f h u m a n a m i n o a c y l - t R N A s y n t h e t a s e s a n d s u b u n i t s o f e l o n g a t i o n f a c t o r 1 c o m p l e x . B i o c h e m B i o p h y s R e s C o m m u n , 2 0

40、0 2 , 2 9 1 ( 1 ) : 1 5 8 1 6 4 1 4 R h o S B , L e e K H , K i m J W , e t a l . I n t e r a c t i o n b e t w e e n h u m a n t R N A s y n t h e t a s e s i n v o l v e s r e p e a t e d s e q u e n c e e l e m e n t s . P r o c N a t l A c a d S c i U S A , 1 9 9 6 , 9 3( 1 9 ) : 1 0 1 2 8 1 0 1

41、 3 3 1 5 R h o S B , K i m M J , L e e J S , e t a l . G e n e t i c d i s s e c t i o n o f p r o t e i n - p r o t e i n i n t e r a c t i o n s i n m u l t i - t R N A s y n t h e t a s e c o m p l e x . P r o c N a t l A c a d S c i U S A , 1 9 9 9 , 9 6( 8 ) : 4 4 8 8 4 4 9 3 1 6 R o b i n s o

42、n J C , K e r j a n P , M i r a n d e M . M a c r o m o l e c u l a r a s s e m - b l a g e o f a m i n o a c y l - t R N A s y n t h e t a s e s : q u a n t i t a t i v e a n a l y - s i s o f p r o t e i n - p r o t e i n i n t e r a c t i o n s a n d m e c h a n i s m o f c o m - p l e x a s s e

43、m b l y . J M o l B i o l , 2 0 0 0 , 3 0 4( 5 ) : 9 8 3 9 9 4 1 7 Q u e v i l l o n S , R o b i n s o n J C , B e r t h o n n e a u E , e t a l . M a c r o m o - l e c u l a r a s s e m b l a g e o f a m i n o a c y l - t R N A s y n t h e t a s e s : i d e n t i - f i c a t i o n o f p r o t e i n

44、 - p r o t e i n i n t e r a c t i o n s a n d c h a r a c t e r i z a t i o n o f a c o r e p r o t e i n . J M o l B i o l , 1 9 9 9 , 2 8 5( 1 ) : 1 8 3 1 9 5 1 8 K i m J Y , K a n g Y S , L e e J W , e t a l . p 3 8 i s e s s e n t i a l f o r t h e a s s e m b l y a n d s t a b i l i t y o f m

45、a c r o m o l e c u l a r t R N A s y n t h e t a s e c o m p l e x : i m p l i c a t i o n s f o r i t s p h y s i o l o g i c a l s i g n i f i c a n c e . P r o c N a t l A c a d S c i U S A , 2 0 0 2 , 9 9( 1 2 ) : 7 9 1 2 7 9 1 6 1 9 S t a p u l i o n i s R , D e u t s c h e r M P . A c h a n n

46、 e l e d t R N A c y c l e d u r i n g m a m m a l i a n p r o t e i n s y n t h e s i s . P r o c N a t l A c a d S c i U S A , 1 9 9 5 , 9 2( 1 6 ) : 7 1 5 8 7 1 6 1 2 0 K o Y G , P a r k H , K i m T , e t a l . A c o f a c t o r o f t R N A s y n t h e t a s e , p 4 3 , i s s e c r e t e d t o u

47、p - r e g u l a t e p r o i n f l a m m a t o r y g e n e s . J B i o l C h e m , 2 0 0 1 , 2 7 6( 2 5 ) : 2 3 0 2 8 3 2 3 0 3 2 1 P a r k H , P a r k S G , L e e J W , e t a l . M o n o c y t e c e l l a d h e s i o n i n d u c e d b y a h u m a n a m i n o a c y l - t R N A s y n t h e t a s e - a

48、 s s o c i - a t e d f a c t o r , p 4 3 : i d e n t i f i c a t i o n o f t h e r e l a t e d a d h e s i o n m o l - e c u l e s a n d s i g n a l p a t h w a y s . J L e u k o c y t e B i o l , 2 0 0 2 , 7 1( 2 ) : 2 2 3 2 3 0 2 2 C h a n g S Y , P a r k S G , K i m S , e t a l . I n t e r a c t

49、i o n o f t h e c - t e r m i n a l d o m a i n o f p 4 3 a n d t h e 爏u b u n i t o f A T P s y n t h a s e . J B i o l C h e m , 2 0 0 2 , 2 7 7( 1 0 ) : 8 3 8 8 8 3 9 4 2 3 P a r k S G , K a n g Y S , A h n Y H , e t a l . D o s e - d e p e n d e n t b i p h a s i c 2 1 3第3 期王恩多哺乳动物氨基酰 - t R N A合成酶的研究 a c t i v i t y o f t R N A s y n t h e t a s e - a s s o c i a