小鼠结肠癌肝转移模型的构建.pdf

《小鼠结肠癌肝转移模型的构建.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《小鼠结肠癌肝转移模型的构建.pdf（2页珍藏版）》请在三一文库上搜索。

1、中国医药指南2 0 1 0 年6 月第8 卷第1 7 期G u i d eo f C h i n a M e d i c i n e ，J u n e2 0 1 0 ，V 0 1 8 ，N o 1 7 小鼠结肠癌肝转移模型的构建 杨扬李乃卿2 论著I5 3 【摘要】目的建立适合基因表述谱研究的小鼠结肠癌肝转移模型。方法将小鼠结肠癌细胞( C 2 6 ) 悬液接种于B A L B C 小鼠脾内，分为切 脾组和保脾组，观察小鼠生存时间及腹腔内肿瘤生长情况。结果切脾小鼠自然生存期1 1 - 1 5 d ，平均( 1 3 0 5 o 7 1 ) d ，保脾小鼠自然生 存期9 - 1 5 d ，平均(

2、1 1 6 4 士1 4 9 ) d 。小鼠肝脏转移率均为1 0 0 。切脾小鼠肝各叶完全被肿瘤占据，保脾小鼠脾内肿瘤巨大，肝内转移多 为散在的米粒大小瘤结节转移。结论用于基因表达谱研究的小鼠结肠癌肝转移模型应采用脾内注射切脾法。 【关键词】结肠癌；肝转移；动物模型； 中图分类号：R - 3 3 2 文献标识码：B 文章编号：1 6 7 1 - 8 1 9 4 ( 2 0 1 0 ) 1 7 0 0 5 3 0 2 E s t a b l i s h m e n to fC o l o n i cC a r c i n o m aL i v e rM e t a s t a s i sM o

3、d e li nB A L B CM i c e Y A N GY a n g 。，L IN a i - q i n 9 2 f lP e o p l e sH o s p i t a lo f Z h o n g s h a n , Z h o n g s h a n5 2 8 4 0 0 ，C h i n a ； 2D o n g z h i m e nH o s p i t a lA f f i l i a t e dt oB e i j i n gU n i v e r s i t yo f T r a d i t i o n a lC h i n e s eM e d i c i n

4、 e , B e i j i n g1 0 0 7 0 0 , C h i H d l A b s t r a c t lO H e c t i v eT oe s t a b l i s ht h ec o l o m cc a r c i n o m al i v e rl n e l a s t a s e 8m o d e lf o rg e n ee x p r e s s i o np r o f i l e si nB A L B Cm i c e M e t h o d sL i v e rm e t a s t a s e sw e r e e s t a b l i s h

5、 e di nB A L B Cm i c eb yi n t r a s p l o n i ci n j e c t i o no f c o l o m ec a r c i n o m ac e l l s ( C 2 6 ) D i v i d e di n t oS p l e e nr e m o v a lg r o u pa n ds p l e e nR e s e r v a t i o n sg r o u p T oo b s e r v e t h es u r v i v a lt i m e T h el i v e rm e t a s t a s e sc

6、o n d i t i o n sw e r ed i s s e c t e da n dr e c o r d e df o ra I la n i n f l a l s R e s u l t sS p l e e nr e m o v a lg r o u p T h ei n e i d o n c er a t e so fl u n gm e t a s t a s e s w i l t s l 0 0 ，S u r v i v a l t i m e W a s l l - 1 5 d a y s ，t h e a v e r a g es u r v i v a l t

7、i m e o f m i n o r b e a r i n ga n i m a l s w a s ( 1 3 O 铷7 1 ) d a y s s p l e e n R e s e r v a t i o n s g r o u p ，T h e i n c i d e n c er a t e s o f l i v e r m e t a s t a s e s w a s1 0 0 , S m v i v a l t i m e W a s 弘1 5d a y s ，t h e a v e r a g es u r v i v a l t i m e o f t m n o r

8、 b e a r i n ga n i m a l s W a s ( 1 1 6 4 + 1 4 9 ) d a y s S p l e e nr e m o v a lg r o u p ，f i v e r t u m o rc o m p l e t e l yo c c u p i e dt h el e a v e s s p l e e nR e s e r v a t i o n sg r o u p ah u g e 劬0 ri nt h es p l e e n , l i v e rm e t a s t a s i sm o s t l ys c a t t e r e

9、 di nt h eg r a i ns i z eo f t h et u m o rn o d u l e m e t a s t a s i s C o n c l u s i o nG e n ee x p r e s s i o np r o f i l i n go f c o l o nc a n c e ri nm i c ef o rl i v e rm e t a s t a s i sm o d e ls h o u l db eu s e ds p l e e nr e m o v a li n j e c t i o nm e t h o d 【K e yw o r

10、d s 】C o l n i cc a r c i n o m a ；L i v e rm e t a s t a s e s ；A n i m a lm o d e l 随着分子生物学的深入研究，基因芯片作为基因组及后基因组时 代的主要研究技术。已成为揭示药物作用机制的重要方法。基因芯片 检测技术的前提是成功而适用的动物模型，首先需要获得足够的R N A 检测量，所以成功的造模方法是研究课题成败的关键所在。下面就我 们近期进行的结肠癌肝转移的造模方法总结如下。 1 材料和方法 1 1 材料 1 1 1 实验动物 4 - 6 周龄体质量2 0 - 2 4 8 的B A L B C 、鼠雄性(

11、6 ) 8 1 只，由北 京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物许可证号：京动许字 ( 2 0 0 0 ) 第0 0 4 号总0 4 9 号，在级动物实验室饲养。 1 1 2 瘤株 小鼠结肠癌C 2 6 细胞株( 美国引进，广安门医院肿瘤实验室惠 赠) 。经3 次皮下接种传代后，无菌条件下摘取瘤体，生理盐水洗 涤，剪成小块，匀浆，离心后取沉淀，反复3 次，培养于l O 新生牛 血清和R P M I l 6 4 0 培养液( 含青霉素1 0 0 U m L ，链霉索1 0 0 U m L ) ，置 3 7 “ C 、含5 C O ：培养箱中3 d ，每日换液。将细胞液机械吹打成单个细 胞，离心

12、取沉淀，加生理盐水调整细胞浓度为7X1 0 5 m L ，观察细胞 活力 9 5 ，备用。 1 2 方法 1 2 1 脾脏注射切脾法 随机选取3 9 只小鼠称重，采用0 5 的戊巴比妥钠( 5 0 m g k g ) 腹 腔内注射麻醉，3 5 r a i n 麻醉成功后，用胶布固定小鼠于手术台上。安 + 通讯作者 尔碘皮肤消毒，左侧腋后线肋缘下纵行切口，长0 5 一l e m ，进腹后于 腹外侧找到柳叶状脾脏。牵出腹腔外，用l m L 注射器从脾下极进针， 将瘤细胞液0 2 m L 注射于脾内，拔针后，酒精棉球按压针眼，轻轻按 揉脾脏5 m i n ，使瘤细胞经脾静脉进入肝脏，注射区苍白隆起消

13、失后， 结扎脾蒂，切除脾脏，查无出血，依次问断缝合肌肉、皮肤关腹。术 后继续在级动物实验室饲养。 1 2 2 脾脏注射保脾法 造模小鼠4 2 只称重，采用0 5 的戊巴比妥钠( 5 0 m g k g ) 腹腔内 注射麻醉，3 - 5 m i n 麻醉成功后，用胶布固定小鼠于手术台上。安尔 碘皮肤消毒，左侧腋后线肋缘下纵行切口，长0 5 - 1 c m ，进腹后于腹 外侧找到柳叶状脾脏，牵出腹腔外，用1 m L 注射器从脾下极进针， 将瘤细胞液0 2 m L 注射于脾内，拔出针头后酒精棉球压迫注射部位 1 2 m i n ，查无出血，依次间断缝合肌肉、皮肤关腹。 造模后死亡1 只，考虑失血过多

14、致死。 2 结果 造模后1 5 d 内自然死亡小鼠3 5 只，切脾组2 1 只，保脾组1 4 只，于第 1 2 天处死小鼠2 3 只。切脾组8 只，保脾组1 5 只，第1 5 天将剩余d x 旯2 2 只全 部处死，切脾组1 0 只，保脾组1 2 只。切脾小鼠自然生存期l l - 1 5 d ，平均 ( 1 3 0 5 O 7 1 ) d ，保脾小鼠自然生存期9 - 1 5 d ，平均( 1 1 6 4 + 1 4 9 ) d 。 尸检小鼠肝脏均有转移转移率为1 0 0 。切脾小鼠肝各叶皆布 满大小不一的瘤结节，大部分小鼠肝脏无正常肝组织，完全被肿瘤占 据，肝重多3 5 9 以上，保脾小鼠脾内

15、肿瘤巨大，肝内转移灶较少，肝 l 广东省中山市人民医院( 5 2 8 4 0 0 ) 2 北京中医药大学东直门属医院( 1 0 0 7 0 0 ) ， 万方数据 5 4I 论 著 中国医药指南2 0 1 0 年6 月第8 卷第1 7 期G u i d eo f C h i n aM e d i c i n e ，J u n e2 0 1 0 ，V 0 1 8 ，N o 1 7 脏形态，重量无明显变化，大多数为散在的米粒大小瘤结节转移。最 大瘤结节为0 8X O 5 c m ，肝重多为0 8 9 左右( 图1 ) 。 3 讨论 结肠癌是一种常见恶性肿瘤。发病率在世界范围内为恶性肿瘤的 A ：切脾

16、组B ：保脾组 图l小鼠结肠癌肝转移造模对比 第3 位，肝脏是结肠癌常见的转移部位，l5 - 2 5 的患者在确诊已发 生肝转移，2 0 - 3 5 的患者转移灶仅出现在肝脏，5 0 7 0 的晚期 结肠癌患者出现肝转移。结肠癌肝转移是结肠癌患者死亡的主要原 因，因此，结肠癌肝转移的治疗日益受到临床的重视。而寻找合适的 动物模型可以为结肠癌肝转移的研究提供良好的实验基础。 K o z l o w s k i 等提出研究肿瘤肝脏转移的最佳模式是从脾脏内植 入瘤细胞，许勤等旺1 同法用B A L B C d 、鼠脾内注射小鼠结肠腺癌细胞 ( C T 2 6 ) 造模成功率1 0 0 。左国华等1

17、3 月 B A L B C - n u n u d 、鼠脾内注 射人结肠癌低分化腺癌细胞株L S l 7 4 T 制造肝转移模型，成功率也达到 1 0 0 。韩斌【4 1 将小鼠结肠癌细胞( C T 2 6 ) 悬液接种于6 1 5 d 、鼠脾被膜 下建立结肠癌肝转移模型，结果肝转移发生率为9 3 3 3 。 脾脏注射瘤细胞液造模模拟了结肠癌根治术后血行转移肝脏的途 径和过程，造模成功率高。脾脏注射后保脾小鼠肝转移率为1 0 0 ，但 是，肿瘤多为散在的瘤结节。数目较小体积较小，可能无法满足较 大组织量的检测要求。同时，由于脾内肿瘤较大，小鼠常较早死于脾 内肿瘤。无法满足多个时间点检测的需要。

18、脾脏注射瘤细胞液切脾法 则可获得转移肿瘤组织较多，能满足各种检测方法取材的需要，尤其 是基因芯片检测取材需近5 0 0 m g 组织，且小鼠生存时间较保脾组长， 可以满足多个时间点的取材。另外，在切断脾蒂前将脾脏完全暴露， 便于进针注射及结扎、切断脾蒂，避免了脾脏大出血减少动物造模 的死亡率。 因此，小鼠结肠癌肝转移模型的建立以脾脏注射瘤细胞液后切脾 法最佳，尤其适用于结肠癌肝转移的基因组表达谱研究，可同时满足 检测组织量及选取多个时间点的要求。 参考文献 【l 】K o z l o w s k iJ M ，F i d l e rU ，C a m p b e l lD E ，e ta 1 M

19、e t a s t a t i cb e h a v i o ro f h u m a nt u m o rc e l ll i n e sg r o w ni nt h en u d em o u s e J C a n c e rR e s ， 19 8 4 ，4 4 ( 8 ) ：3 5 2 2 - 3 5 2 9 【2 】许勤，吴文溪，马利民，等小鼠结肠腺癜肝转移模型的建立忉实用 癌症杂志，2 0 0 0 ，1 5 ( 5 ) ：4 5 6 - 4 5 7 3 】左国华，葛海燕人结肠癌裸小鼠肝转移模型的建立【J 】中华实验 外科杂志，1 9 9 9 ，1 6 ( 4 ) ：3 7 3

20、4 】韩斌6 1 5 d 、鼠结肠癌肝转移模型的建立【J 】医药论坛杂志，2 0 0 5 ， 2 6 ( 2 3 ) ：2 6 - 2 7 盐酸氨溴索雾化吸入治疗慢性阻塞性肺疾病患者15 1 lt t 缶床分析 王智慧彭树弈 【摘要】目的探讨盐酸氨溴索雾化吸入治疗慢性阻塞性肺疾病的临床效果。方法1 5 1 例慢性阻塞性肺患者被随机分为实验组( n = 7 7 ) 和 对照组( n = 7 4 ) ，对照组给予常规治疗，实验组在常规治疗基础土给予盐酸氨溴索雾化吸入治疗。结果实验组总有效率为9 8 7 ，显效率 为9 2 2 ，对照组总有效率为8 7 8 ，显效率为7 1 6 ，实验组疗效显著优于

21、对照组( P 0 0 5 ) 。结论盐酸氨溴索雾化吸入结合常规础 治疗应用于慢性阻塞性肺患者，能显著提高临床效果，改善患者生活质量，值得在临床上应用和推广。 【关键词】盐酸氨溴索；雾化吸入；慢性阻塞性肺疾病 中图分类号：R 5 6 3 8文献标识码：B文章编号：1 6 7 1 - 8 1 9 4 ( 2 0 1 0 ) ，7 0 0 5 4 - 0 2 T h eC l i n i c a lA n a l y s i sO i lA m b r o x o l h y d r o c h l o r i d eo fO x y g e nN e b u l i z a t i o nu s

22、e di n 1 5 1C a s e so fP a t i e n t sw i t hC h r o n i cO b s t r u c t i v eP u l m o n a r yD i s e a s e W A N GZ h i - h u i , P E N GS h u - y i ( D e p a r t m e n to f I n t e rM e d i c i n e ，Z i m e nC e n t r a lH o s p i t a l , S h u a n g f e n g4 17 7 0 0 , C h i n a ) 【A b s t r a

23、 c t J0 b j e c t i v eT oe x p l o r et h ec u r a t i v ee f f e c to f a m b r o x o l h y d r o c h l o r i d eo f o x y g e nn e b u l i z a t i o nu s e di nC O P D M e t h o d s1 5 1c 粼so f C O P Dw e r e r a n d o m l yd i v i d e , di n t oe x p e r i m e n t a lg r o u p ( n = 7 7 ) a n dc

24、 o n t r o lg r o u p ( n = 7 4 ) C o n t r o lg r o u p sw e r eg i v e nr o u t i n et r e a t m e n t ，a n de x p e r i m e n t a lg r o u pW e r e a d d e dt oa m b r o x o l h y d r o c h l o r i d eo fo x y g e nn e b u l i z a t i o no nb a s eo fc o n t r o lg r o u p R e s u l t sT h et o t

25、 a le f f e c t i v er a t ei ne x p e r i m e n t a lg r o u pw a s9 8 7 t h e e x c e l l e n tr a t eW a s9 2 2 ，a n dt h ed a t ai nc o n t r o lg r o u pW a s8 7 8 a n d7 1 6 ，t h ec l i n i c a le f f e c ti ne x p e r i m e n t a lg r o u pw e r es i g n i f i c a n t l yb e t t e rt h a nt h

26、 a ti n c o n t r o lg r o u p ( P O 0 5 ) C o n c l u s i o nA m b r o x o i h y d r o e h l o r i d eo fo x y g e nn e b u l i z a t i o nc o m b i n e dw i t hr o u t i n et h e r a p yu s e di nC O P D p a t i e n t s ，c a ns i g n i f i c a n t l y e n h a n c ec l i n i c a le f f e c ta n di

27、m p r o v et h el i f eq u a i l t yo f p a t i e n t s ，S Oi td e s e r v e da p p l i c a t i o na n dp r o m o t i o ni nc l i n i c a lw o r k 【K e yw o r d s lA m b r o x o l h y d r o c h l o r i d e ；O x y g e nn e b u l i z a t i o n ；C h r o n i co b s t r u c t i v ep u l m o n a r yd i s e a s e 慢性阻塞性肺疾病( c h r o n i co b s t r u c t i v ep u l m o n a r yd i s e a s e ，C O P D ) 是常见的呼吸系统慢性疾病，患病率高。以不完全可逆的气道阻塞为湖南省双峰县梓门桥镇中心医院内科( 4 17 7 0 0 ) 万方数据