木犀草素对大鼠主动脉的舒张作用及相关机制研究.pdf

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1、木犀草素对大鼠主动脉的舒张作用及相关机制研究 蒋惠 娣 ， 汝海龙 ,3 - ， 王霄霞 ， 夏强 2 ， 屠洁 2 ( 1 . 浙 江 大 学 药 学 院 ， 浙 江杭 州3 1 0 0 3 1 ;2 . 浙 江 大 学 医 学 院 ， 浙 i C. 蒯们1 0 0 3 1 ; 3 . 杭 师范学院医学院， 浙江 杭州3 1 0 0 1 2 ) 摘要: 目的观察木犀草素的舒血管作用并探讨其作用机制方法大鼠胸主动脉环张力侧定法结果在内皮完整及去 内皮血管上， 木 犀草素均浓度( 4 . 5 - 3 6 u m o l “ I 一 ) 依赖性地降低笨肾上腺素( P E ) 预收缩血管的张力， 拮

2、抗高钾引起的血管收 缩; 木犀草素 使P E 收缩曲 线非平 行右移， 且 使最大张力减小; L - N A M E , p r o p r a n o lo l 对木犀草素的 舒血管作用无显著影响; 钾通 道阻断剂T E A , 4 - A P , B a C l2 , 5 - 1 4 D 均能显著减弱木犀草素的血管 舒张作用; 木犀草素可以显著地对杭无钙、 无钾、 无钙环境下渐 复钙后由P E 引起的血管收缩结论木犀草素对血管的舒张作用表现为非内皮依赖性， 其舒张作用与其直接抑制电压依从 性钙通道、 受体操纵性钙通道、 细胞内 钙释放， 以 及激活钾通道有关， 而与。 , R 受体无关_

3、关键词: 木犀草素; 血管; 舒张; 机制 中图分类号: R 9 6 5文献标识码: A文章编号: 1 0 0 1 一 2 4 9 4 ( 2 0 0 5 ) 0 6 一 0 4 2 7 一 0 4 Va s o d i l a t i o n e f f e c t o f l u t e o l i n o n r a t t h o r a c i c a o r t a a n d i t s me c h a n i s m J I A N G H u i一 d i t ， R U H a i - l o n g 1 ,3 ， W A N G X ia o - x i a t ， X

4、 I A Q i a n g 2 ， T U h e 2 ( 1 . C o lle g e o f P h a rm a c e u t ic a l S c ie n c e s ， Z h ej i“ n g U - n i v e r s i ty , H a n 脚。 ， 3 1 0 0 3 1 ， C h i n a ; 2 . S c h o o l o f M e d i c i n e . Z . h e j i( r n g U n i v e r s i t y ， H a n g z h o u 3 1 0 0 3 1 ， C h i n a ; 3 . S c h o

5、 o l o f M e d i c i n e 刀l a n g z h o u N o r m a l C o l l e g e ， H a n g z h o u 3 1 0 0 1 2 , C h i n a ) A B S T R A C r : O B J E ( ,- I T V E T o i n v e s ti g a t e t h e v a s o d i l a t i o n e f f e c t a n d u n d e r l y i n g m e c h a n i s m o f l u t e o l i n . ME T H O D S T h

6、 e t e n s i o n o f r a t t h o - r a c i c a o r ta r i n g s w as m e a s u r e d . R E S U L T S L u t e o l i n ( 4 . 5 一 3 6 l t m o l - 1 一 ) c a u s e d th e c o n c e n t r a t io n - d e p e n d e n t r e l a x a t i o n o f e n d o th e l iu m - i n ta c t o r e n d o th e li u m - d e n

7、u d e d a o r ta r i n g s p r e c o n t r a c t e d w it h p h e n y le p h r in e ( P E , 1 0 一 “ m o l “ L 一 ) a n d h ig h l e v e l o f K ( 6 x 1 0 一 m o l “ L 一 ) . L u te o l i n c a u s e d u n p a r a l l e l s h i ft o f t h e P E c o n c e n t r a t i o n - r e s p o n s e c u r v e t o t

8、 h e r i g h t , r e d u ce d t h e m a x i m a l c o n t r a c ti o n i n d u c e d b y P E . L - N A M E a n d p r o - p r a n o lo l d id n o t a ff e c t. th e e f fe c t o f l u t e o l in o n r a t t h o r a c i c a o r ta r in g s , h o w e v e r 5 - h v d m x y d c c a n o a t e , te tr a e

9、th y l a tn m o n i u m , B a C 12 a n d 4 - a m i n o p y r i d in e r e d u c e d t h e v a s o d ila ti o n e f f e c t o f Lu t e o li n s i g n i f ic a n tl y . L u t e o l i n o h v io u s l y r e d u c e d P E i n d u c e d t r a n s ie n t c o n tr a c ti o n i n C a t + - f r e e m e d i u

10、 m a n d K + - f r e e s o l u t io n , a n d P E in d u c e d c o n t r a c ti o n a f te r s t e a d y c o n tr a c ti o n in f r e e C a t s o l u t io n . C O N C L U S I O N L u t e o l i n in d u c e d e n d o t h e l iu m - in d e p e n d e n t r e la x a t io n i n r a t th o r a c ic a o r

11、ta . T h e m e c h a n i s m A v a s r e la t e d t o th e in h i b i ti o n o f v o l t a g e - d e p e n d e n t C a t 十 h a n n e l ( V D C ) ， re c e p t o r - o p e r a t e C a t 十 。 h a n n e l ( R O C ) ， th e r e le as e o f in t r a c e l l u la r C a z a n d t h e a c t i v a ti o n o f K

12、十 c h a n n e l 一a n d (3 - a d r e n o c e p t o r *， n o t i n v o l v e d i n i t s r e l a x a t i o n . K E Y WOR D S : l u t e o l i n ; a o r t a ; r e l a x a t i o n ; m e c h a n i s m 木犀草素为黄酮类化合物中的代表性成分， 存 在于菊花、 四方篙、 忍冬花等许多天然药物和蔬菜、 水果中。含木犀草素_, f 的卜 J 服制剂在肠道菌群作用 下也可转变成木犀草素被吸收二近年的研究显示， 木犀草素

13、具有抑制肝星状细胞增殖及胶原合成作 用川， 抗氧化作用 2 1 ， 蛋白激酶C 抑制作用川。早 年的研究表明， 木犀草 素具有降低实验动物血压 “ ! ， 降 低狗 冠脉阻力， 增加狗冠动脉流量的作用 5 1 。 虽 然已有文献报道黄酮类化合物( 包括木犀草素) 血管 舒张作用的 结构活性关系厂 6 1 ， 但目 前仍未见木犀草 素作用机制的报道。本研究利用离体大鼠胸主动脉 环模型， 观察木犀草素的舒血 管作用及作用机制。 1 药品与试剂 S D 雄性大鼠2 4 。 一 2 6 0 g ( 浙江省医科院实验动 物中心) 。木犀草素、 L - N - 硝基精氨酸甲醋( N t - n i - t

14、 m - L - a r g i n in e tn e t h y l e s t e r , I , 一 N A M E ) ， 4 - 氨基毗U T ( 4 - a m in o p y r i tn i d e , 4 - A P ) ， te t r a th y 1 a m o n iu m( T E A ) ， 5 一 羚基 癸酸( 5 - h y d r o x y d e c a n o a t e , 5 - H D ) ， 普蔡洛尔( p r o p r a - n o l o l ) , 茉肾上腺素( p h e n y le p h n i n 0 . 0 5 认为无

15、统计差异。 3 结果 3 . 1 木犀草素的舒血管作用 4 2 8 C h i n P h a r m J , 2 0 0 5 M a r c h ， V o l . 4 0 N o . 6 木犀草素可显著舒张由P E引发的血管收缩， 且在内 皮完整及去内皮血管， 其舒张程度无统计差 异， L - N A M E 不能减弱或阻断木犀草素对P E 预收缩 血管的舒张作用。见图t o 加00806040 次哥众扭念令 0 4 . 5 9 1 8 3 6 c / Wo l 工 一 ， 图1 木犀草素对P E预收缩血管的舒张作用以及 L - N A M E 对木犀草素舒血管作用的影响. x 土 、 任

16、 3 一 去内皮组( n =1 5 ) ; - 白 卜一内皮完整组( n = 1 5 ) ; - F i g 1 E ff e c t o f l u te o l i n o n P E - i n d u c e d c o n t r a c t io n i n a o r ta r i n g s w i t h e n d o t h e li u m( n=1 5 ) o r w i t h o u t e n d o t h e li u m( n=1 5 ) a n d t h e e ff e c t o f 1 . 0 x 1 0 一 4 m o l - L - 1 L

17、- N A M E o n l u t e o li n i n d u c e d re - l a x a t io n i n t h e e n d o th e l iu m - i n t a c t a o r ta r in g s ( n = 1 0 ) o f r a t . x 士 S 决 一 e n d o ( 一 ) ; J 一 e n d o ( + ) ; 峨 二 )一 L - N A ME ( e n d ( ， 十 ) 高钾引起血管收缩， 木犀草素可以浓度依赖性 地舒张高钾引起的血管收缩， 且在内皮完整及去内 皮血管上作用无明显差别， 见图2 0 00000n

18、 刀141J21 罗/并众冲豁取 0 4. 59 1 8 3 6 c / 1 u n o l L 图 2 x 士 S 个- M e2 木犀草素对高钾引起血管收缩的舒张作用 . n 二1 0 , 血管内皮完整组; 闷 卜 E ff e c t o f l u t e o li n 去内皮血管组 o n K C l - i n d u c e d c o n t r a c t i o n i n a o rt a r i n g s w i t h e n d o t h e li u m o r w i t h o u t e n d o t h e li u m. K C 1 w a s u

19、 s e d a t c o n c e n t r a - t i o n o f 印 仙 n o l - L - 1 . n = 1 0 , x 士 S 戈卜一 c 司 。 ( + ) ; 4-一 e n d o ( 一) 3 . 2 木犀草素舒血管作用与。 ， p 受体的 关系 P E 引起血管收缩， 木犀草素( 9 , 3 6 rt m o l “ L - 1 ) 引起 P E收缩反应曲线非平行右移， 且最大收缩程 度降低， 见图3 0 R 一 受 体阻断剂p r o p r a n o lo l ( 1 . 0 x 1 0 - 6 m o l - L - 1 ) 的存在并未削弱木犀草

20、素的舒血管作用( 图略) 。 3 . 3 木犀草素舒血管作用与C 扩 + 通道的关系 无钙环境下， 当P E预收缩达平台， 再逐渐加人 钙， 木犀草素( 1 8 N m o l - L - 1 ) 可显著降低加人C a t 十 中国药学杂志2 0 0 5 年3 月第4 0 卷第6 期 万方数据 7 - 1 g c / m a t - L 图3 木犀草素对P E 量效曲 线的影响. n = 8 , x 1 s 4 卜一 对照组; 一 木犀草素组( 9 p tm 1 - L - 1 ) ; 4 1 U一 木犀草素组( 3 6 p o o l L - 1 ) 瑰 3 C o n c e n t r

21、a t io n - r e s p o n s e c u r v e s o f e n d o t h e li u m - i n t a c t a o r t a t o p h e n y l e p h r in e i n th e a b s e n c e ( c o n tr o l ) o r p r e s e n c e o f l u t e o l i n . n = 8 , x士s 闷 卜一 m n tm l ; “ 一 lu te o li n ( 9 lu m l “ L - 1 ) ; -W 一 lu te o l in ( 3 6 u m l “ L

22、 一 1 ) 引起的血管张力升高， 见图4 0 0 . 0 1 41 ) 和( 0 . 9 8 7 1 0 . 0 1 1 9 ) ( n = 8 ) ， 两者有统计差 异( P P P 0 .0 1 4 讨论 本研究显示， 木犀草素可以浓度依赖性地舒张 P E 及K C l 引起的血管收缩， 且在内皮完整及去内皮 血管上无统计差异。在内皮完整血管上， 一氧化氮 合酶抑制剂 L - N A M E 不能削弱木犀草素对 P E预收 缩血管的舒张作用， 上述结果提示， 木犀草素的舒血 管作用为非内皮依赖性。 P E 通过激动 a 一 受体而引起血管平滑肌张力浓 度 依 赖性 地提高， 在木 犀草素

23、( 9 , 3 6 p m o l “ L - 1 ) 存在 下， P E引起血管收缩的量效曲线非平行右移( 图 3 ) ， 且最大收缩幅度减小。这一结果提示， 木犀草素 非竞争性地拮抗 P E引发的血管收缩， 因此木犀草 素的舒血管作用并非拮抗。 受体所致。 R 受体阻断 剂p r o p r a n o l o l 不能显著降低木犀草素的舒血管作 用， 推测木犀草素的舒血管作用也不是通过激动R 受体所致。 血管平滑肌上存在受体操纵性钙通道( R O C ) 和 电压依从性钙通道( V D C ) ， 它们可分别被 P E 和K + 激活9 l 。 P E 通过胞内C 扩 十 释放及胞外钙经

24、R O C 内 流而引发血管收缩。本研究显示， 木犀草素抑制P E C h i n P h a r m J , 2 0 0 5 Ma r c h， V o l . 4 0 N o . 64 2 9 00000 00000 54今、21 求、只米扣同 别6040加 水、赞中仲米物 万方数据 弓 发的血管收缩， 提示其可能抑制肌浆网C a t + 释放 和( 或) 抑制R O C 。在无 K + 溶液中， V D C被抑制， 木 犀草素可以显著降低无钾液中P E引发的血管收 缩， 进一步提示其具有抑制胞内C a + 释放和( 或) 抑 制R O C的作用。 无钙环境下P E引起收缩达稳定后再渐加钙

25、， 木犀草素对血管的进一步收缩具有显著的抑制作 用， 说明木犀草素可能通过抑制细胞外钙内流来舒 张血管。木犀草素对高钾引起的血管收缩有明显抑 制作用， 推测木犀草素可以抑制电压依从性钙通道， 减少细胞外钙内流。在无钙液中加人 P E ， 此时 P E 引起的血管收缩为其胞内钙释放所致， 在第 2 次加 P E 前加木犀草素1 8 r m o l “ L - I , P E 引起的血管张力 变化之比c o n 2 / c o n l 显著降低( 0 . 8 5 3 土0 . 0 1 4 1 v s 0 . 9 8 7 土 0 . 0 1 1 9 ) ， 提示木犀草素舒血管作用与抑制 细胞内钙释放

26、有关。 K C l 通过细胞膜去 极化而激活V D C 9 ， 木犀草 素抑制 K C l 弓 1 发的血管收缩， 提示其具有抑制 V D C 的作用。 K 十 通道在调节血管平滑肌收缩及血管张力中 具有重要的作用。激活血管平滑肌上的K 十 通道， 往往引起细胞膜超极化， 从而抑制细胞外钙内流， 引 起血管 舒张 Io l 。 血管 平滑肌上主 要存在4 种K + 通 道: A T I 敏感K 十 通道( K A T ) 、 C 扩 十 激活的K 十 通道 ( K c a ) 、 电压敏感型 K + 通道( K v ) 及内向整流型 K + 通道( K IR ) , g l y b e n c

27、 l a n ri d e 为K A Y 非特异性抑制剂， 5 - H D 为线粒体 A T P 敏感钾通道( m it o - K A TP ) 抑制剂， T E A , 4 - A P 和B a C 12 分别为K c a , K v 及K IR 抑制剂 ” 。 本研究显示: 5 - H D , T E A , 4 - A P , B a C b 均可显著削弱木 犀草素的血管舒张作用， 提示木犀草素的血管舒张 作 用还与其激活K + 通道有关。K A TP ， 特别是m i to - K A T P 的激活， 在抗心肌缺血再灌注损伤中具有非常 重要的作用“ ， 因此木犀草素对心肌缺血 再灌

28、注损 伤的作用值得进一步研究。 总之， 本研究结果表明， 木犀草素对大鼠主动脉 产生非内皮依赖性舒张作用， 其作用机制可能与抑 制V D C , R O C ， 降低细胞内钙释放以及激活 K + 通道 有关， 而与a 受体及R 受体无关。木犀草素的血管 舒张作用可能是其降血压作用的主要机制， 其对离 子通道作用的直接依据正在进一步研究中。 参考文献 1 赵稳兴， 梁祟礼， 陈忠民， 等. 木 犀草素抑制肝星状细胞增殖及 其胶原合成 J . 中 华肝脏病杂志， 2 0 2 , 1 0 ( 3 ) : 2 0 4 . 2 A r e i a s F M , R e g o A C , O l i

29、v e i r a C R . A n t i o x id a n t e ff e c t o f fl a v o n o i d s a l - t e r a s c o r b a t e / F e 2 - i n d u c e d o x i d a t i v e s t re s s i n c u l t u r e d re t i n a l c e l l s J ， B i o c h e m P h a r m a c o l , 2 0 0 1 ， 6 2 ( 1 ) : 1 1 1 . 3 A g u ll o C , C a m e t - P a y

30、r a s tre L , M a n e u ti S , e t a l . R e l a t i o n s 卯b e tw e en fl a v o n o id s t ru c tu re a n d i n h ib it i o n o f p h o s p h a t id y l i n o s i t o l 3 - k in a s e : A c o m p a r i s o n w i t h t y ro s i n e k i n a s e a n d p ro t e in k i n a s e C i n h ib i t i o n J . B

31、 w c h e n a P h a r m a c o l ， 1 9 9 7 , 5 3 ( 1 0: 1 6 4 9 . 4 汪丽燕， 韩传环， 王萍， 等 半合成木犀草素的减压作用L J . 中 国药理学通报， 1 9 8 6 , 2 ( 2 ) : 3 4 . 5 汪丽燕， 韩传环. 木犀草素对冠脉血流动力学的影响L J . 中国 药理学通报， 1 9 9 2 , 8 ( 5 ) : 3 8 8 . 6 C h a n E C , P a n n a n g p e t c h P , W o o d m a n O L . R e l a x a t i o n t o fl a

32、v o n e s a n d fl a v o n o l s i n r a t i s o l a t e d t h o r a c i c a o rt a : m e c h a n i s m o f a c ti o n a n d s t r u c - t u r e - a c t i v i t y re l a t i o n s h i p s J . J C a r d io u a s e P h a r r n a c o l , 2 0 0 0 , 3 5 ( 2 ) : 3 2 6. 7 K u b o ta Y K , T a n a k a N K ,

33、 U m e g a k i K , e t a l . C i n k g o b i l o b a e x t r a c t - i n d u c e d r a l a x a t i - n o f r a t a o r t a i s a s - - ; i a t e d w i t h i n c r e a s e i n e n d o th e l i - ru n i n t r a c e l l u l a r c a lc iu m le v e l J . l i f e S c i ， 2 0 0 1 ， 6 9 ( 2 0 ) : 2 3 2 7 .

34、8 H u a n g Y , Y a o X Q , L a u C W , e t a l . R o le o f e n d o t h e l iu m in t h a p s i - g a r g in - in d u c e d a rt e r i a l r e s p o n s e s in r a t a o rt a J . E a r J P lta r m a c o l , 2 ( 1 0 0 , 3 9 ( 1 ) : 5 1 . X i o n g Z 沂 p e r e l a k i s N . R e g u l a t i o n o f L

35、- t y p e c a lc i u m c h a n n e l s o f v a s - c u l a r s m o o t h m u s c l e c e l l s J . J M o l ( : e l l C a r d io l , 1 9 9 5 , 2 7 ( l ) : 7 5 . N e l s o n M T , Q u a y le J M. P h y s i o l o g ic a l r o l e s a n d p r o p e rt i e s o f p o t a s s i - u m c h a n n e l s i n a

36、r t e r i a l s m o o th m u s c l e J . A m J P h y s i o l , 1 9 9 5 , 2 6 8 : C 7 9 9. F e l r e r M, Ma n n J , E n c a b o A , e t a l . R o l e o f K c h a n n e l s and s o d i - u m p u m p i n th e v a s o d i l a t io n i n d u c e d师a c e t y l c h o l i n e , n i tri c o x i d e , a n d

37、c y c l i c G M P i n th e r a b b i t a r o t a J lG e n P h a r m a e o l ， 1 9 9 9 , 3 3 几lesnU n，1 LI厂一一L 1 1 1 2 S e i n o S , T a k a s h i M . P h y s i o l o g i c a l an d p a t h o p h y s i o l o g ic a l ro l e s o f A T l 一 * n s i t i v e K c h an n e l s J . P r o g B i o p h y s M o

38、l B io l , 2 0 0 3 , 8 1 ( 2 ) : 1 3 3 . ( 收稿日期: 2 0 0 4 - 0 4 0 6 ) 州川 令 朋 令 V II I令 川 ( 令 I ll 令 川 一令 朋 令 川 令 川令u 令u ,+ w i令 湘+ i 川 今 i w . m i今 川 降川令 u d . 令 il l令 川 险洲 令 冲山 令一 川令川1 . 一 令一 日 令旧1 +川1 今川1 今川1 令川一 今 山今一 ; u 令川I 令川 令1 一 一 令( 川令 I I 令一 川令 川令川1 + I.川 、 令 中国药学杂志 被 工程索引 收录 根据中国 科学院文献情报中 心查询 中国药学杂志 2 0 0 1 年至2 0 0 3 年被欲 工 程索引 ( E I C o m p e n - d e x ) 收录的文章共计7 8 7 篇。 +二一一今丢一+111+1111今三一+1111今三1+三一+ Ma r r h。 V o l . 4 0 N o . 6 一J，2mi 一Phann 一Chi，l 岌 ， 洲 ， 阳 一 令 4 3 ) + + + + + + + + l 中国药学杂志2 0 0 5 年3 月第4 0 卷第6 期 万方数据