广西黑衣壮族人群微粒体甘油三酯转移蛋白基因多态性与血脂水平的关系.pdf

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1、书书书 论著 基金项目： 国家自然科学基金资助项目 （30360038） 作者单位： 530021 南宁， 广西医科大学心血管病研究所 （黎荣山、 尹瑞兴） ； 广西医学科学实验中心 （林伟雄、 杨德寨） 通讯作者： 尹瑞兴， Email：yinruixing yahoo. com. cn 广西黑衣壮族人群微粒体甘油三酯转移蛋白 基因多态性与血脂水平的关系 黎荣山 尹瑞兴 林伟雄 杨德寨 【摘要】 目的 探讨广西黑衣壮族人群微粒体甘油三酯转移蛋白基因多态性 （MTP -493G/ T） 与血脂水平的关系。方法 采用整群抽样方法对 500 名 7 83 岁黑衣壮族人群的血压、 身高、 体重、 体

2、重指数、 血脂及载脂蛋白进行测定； 用聚合酶链反应结合等位基因特异性寡核苷酸探针点杂交法检 测 MTP -493G/ T 等位基因及其基因型分布频率； 用聚合酶链反应产物直接测序法进行验证。并将其 结果与当地的 500 名汉族人群作比较。结果 （1） 黑衣壮族人群 MTP -493 G 和 T 等位基因的频率 分别为 0. 74 和 0. 26， GG、 GT 和 TT 基因型频率分别为 0. 58 （289/500） 、 0. 33 （166/500） 和 0. 09 （45/ 500） ； 汉族人群 G 和 T 等位基因的频率分别为 0. 73 和 0. 27， GG、 GT 和 TT 基

3、因型频率分别为 0. 56 （281/500） 、 0. 34 （172/500） 和 0. 09 （47/500） ， 两族人群间比较， 差异无统计学意义。 （2） TT 基因型个 体的总胆固醇、 甘油三酯、 低密度脂蛋白-胆固醇 （LDL-C） 和载脂蛋白 B 水平明显高于 GG 和 GT 基因 型个体 （P 5. 17 mmol/ L 者为高胆固醇血 症， 甘油三酯 1. 70 mmol/ L 者为高甘油三酯血症， 总胆固醇 5. 17 mmol/ L 和/ 或甘油三酯 1. 70 mmol/ L 者为高脂血症 6。 2. 高血压诊断标准： 按 1999 年世界高血压联盟 规定的标准，

4、收缩压140 mm Hg （1 mm Hg = 0. 133 kPa） 和/ 或舒张压90 mm Hg 确诊为高血 压， 调查前 2 周服用降压药者也纳入确诊高血压组， 单纯收缩期高血压按收缩压140 mm Hg， 而舒张 压 24 kg/ m2为超重， 体重指数 28 kg/ m2为肥胖。 四、 统计学处理 建立 Excel 数据库， 计量资料以 -x s 表示， 应用 SPSS 10. 0 统计软件分析数据。两个样本均数间的 比较用 t 检验， 多个样本均数间的比较用方差齐性 检验和方差分析， 多个样本均数间的两两比较用 q 检验。计数资料用百分率表示， 率的比较用 x2检验 和四格表确切

5、概率法。 结果 一、 PCR 产物电泳结果 样品基因组 DNA 经 PCR 扩增和 2% 琼脂糖凝 胶电泳成像后， 均可确认有 461 bp 核苷酸序列的目 的基因存在 （图 1） 。 M. 100 bp 标准参照物； 1、 2 和 3. 检测样品并加 230 bp 条带的内参照基因； 4. 检测样品但不加内参照基因 （待 用于测序的样品） ； 461 bp 条带为目的基因 图 1 样品 PCR 产物的电泳结果 二、 PCR/ ASO 点杂交结果判定 只能与包含 G 等位基因探针杂交显影的样品 为 GG 基因型； 只能与包含 T 等位基因探针杂交显 影的样品为 TT 基因型； 可分别与包含 G

6、 和 T 等位 基因探针杂交显影的样品为 GT 基因型 （图 2） 。 三、 DNA 测序结果 PCR/ ASO 点杂交结果显示为 GG、 GT 和 TT 基 因型者， DNA 测序结果也分别证实在 MTP 基因启 动子区域核苷酸序列 （MTP - 493G/ T） 存在单碱基 突变， 呈 GG、 GT 和 TT 基因型 （图 3 5） 。 四、 等位基因和基因型分布频率 黑衣壮族人群 MTP -493 G 和 T 等位基因的频 率分别为0. 74 和0. 26， GG、 GT 和 TT 基因型频率分 4942中华医学杂志 2005 年 9 月 14 日第 85 卷第 35 期 Natl Me

7、d J China，September 14， 2005， Vol 85，No. 35 表 2 3 种基因型的血脂及载脂蛋白水平比较 （-x s） 基因型 例数 总胆固醇 （mmol/ L） 甘油三酯 （mmol/ L） LDL-C （mmol/ L） HDL-C （mmol/ L） Apo A1 （g/ L） Apo B （g/ L） GG5704.5 1.6*1.6 0.6#2.2 0.6#2. 1 0. 41. 4 0. 20. 8 0. 5# GT3384.6 1.8*1.6 0.6#2.3 0.7#2. 1 0. 41. 4 0. 20. 8 0. 2# TT925.0 1.82.3

8、 1.32.5 1.22. 1 0. 41. 4 0. 11. 0 0. 4 F 值3.0747.805.780. 661. 757. 49 P 值0. 050. 050. 05， 表 1） 。 表 1 黑衣壮族及汉族 MTP -493 基因型及 等位基因频率分布 组别例数 MTP 基因型 GGGTTT 等位基因 GT 黑衣壮族 500 289 （0. 58） 166 （0. 33） 45 （0. 09）0. 740. 26 汉族500 281 （0. 56） 172 （0. 34） 47 （0. 09）0. 730. 27 x2值0. 2623*0. 2567* 注： *P 0. 05 五、

9、 GG、 GT 和 TT 基因型对血脂谱的影响 TT 基因型个体的总胆固醇、 甘油三酯、 LDL-C 和 Apo B 水平明显高于 GG 和 GT 基因型个体 （P 0. 05 或 P 0. 01） ， 但 GG 和 GT 基因型者的总胆固 醇、 甘油三酯、 LDL-C 和 Apo B 水平比较差异无统计 学意义。3 种基因型者的 HDL-C 和 Apo A1 水平比 较， 差异也无统计学意义 （表 2） 。 讨论 MTP 由 2 个亚基以非共价键形成可溶性的二 聚体存在于内质网中。大亚基含 894 个氨基酸， 氨 基末端有 19 个氨基酸的信号肽， 不同种属间具有高 度同源性 8， 在含有

10、Apo B 脂蛋白的合成和转移中 起重要作用。大亚基功能缺失可引起 脂蛋白缺 乏症 9。人类 MTP 大亚基 cDNA 长约 55 kb， 定位 于 4 号染色体短臂 24 位点， 由 18 个外显子组成 7。 已有报道在 MTP 启动子区有 - 164T/ C、- 400A/ T 和 -493G/ T 等基因多态性。其中 -493G/ T 与血脂 及脂蛋白的代谢有密切关系。有资料显示 TT 基因 型与美国男性黑人的总胆固醇、 LDL、 甘油三酯和 Apo B 水平增高有联系 10， 11。2 型糖尿病患者中 TT 型者有较高的总胆固醇、 极低密度脂蛋白水平和较 小的 LDL 颗粒 12。但也

11、有研究发现 TT 基因型个 5942中华医学杂志 2005 年 9 月 14 日第 85 卷第 35 期 Natl Med J China，September 14， 2005， Vol 85，No. 35 体 13和 GT 基因型 2 型糖尿病患者14的总胆固醇、 LDL 和 Apo B 水平明显较低， 或 MTP -493G/ T 基因 多态性与血浆脂蛋白水平无关系。出现这种相悖结 果的原因可能与一些潜在的因素不同有关， 如样本 大小、 种族、 年龄、 体重指数和其他的环境因素等。 本研究控制了入选人群的基本特性， 在一般情况一 致的基础上， 黑衣壮族人群 MTP - 493G/ T 等位

12、基 因和基因型分布频率与汉族人群比较差异并无统计 学意义。这提示广西黑衣壮族与汉族人群可能具有 同源性， 或者 MTP - 493G/ T 基因的表达在不同种 族间没有显著差异。 Karpe 等 15研究显示 T 等位基因的转录活性几 乎是 G 等位基因的两倍， 提示 TT 基因型个体可能 具有更高的富含 Apo B 脂蛋白的生成率， 使富含 Apo B 脂蛋白的脂质水平增高。本研究也显示 TT 基因型个体的总胆固醇、 甘油三酯、 LDL-C 和 Apo B 水平明显高于 GG 和 GT 基因型。但未发现 TT 基因 型个体血脂水平的增加与其基因转录活性成正比。 其原因可能是 Apo B 的合

13、成是持续的， 如果一个新 生的 Apo B 分子没有得到足够的脂质， 那么它于分 泌前在内质网中将被快速降解， 所以 Apo B 和富含 Apo B 的脂蛋白从肝脏的分泌依赖于脂蛋白的降解 和合成之间的平衡。因此， 血浆中富含 Apo B 脂蛋 白增加的水平可以与增加的 MTP 水平不相称， 或者 在 TT 基因型个体中可能对过量的富含 Apo B 脂蛋 白存在有转录后修饰。 MTP -493G/ T 多态性对不直接来源于极低密 度脂蛋白产物的 HDL-C 和 Apo A1 并无影响。虽然 流行病学研究显示 HDL-C 和甘油三酯水平呈负相 关， 但本结果显示 HDL-C 和 Apo A1 在

14、 3 种基因型 中的差异并无统计学意义， 是否 TT 基因型个体的 甘油三酯水平还没有高到足以影响 HDL-C 水平的 程度， 或是否 TT 基因型中有一种未知的代谢调节 机制导致这种负相关不出现， 还有待于进一步研究。 有研究发现虽然 TT 基因型个体总是与高的富 含 Apo B 的脂蛋白水平相关， 但 TT 基因型的效应随 着年龄的增长而逐渐减弱， 总胆固醇和 LDL 水平随 年龄的增长而逐渐下降。因此认为连续的系列测定 比单次测定结果能更好地反映作用缓慢的基因效 应 10。这在我们今后的研究中是值得注意的。 参考文献 1Slight I，Bendayan M，Malo C，et al.

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