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1、中国普外基础与临床杂志2 0 0 4 年9 月第1 1 卷第5 期C h i n J B a s e s C l i n G e n e r a l S u r g , V o l . 1 1 , N o . 5 , S e p . 2 0 0 4 基础与实验研究 文章编号】1 0 0 7 - 9 4 2 4 ( 2 0 0 4 ) 0 5 - 0 4 2 4 - 0 4 大鼠手术后疲劳综合征模型的建立及其评价“ 杨建新 邓时贵“ 杨明 邱幸凡3 张六通3 【 摘要】 目的制作和评价大鼠手术后疲劳综合征模型。 方法完全模仿手术的全过程切除大鼠的部分肝 脏。 结果7 0 %肝切除实验大鼠一般情况
2、表现差， 体力耐受力下降， 出现一定程度的抑郁表现， 并在营养学指标、 小 肠勃膜应激反应损伤和肝脏白蛋白基因表达方面发生明显改变.结论切除7 0 %肝脏制作大鼠动物模型， 具有临 床术后疲劳综合征的基本特征， 可作为研究手术后疲劳综合征的实验动物模型。 【 关键词】手术后疲劳综合征大鼠动物模型肝切除基因表达 【 中图分类号】R - 3 3 2【 文献标识码】A E s t a b l i s h m e n t a n d A s s e s s m e n t o f R a t Mo d e l o f P o s t o p e r a t i v e F a t i g u e S
3、y n d r o me Y A N G J i a n - x i n “ , D E N G S h i - g u i ， Y A N G Mi n g， Q I UX i n - f a n ， Z H A N GL i u - t o n g . “ D e p a r t m e n t o f G e n e r a l S u r g e r y， T h e S e c o n d A 1 几 八 l i a t e d Ho s p i - t a l ， G u a n g z h o u 肠: i v e r s i t y o f T C M, G u a n g z
4、 h o u 5 1 0 1 2 0 ， C h i n a A b s t r a c t O b j e c t i v e T o e s t a b l i s h a n d a s s e s s t h e r a t m o d e l o f p o s t o p e r a t i v e f a t i g u e s y n d r o m e( P O F S ) . Me t h o d s T h e r a t mo d e l o f P O F S w a s d e v e l o p e d b y t h e p a r t i a l r e s
5、e c t i o n o f t h e l i v e r . T h e b e h a v i o r a l c h a n g e s p r i o r a n d p o s t t o o p e r a t i o n , t h e d i s o r d e r o f n u t r i t i v e i n t a k e a f t e r o p e r a t i o n , s t r e s s r e a c t i o n ( p a t h o l o g i c a l c h a n g e s o f mu - c o u s m e m b
6、 r a n e i n s m a l l i n t e s t i n e ) a n d t h e h e p a t i c a l b u m i n g e n e e x p r e s s i o n w e r e o b s e r v e d . R e s u l t s L o w b o d y t e m- p e r a t u r e , l o w e r s e n s i t i v i t y a n d r e a c t i v i t y w e r e f o u n d . T h e s e r u m l e v e l s o f
7、t h e i r o n , t o t a l p r o t e i n , a l b u m i n , g l o b u l i n a n d s o o n a s t h e i n d e x e s o f n u t r i t i o n o b v i o u s l y d r o p p e d . T h e i n j u r y o f t h e m u c o u s m e m b r a n e r e s u l t e d f r o m t h e s t r e s s r e a c t i o n a f t e r t h e r
8、e s e c t i o n o f t h e l i v e r . T h e g e n e e x p r e s s io n o f t h e a l b u m i n d e c r e a s e d i n t h e m o d e l g r o u p . C o n c l u s i o n T h e e x p e r i m e n t a l r a t m o d e l o f P O F S b y p a r t i a l r e s e c t i o n o f t h e l i v e r c a n b e u s e d f o
9、 r t h e i n v e s t i g a t i o n o f POF S . K e y w o r d s P o s t o p e r a t i o n f a t i g u e s y n d r o m e R a t A n i m a l m o d e l R e s e c t i o n o f l i v e r G e n e e x - p r e s s i o n F o u n d a t i o n i t e m G u a n g d o n g P r o v i n c i a l B u r e a u o f T C M ( N
10、 o . 0 9 9 5 1 1 ) 手 术 后 疲劳综合征( p o s t o p e r a t i v e f a t ig u e s y n - d r o me , P O F S ) 是外科手术后一个普遍存在的征候 群， 是外科手术后患者恢复期的主要并发症之一 。 许多学者认为， P O F S的发生其病因是多源性的， 与 手术创伤、 术后营养及代谢状态恶化、 骨骼肌收缩力 及耐力下降呈正相关 2 . 3 1 。机体在较强的创伤刺激 下， 最终可导致 P O F S的发生。 P O F S动物模型的建立以及评价系统的不断完 善， 对临床研究 P O F S具有重要理论和实际意义
11、。 肝部分切除术动物模型是由 H i g g i n s 等1 4 3 首先创 建， 几十年来一直作为研究肝细胞再生的经典模型。 在此基础上， 我们选择合适的切肝量， 刺激强度， 导致P O F S的发生， 建立了 型， 并对此模型进行评价， 现报道如下 即达到合适的 P O F S 动物模 【 基金项目 】 广东 省中医药管 理局科研项目 ( 编号; 0 9 9 5 1 1 ) 【 作者单位】1 . 广州中医 药大学二附院普外科( 广州 5 1 0 1 2 0 ) = 2 . 广东省中医院中心实验室;3 . 湖北中医学院基础部( 武汉 4 3 0 0 6 1 ) t 作者简介】杨建新( 1
12、9 5 7 年一 ) ， 男， 湖北省武汉市人， 医学博 士， 副教授， 主要研究外科围手术期中西医结合治疗。 1 材料与方法 1 . 1 实验动物 S D大鼠4 0 只， 清洁级， 体重 260 一3 00 g2 6 0 -3 0 0 ， 雌雄 各半， 由广州第一军医大学实验动物中心提供( 粤检 证字: 2 0 0 l A O 5 1 号) 。 1 . 2 造模方法 大鼠在饲养室适应 5d ， 编号称重， 查随机表将 其随机均分为 A, B , C , D 4组， 4组动物分别按 。 、 3 0 %, 5 0 %及7 0 %的切肝量切除部分肝脏。大鼠以 1 0 %水合氯醛按。 . 3 m l
13、 / 1 0 0 g 体重腹腔注射麻醉， 背位固定， 腹部用电推剪剃毛， 皮肤用碘酒、 酒精消 毒， 沿腹白 线开腹， 参照 H i g g i n s 等 4 1 的方法， 按预 定切肝量用双极射频电凝器切除肝脏。A组切开腹 万方数据 中国普外基础与临床杂志2 0 0 4 年9 月第1 1 卷第5 期 C h i n J B a s e s C l i n G e n e r a l S u r g , V o l . 1 1 , N o . 5 , S e p . 2 0 0 4 腔， 仅牵拉肝脏， 不切肝; B组大鼠按 0 . 8 1 g 肝重/ 1 0 0 g 体重比例切肝( 其中1
14、只大鼠因手术后出血次 日 死亡) ; C组及 D组切肝比例分别为 1 . 3 5 g / 1 0 0 g 体重和 1 . 9 0 g / 1 0 0 g 体重; D组切除肝脏的左叶 和中叶， 切除量占 全肝的7 0 %( 见图1 ) 5 , 6 1 。 所有模 型制作在上午8， 0 0 9， 0 0 之间进行。术毕腹腔 内注射5 %葡萄糖 5 m l ， 伤口缝合处涂少量的金霉 素眼膏， 术后大鼠自由进食、 饮水。 现， 发生率为 2 1 . 3 %， 与同期 D组比较差异有显著 性意义( P 0 . 0 5 ) ; 随着手术结束后时间的延长， 各组 动物悬尾挣扎不动时间逐渐缩短， 可能与手术
15、后动 物的自 行恢复能力有关。D组大鼠有8 0 . 0 %的大鼠 最大挣扎幅度在中位， 仅有 1 0 . 0 %能达到高位， 另有 1 0 . 0 %的动物最大挣扎幅度在低位， 与A , B , C组比 较差异有显著性意义( P 0 . 0 5 ) o 表 3 各组肝部分切除术后不同时相大鼠负重 游泳力蝎时间的变化( m i n , z 士 ， ) 组别。2d A组1 0 6 . 8 士1 . 3 B组9 7 . 1 士1 . 1 C组1 0 4 . 6 士1 . 2 “ D组1 0 3 . 7 士1 . 0 ” 与 A, B 组比较，* P 0 . 0 5 ) o C , D 组大鼠血清铁含
16、量及血浆转铁蛋白含量明显低于A 组， 差异有显著性意义( P 0 . 0 5 ) . 表 4 各组肝部分切除术后大鼠血清蛋白、 血清铁和血浆转铁蛋白含，测定结果 x 士 ， ) 组别 A组 B组 C组 D组 总蛋白( g / L ) 5 5 . 9 1 士2 . 1 5 3 . 1 士7 . 0 5 0 . 9 士4 . 0. 4 8 . 5 士5 . 5 * * 白蛋白( g / L )球蛋白( g / L )血清铁( K m o l / L )血浆转铁蛋白( g / L ) : 2 5 . 2 士2 . 1 2 5 . 4 士0 . 6 2 4 . 2 士1 . 2 2 3 . 4 士3
17、. 1 3 0 . 7 士4 . 0 2 7 . 7 士6 . 9 2 7 . 1 士3 . 9 2 6 . 0 士 4 . 0 “ 2 7 . 9 士4 . 3 2 9 . 3 士1 0 . 3 1 8 . 6 土3 . 0 * * 1 4 . 3 士 2 . 4 * * 0 . 6 4 士0 . 1 0 0 . 7 0 士0 . 3 0 0 . 4 0 士0 . 2 0 “ 0 . 4 8 士0 . 2 0 与 A组比较，* P 0 . 0 5 ; * * P 0 . 0 1 2 . 6 肝部分切除大鼠小肠猫膜损伤病理评价结果 小肠豁膜病理读片结果显示， D组大鼠的小肠豁 膜上皮损伤按照M
18、u l l e r 评分标准， 评为2 分( 5 / 1 0 ) 和 3 分( 5 / 1 0 ) 者各占一半。C组分布较分散， 。 分( 1 / 1 0 ) , 1 分( 5 / 1 0 ) , 2 分( 2 八0 ) , 3 分( 2 八。 ) 。B组大鼠 小肠豁膜评为。 分、 1 分、 2 分者的比率分别为4 / 9 , 4 / 9 和1 / 9 ， 未见 3 分。 A组大鼠小肠豁膜变化 0 分、 1 分的比率依次为6 / 1 0 和4 / 1 0 ， 未见2 分和3 分。 2 . 7 手术后大鼠肝脏白蛋白基因的表达结果 D组大鼠肝脏白蛋白表达明显减弱， 为 A组的 ( 2 7 . 0
19、士1 1 . 3 ) %， 差异有显著性意义( P0 . 0 1 , n =3 ) ; B , C组大鼠肝脏白蛋白表达也有不同程度 的减弱， 分别为 A组的( 9 1 . 7 士1 5 . 6 ) %( n =3 ) 和 ( 6 2 . 8 士1 3 . 9 ) % ( n =3 ) ， 其中， C组与 A组相比较 差异有显著性意义( P 0 . 0 5 , n =3 ) ， 而B组肝脏白 蛋白表达减弱不明显。本结果提示， C , D组大鼠肝 部分切除术后肝脏白蛋白基因表达明显受抑制， 肝 脏白蛋白表达抑制程度与手术切肝量多少相关。 3 讨论 手术后疲劳发生的根本原因是手术创伤所致的 应激反应
20、。当手术创伤达到一定程度时， 会引起机 体某些器官或系统的功能紊乱， 导致手术后疲劳的 发生、 发展。制作 P O F S大鼠动物模型的关键是找 到这个创伤的“ 度” ， 以及如何观察和评价它。根据 目前对人体P O F S的认识， 我们完全模仿手术的全 过程切除大鼠的部分肝脏， 然后观察其行为学指标、 营养学指标、 基因表达等以综合评价该模型。 3 . 1 一般观察 D组大鼠表现肌肉寒颤、 四肢冰冷等症状; 肛 温测试结果显示， 该组大鼠肛温明显低于 B组和 C 组， 至手术后第 6 天仍未见明显好转。该结果提示， 7 0 %肝切除大鼠出现了明显的体温下降、 四肢冰冷、 眯眼、 活动减少、
21、体力不支、 毛发枯搞、 对刺激不敏 感、 自我洁净能力下降等现象。 3 . 2 体力情绪 鼠尾悬挂实验的间断不动时间能在一定程度上 反映动物的肌无力， 同时， 间断不动时间也可以反映 动物出现抑郁倾向的情绪反应， 即悬尾挣扎不动时间 明显延长提示动物的情绪表现为“ 失望” 。游泳力竭 时间是反映动物体力及衡量动物是否疲劳的经典指 标。7 0 %肝切除大鼠悬尾不动时间明显延长， 负重游 泳力竭时间短， 挣扎幅度小; 3 0 %及 5 0 %肝切除大鼠 悬尾不动时间较 7 0 %肝切大鼠明显缩短， 游泳时间 长， 并有较大的挣扎幅度。提示 7 0 %肝切除后大鼠 出现明显体力不支， 并在一定程度上
22、出现抑郁倾向。 3 . 3 血清总蛋白、 白蛋白、 球蛋白含量变化 7 0 %肝切除后大鼠血清总蛋白和球蛋白含量明 万方数据 4 2 7 中国普外基础与临床杂志2 0 0 4 年9 月第1 1 卷第5 期 C h i n J B a s e s C l i n G e n e r a l S u r g , V o l . 1 1 , N o . 5 , S e p . 2 0 0 4 显下降， 白蛋白的变化在不同肝切除组大鼠中变化 不明显。蛋白的丢失可能是造成手术后疲劳的原因 之一。白蛋白的变化不明显， 提示白蛋白并非灵敏 的营养指标， 在血中的半衰期达 1 8 2 1 d ， 选择急性 反
23、应蛋白( P A, T F N和 R B P等) 可能会增加其敏感 性 1 1 7 。肝部分切除后， 大鼠血清总蛋白、 白蛋白及 球蛋白含量变化程度与手术切肝量多少有关， 切肝 量越多变化越明显， 与临床上患者术后营养学指标 变化相似 2 。 3 . 4 大鼠血清铁和血浆转铁蛋白含置的变化 因切肝量较多( 5 0 %, 7 0 %切肝) ， 导致肝脏合成 转铁蛋白明显受抑制， 短期内不足以补偿手术带来 的血浆转铁蛋白的丢失; 切肝量少( 3 0 %切肝) 的动 物， 肝功能正常， 可反馈性刺激肝脏大量合成转铁蛋 白， 增加机体血清铁的含量。 3 . 5 大鼠小肠猫膜损伤 大鼠肝部分切除术后，
24、累及小肠豁膜损伤， 小肠 勃膜广泛充血、 水肿、 大部分绒毛脱落甚至坏死等， 造成小肠营养吸收障碍， 是机体营养不良的重要原 因， 可加重 P O F S的发生。 3 . 6 肝脏白蛋白基因表达的比较 P O F S 大鼠模型实验结果显示， 7 0 %肝切除动物 肝脏白蛋白基因表达明显受抑制， 造成机体蛋白质丢 失、 合成障碍， 也是引起P O F S的重要原因。 综上所述， 7 0 %肝切除实验大鼠的一般情况表 现差， 体力耐受力下降， 出现一定程度的抑郁表现， 并在营养学指标、 小肠豁膜应激反应损伤和肝脏白 蛋 白基 因表达 等方 面发 生 明显 改变， 具 有 临床 P O F S的基本
25、特征。因此我们认为， 以7 0 %的比例 对大鼠进行肝部分切除所制作的大鼠模型， 适合作 为P O F S 研究的实验动物模型。 参考文献 1 R u b i n G J , H o t o p f M. S y s t e m a t i c r e v i e w a n d m e t a - a n a l y s i s o f i n t e r v e n t io n s f o r p o s t o p e r a t i v e f a t ig u e J . B r J S u r g , 2 0 0 2 ; 8 9 ( 8 ) : 9 7 1 2 C h r i s
26、 t e n s e n T , H o u g a r d F , K e h l e t H . I n f l u e n c e o f p r e - a n d i n - t r a - o p e r a t i v e f a c t o r s o n t h e o c c u r r e n c e o f p o s t o p e r a t i v e f a t i g u e J . B r J S u r g , 1 9 8 5 ; 7 2 ( 1 ) ， 6 3 3 C h r i s t e n s e n T , K e h l e t H . P o
27、 s t o p e r a t iv e f a t ig u e J . Wo r l d J S u r g , 1 9 9 3 ; 1 7 ( 2 ) ， 2 2 0 4 H i g g i n s G M, A n d e r s o n R M. E x p e r i m e n t a l p a t h o l o g y o f t h e l i v - e r J . A r c h P a t h o l , 1 9 3 1 ; 1 2 ( 2 ) : 1 8 6 5 陈长勋， 金若敏， 李仪奎， 等. 正常S D大鼠的部分生物数据测定 J .动物学杂志， 1 9 9
28、 6 ; 3 1 ( 4 ) 0 1 9 6 陈平， 李昆， 董家鸿. 肝硬变大鼠肝部分切除术动物模型的 制作方法 J . 第三军医大学学报， 2 0 0 2 ; 2 4 ( 4 ) 4 8 8 7 王天芳， 陈易新， 季绍良， 等.慢性束缚致慢性疲劳动物模型的 研制及其行为学观察 【 J .中国中医基础医学杂志， 1 9 9 9 ; 5 ( 5 ) ， 2 5 8 艾华. 力竭性游泳对大鼠辜丸金属结合蛋白的诱导及其与辜 酮和锌的关系【 J . 中国应用生理学杂志， 1 9 9 4 ; 1 0 ( 2 ) 1 1 7 9 Mu l l e r A R, L a n g r e h r J M,
29、 N a l e s n i k M, e t a l . Mu c o s a l g l u t a m - i n a s e a c t i v i t y a n d h i s t o l o g y a s p a r a m e t e r s o f s m a l l b o w e l p r e s e r - v a t i o n i n j u r y J . J S u r g R e s , 1 9 9 4 ; 5 6 ( 3 ) ， 2 0 7 1 0 C h o m c z y n s k i P , S a c c h i N . S i n g l e
30、 - s t e p m e t h o d o f R N A i s o l a t i o n b y a c i d g u a n i d i n i u m t h i o c y a n a t e - p h e n o l - c h l o r o f o r m e x t r a c t i o n J . A n a l B i o c h e m, 1 9 8 7 ; 1 6 2 ( 1 ) : 1 5 6 1 1 毛争春， 陈如坤， 赵琳. 重组人生长激素对心脏手术后疲劳综 合征的影响【 J 中华医学杂志， 2 0 0 2 ; 8 2 9 ( 1 1 ) 2 6
31、7 1 2 李雅慧， 贾汝梅， 王景顺， 等. 1 0 0 2 例普通外科择期手术住院患 者营养状态评价 J . 中国临床营养杂志， 2 0 0 2 ; 3 ( 1 ) : 4 ( 2 0 0 3 - 1 1 - 0 4 收稿， 2 0 0 4 - 0 4 - 0 1 修回) ( 本文编辑 李缨来) 消息 第八届全国胃肠外科学术会议证文通知 中华医学会外科学分会胃肠外科学组拟定于2 0 0 5 年5 月中旬( 地点待定) 召开第八届全国胃肠外科学术会议， 现将会议 征文事项通知如下: 1 . 征文内容: 胃肠( 包括食管) 外科的临床研究和实验研究; 胃肠( 包括食管) 外科诊断与治疗的新技术
32、和新方法; 腹腔镜在胃肠食管疾病诊疗中的应用; 胃肠食管疾病的其他诊疗经验等。 2 . 征文要求: 请寄全文( 4 0 0 0 字以内) 及其摘要( 8 0 0 字左右) 各1 份， 请用4 号字打印( 最好附软盘) ， 无论文摘要者， 其 论文不收进论文汇编; 稿件由作者单位审查、 盖章同意。 3 . 截稿时间: 2 0 0 5 年 2月 2 8日( 以当地由戳为准) 。 4 . 本次会议将邀请国内外知名专家做专题报告， 介绍最新进展。 5 . 参加本次会议者， 按有关规定可获得国家继续教育工 类学分。 6 . 来稿请寄广州市中山二路5 8 号中山大学附属第一医院内 中华胃肠外科杂志 编辑部( 邮政编码: 5 1 0 0 8 0 ) 徐剑收， 请 在信封注明“ 会议稿件” 。 中华医学会外科学分会胃肠外科学组 万方数据