影响ICSI受精因素的探讨.pdf

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1、天津医药2 0 0 6 年5 月第3 4 卷第5 期3 5 1 综 述 与 讲 座 影响i c s i 受精因素的探讨 鲁振宇刘慧娟张云山* 关键词 卵母细胞 受精， 人工 受精， 体外 精子注射， 细胞质内 自 从1 9 9 2 年首例经卵胞浆内单精子注射( i c s i ) 技术获 得试管婴儿诞生至今， i c s i 已成为治疗男性不育的重要手 段， 大大提高了 人类辅助生育的成功率。 i c s i 技术是 将精子 直接注人卵细胞浆内， 避免了自 然受精过程中 精子穿过透明 带， 与胞浆融合等生物反应。 i c s i 后的 受精情况受多方面因 素的影响， 其机制复杂， 笔者仅就部分

2、因素作如下综述。 1 卵子因素 1 . 1 纺锤体 纺锤体由 微管组成， 在卵母细胞减数分裂染 色体排列和分离过程中起重要作用m 。纺锤体结构的变化可 以 反应卵细胞胞浆功能和卵细胞的质量， 纺锤体的异常会引 起卵细胞发育过程的停滞。 大多数卵龄较大的卵子纺锤体部 分或全部分离， 仅有少部分染色体周围的 微管或卵浆中分离 的微管可以 被观察到。 纺锤体具有双折射性， 纺锤体的结构 与双折射性可以被P o l s c o p e 和S p i n d l e V i e w 影像系统清晰分 辨， 人卵子中双折射性纺锤体可以预测卵胞浆的成熟程度和 卵子质量。 双折射性的纺锤体预示着i c s i

3、后较高的 受精率， 从受精到囊胚的形成， 到随后的 种植、 妊娠， 有纺锤体的卵子 的结局均好于无纺锤体的卵子2 1 ， 而无双折射性纺锤体的卵 子有可能存在染色体的 异常， 卵子质量差， 发育缓慢。 年龄大 的妇女更易出现染色体的异常3 1 0 传统的i c s i 操作是建立在MII 卵母细胞的纺锤体靠近 第一极体假设的基础上的， 卵母细胞刚完成减数分裂时第 一极体和纺锤体可能相邻， 但是随时间的推移， 第一极体和 纺锤体相对位置发生改变， 传统的穿刺部位选择有可能引 起纺锤体的破坏。 另外， 显微操作过程中 温度的波动会损伤 纺锤体。 通过P o l s c o p e 和S p i n

4、 d l e V i e w 影 像系统对纺锤 体成 像， 显 微注射过程中可以直接看到纺锤体， 便于显微注射点的位置 和精子沉积位置的选择， 从而避免在i c s i 过程中 损伤纺锤 体， 使i c s i 更加安全可靠， 获得更高的受精率4 ,5 1 。 同时， 人卵 中双折射性的纺锤体可以在临床上应用于预测卵子的质量。 1 .2 线粒体D N A 卵子的发育依赖正常的胞核成熟以及卵 浆成熟， 线粒体的生物起源和生物能学在卵子成熟和胚胎发 育中占有非常重的作用。 线粒体的功能成熟是卵浆成熟的一 个重要指标， 线粒体的变化会影响卵子胞浆的成熟，并影响着 卵子的发育能力。 卵子成熟的最后阶段

5、线粒体内容物含量骤 增， 线粒体发生障碍造成的卵子成熟不充分往往造成i c s i 受 精失败。 卵子成熟涉及线粒体的 发生和线粒体D N A ( m t D N A ) 的复 制， m t D N A的 含量在卵子受精中 起重要作用， 是在分子水平 研究卵细胞胞浆成熟机制的工具。 M a y - P a n l o u p 等!佣定量聚 合酶链反应( P C R ) 的方法对进行i c s i 的正常卵巢和卵巢功 能不足患者的卵子m t D N A 含量进行比较， 发现卵巢功能不 足患者的卵子m t D N A拷贝数明显低于正常卵巢功能患者的 卵子。 精子正常但受精失败的卵子比由于严重精子缺

6、陷导致 的 受精失败的卵子m t D N A明显减少( P 0 .0 0 0 1 ) 。 不明原因 的受精失败的卵子内m t D N A较受精正常的卵子内m t D N A 少。 注射正常精子仍不受精的不明原因受精失败可能是因为 卵子胞浆不成熟所致， 因此， 这就意着卵子胞浆不成熟可能 由m t D N A缺乏引起。 卵巢储备能力低、 卵巢营养功能失调、 卵子质量差的患者卵母细胞的m t D N A含量低。 改良 的I C S I ( m I C S I ) 方法是将精子沉积于卵浆中 部后， 尽量靠近对侧卵膜( 穿刺点对侧) 抽吸， 这个部位有较高的线 粒体膜电位。 这种方法应用于曾经在i c

7、 s i 周期中完全受精失 败的患者， 应用m I C S I 后受精率明 显升高( P 0 .0 0 1 ) m o m I C S I 可以促进卵子激活， 所以可以代替传统I C S I o 1 .3 第一极体 第一极体的排出提示卵母细胞减数分裂的 恢复及卵细胞核的成熟。1 级的 第一极体卵细胞受精率高于 2 , 3 级第一极体的卵细胞。 但是， E b n e r 等!S J则认为第一极体 的形态与受精无关。 1 .4 颗粒化胞浆卵子的质量如胞浆和核的成熟程度与IC- 51后成功率密切相关， 成熟卵细胞胞浆清亮、 均质， 无空泡、 碎片， 无颗粒状暗区。 中央型颗粒化胞浆( C L C

8、G ) 具有清晰边 界， 易于辨认， 较其他正常胞浆结构黑暗。 卵细胞的形态对受 精、 胚胎质量及妊娠率的影响十分显著， 卵子胞浆颗粒化是 一个较差的因素， 代表着卵浆的不成熟， 但是何种因素影响 胞浆颗粒尚 不清楚， 染色体异常可能是卵浆不成熟的原因， 但是有研究表明其与受精无关， 尚待进一步证实(9 1 1 .5 卵泡液的成分 在应用G n 刺激卵巢的过程中， 卵泡液 的成分发生戏剧性的变化， 这些卵泡液的成分或多或少直接 或间接地影响卵子的变化和发展潜能， 卵泡液中的P , G H , P R L , L H , I L - I , T N F - 。 浓度与卵 泡成熟度呈正相关， 这些

9、物 质的浓度对于判断卵子成熟、 卵子的质量有重要价值。I C S I 的受精结果与某些激素和卵泡液中的细胞因子( E 2 , F S H , P , G H , P R L , I L - 1 , T N F - a , L H ) 有关ion 2 精子因素 2 . 1 精子D N A 近年来发现精子 D N A的损害是造成男性 作者单位: 3 0 0 0 5 2 天津市中心妇产科医院 魂 审校者 了 5 2 T i a n j i n M e d J , M a y 2 0 0 6 , V o l 3 4 N o 5 不育的另一原因， 目 前尚 未找到治疗的 有效方法。 精子D N A 的完

10、整性对于自 然和辅助性受精都非常重要 0 ,Z1 , I C S I 绕过 了自 然选择的过程， 增加了D N A 破坏的危险， 异常的男性基 因， 是受精失败非常显著的原因， I C S I 克服了 受精对精子数 量的 要 求， 克服了 众多受精失 败的 机制。 但是， 由 于I C S I 对精 子的选择仅仅基于其活率和精子的大体形态， 而越过了自 然 选择的过程， 可能会介人受损的父代基因III 。 严重的男性不 育患者， 精子染色体非整倍体危险性增加， 精子非整倍体会 对卵子受精造成严重影响o 21 。另外， 随着年龄的增长， 精子 D N A 破坏程度加重， 男性吸烟也会对精子D N

11、 A造成破坏n 31 E r m a n n 。 等14 研究发现， 肇丸中的精子D N A损害程度明显低 于射出的 精液， 对于精子D N A 有较严重损害的患者选择用 肇丸中的精子进行I C S I 治疗是最有效的辅助生育的方法。 2 .2 卵细胞激活因 子 ( S O A F ) I C S I 技术受精存在很多方面 的影响， 最关键的是卵子的激活。I C S I 后人卵子的激活是由 于精子生成的S O A F的作用， S O A F 引起内源性的C a ? + 释 放s I , C a 2 ,* 度瞬间升高是保证卵激活的必要条件。 如果精子 细胞中S O A F 缺乏将严重影响I C

12、S I 的受精率。 I C S I 后的 受精率可达8 0 %， 然而部分患者， 特别是精液 质量很差的患者， 或从皋丸、 附皋中获取的精子行I C S I 后受 精率低， 甚至受精完全失败。部分原因是从精液、 肇丸、 附肇 中 获得的 精子的S O A F 活性不足， 不能引 起卵子内源性C a Z 释 放。 据Y a n a g i d a 等P 6l报道， 行I C S I 后再行电 激活 可有 效地 提高I C S I 的受精率， 卵子的电激活是将行I C S I 后的卵子放 人填充激活液的电极中进行激活， 单一电脉冲使卵子内C a Z 浓度长期升高， 通过电刺激促使卵母细胞C a Z

13、 内 流重新激活 细胞质使受精率提高。 2 .3 氧化反应产物( R O S ) R O S 是精子氧化反应产物， 造成 精子膜脂质过氧化反应， 有损精子并损害受精能力。R O S 半 衰期短， 破坏性强， 通过抗氧化物来清除。 R O S 的产生和清除 之间的不平衡使精子细胞造成破坏， 精浆中R O S 对大多数 精子参数和 I C S I 后患者的受精率产生负面影响。精浆中 R O S 的浓度和总的抗氧化物的含量、 精子D N A的完整性、 精 子的 形态、 活动力、 质膜完整性和硒含量成反比; 抗氧化物质 对多数精子参数和I C S I 后患者的受精率产生正面影响， 而抗 氧化物的 含量

14、和Z n , S e 、 精子的形态和受精率成正比。因此， 行 I C S I 治疗前让患者用抗氧化剂治疗可以保护精子免于 R O S 的 破坏， 对受精率和妊娠率有较大改善D 飞 2 .4 精子成熟度 对于非梗阻性无精子症患者， 从射精管采 取的 精子成熟程度较攀丸采取的 精子成熟程度高， I C S I 后的 受精率高。B e n - R a f a e l 等11 81发现应用7 5 I U 或1 5 0 I U的F S H 治疗至少6 0 d 后， 受精率明 显升高， 可能与F S H治疗后精子 细胞内的与成熟有关的成分水平增高有关。 因素是精子制动和精子注入卵子的安全性。 I C S

15、 I 前精子的制 动对于受精的 有效性很重要， 注人未制动的精子， 则精卵间 的反应被正常的 精子质膜阻止， 会导致受精率降低。 精子制 动后精子的质膜受到破坏， 这种破坏有利于S O A F 的释放， 诱导卵子的激活。 精卵融合的早期， 可以观察到卵子中C a t . 的波动。 精子制动的方法有3 种: 吸取法、 挤压法和压电法。 挤压法涉及触、 磨、 划、 压， 用注射针挤压精子尾部上三分之 一处; 吸取法不通过挤压， 而是吹打精子尾部上三分之一处 3 - 5 次; 压电 法应用压电 显微操作仪的 压电 脉冲 作用于精子 尾部上三 分之一处。 随机应用3 组精子分别用3 种不同的方 法制动

16、， 制动后通过伊红染色的 方法观察质膜的 破坏程度以 及卵子中C a t 的波动情况。结果发现: 用压电法制动精子， C e波动早于其他的2 种方法， 受精率明显高于吸取法和挤 压 法 11 910 I C S I 后受精失败的原因 很多， 有待于进一步探讨和研究。 3 I C S I 技术本身 卵子激活存在两种机制: ( 1 )由 受体介导的精卵融合。 ( 2 ) 精子因素。I C S I 绕过了精卵融合阶段， 影响受精的机制 中精子的因素就变得格外重要。 I C S I 技术中 受精的2 个关键 参考文献 1 H a n s e n K R , T h y e r A C , M .S l

17、 u s s P M , e t a l . R e p r o d u c t i v e a g e i n g a n d o v a r i a n f u n c t i o n : i s t h e e a r l y f o l l i c u l a r p h a s e F S H r i s e n e c e s s a ry t o m a i n t a i n a d e q u a t e s e c r e t o ry f u n c t i o n i n o l d e r o v u l a t o ry w o m e n ? H u m R e

18、p r o d , 2 0 0 5 ,2 0 ( 1 ) : 8 9 - 9 5 2 C o h e n Y , M a l c o v M , S c h w a rt z T , e t a l . S p i n d l e i m a g i n g : a n e w m a r k - e r f o r o p t i m a l t i m i n g o f I C S I ? H u m R e p r o d , 2 0 0 4 , 1 9 ( 3 ) : 6 4 9 - 6 5 4 3 P e l l e s t o r F , A n a h o ry T , H a

19、 m a m a h S . T h e c h r o m o s o m a l a n a l y s i s o f h u m a n o o c y t e s . A n o v e r v i e w o f e s t a b l i s h e d p r o c e d u r e s . H u m R e p r o d , 2 0 0 5 , 1 ( 1 1 ) : 1 5 - 3 2 4 W a n g W H , M e n g L , H a c k e t t R L , e t a l . R i g o r o u s t h e m a l c o n

20、 t r o l d u r - i n g i n t r a c y t o p l a s m i c s p e r m i n j e c t i o n s t a b i l i z e s t h e m e i o t i c s p i n d l e a n d i m p r o v e s f e rt i l i z a t i o n a n d p r e g n a n c y r a t e s . F e rt i l S t e r i l , 2 0 0 2 , 7 7 ( 6 ) : 1 2 7 4 - 1 2 7 7 5 M o o n J H ,

21、 H y u n C S , L e s W, e t a l . V i s u a l i z a t i o n o f t h e m e t a p h a s e 1 1 m e i o t i c s p i n d l e i n l i v i n g h u m a n o o c y t e s u s i n g t h e P o l s e o p e e n a b l e s t h e p r e d i c t i o n o f e m b ry o n i c d e v e l o p m e n t a l c o m p e t e n c e a

22、 f t e r I C S I H u m R e p r o d , 2 0 0 3 , 1 8 :8 1 7 - 8 2 0 6 M a y - P a n l o u p P , C h r e t i e n M F , J a c q u e s C , e t a l . L o w o o c y t e m i t o - c h o n d r i a l D N A c o n t e n t i n o v a r i a n i n s u f fi c i e n c y . H u m R e p ro d , 2 0 0 5 , 2 0 ( 3 ) :5 9 3

23、 - 5 9 7 7 E b n e r T , M o s e r M , S o m m e r g r u b e r M , e t a l . C o m p l e t e o o c y t e a c t i c a - t i o n f a i l u r e a f t e r I C S I c a n b e o v e r c o m e b y a m o d i f i e d i n j e c t i o n t e c h - n i q u e . H u m R e p r o d ,2 0 0 4 , 1 9 ( 8 ) : 1 8 3 7 - 1

24、8 4 1 8 E b n e r T , M o s e r M , S o m m e r g r u b e r M , e t a l . F i r s t p o l a r b o d y m o r p h o l - o g y a n d b l a s t o c y s t f o r m a t i o n r a t e i n I C S I p a t i e n t s . H u m R e p r o d , 2 0 0 2 , 1 7 ( 9 ) :2 4 1 5 - 2 4 1 8 9 K a h r a m a n S , Y a k i n K ,

25、 D o n m e z E , e t a 1 . R e l a t i o n s h i p b e t w e e n g r a n u l a r c y t o p l a s m o f o o c y t e s a n d p r e g n a n c y o u t c o m e f o l l o w i n g i n t r a c y to p l a s - m i c s p e r m i n j e c t i o n . H u m R e p r o d ,2 0 0 0 , 1 5 ( 1 1 ) :2 3 9 0 - 2 3 9 3 1 0

26、C a r m e n M , E s t r e l l a R R , E s p e r a n z a 0 , e t a l . F o l l i c u l a r fl u i d m a r k e r s o f o o c y t e d e v e l o p m e n t a l p o t e n t i a l . H u m R e p r o d ,2 0 0 2 , 1 7 (4 ) : 1 0 1 7 - 1 0 2 2 1 1 Z h u P , M a Y , H u a n g Y . R o l e o f s p e r m D N A i n

27、 t e g r i t y i n m a l e i n f e r - 天津医药2 0 0 6 年5 月第3 4 卷第5 期3 5 3 t i l i t y . Z h o n g h u a N a n K e X u e , 2 0 0 4 , 1 0 ( 3 ) : 2 2 2 - 2 2 6 1 2 A l v a r e z J G . E f fi c i e n t t r e a t m e n t o f i n f e rt i l i t y d u e t o s p e r m D N A d a m - a g e b y I C S I w i t h t

28、 e s t i c u l a r s p e r m . H u m R e p r o d , 2 0 0 5 , 2 0 ( 7 ) : 2 0 3 1 一 2 0 3 2 1 3 M o r r i s L D , I l o t t S , D i x o n L , e t a l . T h e s p e c t r u m o f D N A d a m a g e i n h u m a n s p e r m a s s e s s e d b y s i n g l e c e l l g e l e l e c t r o p h o r e s i s ( C o

29、 m e t a s - s a y ) a n d i t s r e l a t i o n s h i p t o f e rt i l i z a t i o n a n d e m b ry o d e v e l o p m e n t . H u m R e p r o d ,2 0 0 2 , 1 7 ( 4 ) :9 9 0 - 9 9 8 1 4 E r m a n n o G , F i l o m e n a S , M a r c e l l o 1 , e t a l . E f f i c i e n t t r e a t m e n t o f i n - f

30、 e rt i l i t y d u e t o s p e r m D N A d a m a g e b y I C S I w i t h t e s t i c u l a r s p e r m a t o - z o a . H u m a n R e p r o d , 2 0 0 5 ,2 0 ( 1 ) :2 2 6 - 2 3 0 1 5 M a c h a c a K , H a n n S . I n d u c t i o n o f m a t u r a t i o n - p r o m o t i n g f a c t o r d u r - i n g

31、X e n o p u s o o c y t e m a t u r a t i o n u n c o u p l e s C a 2 ,s t o r e d e p l e t i o n f r o m s t o r e - o p e r a t e d e n t ryJ C e l l B i o 1 , 2 0 0 2 , 1 1 5 ( 2 ) : 3 1 1 - 3 2 0 1 6 Y a n a g i d a K , K a t a y o s e H , H i r a t a H , e t a l . S u c c e s s f u l f e rt i

32、l i z a t i o n a n d p e r g n a n c y f o l l w i n g I C S I a n d e l e c t r i c a l o o c y t e a c t i v a t i o n . H u m B e - p r o d , 1 9 9 9 , 1 4 : 1 3 0 7 - 1 3 1 1 H a m m a d e h M E , A I - H a s a n i S , L o r e n z M , e t a l . R e l a t i o n s h i p b e t w e e n r e a c t i

33、v e o x y g e n s p e c i e s , t o t a l a n t i o x i d a n t s t a t u s l e v e l s i n s e m i n a l p l a s m a a n d D N A i n t e g r i t y a n d f e rt i l i z a t i o n r a t e o f p a t i e n t s u n d e r g o - i n g I C S I t h e r a p y . T h e 1 9 t h A n n u a l M e e t i n g o f t h

34、 e E S H R E . M a d r i d S p a i n , 2 0 0 3 . B e n - R a f a e l Z , F a r h i J , F e l d b e r g D , e t a l . F o l l c i l e s t i m u l a t i n g h o r - m o n e t r e a t m e n t f o r m e n w i t h i d i o p a t h i c o l i g o t e r a t o a s t h e n o z o o s p e r m i a b e f o r e i n

35、 c i t r o f e rt i l i z a t i o n : t h e i m p a c t o n s p e r m m i c r o s t r u c t u r e a n d f e rt i l i z a t i o n p o t e n t i a l . F e rt i l S t e r il ,2 0 0 2 ,7 3 :2 4 - 2 8 Y a n a g i d a K , K a t a y o s e H , H i r a t a H , e t a l . I n fl u e n c e o f s p e r m i m m o

36、 b i - l i z a t i o n o n o n s e t o f C a o s c i l l a t i o n s a f t e r I C S I . H u m R e p r o d , 2 0 0 2 , 1 6 ( 1 ) : 1 4 8 - 1 5 2 ( 2 0 0 5 - 0 8 - 1 3 收稿2 0 0 5 - 1 2 - 2 2 修回) 肝癌M D R产生途径与逆转研究进展 蒋明东李少林 * 关键词 肝肿瘤 抗药性， 多药 细胞凋亡 肝炎病毒， 乙型 肝细胞癌( h e p a t o c e ll u l a r c a r c i n o m

37、a , H C C ) 是世界范围 高 发恶性肿瘤， 治疗手段有手术、 放疗和介人化疗， 中晚期患者 常用化疗， 但效果较差。 肿瘤细胞多药耐药( m u l t i d r u g r e s i s - t a n c e , M D R ) 是肝癌化疗失败的 根本原因， 并影响肿瘤转移和 复发， 最终导致患者死亡。因此， 肝癌M D R 产生途径及逆转 一直是国内外肿瘤界的研究热点， 笔者就其进展综述如下。 1 肝癌MD R的产生途径 1 . 1 多药耐药基因( m d r ,) 途径 m d r ， 的编码蛋白P - g p 是跨 膜转运蛋白 超家族成员之一， 相对分子质量1 7 0

38、x 1 0 3 ， 为A T P 依赖“ 药泵” 。 实验测定发现， M D R 肝癌组织及其细胞m d r ， 扩 增明 显， m R N A和P - g p 表达增高， 表达量与耐药性呈正相关， 且m d r ， 阳性患者， 术后局部化疗差， 阴性者药物疗效明显1% 说明m d r ， 及P - g p 升高是肝癌M D R 产生的重要途径， 其可 将细胞内药物泵出胞外， 使细胞内药量低而无法有效杀灭肿 瘤细胞。 1 . 2 多药耐药相关基因( m r p ) 和肺癌多药耐药基因( l r p ) 途 径 m r p 的编码蛋白( P 1 9 0 ) 亦为跨膜转运蛋白， 相对分子质 量1

39、9 0 x 1 0 ， 较多M D R 肿瘤细 胞的m r p 及P 1 9 0 高表达。 P 1 9 0 参与胞质囊泡运输， 使细胞内药物再分布， 核酶等重要靶点 药物减少， 同时能泵出负电 荷药物， 最终导致细胞M D R 形 成。 有文献报道化疗不敏感肝癌细胞P 1 9 0 高表达， 抑制P - 9 p 不能完全逆转肝癌M D R ， 提示肝癌M D R 存在m d r ， 之外的 m r p 等途径2 . l r p 的编码蛋白 相对分子质量1 1 0 x 1 0 ， 其9 5 % 在胞质， 5 % 与核膜相连。M D R 肿瘤细胞中， 部分可见l r p 表 达明显增高， 说明帅与M

40、 D R 有直接关系31o l r p 介导的肝癌 M D R 有待继续探讨。 1 . 3 抗细胞凋亡信号增强途径肿瘤细胞内抗凋亡信号增 强， 是M D R 发生的重要途径14 1。研究发现细胞凋亡发生有经 线粒体和( 或) 死亡受体两条通路is 。因 此， 阻断作用通路， 可 导致细胞内 抗凋亡信号增强， 使肿瘤形成M D R 16 1。肝癌耐药 株B e l 7 4 0 2 促凋亡因 子b c l - 2 不表达， 因 子c p p 3 2 表达下调， 而凋亡抑制因子b c l - x , , b a x 和b c l - x s 呈高表达m ， 并且细胞 野生型抑癌基因p 5 3 表达下

41、调， 亦使促凋亡因 子活化降低， 结果肿瘤P - g p 活化伴细胞凋亡减少18 1。 可见细胞抗凋亡信号 增强与M D R发生有密切关系。 1 .4 谷胧甘肤酶系统激活途径 谷胧甘肤( g l u t a t h i o n e , G S H ) 是m r p 泵 底物， 谷胧昔肤转移酶 ( g la t a t h i o n - s - tr a n s f e r a s e , G S T ) 偶联G S H到化疗药物， 增加药物外流， 因此， 肿瘤M D R 细胞G S H和G S T 水平与其耐药程度呈正相关。耐受顺铂 ( C D D P ) 肝癌细胞株可见G S H和G S

42、T 高活性， D N A 修复和凋 亡调节变化191 0 1 .5 改变D N A拓扑异构酶途径 拓扑异构酶( t o p o i s o m e r a s e , T o p o ) 是D N A 复制和 转录基本核酶， 分为T o p o I 和T o p o II 。 T o p o I 是喜树碱和葱环类药物靶点， T o p o 1 1 是鬼臼素类药物 靶点。 肿瘤细胞T o p 。 酶减少或活性降低， 药物靶点和D N A 不易形成复合物， 对药物敏感性下降， 即发生M D R ， 肿瘤 M D R 株T o p o 酶改变常与m d r ， 和m r p 高表达等因 素共存11 01 0 T o p o 酶改变对肝癌M D R的 作用有待探索。 1 .6 乙型肝炎病毒X 蛋白( H B X ) 介导途径 丝氨酸/ 苏氨酸 激酶( M A P K ) 是H B X 激活的主要信号转导通路。 研究证实: 国家自 然科学基金资助项目 ( 项目 编号: 3 0 3 7 0 4 2 2 ) 作者单位: 4 0 0 0 1 6 重庆医科大学基础医学院核医学教研室 女 审校者