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1、2 0 0 4 年 第7 卷 第 2 期 广西中医学院学报 f 一 一 一 一 ， ， i r .Yl b .F .Fg FV .Fl F! “. 家兔实验性高脂血症模型的研究 吴福宏， 方显明 ( 广西中医学院附属瑞康医院， 广西 南宁 5 3 0 0 1 1 ) 关键词: 高脂血症; 家兔; 动物模型; 实验研究 中图分类号: R - 3 3 2 文献标识码: A 文章编号: 1 0 0 8 - 7 4 8 6 ( 2 0 0 4 ) 0 2 - 0 0 0 1 - 0 2 在研究高脂血症及动脉粥样硬化( a t h e r o s c l e r o s i s ) 的发病 机制以及调脂
2、药和抗动脉粥样硬化药物时， 建立典型的动物 模型十分重要。而家兔在生物医学研究中应用非常广泛， 尤 其在建立高脂血症造成动脉粥样硬化实验模型中最为常用， 且被推荐为有关调血脂药和抗动脉粥样硬化药研究的主要 动物 川。 但 在建立 高脂血 症 兔模型时， 高脂饲料配 方和 喂饲 方法各家说法不一， 且造模所用时间也不相同， 其效果亦有 所差异。 本实验采用新西兰大白 兔， 以喂饲高脂饲料的方法 造模， 观察诱发高脂血症的时间， 并取其胸主动脉进行形态 学观察。 1 材料与方法 1 . 1 动物分组与造模 健康雄性新西兰白兔1 6 只( 由广西 中医学院动物中心提供) ， 随机分为2 组， 分笼饲
3、养( 饲养环 境温度保持在2 6 r-， 室内 湿度控制在7 0 %左右， 自 动通风器 保持室内 通风) ， 观察两组动物毛色、 眼神、 进食、 活动、 粪便， 记录空腹体重， 并自 隐静脉取血测血脂各项指标。适应性喂 养1 周后， 正常对照组继予以基础饲料喂养， 高脂模型组予 以高脂饲料喂饲， 配方为: 1 %胆固醉+巧%鲜蛋黄十 5 . 0 % 猪油十 基础饲料。猪油加热熔化， 将胆固醉溶于猪油内， 另 将鲜蛋黄蒸煮后直接加人饲料中， 一同搅拌均匀。每只每日 高脂饲料限 制在1 0 0 - 1 2 0 g ， 自 由 饮水， 共喂饲1 0 周。 1 . 2 观察指标及方法 在实验期间 每
4、天仔细观察并记录各 组动物的一般情况， 包括: 毛色、 眼神、 进食、 活动、 粪便颜色 及性状等的变化。实验前和实验第 5 周、 第 1 0 周记录空腹 体重， 并自 隐静脉取血清测血脂各项指标。 1 . 3 主 要试剂及仪器 胆固 醇( T C ， 批号: B K 4 2 7 7 ) 、 甘油三 M ( T G ， 批号: C E 3 2 7 5 ) 试剂为美国德灵公司生产。 高密度脂 蛋白 胆固醇( H D L - C ， 批号: 1 1 3 R A A ) 试剂为日 本第一化学药 品 株式会社生产。 脂质过氧化物( M D A ， 批号: 0 3 0 5 2 3 ) 、 超氧 化物歧化
5、酶( S O D ， 批号: 0 3 0 5 1 4 ) 试剂为南京聚力公司生产。 7 2 1 分光光度计( 上海第三分析仪器厂生产) , 8 0 一离心机 ( 上海手术器械厂生产) 。S N - 6 9 5 A型放免 r 测量仪( 上海原 子核研究所日 环仪器一厂生产) , R X L 全自 动生化仪( 美国德 灵公司生产) 。 1 . 4 形态学 观察 于第1 0 周实验结束后， 自 耳缘静脉注射 空气2 0 m l ， 气栓处死。将家兔主动脉从主动脉根部至骼总动 脉分叉处取出， 剥离外膜结缔组织， 从腹侧面纵行剖开， 0 . 9 %生理盐水冲洗干净， 先直接作病理肉眼大体观察， 根据 内
6、膜粥样斑块病变程度分级标准， 评价粥样化损伤的程度。 再以1 0 %福尔马林固定， 常规制作光镜标本， 观察各组动物 主动脉粥样硬化病变具体情况。 1 . 5 统计学处理 全部数据用均数土 标准差( 三土 : ) 表示， 两组间比较采用 t 检验处理。 2 实验结果 2 . 1 一般情况观察两组动物在造模前毛色、 眼神、 进食、 活动、 粪便颜色及性状等一般情况均无明显差异。造模结束 后， 对照组动物自 身与造模前对比无明显变化。但模型组在 造模第二周时， 动物粪便由原来的棕绿色、 直径0 . 5 - 0 . 6 c m 圆 形颗粒变为黑褐色、 长1 . 8 - 2 . O a n 、 宽0
7、. 7 - - 0 . 8 二 的椭 圆形颗粒; 第三周起全部动物出现毛发疏松、 无光泽， 反应稍 迟钝、 倦怠、 偶有便绪， 约 3 0 %的动物出现食欲不振( + / + + ) ; 第五周出现明显的肌肤甲错、 喜卧， 约6 0 %的动物出现 食欲不振( 十 / 十+ ) ; 到第八周全部动物均出 现食欲不振( + +/ +) 。 2 . 2 造模时间 对血脂的影响 正常对照组在实验前和实验 第5 周、 第 1 0 周的血脂水平基本接近， 无显著性差异( P 0 . 0 5 ) 。 模型组兔在实验第5 周后， 血清T G升高6 4 . 2 4 9 6 , T C , L D L - C ,
8、 A I 则显著升高， 分别升高约1 3 倍、 3 4 倍、 2 5 倍。 实验1 0 周后， 上述指标与第5 周时无明显差异， 表明在第5 周时高脂血症动物模型已 成功建立。 详见表1 、 表2 0 2 . 3 造模前后各组动物体重变化各组动物在实验5 周、 1 0 周后， 体重无显著性差异( P 0 . 0 5 ) 见表3 0 2 . 4 动脉粥样硬化形态学 观察分为肉眼硬化分级和镜检 两个部分。 收稿日 期: 2 0 0 4 - 0 5 - 2 5 作者简介: 吴祖宏( 1 9 7 7 -) ， 女， 广东大埔县人， 住院医师， 在读研究生， 研究方向: 心血管疾病的中医药防治。 万方数
9、据 2 J o u rn a l o f G u a n g x i 卜d i t io n a l C h in e s e M e d ic a l U n iv e r s it y2 0 0 4 , V o l . 7 . N o . 2 2 . 4 . 1硬 化 分 级 参 照 文 献 2 ) 方 法: 各组 兔主 动 脉 斑块肉 眼观察分级情况见表4 0 表1 正常对照组不同时间血脂水平及动脉硬化指数 ( m m o l 几， 二士: ， n二 8 ) 指标第0 周第 5 周第 1 0 周 1 . 5 5土0. 4 11 . 4 1 土0. 2 3 1 . 5 2土0. 7 4 1
10、 . 3 9土0 . 4 21 . 0土0. 0 80. 7 4士0. 2 4 HD LC 0 . 6 1 士0 . 0 90. 6 3土0. 0 50. 5 1土0. 0 8 L DL - C0 . 6 5士0. 3 90 . 5 9土0 . 2 2 0. 6 8士0. 7 5 1 . 6 2士0. 9 61 . 2 7土0. 3 71 . 4 3土0. 5 6 注: A I 为动脉硬化指数。 表2 造模前及造模第5 周、 第1 0 周血脂水平和动脉硬化指 数( m m o l 几， 王土， ， n= 8 ) 指标 第0 周 1 . 6 8土0. 第 5 周第 1 0 周 4 8 2 3 .
11、 0 7 1 0 . 6 6 D 2 4 . 2 7 士 0 . 8 4 1 1 . 2 8士0. 4 92 . 2 8 士 0 . 4 8 1 2 . 4 2 土 0 . 9 6 1 0. 6 6士0 . 2 1 . 9 6土0. 0. 7 8士0 . 0 6 2 2. 0 9士1 面显著隆起， 广泛存在于颈总动脉开口处及胸、 腹主动脉内 膜处。其中1 例主动脉( 升、 降段) 内膜全为粥样病灶， 几乎 占 满整段动脉内膜， 其他例略为轻些。光镜下， 内膜显著增 厚、 水肿， 表面出现继发性溃疡改变， 粥瘤处其中膜平滑肌变 薄， 外膜可见毛细血管新生及少许结缔组织增生( 见封三图 3 、 图
12、4 ) 。 病灶表面由纤维细胞、 胶原纤维构成薄的纤维帽， 其下方有大量泡沫细胞、 少许炎症细胞( 见封三图5 ) o浅染 无定形物、 脂质、 坏死物及胆固醇结晶( H E 片呈针状空隙) 及 钙化颗粒物， 接近底部可见少许淋巴细胞、 中性粒细胞( 见封 三图6 ) a 3 讨论 高脂血症与动脉粥样硬化的发病关系十分密切。中医 认为， 高脂血症的形成与脏气受损， 痰浊. 痕血内停有关。血 脂是一种人体所需的精微物质， 是人体气血精微的组成部 分， 参与营养和代谢。若饮食不节， 过食肥甘厚腻， 呆胃滞 脾， 进而脾胃功能失调， 不能正常运化输布水谷精微至周身， 多余脂质滞留 沉积于血脉中则形成脂
13、浊， 即所谓痰浊内生， 进而影响血液运行而出现痕血内停。因此， 脏气亏损、 痰寮 互结是高脂血症形成的主要病因病机， 而痰浊. 痕血是高脂 血症的主要病理产物。 本次实验研究发现: 在造模前的适应性喂养阶段， 两组 动物一般情况无明显差异。但是经过喂饲高脂饲料之后， 高 脂模型组的动物逐步出现中医所说的痰浊、 血痕证的典型表 现: 如粪便性状、 颜色的明显改变、 毛发疏松、 无光泽， 反应稍 迟钝、 倦怠、 喜卧、 偶有便澹、 肌肤甲错， 其食欲不振随着造模 时间的延长而表现得愈加明显。 从表3 中我们可以看出， 高脂饲养 1 0 周后所测的血生 化指标以及动脉硬化指数与第5 周时无明显差异，
14、 表明在第 5 周时高脂血症动物造模已成功， 由此证明此法能有效建立 高脂血症和动脉粥样硬化模型。本实验高脂饲料配方与传 统配方有一些差异， 传统配方中的胆固醉所占百分比为 0 . 5 %， 而我们将胆固醇所占份量加至 1 %， 旨以探索在加大 剂量后能否缩短造模时间以及是否对动物模型产生不利因 素， 但两组动物的 体重差异无显著性( P 0 . 0 5 ) ， 表明高脂 喂饲基本不影响兔的生长发育。本文所用方法简便实用， 病 理变化典型， 且容易重复， 比传统的造模时间可缩短 1 一3 周。 nllJ ，1八 HDL C0. 6 6士0. L DL - C0. 6 3士0 . 1 . 3 8
15、 士 0 . 3 6 3 5 . 4 4 士 7 . 3 9 1 3 0 . 0 1 士 3 注: 与造模前相比， O P 0 . 0 1 0 表3 实验动物体孟变化( k g , 王士: ) 组别n第 0 周第5 周第 1 0 周 正常对照组8 2 . 4 5 土 0 . 1 7 3 . 2 2 土 0 . 1 4 3 . 5 3 士 0 . 1 8 高脂模型组8 2 . 3 7 土 0 . 1 2 3 . 2 5 士 0 . 2 0 3 . 2 1 土 0 . 1 5 表4 各组造模后主动脉斑块肉眼观察病变程度分级 病变程度分级 组别 0 级 0 . 5 级 1 级2 级3 级4 级 n一
16、 一 一 一 0 级0 . 5 级1 级2 级3级4级 正常对照组 高脂模型组 6 2 经R id it 分析， 高脂模型组病变程度分级高于正常对照 组( P 0 . 0 1 ) . 2 . 4 . 2镜检 正常对照组兔主动脉内膜光滑无粥样病损， 肉眼无脂质斑块形成; 光镜下组织学切片示正常主动脉壁、 内 膜、 中膜、 外膜均清晰可见， 各层结构正常。内膜无脂质沉 积改变， 含少量胶原纤维和平滑肌纤维， 弹力纤维分布均匀， 未见异常改变( 见封三图1 、 图2 ) 。而高脂模型组兔主动脉 内 膜粗糙不平， 肉眼可见大量灰黄色条纹状脂纹， 向内膜表 参考文献 1 中华人民共和国卫生部药政局编 . 新药( 西药) 临床前研 究指导原则汇编( 药学、 药理学、 毒理学) M . 1 9 9 3 . 6 9 . 2 陈 版社 奇 . 中药药理研究方法学 M . 北京: 人民卫生出 ， 1 9 9 3 . 9 . 万方数据