尿液白细胞定量分析方法学研究.pdf

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1、医学临床研究2 0 0 8 年 2 月第 2 5 卷第 2 期J C l inR e s ， F e b . 2 0 0 8 ， V o l 2 5 ， 吻2 3 0 1 论著 尿液白细胞定量分析方法学研究 王明达朱秋良李宁沙 ( 湖南省长沙市三医院检验科， 湖南长沙4 1 0 0 0 7) 【 摘要 【 目的】 探讨并比较尿液白细胞定量检测方法与镜检定量计数的关系。 【 方法】 采用离心和不离心 镜检法及自 动化仪器定量计数法， 以同一标准和实脸方案分析不同尿液白细胞定圣方法之间的差异。 【 结果】 离心镜检法误差较大。不离心多样品童镜检法、 A V E 一 7 63全自 动尿有形成分分析仪

2、及U F-10。 尿流式 分析仪检浏结果能较好的反映尿液中白细胞的实际浓度。【 结论】 离心镜检法有利于尿液中病理成分的早期 发现， 但不适于尿白细胞定量计数。不离心多细胞数1的镜检定量能较准确反映尿白细胞的实际浓度。 A V E-763 及 U F1 00 分析仪由于计数细胞圣大， 检浏结果也能较准确反映尿白细胞的实际浓度。但其细胞识 别能力需另行研究。 关键词1 白细胞 Me t h edo l o gy o fQ u a n t i t a t i v eA n a l y s i sforU r i n a ry Wh i t eB l 以 xIC e l lW A N G从n 犷da

3、， Z HUQ i u-l i a n g， LI N i n 犷sha( 及P a rt m e n t o fL a b o rat o 卿M七 d i c i n e ， 叭 e Thi rd Ho s P i tal o fCha n g s h a ， 月“ n a n4 1 0 0 1 5 ， 玉i n a) A 加 t 扭 c t 【 O bj e c t i v e l T o e v a l u a t e a n d c o m p a r e t h e q u a n t i t a t i v e m e t h o d s o f d e t e c t i n g

4、u r i n a r y w h i t e b l o o d c e l l ( Wl 贾 二 ) a n dt h e i r r e l a t i o n s h i p t ot h e m i c r o s c o p i c c o u n t . l Me t h o d s lU r i n a r yWB(二 w e r e d e t e c t e di nu n c e n - t r i f u g e d s a m p l e s b yA V E 一 7 6 3f u l l a u t o m a t e du r i n a l y s i s a

5、n a l y z e r ， U F-1 o of u l l a u t o m a t e du r i n e c e l l a n a l y z e r ， a n dm i c r o s c o p i c q u a n t i t a t i o na n di nu n c e n t r i f u g e ds a m p l e s b ym i c ros c o p i c q u a n t i t a t i o nw i t ht h es a m e s t a n d a r d m e t h o d s t o a n a l y z e t h

6、 e d i f f e r e n c e a m o n g t h e q u a n t i t a t i v e m e t h o d s f o r t h e d e t e c t i o n o f t h e u r i n a 仃WBC. 【 R e - s u l t s l T h e a nal y s i s o f WBC w i t h A V E-7 6 3 ， U F1 o o a n d m i c ros c o p i c q u a n t i t a t i o n i n u n c e n t r i f u g e d u r i n

7、e s ( w i t h a l a r g e s c o Pe o f c e l l c o u n t ) w a s m o r ee xac t t h a nt h a t w i t hm i c ro s c o p i cq u a n t i t a t i o ni nc e n t r i f u g e ds a m p l e s . C o n c l u s i o n lT h e q u a n t i t a t i v e a n a l y s i s o f u n c e n t r i f u g e ds a m p l e s i s b

8、 e n e f i t for t h e s t a n d a r d mi c r o s c o p i c q u a n t i - t a t i o nt o d e t e c t t h e p a t h o l o g i c a l f o r m e de 1 e m e n t s e a r l y i n c e n t r i f u g e ds a m p l e s i n d i a g n o s i s o f t h e u r i n a r y WB C . B u t i t i s n o t a p P l i c a b l e

9、f o r t h e q u a n t i t a t i v e a n a l y s i s o f t h e u r i n a r y WB(二 . T h e q u a n t i t a t i v e a n a l y s i s o f t h e u n c e n - t r i f u g e d s a m p l e s i n a l a r g e s c o p e w i t h m i c r o s c o p i c c a n r e f l e c t t h e a c t u a l c o n c e n t r a t i o n

10、 o f WBC i n t h e s e d i m e n t s m o r e a c c u r a t e l y . A V E-7 6 3 a n d U F 一 1 o 0 c a n d e t e r m i n e WBC m o r e e xac t l y b e c a u s e m o rec e l l s a r e c o u n t e d . N e v - e r t h e l e s s ， t h e f u n c t i o nf o r t h e c e l l i d e n t i f i c a t i o ns h o u

11、 l db e i n v e s t i g a t e d . 仁 K eywo油 l e u k o c y t e s 中图分类号I R 3 2 9 . 2 文献标识码I A 文章编号 1 6 7 1 一 7 1 7 1 ( 2 0 0 5 ) 0 2 一 0 3 0 1 一 0 3 门J勺J门J飞J门J门 4比J比bt廿1扮匕q r.rL一ILrLFLrL 单， 而腔内手术术中可能发生多种并发症和意外， 如 出现T U R S 、 膀胧颈或前列腺包膜穿孔等情况时通 常需要立即停止手术操作、 密切观察。如果手术 中应用防水敷料可防止污染。本组先行腹股沟病修 补术后再行碎石及 P K V

12、 P ， 效果满意。 参考文献 马波. 前列腺增生症合并腹股沟斜庙的手术治疗( 附12例报 告) J . 医学临床研究， 2 0 0 5 ， 2 2 ( 8 ) : 1 1 4 9 一 1 1 5 0 . 中华医学会外科学分会病和腹壁外科学组. 成人腹股沟庙、 股 庙和腹部手术切口病手术治疗方案( 2 。 。 3 年修订稿) J . 中华 外科杂志， 2 0 0 4 ， 4 2 ( 1 4 ) : 8 3 4 一 8 3 5 . 鲁纯智， 金滨， 王建业. 老年人腹股沟病修补术与尿道前列腺电 切术同期进行的疗效观察仁 J . 中华老年医学杂志， 2 0 07， 26 ( 3 ) : 1 7 8

13、 一 1 8 0 . 刁Jll曰 ，1八乙 rIJrL 3 姚峰， 赫杰， 陈倩等. 无张力腹股沟庙修补术后复发的临床分析 J . 中华普通外科杂志， 2 0 0 4 ， 1 9 ( 1 2 ) : 7 2 0 一 7 2 1 . 刘洪新， 张爱民， 浦金贤， 等. 等离子体切除前列腺与电切前列 腺的比较 J . 中华男科学杂志， 2 0 0 7 ， 1 3 ( 2 ) : 1 8 1 一 1 8 2 . 卢国军， 唐来坤， 汪祖林， 等. 等离子电切与T U R P手术优缺点 之比较 J . 中国男科学杂志， 2 0 0 7 ， 2 1 ( 1 ) : 4 5 一 4 8 . 沈文浩. 前列

14、腺钦激光刻除术与经尿道前列腺电切术的近期疗 效比较 J . 临床泌尿外科杂志， 2 0 0 4 ， 1 ， ( 4 ) : 2 6 2 一 2 6 5 . 张凯， 席时富一 期治疗良性前列腺增生合并腹股沟庙 Jj. 中 国男科学杂志， 2 0 0 6 ， 1 0 ( 4 ) : 2 7 8 一 2 7 9 . 杨志坚， 王慧洁， 陈德志， 等. 同期行经尿道前列腺电气化术和 无张力庙修补术治疗前列腺增生症并发腹股沟庙【 J. 临床泌 尿外科杂志， 2 0 0 5 ， 2 0 ( 2 ) : 8 2 一 8 3 . ( 本文编辉: T达) 收稿日期 2 0 0 7 一 1 1 一 2 1 万方数

15、据 3 0 2 .医学临床研究2 0 0 8 年 2 月第 2 5 卷第 2 期J C l i n R e s ， F e b . 2 0 0 8 ， V o l 2 5 ， 南2 尿液细胞定量分析是临床实验室常见的分析项 目， 对于泌尿系统疾病的诊断和鉴别诊断， 观察疾病 的进展和疗效具有重要的参考价值。早年应用较多 的细胞定量分析方法有 a d di s 计数、 lh细胞计数 等， 后来， 为了规范尿液细胞定量分析方法， 美国 N C C L S 和中华医学会检验分会相继颁布了标准操 作规程l. 2 。近年来， 各种自动化尿有形成分分析 仪不断应用于临床阁， 为尿液有形成分定量分析提 供了

16、方便、 简捷的方法， 如A V E 一 763 全自动尿有形 成分分析仪和U F 一 1 00尿流式细胞分析仪等。但实 际应用中发现同一样本不同方法间定量结果差异较 大。为了探讨这些差异的原因， 寻找更准确的定量 方法， 国内有人用定量的含不同浓度红细胞的尿液 进行了研究4.作者以白细胞为对象， 也进行了相 关的研究并报道如下。 1 材料与方法 1 . 1 材料选择长沙市血液中心提供的浓缩白细 胞悬液1 . 5 单位， 用经过校准的血细胞分析仪准确 测量其白细胞值。使用正常人混合尿液( 收集多人 尿液， 经高速离心方法除去细胞成分， 留取上清液) 加人经溶血处理后( 去除红细胞) 的浓缩白细胞

17、配制 成理论含量分别为1 0 0 0 个加L 、 500 个加L 、 2 50个/ 拜 L 、 1 2 5个加L 、 6 2个加L 、 3 1个加L 、 1 5个加L 、 8 个/ 拼 L 的尿液标本。 1 . 2 方法 1 . 2 . 1 不离心镜检法混匀配制好的尿液， 用血红 蛋白吸管吸取样本， 滴入牛鲍氏计数板内， 静置 1 min后先用低倍镜观察细胞分布情况， 再用高倍镜 计数 10个大方格内白细胞数。重复测定6 次， 共计 数60个大方格内白细胞数。 4 1 . 2 . 2 离心镜检法以混匀的尿液标本 IQ mL于 一次性尿液细胞定量专用塑料离心管内， 以15 00 r / m i

18、n 离心sm i n ， 吸弃上清尿液， 留取0 . Zm L沉 渣; 轻轻混匀后用血红蛋白吸管吸取样本， 滴人牛鲍 氏计数板内， 静置 lm in后先用低倍镜观察细胞分 布情况， 再用高倍镜计数 10 个大方格内白细胞数。 重复测定6 次， 共计数60个大方格内白细胞数。 1 ， 2 . 3 自 动分析仪检测法严格按仪器说明书操 作步骤对每份样本进行检测， 记录检测结果。 A v E 一 763 尿有形成分分析仪测定过程中标本沉降 时间为8 05 ， 结果经仪器高倍镜下人工辅判确定; U F-10O 尿液分析仪检测过程中使用 S ysm e x 公司 的U F 一 c H E c K液对仪器

19、进行室内质量控制; 每份 标本连续检测6 次。 1 . 3 统计学处理 数据以万 士， 表示， 统计方法采 用配对资料t 检验。 2 结果 各种检测方法测定值及与理论定值偏差比较见 表1 。由表1 可见不离心镜检计数法检测结果与理 论定值较接近; 离心镜检计数法检测结果与理论定 值误差较大。A V E 一 7 63 尿有形成分分析仪检测结 果与理论定值也较接近， 但随着样本中细胞数减少， 其检测误差增大。U F 一 100 尿流式分析仪检测结果 与理论定值较接近， 但随着样本中细胞数增多， 其检 测误差明显。 表1 各种方法实际测定值与理论定值偏差比 较( 细胞数/ “ L) 理论定值 浓度

20、1 ( 1 0 0 0)愧 黔澳 黔吮 黔玲 籍 )5 浓度 6 ( 3 1 )玲 搭 )， 浓度 8 ( 8 ) 不离心镜检法 离心镜检法 A V 公7 3 6 分析仪检侧 U F-1 0 0 分析仪检侧 侧定值 与理论定值偏差( 写) 侧定值 与理论定值偏差( %) 侧定值 与理论定值偏差( %) 侧定值 与理论定值偏差 %) 9 7 1 士9 5 一 2 。 9 0 4 5 2 士5 7 一 5 4 . 8 9 4 8 士6 6 一 5 . 1 2 9 3 8 士2 0 一 6。 5 3 4 6 7 士6 2 一6 . 4 6 2 5 2 士6 2 一4 9 7 4 7 6 土3 7 一

21、4 . 7 4 4 8 2 士1 1 一3 . 6 6 2 4 6 士3 3 一 1 . 6 0 1 1 4 土1 7 . 1 一5 4 . 2 8 2 3 8 士2 0 一4 . 9 2 2 4 2 士1 3 一3 . 4 0 1 2 2 士 1 8 一 2 . 4 0 6 0 士1 1 . 1 一 5 1 。 8 1 2 2 士1 9 . 7 一 3 . 3 0 1 2 0 士7 . 0 一 4 . 0 0 6 3 . 7 士7 . 0 1 . 9 2 2 9 。 0 士4 . 5 一 5 3 。 6 5 8 士1 0 一 7 . 2 0 6 1 . 3 士6 。 0 一 1 ， 9 2

22、2 8 . 0 士5 . 7 1 0 . 5 1 8 . 0 士3 . 4 一4 2 . 5 2 8 . 6 士7 9 一8 . 6 3 3 2 3 士2 。 9 3 . 1 9 1 4 . 7 士2 。 7 5 ， 7 7 1 3 . 7 士3 . 4 一4 2 . 5 1 3 . 7 士3 . 4 一 1 2 。 2 1 63 士1 . 5 4 。 4 9 7 . 0 士2 . 1 一 1 0 。 3 4 . 0 士 1 . 4 一4 8 . 7 6 . 8 3 士22 一 1 2 . 4 7 . 5 士1 ， 5 3 8 5 不离心镜检法、 A V E 一 763 尿有形成分分析仪和 U

23、 F-l o o 尿流式分析仪的检测结果之间相比较差异 无显著性( t 值分别为0 . 6 0 ， 0 . 2 0 ， 均P0 . 0 5 ) ; 离 心镜检法与不离心镜检法、 A V E-763 尿有形成分分 析仪和U F-1 00 尿流式分析仪的检测结果之间差异 有显著性( t 值分别为1 . 9 7 ， 2 . 0 3 ， 1 . 9 6 ， 均 P0 . O 5 ) 。 万方数据 医学临床研究2 0 0 8 年2 月第 2 5 卷第 2 期J C I inR e s ， F e b . 2 0 0 8 ， V o l 2 5 ， 南2 3 讨论 尿液有形成分是指通过尿液排出体外能在光学

24、 显微镜下观察到的有形物， 包括细胞成分、 各种管 型、 结晶、 寄生虫等。通过尿液有形成分定量分析， 对泌尿系统疾病的诊断、 鉴别诊断及预后判断有重 要意义。目 前， 尿液有形成分检查的方法有传统显 微镜法和分析仪法， 前者又可分为不离心直接镜检 法、 离心镜检法， 仪器分析法有流式分析和图像分析 两种形式阁， 其分别以U F 一 1 0 0 尿液分析仪和A V E - 763 尿有形成分分析仪为代表。 为了规范实验方法， 美国N C C L S和中华医学 会检验分会分别制定了尿液有形成分检查的操作规 程， 即取 1 0mL尿液于离心管内， 以1 5 0 0r / mi n离 心s m in

25、， 准确留取0 . Z m L沉渣， 混匀后滴人标准 尿沉渣计数板内， 计数一定体积内细胞数并换算成 x x 扭L形式报告结果。随着各种自动化尿液有形 成分分析仪不断问世， 检测效率大大提高; 但实验结 果与上述离心镜检法差异较大。本研究结果表明， 不离心直接镜检法、 A V E-7 63 分析仪法和U F-1 00 分析仪法检测结果之间差异无显著性， 均较接近于 理论值; 本研究中不离心直接镜检法计数 60个大方 格， 较常规工作计数 10 个大方格的工作量增大 6 倍， 临床实用性受到削弱， 而随着计数的细胞数越 多， 结果的不准确度越小。A V E 一 7 63 按照经典的显 微镜镜检的

26、流程设计， 工作时首先用多于人工镜检 检查量的低倍镜扫描过筛标本， 并自动定位阳性目 标并转高倍镜采集目标的特征参数， 计算机对其进 行处理、 分析、 拟合、 完成分析过程。U F 一 100 是利用 流式技术和电阻抗原理进行细胞计数， 从表1 看出， 这两种分析仪的检测结果都接近理论值， 但U F 一 1 0 。 尿流式分析仪在高浓度白细胞标本时， 误差相对较 大， 提示在分析高浓度阳性标本时应考虑先进行标 本稀释后再检测， 以获取更为准确的结果。A v E - 7 6 3 尿有形成分分析仪在分析低浓度白细胞标本 时， 误差相对较大， 这可能与细胞数少和计数池内的 分布误差有关， 提示在分析

27、低浓度标本时应考虑增 加样本检测次数或增加扫描幅数以提高准确性， 但 在保证结果准确性又不过度降低工作效率的前提 下， 如何选定合适的复检次数还有待进一步研究。 离心镜检法检测结果与理论值相差很大， 从表 1 可 以看出， 其检测值均比理论值有明显的减少， 负偏差 高达4 0 %以上。产生这么大偏差的原因估计有以 下几种: 离心问题: 标本离心后， 大部分白细胞沉 积于管底， 但不是全部， 上清液中仍有部分白细胞; 操作过程中部分白细胞变形、 溶解; 离心管材 质: 本研究使用塑料离心管， 可能有白细胞粘附于试 管壁现象发生; 离心后沉渣没有充分混匀; 充池 计数时的白细胞分布误差; 计算结果

28、时乘以的稀 释倍数对误差的放大作用。 综上所述， 离心目测计数法可浓缩尿液中的有 形成分， 便于早期寻找发现病理成分， 有利于为泌尿 系统疾病提供有价值的诊断线索， 如果操作严格规 范、 操作技术娴熟且责任感强， 则结果仍具代表性和 可比性; 但此法影响因素很多， 结果准确性较差， 不 适合常规尿有形成分的定量分析。如果采用定量报 告结果的方式， 最好采用不离心多数量目测计数法， 至于计数量应达到多少方能获得准确定量的结果， 尚需进一步研究。U F 一 100 尿流式分析仪和A V D 7 6 3 尿有形成分分析仪均采用不离心， 多数量的计 数方式， 常规工作中应用能获得满意的结果且效率 大大

29、提高， 只是在高浓度样品( 如肉眼血尿、 混浊尿 等) 时U F 一 100 仪应注意上机前稀释样品， 在低浓度 样品时A V E 一 7 63 仪应增加计数次数或扫描范围以 保证结果准确。值得一提的是， 人工镜检仍是细胞 形态学检查的金标准， 仪器自动识别还有很多不完 善的地方， 阳性结果必须经人工目测确认后方可发 出报告。 参考文献 中华人民共和国卫生部医政司编. 全国临床检验操作规程 M . 第三版. 南京; 东南大学出版社， 2006. 2 9 3 一 2 9 7. 丛玉隆. 尿液沉渣检验标准化建议【 J. 中华检脸医学杂志， 2 0 0 2 ， 2 5 : 2 4 9 一 2 5 0

30、 . 丛玉隆， 马骏龙， 李云莲， 等 尿沉渣侧定四种方法学参考值范 围调查 月. 中华检脸医学杂志， 1 9 97， 20: 2 2 9 一 2 3 1. 丛玉隆， 马骏龙， 张时民， 等. 尿液细胞成分定量分析方法学研 究 J . 中华检脸医学杂志， 2 o 06， 29: 211 一 214. 熊立凡， 刘成玉. 临床检验基础 M . 第 4 版.北京: 人民卫生 出版社， 2 0 0 7 . 1 6 9 一 1 7 0 . ( 本文编样: 王沪湘) 收稿日期1 2 0 0 7 一 1 1 一 2 9 门J飞JlesjrJ工.J 11，1六JA亡口 rLrL工esLL.LltJ 万方数据