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1、模拟失重后高 + Gx 作用对大鼠脑胶质细胞酸性蛋白表达的 影响 孙喜庆1， 徐志鹏1， 张 舒1， 吴 斌2， 曹新生1， 吴 萍2 （1. 第四军医大学航空航天医学系航空航天生物动力学教研室， 陕西西安 710032； 2. 中国航天员科研训练中心， 北京 100094） 摘要： 目的 探讨模拟失重后高 + Gx 暴露对星形胶质细胞中胶质细胞酸性蛋白 （glial fibrillary acidic pro_ temin， GFAP） 表达的影响。方法 40 只雄性 SD 大鼠随机分为4 组， 即对照组、 +15 Gx 组、 7 d 模拟失重 组、 7 d 模拟失重后再 +15 Gx 组，
2、 每组 10 只。大鼠在动物离心机上承受 + Gx 作用后， 灌注取脑， 固定 包埋， 做石蜡切片。用免疫组化方法观察 GFAP 表达的情况。结果 +15 Gx 组大鼠海马、 顶叶皮层在暴 露 1 d 后 GFAP 阳性细胞由少至多， 以细小型为主； 模拟失重组大鼠海马、 顶叶皮层在暴露后各时间点 阳性细胞逐渐增多， 细小型多见； 模拟失重后再 +15 Gx 组大鼠海马、 顶叶皮层在暴露后各时间点阳性 细胞反应较强， 以肥大型为主， GFAP 表达较 +15 Gx 组和模拟失重组均显著增加。结论 +15 Gx:180 ; 暴露和 7 d 模拟失重均可引起大鼠海马、 顶叶皮层 GFAP 表达增加
3、； 模拟失重后再高 + Gx 暴露可明显 增强脑组织 GFAP 的表达。 关键词： 失重模拟； 正加速度； + Gx； 胶质细胞酸性蛋白； 免疫组化法 中图号： ?i_ing， ?= ABi_peng，ACAG SBD，E= Fin，GAH ?in_;Beng，E= Ping. Space Iedicine J Iedical Kngineering， 2006， 19 （1） ： 19 22 Abstract： Objective Lo ;tDdy po;ible inflDence on cerebral fDnction by BigB + Gx expo;Dre after ;imDl
4、ated MeigBtle;ne;. Method Forty male SD rat; Mere randomly diNided into control groDp，7 d ;imDlated MeigBtle;ne; groDp， +15 Gx groDp and +15 Gx expo;Dre after 7 d ;imDlated MeigBt_ le;ne; groDp， 10 rat; in eacB groDp. After rat; ;Dffered from + Gx ;tre;， brain; Mere remoNed to maOe paraffin ;ection;
5、. LBe expre;ion cBange; of glial fibrillary acidic protein（GFAP）in cerebral cortex and BippocampD; Mere detected by immDnoBi;tocBemical metBod. Result Kxpre;ion cBan_ ge; of GFAP Mere ob;erNed in cerebral cortex and BippocampD; on tBe fir;t day after +15 Gx expo_ ;Dre，and mo;t eNidently on tBe tBird
6、 day. Io;t of tBem Mere ;mall type a;trocyte;. Dmber; of GFAP reactiNe neDron; increa;ed after ;imDlating MeigBtle;ne; for 7 d，mo;tly ;mall type a;tro_ cyte;. FolloMing +15 Gx expo;Dre after ;imDlated MeigBtle;ne; GFAP reaction; Mere ;tronger， and tBe nDmber; of BypertropBic type a;trocyte; Mere Big
7、Be;t in cerebral cortex and BippocampD;. A; compared MitB +15 Gx groDp or ;imDlated MeigBtle;ne; groDp， tBe;e cBange; Mere more ob_ NioD; after ;tre;. Conclusion +15Gx:180; expo;Dre and ;imDlated MeigBtle;ne; for 7 d may in_ dDce an increa;e of expre;ion of GFAP in rat cerebral cortex and BippocampD
8、;. GFAP reaction may be aggraNated after + Gx expo;Dre folloMing ;imDlating MeigBtle;ne;. Key words：MeigBtle;ne; ;imDlation； po;itiNe acceleration；+ Gx； glial fibrillary acidic protein； im_ mDnoBi;tocBemi;try Address reprint requests to： SDn ?i_ing. Department of Aero;pace Fiodynamic;， LBe FoDrtB Ii
9、litary Iedical =niNer;ity，?iPan SBaanxi 710032， GBina 星形胶质细胞是中枢神经系统的主要成分之 一， 具有对各种损害产生强烈反应的特性。胶质 纤维酸性蛋白 （glial fibrillary acidic protemin， GFAP） 是星形胶质细胞的特异蛋白和骨架成分 之一， 在星形胶质细胞成熟时 GFAP 表达增加并 贯穿一生。因此， GFAP 被公认为星形胶质细胞 的特异性分子标记物 1。在正常情况下脑内少 有表达， 而在脑缺血状态下出现反应性上调， 其上 收稿日期： 2005_04_07 通讯作者： 孙喜庆 ;Dnxiing tom
10、. com 调的机制尚未完全阐明。在载人飞船上升和返回 过程中， 航天员会受到 + Gx 或失重以后 + Gx 作 用的影响。已经证实 + Gx 负荷可以导致脑组织 缺血缺氧 2， 因此动物 + Gx 作用后类似于脑缺 血再灌注过程。动物实验证明， 脑缺血后可诱导 脑组织胶质细胞活性增高 （包括星形胶质细胞、 小胶质细胞） ， 它在脑缺血发生、 发展过程中起着 重要作用。李金声等 3的研究显示，+ GQ 暴露 后， 在顶叶皮层、 海马、 丘脑、 丘脑下部和梨状皮层 均可见星形胶质细胞 GFAP 表达增强。载人飞船 第 19 卷 第 1 期 航天医学与医学工程 Vol. 19 No. 1 200
11、6 年 2 月 Space Medicine gm2+ 甲醇溶液、 3 m1- 4 ?:35A9x9100 分别处 理30 m3A 后， 微波热修复10 m3A。滴加山羊血清 封闭液后， 加入兔抗鼠 GFAP 蛋白抗体 （1: 50） ， 在 37 /条件下孵育2 0， 加入羊抗兔 BgG 37 /孵 育 15 m3A， 然后入卵白素 - 生物素 - 酶复合物 37 /孵育 15 m3A。DA6 显色， 苏木素复染， 经脱 水、 透明、 封片后光镜观察。以上各步骤间均用 0.01 m51- 4 P6S 洗 3 3 m3A。阴性对照用正常 山羊血清代替一抗， 余各步骤同上。在 40 10 倍 的
12、光镜视野下， 分别对各组切片的染色阳性细胞 进行计数， 计数 10 个视野， 最后取平均值。 统计分析 所有实验数据均以 x s 表示， 采用 “SPSS 11.0 C5: D3Ad5D.” 进行方差分析及 4SD9t 检验。 结 果 对照组 GFAP 的表达 对照组 GFAP 阳性 表达定位于星形胶质细胞的胞浆及纤维， 呈棕褐 色， 细胞多呈蜘蛛状， 周围有放射状突起， 部分细 胞突起粗短， 无分支； 部分细胞突起细长， 可见多 级细小分支。对照组顶叶皮层和海马 EA1 区仅 有少量阳性细胞及纤维， 胞体多细小， 纤维纤细， 阳性细胞呈散在分布 （见图 1A， 图 2A） 。 +15 Gx
13、暴露后 GFAP 的表达 +15 Gx 组 顶叶皮层和海马 EA1 区在暴露后即刻可见较弱 的 GFAP 阳性反应， 多为胞体小、 突起细的细小 型； 在暴露后 1 d 上述区域 GFAP 呈中等强度的 阳性反应， 阳性细胞数明显增多 （P ,12（ GFAP） ：+*d/0.1*2 :; ?5*A 9.=*5) .2d 1) 1+-01=.1*2 12 .)5*,;, d199,5,21.1*2 B 8 C5.D B 4,d C1*0 E,)， 1999， 32 （5） ： 619) *9 + Gx 0*.d *2 ,2,5?; +,.:*01)+ *9 :5.12 1)/, 12 5.)
14、B 8 M-.=, 4,d1=12, N 4,d1=.0 J2?12,512?， 2002， 15 （6） ： 406,d + GD ,x-*)/5,) *2 ?01.0 91:5100.5; .=1d1= -5*,12 （GFAP）,x-5,)1*2 12 5. :5.12 B 8 CA12 B A,5*.1012? 0*2?1U1; 9*00*12? A;-*A,5+1. 9*5,:5.12 1)=A,+1. B 8 4,.: C5.12 31)， 1996， 12 （1） ： 215*,;,) 12d/=, :0*d1,) 12 ,2d*A,1.0 =,00) B 8 6./5,， 19
15、87， 325 （9） ： 253/d; *9 :5.12 )/-5./*?5.-A *9 5.:1 d/5,d ,1?A0,)2,) B 8 CA12 M-.=, M=1,2=, Q,=A2*0*?;， 1989， 9 （4） ： 591* CT，CA/2? 4C，7,5XA*U)X; O4，et al8C5.12 ?1/.+12, );2A,.), 12=5,.), 9*00*12? =,5,:5.0 1)=A,A, 5. B 8 C5.12 E,)， 1992， 569 （2） ： 2755*=;,d 2,/51, ?/1d.2=, B 8 C,00 Q1)/, E,)， 1997， 290 （6） ： 3853938 作者简介： 孙喜庆， 男， 教授， 研究方向为重力生理学 22 航天医学与医学工程 第 19 卷