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1、.6 8 丝菱亚鱼医堂2 0 0 4 年9 月第1 5 卷第3 期 J ia n g s u P r e v M e d , S e p , 2 0 0 4 , V o 1 1 5 . N o . 3 聚丙烯酞胺凝胶浓缩样本时仅吸收样品中的水 分， 对样本中的抗原、 抗体无吸附、 破坏作用。 故认为 本法除可用于H B s A g的浓缩检测外， 尚可用于其 他抗原、 抗体( 如尿液中H I V -A b ) 的浓缩检测。 杀灭效果的试验效果观察 J l . 1 1 一 1 3 . 2 许斌， 韩光宇， 程梅， 等 .血液 不同试利和设置低限灰区 J l 3 4 2 - 3 4 4 . 中国消毒
2、学杂志， 1 9 9 8 , 1 5 ( 1 ) : H B s A g 、 抗H C V复检中应采用 .I店床检验杂志， 1 9 9 8 , 1 6 ( 8 ) : 参考文献 1 丁兰英， 蒋莉， 李荣芬， 等 . Z WX -1 型紫外线消毒器对微生物 满 影卫 卫与 淞 釜段 全 牛初乳素产品中免疫球蛋白I g G的测定及分析 李莉 (江苏省疾病预防控制 中心， 江苏 南京2 1 0 0 0 9 ) 文献标识码 B 中图分类号 R-3 3 文章编号1 1 0 0 6 -9 0 7 0 ( 2 0 0 4 ) 0 3 -0 0 6 8 -0 2 【关 健 词 】 牛初乳素; 免疫球蛋白I
3、g G ; 高效液相色谱 0日八钊n分 00 1111 牛初乳素中含有丰富的免疫球蛋白I g G， 可对 抗各种细菌， 病毒， 中和毒性物质和调节过敏反应， 是一种纯天然， 无任何副作用的优质保健食品。 为了 解进口与国产牛初乳素产品的质量差异， 以及低温 低压下制备的牛初乳素产品功效成分免疫球蛋白 I g G的稳定性， 采用高效液相亲和色谱法对不同产 品中的免疫球蛋白I g G的含量进行了测定， 获得了 相关的数据。结果报告如下。 1 材料与方法 1 . 1 仪器与试剂仪器: H P 1 1 0 0 型高效液相色谱 仪及色谱工作站， 二极管阵列检测器( 安捷伦公司生 产) ; 试剂: 磷酸二
4、氢钠( A R) , 磷酸氢二钠( A R) 、 甘 氨酸( A R ) 、 盐酸( A R) o A液( p H 6 . 5 , 0 . 0 5 m o l / L 磷酸盐缓冲液) : 8 . 9 5 5 g 磷酸氢二钠十7 . 8 0 2 g 磷酸 二氢钠加双蒸水定容至1 0 0 0 m l . B液: ( p H 2 . 5， 0 . 0 5 m o l / L甘氨酸盐酸缓冲液) : 3 . 7 5 2 g甘氨酸加 双蒸水 2 5 0 m l ， 加 1 5 0 m l 0 . 2 m o l / L盐酸， 加双蒸 水溶解并定容至1 0 0 0 m l 1 . 2 样品及处理样品为市售
5、1 0 种含牛初乳素保 健品， 分别编号1 1 0 。 试样: 精密称取0 . l g ( 精确至 0 . 0 0 0 1 g ) 样品， 用A液稀释至2 5 . 0 m l ， 充分摇匀， 微孔滤膜过滤。标准溶液: 精密称取0 . 0 0 8 0 g 免疫 球蛋白I g G ( s i g m a 公司) 用A液稀释至1 0 . 0 m l ， 该 标准溶液浓度为0 . 8 0 m g / m l . 1 . 3 实验方法 ( 1 )色谱条件: 色谱柱: H i 一T r a p P r o t e i n G 柱， l m l ; 色谱柱预处理: 用约 1 0 0 m l 的双蒸水洗柱 (
6、 流速 0 . 2 m l / mi n ) 再用 2 0 m l 体积的A液平衡色 谱柱; 检测波长: 2 8 0 n m; 流动相: A液 ( p H 6 . 5 , 0 . 0 5 m o l / L磷酸盐缓冲液) : 8 . 9 5 5 g 磷酸氢二钠+ 7 . 8 0 2 g磷酸二氢钠加双蒸水定容至 l 0 0 0 m l o B液: ( P H 2 . 5 0 . 0 5 m o l / L甘氨酸盐酸缓冲液) : 3 . 7 5 2 8甘 氨酸加双蒸水2 5 0 m l ， 加 1 5 0 m l 0 . 2 m o l / L盐酸， 加双蒸水溶解并定容至1 0 0 0 m l 。
7、进样量2 0 川， 外 标一点法定量。 ( 2 ) 梯度洗脱: 按表 1 参数进行梯度洗脱。 衰 1 梯度洗脱衰 时间( mi n )流速( ml / mi n )A液 ( %)B液 ( %) 0 . 0 0 . 4 0 0 4 . 5 0 . 4 0 0 5 . 5 0 . 4 0 0 1 5 . 0 0 . 4 0 0 1 5 . 5 0 . 4 0 0 3 5 . 0 0 . 4 0 0 1 0 0 1 00 1 0 0 1 0 0 ( 3 )准确度与精密度试验: 准确度试验， 称取同 一样品6 份， 3 份测定本底值， 3 份添加免疫球蛋白 I g G标准溶液， 扣除本底均值， 计算平
8、均回收率; 精 收稿日期: 2 0 0 4 -0 5 -2 0 作者简介: 李莉( 1 9 5 6 -) ， 女， 江苏如东人， 副主任技师。 万方数据 江苏预防医学2 0 0 4 年9 月第1 5 卷第3 期 J i a n g s u P r e v M e d , S e p , 2 0 0 4 , V o l 1 5 , N o . 3 .6 9 密度试验， 称取同一样品3 份， 测均值， 计算标准差、 RS Do 2 结果 2 . 1 色谱图图1 为测定I g G色谱图， 其中峰为 I g G色谱峰， 保留时间为1 1 . 7 mi n o 一111一 月闷， U A m 乏 T -
9、0 ” m in 川州川川训刊利封利利月共0 图1 牛初乳紊产品中免痊球蛋白坛 G测定色诺圈 2 . 2 准确度与精密度试验准确度: 样品添加免疫 球蛋白I g G标准溶液， 扣除本底均值， 测得平均回 收率为 9 3 . 6 0 o ( n =3 ) 。精密度: 样品测得均值为 2 8 - 0 7 %， 标准差为 0 . 6 1 , R S D为 2 . 2 0 0 0 裹 2 1 0 种含牛初乳索样品免疫球蛋白 I g ( G 含.测定结果 样品编号样品来源I g G含量( %) I g G的含量具有很大差异。进口牛初乳素中的免疫 球蛋白I g G含量普遍较高， 均在 2 5 %以上。国产
10、牛 初乳素的免疫球蛋白I g G含量都比进口牛初乳素 低， 且不同产品之间差异较大， 最高可达到 2 1 . 6 0 0 最低的仅有 1 . 3 %。见表2 , 2 . 4 样品稳定性将 2 号、 3 样品置实验室内室温 下避光放置1 年， 测定其免疫球蛋白I g G的含量。 结 果: 2 号样品免疫球蛋白I g G的含量为2 0 . 5 0 o ， 较原 来下降了2 7 . 0 Y o s 3 号样品免疫球蛋白I g G的含量 为 1 1 . 5 0 0 ， 较原来下降了5 5 . 3 0 o 。其中2 号样品为 添加了黄酮类化合物的牛初乳素产品。 3 讨论 目前国内测定免疫球蛋白I g G
11、的方法有紫外 分光光度法、 免疫比浊法等， 这两种方法仅适用于血 清制品的测定。 牛初乳素产品成份比较复杂， 除了赋 形剂外， 还添加了其他营养素， 因而干扰因素较多， 不能采用上述两种方法来测定。高效液相亲和色谱 法是近几年发展起来的一种新的分离技术 ， 其将配 基键合在凝胶柱上， 活性免疫球蛋白I g G在P H 6 . 5 的磷酸缓冲液中与配基连接并吸附在凝胶柱上， 再 用P H 2 . 5 的盐酸甘氨酸缓冲液将其洗脱， 从而达到 有效分离。 本次测定结果表明， 采用该法测定牛初乳 素产品中的活性物质免疫球蛋白I g G， 分离效果好， 平均回收率为 9 3 . 6 0 o ， 批内相对
12、标准偏差为 2 . 2 0 o , 并且样品前处理步骤简单。 牛初乳素产品测定结果表明国产产品在质量上 参差不齐， 应当引起有关部门的高度重视， 不能仅以 测定蛋白质作为这类产品的质量控制指标， 因为牛 初乳素的主要功效成分是免疫球蛋白， 应当将免疫 球蛋白I g G的含量作为主要的指标来测定， 真正保 护消费者的利益。 牛初乳素是低温低压下制成的冷冻干燥产品， 为了考察其存放时间， 做了稳定性试验 ， 结果表明， 这类产品的存放时间不宜过长， 其功效成份的含量 在 1 年后下降。尤其是添加了黄酮类化合物的牛初 乳素产品， 下降速率更快。因此， 生产厂家在设计牛 初乳素这类保健品处方时， 应当充分考虑到处方中 各种化合物之间的反应以及配伍禁忌， 做到合理配 方 ， 保证产品的质量。 匕口lltllb月1 ，曰R巴J工n6 ，JO勺n乙11 .口. 0内bs 0乙1111 进 口 进口 进 口 国产 国产 国产 国产 国产 国产 国产 2 . 3 样品测定测定牛初乳素产品中免疫球蛋白 万方数据