小鼠肺癌模型的建立及其在顺铂、恩度对比试验中的应用.pdf

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1、9 4 6 新疆医科大学学报J O U R N A l O FX I N J I A N GM E D I C A I 。U N I V E R S I T Y2 0 0 9J u l ，3 2 ( 7 ) 小鼠肺癌模型的建立及其在顺铂、恩度对比 试验中的应用 张国明，庞作良”，罗洞波 ( 新疆医科大学附属肿瘤医院胸外科，新疆乌鲁木齐8 3 0 0 1 1 ) 摘要：目的：构建L e w i s 肺癌C 5 7 B L 6 小鼠皮下移植瘤模型，研究恩度与顺铂及联和用药对L e w i s 肺癌 C 5 7 B L 6 小鼠皮下移植瘤的生长抑制作用。方法：使用C 5 7 B L 6 小鼠作为实验

2、动物。培养小鼠I e w i s 肺癌细胞， 收集对数生长期的肿瘤细胞，调整细胞悬液浓度至1 1 0 7 m l 。于小鼠右侧腋部皮下注射细胞悬液0 2m l ( 细胞总 数为2 1 0 6 ) 。建立L e w i s 肺癌小鼠皮下移植瘤动物模型。待接种后第8 天，能扣及肿瘤时( 约8m m ) 开始实验。 将4 0 只荷瘤小鼠随机分为四组。A 组：生理盐水组；B 组：顺铂组；C 组：恩度组；D 组：恩度与顺铂联用组。C 组、 D 组每日给予恩度3m g k g ，腹腔注射给药，每日1 次，连续1 4d ；B 组、D 组腹腔注射顺铂0 2m l ( 按照1m g k g 给 药) ，每天1

3、次，连续2 周。A 组给予生理盐水0 2m l 只腹腔注射，每E l1 次连续二周后处死。观察各组小鼠的生 存质量情况，每3 天称取体重一次并测最肿瘤长短径，描绘肿瘤生长曲线；称量瘤重。计算抑瘤率。结果：各治疗 组小鼠移植瘤生长较生理盐水组相对缓慢。联合治疗组肿瘤体积明显小于牛理盐水组、顺铂组和恩度组；顺铂组、 恩度组和联合治疗组抑瘤率分别为3 2 1 9 、2 1 9 6 、5 5 0 8 。顺铂与恩度联用对小鼠移植瘤具有协1 日j 抑制作用 ( Q 1 1 5 ) 。结论：在实验条件下，恩度与化疗药物顺铂均对L e w i s 肺癌皮下移植瘤生长有明显抑制作用。恩度与 顺铂对L e w i

4、 s 肺癌移植瘤具有较好的协同抑制作用，同时能够改善小鼠的生存质量。在肺癌治疗中具有一定潜力。 关键词：L e w i s 肺癌；恩度；顺铂 中图分类号：R 一3 3 2 ；R 7 3 4 2 ；R 7 3 0 5 3文献标识码：A文章编号：1 0 0 9 5 5 5 1 ( 2 0 0 9 ) 0 7 - 0 9 4 6 0 4 T h ee s t a b l i s h m e n to ft h em o d e lo fS m a l lr a tl u n gc a n c e ra n di t7 Sa p p l i c a t i o n i nc o n t r a s t

5、e x p e r i m e n to fC i s p l a t i n Z H A N GG u o - m i n g ，P A N GZ u o - l i a n g ，L U OD o n g - b o ( D e p a r t m e n to fC h e s ts u r g e r y ，A f f i l i a t e dT u m o rH o s p i t a l ，X i n ji a n gM e d i c a lU n i v e r s i t y ， U r u m q i8 3 0 0 11 ，C h i n a ) A b s t r a

6、c t ：O b j e c t i v e ：T os t o d yt h ef u n c t i o no fY H 一16 ，D D Pa n dc o m b i n e dU s i n go ns u b u t a n e o u s l vi m p l a n t e dL e w i s1 u n gc a r c i n o m a ( L L C ) o fC 5 7 B I 6M i c e M e t h o d s ：F o r t yC 5 7 B L 6m i c ew e i g h t i n g2 0 2 ，6 8 w e e k so l dw e

7、 r eu s e da n da 1 1w e r em a l e T h eL L Ce e l l l i n ew a sc u l t i v a t e di nah u m i d i f i e da t m o s p h e r eo f5 C 0 2a t3 7 i nD M E Mm e d i u m ，s u p p l e m e n t e dw i t h1 5 c a l fs e r u ma n da n t i b i o t i c s T u m o rm o d e l sw e r e e s t a b l i s h e db yh y

8、p o d e r m i c a li n j e c t i o no f2X1 0 6t u m o rc e l l si n t ot h er i g h ta r m p i to ft h em i c e ，a n dt u m o r g r o w t hw a sc a l c u l a t e db ym e a s u r i n gt h el o n ga n ds h o r td i a m e t e r s T h em i c ew e r ed i v i d e dr a n d o m l yi n t o f o u rg r o u p s

9、a n de a e hg r o u pc o n s i s t so f1 0m i e e A l lg r o u p sw e r et r e a t e df r o mt h ee i g h t hd a yo ft h eL L C c e l l si n j e c t e dt h r o u g h o u tt h ew h o l ee x p e r i m e n t C i s p l a t i ng r o u pw e r eg i v e nw i t hD D P0 2m l ( 1m g k g ) ， Y H 一1 6g r o u pw

10、e r eg i v e nw i t hY H 一1 61 5m g k g ，D D P + Y H 一1 6g r o u pw e r eg i v e nw i t hD D P + Y H 一1 6t h e s a m ed o s el i k eD D Pg r o u pa n dY H 一1 6g r o u p a n de q u a lv o l u m eo fs a l i n ew a sg i v e nt oc o n t r o lg r o u pm e a n t i m e T u m o r sg r o w t hw a sd e l i n

11、e a t e dt h et u m o rg r o w t hc u r v e T h r e ew e e k sa f t e ri m p l a n t a t i o n ，a l lm i c e * 作者简介：张国明( 1 9 8 3 一) 男，在读硕士研究生，研究方向：肺癌。 “通讯作者：庞作良，男，教授，博士研究生导师E - m a i l ：p a n g z u o l i a n g 1 2 6 c o r n 。 万方数据 新疆医科大学学报J O U R N A LO FX I N J I A N GM E D I C A LU N I V E R S I T

12、 Y2 0 0 9J u l ，3 2 ( 7 ) 9 4 7 w e r es a c r i f i c e d T h ew e i g h to ft u m o r sa n dm i c ew a sm e a s u r e d R e s u l t s ：T h et r a n s p l a n tl u m pv o l u m eo f t r e a t e dg r o u p sw e r eo b v i o u ss m a l lt h a nt h es a l i n eg r o u p D D Pg r o u p ，Y H 一1 6g r o u

13、 p ，D D P + Y H 一1 6g r o u p T h e i rs u p p r e s s i n gr a t ea r e3 2 1 9 ，2 1 9 6 ，5 5 0 8 C o n c l u s i o n ：U n d e rt h ee x p e r i m e n tc o n d i t i o n ，D D P a n dY H - 1 6c a nr e p r e s si m p l a n t e dl u n gc a r c i n o m ao b v i o u s l y ，t h e yh a v ec o n j u n c t i

14、 o nf u n c t i o n ( Q 1 1 5 ) T h e yc a ni m p r o v e m e n tl i v i n gq u a l i t yo fs m a l lr a t s K e yw o r d s ：l e w i sl u n gc a r c i n o m a ；c i s p l a t i n ；Y H 一1 6 支气管肺癌( b r o n e h i o g e n i c a r e i n o m a ) 简称肺 癌( 1 u n g e a n e e r ) ，目前是发病率和死亡率增长最快、 对人类健康和生命威胁最大的恶性

15、肿瘤 1 。尽管近 年来多学科综合治疗模式的进展使得t i e d , 细胞肺癌 的治疗效果有了较大提高，但是目前死亡率仍然很 高，总的五年生存率仅1 5 左右，因而迫切需要寻 找毒性较低的药物来增加非小细胞肺癌的疗效瞳 。 本课题研究血管内皮抑制素恩度在体内实验条件下 对L e w i s 肺癌小鼠皮下移植瘤的抗肿瘤作用，进一 步与顺铂联用，研究其对顺铂是否有化疗增敏和加 强抗血管生成作用，产生更强的抗肿瘤效果。通过 测量体重和检测尾静脉血白细胞数的波动，比较两 药单用及联合用药的毒副反应，为肺癌治疗新模式 提供实验基础。 l 资料与方法 1 1 一般资料 1 1 1 实验动物C 5 7 B

16、 I 。6 小鼠，共5 0 只，清洁 级，均为雄性，6 - - 8 周龄，体重1 8 2 2 9 ，购自新疆医 科大学实验动物中心。L e w i s 肺癌细胞系购自中国 科学院上海生命科学研究所。 1 1 2 药物与试剂恩度( 山东先声麦得津生物制 药有限公司) 。顺铂( D D P ) ，由山东齐鲁制药有限公 司提供。D M E M 培养基( G i b e o 公司) 、小牛血清 ( 杭州四季青公司) 、胰蛋白酶( 上海华美生物试剂公 司) 。 1 1 3 实验仪器S S B - 2 超净台( 上海净化设备 厂) 、5 C O ：恒温培养箱( 美国力高公司) 、倒置相 差显微镜( 日本o

17、 l y m p u s 公司) 、低温高速离心机 ( 上海医用分析仪器厂) 、电子天平( H R 一2 0 0 型日本 L I M I T E D 公司) 、细胞培养瓶( 德国G r e i n e r 公司) 、 游标卡尺( 北京计量器械厂) 。 1 2 方法 1 2 1荷L e w i s 肺癌小鼠模型的建立将L e w i s 肺癌细胞置于完全培养基中培养并传代，取生长良 好的细胞经胰酶消化后，用计数板计数，将浓度调整 至1 1 0 7 个m l 以供注射。取5 0 只C 5 7 B L 6 小 鼠，将2 1 0 6 个( o 2m 1 ) L e w i s 肺癌细胞接种于每 只小鼠

18、右季肋部皮下，接种8d 后开始抑瘤实验。 1 2 2 抑瘤实验将造模成功荷瘤小鼠随机分成 4 组，每组1 0 只，A 组：生理盐水组；B 组：顺铂组； C 组：恩度组；D 组：恩度与顺铂联用组。C 组、D 组每E t 给予恩度1 5m g k g ，腹腔注射给药，每日1 次，连续1 5d ；B 组、D 组腹腔注射顺铂0 2m l ( 按 照1m g k g 给药) ，每天1 次，连续1 5d 。A 组给予 生理盐水0 2m l 只腹腔注射，每日1 次，连续1 5d 后处死。观察各组小鼠的生存质量情况，每3 天称 取体重一次并用游标卡尺测量肿瘤长径( L ) 和短径 ( w ) 并按肿瘤体积计算

19、公式V L w z z 计算肿 瘤体积 3 。描绘肿瘤生长衄线；称量瘤重，计算抑瘤 率( I R ) 肿瘤抑制率一( 生理盐水组肿瘤重量一实 验组肿瘤重量) 生理盐水组重量i 0 0 ，参照以 下公式计算Q 值并判断两药的联合效应 4 ：Q E ( A + B ) l E A + ( 1 一E A ) E B ；其中，E ( A + B ) 为 两药合用的抑瘤率，E A 和E B 为两药单用的抑瘤 率。Q 值为0 8 5 1 1 5 表示两药作用相加，Q 1 5 表示两药作用协同，Q 1 1 5 ) ( 表2 ) 。 表2 四组小鼠移植瘤重量及抑制率 2 4 对体重变化的影响 治疗后模型组、恩

20、度组二 组之间鼠重均值比较没有统计学差异。此二组的鼠 图1 肿瘤生长曲线重均值皆大于化疗组与恩度+ 化疗组，差异极显著。 2 3 四组肿瘤瘤重及抑制率实验组与对照组间 化疗组与恩度+ 化疗组相比，鼠重较小，两组比较有 肿瘤重量差异有统计学意义，D D P 组、恩度组与恩 显著性差异。说明使用顺铂化疗药可致小鼠体重减 + D D P 组间差异有统计学意义，恩度与顺铂对肿 轻，恩度可以减轻这一毒副作用( 表3 ) 。 裹3 各组治疗后鼠重均值比较 2 5 肿瘤组织的病理观察大体观察：肿瘤血供丰 富，质脆，易出血，浸润周围组织和皮肤，界限不清， 不易分离，切面呈鱼肉样。H E 染色镜下观察：癌巢 大

21、，癌细胞数目丰富，细胞排列紧密，细胞体积大，胞 质丰富，核大，纤维组织包裹不明显，间质血管丰富。 3 讨论 目前，化疗作为恶性肿瘤主要治疗手段之一，已 广泛应用于临床。但是一方面，由于癌症是一种消耗 性疾病，其代谢率很高，此外，癌症病人常有葡萄糖耐 量异常，会造成高血糖现象，从而抑制食欲，减少食物 摄取量 5 ，因此往往引起患者迅速消瘦。另一方面， 由于化疗在杀灭肿瘤细胞的同时，也可引起病人不同 程度的毒性反应，造成暂时性味觉改变，而产生厌食 现象。临床上使用的化疗药多数可引起胃肠道反应， 常表现为食欲不振、厌食、异味感、腹胀、便秘、恶心和 呕吐等。所有这些症状可影响病人化疗的疗效，影响 病人

22、的生活质量。临床上约有4 0 8 0 的癌症病 人伴有不同程度的营养不良，可导致化疗终止或改 变，影响化疗足量、足疗程的治疗。因此，促进患者的 食欲，增加病人的营养摄入至关重要- 7 。 1 9 7 1 年F o l k m a n 教授首次提出肿瘤生长依赖 血管形成的概念。当肿瘤直径超过1 2m E 时，直 接由微环境提供的氧和营养物质己不能满足其生长 需要，此时肿瘤的生长必须有赖于新生血管的生成 来运送氧和营养物质。血管生成不仅在肿瘤的生长 过程中必需，而且在肿瘤的侵袭和转移阶段也发挥 作用 。抗血管生成治疗成为肿瘤治疗领域的一线 曙光，通过抑制肿瘤新生血管的生成阻断肿瘤细胞 的营养供给、

23、从而抑制肿瘤的生长和转移。恩度 T M ( E n d o s t a r ) 是由中国南京先声药业股份有限公 司开发的新型重组人血管内皮抑素，临床前研究结 果显示该药能抑制血管内皮细胞增殖、血管生成和 肿瘤生长，且不良反应很小 9 一l o 本课题研究重组人血管内皮抑素恩度在体内实 验条件下对L e w i s 肺癌小鼠皮下移植瘤的抗肿瘤作 用，进一步与顺铂联用，研究其对顺铂是否有化疗增 敏和加强抗血管生成作用，产生更强的抗肿瘤效果。 通过测量肿瘤体积，肿瘤瘤重计算抑瘤率，比较两药 单用及联合用药的抗肿瘤作用；通过测量体重比较 两药单用及联合用药的毒副反应。为肺癌治疗新模 式提供实验基础。

24、( 下转9 5 1 页) 万方数据 新疆医科大学学报J O U R N A LO FX I N J I A N GM E D I C A I 。U N I V E R S I T Y2 0 0 9J u l ，3 2 ( 7 ) 9 5 1 应数值高于正常脑白质。说明高级别星形细胞瘤瘤 周水肿区的肿瘤血管密集程度高、血供丰富。本文 结果中提到的“晕”征是指在T 2 W I 上显现出的环绕 在瘤体与水肿之间的第三种信号，即信号强度介于 瘤体与水肿之间，增强后“晕”区均可见异常强化，与 水肿区形成对比、强化程度等或稍低于瘤体实性部 分，说明“晕”区从平扫到增强均表现出它的特殊性。 本文2 1 例高

25、级别星形细胞瘤均可见范围不同的 “晕”征，而1 7 例单发脑转移瘤瘤体与瘤周水肿的界 限是清晰的，平扫与增强信号强度彼此分明，说明这 两种肿瘤瘤体与瘤周水肿之间的组织学成分是不同 的。“晕”征就是高级别星形细胞瘤瘤周水肿发生机 制以及瘤周高肿瘤血管密度、血供丰富的具体体现， 也是瘤周肿瘤细胞沿血管壁浸润及肿瘤新生异常血 管在M R I 上最直接的反应。 3 2 浸润、破坏、增殖是高级别星形细胞瘤的生物 学行为K i 一6 7 是反映脑胶质细胞增殖活性的标记物 李志强等 4 研究表明高级别犀形细胞瘤的微血管 密度( M V D ) 和K i - 6 7 L I 数值均显著高于低级别星 形细胞瘤且

26、M V D 与K i - 6 7 L I 问存在正相关性，说 明肿瘤新生血管的形成促进了瘤细胞的恶性增殖， 并可导致细胞异形性改变。随着胶质瘤级别的增 高、M V D 、K i 一6 7 L I 值就会增高，肿瘤细胞的分裂、增 殖、浸润也就越明显，恶性程度亦越高。本文结果中 单发脑转移瘤环形强化壁虽厚薄不均，但完整连续， 而高级别星形细胞瘤则均出现不同程度的破溃、松 散且白质深部一侧发生率为7 6 2 ，说明局部肿瘤 细胞生长、繁殖活跃且有向深部白质发展的趋势。 同时从两组“癌性卫星灶”即瘤体周围的浸润“子灶” 的发生率、胼胝体和侧脑室前、后角受侵的发生率以 及脑脊液播散的发牛率来看，存在明显

27、差异。具体 表现为单发脑转移瘤膨胀性生长，以瘤体引发的水 肿和占位效应为主i i 高级别星形细胞瘤则是以对 脑实质的浸润、破坏共至播散为主。因此，笔者认 为这是两种肿瘤乍长方式或生物学行为不同在 M R I 征象上的直接体现。也是高级别星形细胞瘤在 M R I 上表现出的侵袭性生长与该肿瘤生长过程中 具有形成其生长增殖所需肿瘤血管网的能力的相互 印证。 综上所述，虽然单发脑转移瘤与高级别星形细 胞常规M R I 征象有很多共同之处，鉴别有一定困 难，但原发脑肿瘤与脑转移瘤不同的病理基础决定 了它们各自有不同的生物学行为，而且都细致地在 常规M R I 征象中体现出来，如“晕”征、“癌性卫星 灶

28、”、胼胝体受侵等，只要全面、认真、仔细地观察和 总结，抓住鉴别要点，就能够提高临床工作中的鉴别 能力。 参考文献： 1 任广，陈爽，冯晓源脑肿瘤瘤周水肿的M S C T 灌注成像 研究进展 J 国际医学放射学杂志。2 0 0 8 。3 1 ( 1 ) ：1 5 2 L a wM ，C h aS ，K n o p pE A ，e ta 1 H i g h g r a d eg l i o m a sa n d s o l i t a r ym e t a s t a s e s ：d i f f e r e n t i a t i o nb yu s i n gp e r f u s i o n

29、a n dp r o t o ns p e c t r o s c o p i cM Ri m a g i n g J R a d i o l o g y ，2 0 0 2 ，2 2 2 ( 3 ) ： 7 1 5 7 2 1 3 张皓。沈天真，陈星荣，等M R 灌注成像在鉴别单发脑转移 瘤与高级别胶质瘤中的价值 J 中华放射学杂志，2 0 0 6 ，4 0 ( 4 ) ：3 9 4 - 3 9 5 4 李志强，袁先厚。张望来等微血管密度和K i 一6 7 指数与星形 胶质瘤临床病理关系的研究 J 实用癌症杂志，2 0 0 1 ，1 6 ( 1 ) ： 1 6 1 7 r 收稿日期：2 0 0

30、 9 0 2 2 3 ( 上接9 4 8 页) 本研究中发现顺铂与恩度联用对小鼠移植瘤具 有协同抑制作用( Q 1 1 5 ) 在实验条件下，恩度 与化疗药物顺铂均对L e w i s 肺癌皮下移植瘤生长有 明显抑制作用。恩度与顺铂对L e w i s 肺癌移植瘤具 有较好的协同抑制作用，同时能够改善小鼠的生存 质量。在肺癌治疗中具有一定潜力。 参考文献： 1 翁心植控烟是预防肺癌最重要的措施 J 中华全科医师杂 志。2 0 0 5 4 ( 6 ) ：3 2 7 3 2 8 2 F e r r e i r aC G 。H u i s m a nC G i a c c o n eG N o v

31、e la p p r o a c h e st Ot h e t r e a t m e n to fn o n s m a l lc e l ll u n gc a n c e r J C r i tR e vO n e o l H e m a t o l 。2 0 0 2 ，4 1 ( 1 ) ：5 7 7 7 3 S t e e lG G G r o w t hk i n e t i c s o ft u m o r s M O x f o r d ：C l s v e n d o n P r e s sO x f o r d ，2 0 0 3 ：7 0 4 Y a m a g u c

32、h iY ，O h s h i t aA ，K a w a b u e h iY ，e ta 1 A d o p t i v ei m m u n o t h e r a p yo fc a n c e ru s i n ga c t i v a t e da u t o l o g o u sl y m p h o c y t e s - c u r r e n ts t a t u sa n dn e wS t r a t e g i e s J H u mC e l l ，2 0 0 3 ，1 6 ( 4 ) ：1 8 3 - 1 8 9 5 陈金风。李红。胡雪慧癌症化疗病人的消化系统症

33、状观察及 饮食护理对策 J 实用护理杂志，2 0 0 1 ，1 7 ( 1 ) ：4 3 6 乔莲芝韩仕萍，张泽秀3 4 例癌症病人的营养状况分析 J 解放军预防医学杂志1 9 9 7 1 5 ( 2 ) ：1 2 1 1 2 3 7 阳世伟。殷磊癌症病人的营养不良与预防措施 J 护理学 杂志2 0 0 1 1 6 ( 6 ) ：3 8 3 8 D k h i s s iF L uH 。S o r i aC ，e ta 1 E n d o s t a t i ne x h i b i t sad i r e c t a n t i t u m o re f f e e ti na d d i

34、t i o nt oi t sa n t i a n g i o g e n i ca e t i v i t yi nC O I o nc a n c e rc e l l s J H u mG e n eT h e r ，2 0 0 3 ，1 4 ( 1 0 ) ：9 9 7 1 0 0 8 9 杨林，王金万，汤仲明，等重组人血管内皮抑制素I 期临床 研究 J 中国新药杂志。2 0 0 4 。1 3 ( 6 ) ：5 4 8 5 5 3 1 0 杨林。手金万崔成旭，等重组人血管内皮抑制素Y H 一1 6 联合用药治疗晚期非小细胞肺癌的多中心1 1 期临床试验 J 中国新药杂志，2 0 0 5 ，1 4 ( 2 ) ：2 0 4 2 0 7 r 收稿日期：2 0 0 9 0 2 1 8 万方数据