结核菌H37RA皮内接种对小鼠巨噬细胞的激活效应.pdf

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1、2 3 2 中 国 人 兽 共 患 病 学 报 Ch i n e s e J o u r n a l o f Z o o n o s e s 2 0 0 6 , 2 2 ( 3 ) 文章编号: 1 0 0 2 一2 6 9 4 ( 2 0 0 6 ) 0 3 一0 2 3 2 一0 4 结核菌 H 3 7 R a 皮内接种对小鼠巨噬细胞的 激活效应 关 陶昆， 卢贤瑜 摘要: 目的探讨小鼠皮内接种结核菌H 3 7 R a 后， 腹腔M0是否被免疫激活以及激活后氮氧化物的产生、 抗结核细胞 因子的表达， 从而了 解H 3 7 R a 的免疫应答过程及对M o的抗菌免疫作用。方法用H 3 7 R

2、a , B C G皮内免疫小鼠后第3 0 , 6 0 天， 分别采用G r i e s s 法、 化学法、 E L I S A法检测小鼠 腹腔M o在受到、 未受到I F N - y 刺激后N O , 1 -1 2 q 的产生以 及I L - 1 2 , T N F - a 的表达水平。结果 H 3 7 R a 免疫小鼠后能显著诱导M4)分泌表达 I L - 1 2 , T N F - a ， 与B C G皮内接种组、 未免疫组比较， 其差 异均有统计学意义( P 0 . 0 5 ) ; 也能诱导M 0产生N O , 玫q， 与未免疫组比较具有统计学意义( P 0 . 0 5 ) ， 与B C

3、 G皮内接种 组比较， 无明显差异; ) I F N - y 对巨噬细胞氮氧化物的产生、 细胞因子的表达具增强效应。结论H 3 7 R a 皮内接种小鼠后能诱 导巨噬细胞活化并产生较强的激活效应， 且该效应略优于B C G . 关键词: H 3 7 R a ; 巨噬细胞; 氮氧化物; 细胞因子 中图分类号: R 3 9 2 . 1 2 文献标识码: A Ma c r o p h a g e a c t i v a t i o n a f t e r i n t r a c u t a n e o u s v a c c i n a t i o n w i t h M少 c o b a c t

4、e r i u m t u b e r c u l o s i s H 3 7 R a s t r a i n i n mi c e T A O K u n , L U X i a n - y u ( D e p a r t m e n t o f C l i n i c a l I m m u n o l o g y , K e y L a b o r a t o r y o f L a b o r a t o r y Me d i c a l D i a g n o s i s , Mi n i s t r y o f E d u c a t i o n ， C h o n g q i n

5、 g Me d i c a l U n i v e r s i t y , C h o n g q i n g 4 0 0 0 1 6 , C h i n a ) A B S T R A C T ; T o d e t e r m i n e w h e t h e r t h e c e l i a c m a c r o p h a g e s a r e a c t i v a t e d a n d t h e p r o d u c t i o n o f n i t r i c o x i d e a n d e x p r e s s io n o f t h e a n t i

6、 - t u b e r c u l o u s c y t o k i n e s a f t e r m a c r o p h a g e a c t i v a t i o n , m a l e C 5 7 B L / 6 m i c e w e r e i m m u n i z e d i n t r a c u t a n e o u s l y w i t h M y c o b a c t e r i u m t u b e r c u l o s i s H 3 7 R a , a n d t h e p r o d u c t i o n o f N O a n d 从

7、q a s w e ll a s t h e e x p r e s s i o n l e v e l s o f I L - 1 2 a n d T N F - a o f t h e I F N - ,y - s t i m u l a t e d o r u n - s t im u l a t e d m o u s e c e l ia c m a c r o p h a g e s w e r e d e t e r m i n e d b y G r ie s s s m e t h o d , c h e m i c a l m e t h o d a n d E L I S

8、 A a s s a y r e s p e c t i v e l y . T h i rt y a n d 6 0 d a y s a f t e r t h e i n t r a c u t a n e o u s v a c c i n a t i o n , i t w a s f o u n d t h a t i m m u n i z a t i o n o f M. t u b e r c u l o s i s H 3 7 R a s t r a i n c o u l d i n d u c e m a c r o p h a g e s e f f e c t i v

9、 e l y t o s e c r e t e I L - 1 2 a n d T N F - a w i t h s i g i f i c a n t d i f f e r e n c e s w i t h t h e B C G - i n t r a c u t a n e o u s l y i m m u n i z e d g r o u p a n d t h e u n - i m m u n i z e d g rou p . I n a d d i t i o n , i t a l s o i n d u c e m a c r o p h a g e s t o

10、 p r o d u c e N O a n d 姚姚 w i t h s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e t o t h e u n - i m m u - n i z e d g r o u p ， b u t w i t h o u t a n y d i f f e r e n c e w i t h t h e B C G - i m m u n i z e d g r o u p o f m i c e . I F N - y d e m o n s t r a t e d a n i n t e n s i v e e f f e

11、c t o n t h e p r o - d u c t i o n o f n i t r i c o x i d e a n d c y t o k i n e s f r o m m a c r o p h a g e s . I t i s c o n c l u d e d t h a t t h e i n t r a c u t a n e o u s v a c c i n a t i o n w i t h M. t u b e r c u l o s i s H 3 7 R a s t r a in c a n i n d u c e a c t i v a t i o

12、n o f m a c r o p h a g e s a n d g e n e r a t e s t r o n g i m m u n e r e s p o n s e s . T h i s e f f e c t m a y b e b e t t e r t h a n t h a t o f i m- mu n i z a t i o n wi t h B C G . K E Y WO R D S : H 3 7 R a ; m a c r o p h a g e ; n i t r i c o x i d e ; c y t o k i n e s 近年来随着人口流动的增加

13、， 人类免疫缺陷病 毒( H I V ) 与结核菌伴发感染以及结核杆菌多重耐药 菌株的出现， 使全球结核病死灰复燃， 发病率、 死亡 率呈不断上升趋势( 1 ) 。而传统的B C G疫苗保护效 果较不稳定， 从。 一8 0 %不等(2 ) ， 且主要对刁 , ) L 结核 的预防有效， 对成人 结核病预防效果不理想。原因 之一是B C G菌株变异造成其保护性抗原丢失， 其次 与非典型分枝杆菌感染有关。因此， 研制新疫苗控 制结核病的传播已成当务之急。H 3 7 R a 是人型结 核杆菌有毒株H 3 7 R v 减毒而来的无毒株， 据报 道(4 -1 ) , H 3 7 R a 比B C G具有

14、更完整的 免疫原性， 国 外也在关注H 3 7 R a 是否可研制成结核疫苗。而结 核菌进入机体后， 首先被体内M (D 捕获并吞噬、 消 ， 重庆市教委( 2 0 0 4 ) 第1 2 号科研基金、 重庆医科大学科技创新基金 ( C x 2 0 0 2 0 4 ) 资助项目 通讯作者: 卢贤瑜 作者单位: 重庆医科大学临床免疫学教研室， 临 床检验诊断学省部共 建教育部重点实验室， 重庆 4 0 0 0 1 6 2 0 0 6 , 2 2 ( 3 ) 中 国 人 兽 共 患 病 Ch i n e s e J o u r n a l o f Z o o 学 报 2 3 3 化， 因此 Mo的活

15、化情况对其在体内的转归具重要 作用。本研究拟用H 3 7 R a 免疫小鼠， 检测腹腔 M (D 是否被免疫激活以及激活后氮氧化物等效应物质的 产生、 抗结核细胞因子的表达， 从而了解H 3 7 R a 的 免疫应答过程及对 MD的抗菌免疫作用， 从分子水 平上为开发 H 3 7 R a 成为新型抗结核疫苗提供理论 和实践基础。 1 材料与方法 1 . 1 实验动物C 5 7 B L / 6 雌性小Ca 6 一8 周龄， 体 重1 8 士 2 g , 购自 重庆医科大学实验动物中心。 1 . 2 主要试剂H 3 7 R a 菌购自北京药品生物制品 检定所， 编号为9 3 0 2 0 ; B C

16、 G购自 上海生物制品研究 所， 批号为 2 0 0 3 0 5 0 4 0 1 ; r mI F N - Y 购自晶美公司， 为 P E P R O T E C H E C产品; 小鼠I L - 1 2、 T N F - a E L I S A 检测试剂盒购自上海森雄科技实业有限公司， 批号 分别为0 5 0 9 2 1 4 和0 5 0 9 2 1 5 ; N O检测试剂盒、 H Z q 检测试剂盒则为碧云天生物技术公司、 南京建成生 物工程研究所产品。 1 . 3 细菌增菌H 3 7 R a 菌种用0 . 5 m 1 生理盐水和 苏通培养液的混合液( 体积比为1 : 3 ) 稀释， B

17、C G疫 苗每支用专用稀释液 0 . 5 m 1 稀释， 分别接种于罗氏 斜面培养基上培养。1 8 d 后分别刮取罗氏培养基上 生长良好的菌落于磨菌器中， 加入少量含 0 . 0 5 % T w e e n - 2 0 的生理盐水研磨， 稀释成均匀浑浊菌液。 镜下计数， 调整细菌浓度为3 . 5 x 1 0 7 个/ M I . 1 . 4 实验分组及动物接种C 5 7 B L / 6 小鼠3 6只， 随机分成3 组， 每组1 2 只。 OH 3 7 R a 皮内接种组( 实验组) : 于每只小鼠尾 根部皮内注射 H 3 7 R a 菌液 0 . 1 m 1 ( 含活菌数约 1 . 2 x 1

18、 0 6 个) ， 使 其 成 皮 丘。 O O B C G皮内接种组( 对照组) : 于每只小鼠尾根 部皮内 注射B C G菌液0 . 1 m 1 ( 含活菌数约1 . 2 x 1 0 6 个) ， 使其成皮丘。 未免疫组( 空白对照组) : 不做任何处理， 随实 验组一起喂养。 1 . 5 腹腔巨噬细胞的制备及培养上清液的收集 在免疫后第3 0 , 6 0 d ， 分别从 3 个实验组中随机取小 鼠 各 6只， 眼球放血， 拉颈处死， 7 5 %酒精浸泡 3 0 m i n 。无菌打开腹腔， 以预冷的无血清 R P M1 1 6 4 0 灌洗腹腔细胞， 离心 1 0 m i n ( 1 5

19、 0 0 r / m i n ) ， 弃上清， 沉淀以无血清 R P M1 1 6 4 0 洗2 次， 调整细胞浓度至 1 . 5 x 1 0 6 个 / m l 。细胞悬液加至2 4 孔培养板， 0 . 5 m l/ 孔， 置3 7 -, 5 %C 0 2 培养箱中培养4 h ， 洗去 非粘附细胞即为 P - M(D 。将该 M。分为两组， 一组 每孔加入含1 0 %小牛血清的1 6 4 0 培养液0 . 5 m l ， 另 一组每孔加入含 I F N - y的 1 6 4 0培养液 0 . 5 m l ( I F N - y 终浓度为2 0 n g / m l ) (7 ) , 3 7 C

20、 , 5 % C 0 2 温箱 培养4 8 h 后收集上清， - 2 0 冰箱保存备用。 1 . 6 细胞因子测定取巨噬细胞培养上清液， 应用 A B C - E L I S A双抗体夹心法按试剂盒说明书测定I L - 1 2、 T N F - a c 的浓度。 1 . 7 N O活性测定 取巨噬细胞培养上清液， 应用 G r i e s s 法按试剂盒说明书测定 N O浓度。 1 . 8 H 2 姚活性测定取巨噬细胞培养上清液， 按 照试剂盒说明书采用化学法测定H 2 0 2 浓度。 2 结果 2 . 1 H 3 7 R a , B C G皮内免疫小鼠后腹腔巨噬细胞 I L - 1 2的表达

21、情况H 3 7 R a 和B C G在皮内接种小 鼠后第3 0 , 6 0 d ， 腹腔巨噬细胞分泌表达的 I L - 1 2 分 别为 2 2 . 7 8士3 . 1 2 p g / m l , 2 0 . 6 2士2 . 8 4 p g / m l 和 1 9 . 5 2 士 2 . 4 2 p g / m l , 1 8 . 5 7 士 3 . 0 9 p g / m l ， 与未免疫 组( 5 . 4 3 士 1 . 0 7 p g / m l 和5 . 0 4 士 1 . 3 2 p g / m l ) 比 较， 其 差异具有明显的统计学意义( P0 . 0 1 ) ; 且H 3 7

22、 R a 组两时间段 I L - 1 2表达水平都明显高于B C G对照 组; 在免疫3 0 , 6 0 d 后 H 3 7 R a 组、 B C G组I L - 1 2 表达 水平均随时间延长呈下降趋势; 而当巨噬细胞体外 受I F N - y 刺激后， I L - 1 2表达水平较未受 I F N - y 刺 激时的各组水平明显增强。详见表t o 表1 H 3 7 R a , B C G皮内免疫小鼠后腹腔巨噬细胞I L - 1 2 表达水平 p g / m l ) T a b . 1 E x p r e s s i o n o f I L - 1 2 f r o m c e l i a c

23、 m a c r o p h a g e a f t e r i m mu n i z a t i o n w i t h H 3 7 R a o r B C G i n mi ce 无 I F N - y 刺激受I F N - y 刺激 3 0 D a y s6 0 D a y sD a y s 3 0 Da vs 6 0 D a y s H3 7 Ra B C G No n - i mmu n i z a t i o n 2 2. 7 8士3. 1 2 1 9. 5 2士2. 4 2 2 0 . 6 2士2. 8 4 1 8 . 5 7士3. 0 9 3 1 . 5 8士4 . 2 4 2

24、 5. 7 7士3. 2 3 2 9. 2 4土3. 8 2 2 5. 1 2士3. 7 5 5. 4 3土1 . 0 75. 0 4士1 . 3 2 N o t e I m m u n i z a t i o n g r o u p s c o m p a r e d w i t h n o n - i m m u n i z a t i o n g r o u p s ( P 0 . 0 1 ) ; O H 3 7 R a g r o u p s c o m p a r e d w i t h B C G g r o u p s ( P 0 . 0 5 ) 2 . 2 H 3 7 R a

25、, B C G皮内免疫小鼠后腹腔巨噬细胞T N F - a 的表达情况H 3 7 R a 和B C G在皮内接种小 2 3 4 中 国 人 兽 共 患 病 学 报 Ch i n e s e J o u r n a l o f Z o o n o s e s 2 0 0 6 , 2 2 ( 3 ) 鼠后第 3 0 , 6 0 d , 腹腔巨噬细胞分泌表达的 T N F - a 水平与未免疫组比较， 其差异均有显著的统计学意 义( P 0 . 0 1 ) ; 且两免疫组间T N F - a 表达水平也有 统计学意义( P0 . 0 5 ) ; 受 I F N - y 刺激后的各组水 平较未受 I

26、F N - y 刺激的水平明显增强。详见表2 0 2 . 3 H 3 7 R a , B C G皮内免疫小鼠后腹腔巨噬细胞 N O的分泌情况H 3 7 R a , B C G皮内接种小鼠后均 可诱导腹腔巨噬细胞分泌产生多量的 N O ， 与未免 疫组比较， 其差异具有统计学意义( P0 . 0 1 ) ; 但两 免疫组间差异无统计学意义; 免疫3 0 , 6 0 d 后H 3 7 R a 组、 B C G组N O产量均随时间延长呈下降趋势， 各 组两时间段之间无显著性差异; I F N - y 对 N O的产 生有促进作用。详见表 3 0 2 . 4 H 3 7 R a , B C G皮内免疫

27、小鼠后腹腔巨噬细胞 H Z q的分泌情况 H 3 7 R a , B C G皮内接种小鼠后可 显著增强腹腔巨噬细胞产生H 2 O : 的水平， 与未免 疫组比较， 其差异具有统计学意义( P 0 . 0 5 ) ; 但两 免疫组间无显著性差异; I F N - y 对姚O : 的产生也具 有增强效应。见表 4 0 Ta b. 2 表2 H 3 7 R a , B C G皮内免疫小鼠后腹腔巨 噬细胞T N F - “ 表达水平( p g f m l ) E x p r e s s i o n o f T N F - a f r o m c e l i a c m a c r o p h a g

28、e a f t e r i mm u n i z a t i o n w i t h H 3 7 R a o r B C G i n mi c e 无 I F N - y 刺激 受 I F N - 7 刺激 3 0 D a y s6 0 D a y s3 0 D a y s 6 0 D a y s H3 7 Ra B CG No n - i mmu n i z a t i o n 2 5 2 . 3 3 1 8 . 1 3 * # 2 1 4 . 6 2 士8 . 4 2 . 4 1 . 7 4士3. 1 1 2 4 6 . 4 7 1 7 . 2 9 * # 1 9 3 . 1 6 士5 .

29、 2 3 * 3 8. 5 4士3. 9 8 3 3 8 . 1 2 土 8 . 8 7 . # 2 8 5 . 6 7士5 . 2 3 * 3 2 7 . 4 3 1 9 . 4 3 . # 2 7 0 . 5 1 士4 . 9 5 * N o t e : I m m u n i z a t i o n g r o u p s c o m p a r e d w i t h n o n - i m m u n i z a t i o n g r o u p s ( P0 . 0 1 ) ; # H 3 7 R a g r o u p s c o m p a r e d w i t h B C

30、 G g r o u p s ( P 0 . 0 5 ) 表2 H 3 7 R a , B C G皮内免疫小鼠后腹腔巨噬细胞N O分泌水平( jx m o l/ L ) T a b . 3 P r o d u c t i o n o f N O f r o m c e l i a c ma c r o p h a g e a f t e r i mmu n i z a t i o n w i t h H 3 7 R a o r B C G i n mi c e 无 I F N - y 刺激受 I F N - Y 刺激 G r o u p 3 0 Da y s6 0 D a y s3 0 D a

31、 y s 6 0 D a y s H3 7 Ra B CG No n - i mmu n i z a t i o n 1 5 . 6 4士3 . 1 4 * 1 2 . 8 8 士2 . 8 7 . 3. 8 3土1 . 6 6 1 4 . 7 8土2 . 7 3 * 1 2 . 3 3 士3 . 1 9 * 4. 0 2士1 . 0 9 2 3 . 3 5士5 . 5 1 * 2 1 . 4 1 士4 . 7 2 * 2 2 . 7 3 14 . 4 8 * 1 9 . 3 8 14 , 6 7 * N o t e :， I m m u n i z a t i o n g r o u p s

32、 c o m p a r e d w i t h t h e n o n - i m m u n i z a t i o n g r o u p s ( P0 . 0 1 ) 表4 H 3 7 R a , B C G皮内免疫小鼠后腹腔巨噬细胞玩仇分泌水平恤m o V L ) T a b . 4 P r o d u c t i o n o f H i 仇 f r o m c e l i a c ma c r o p h a g e a f t e r i mm u n i z a t i o n w i t h H 3 7 R a o r B C G i n mi c e 无 I F N - y

33、 刺激受 I F N - y 刺激 3 0 Da 诏6 0 1 a v s D a y sD a y3 0 D a y s H3 7 Ra B CG No n - i mmu n i z a t i o n 1 0 . 6 8士1 . 5 4 * 8 . 9 2士1 . 3 7 * 4. 1 8士0. 6 6 1 0 . 1 3 士1 . 7 4 * 8 . 6 4士1 . 2 3 * 4. 0 4士0. 5 9 1 9 . 9 5 12 . 2 4 * 1 7 . 7 5士1 . 9 3 1 8 . 6 1 12 . 0 2 * 1 6 . 7 8 士1 . 7 5 * N o t e I

34、m m u n i z a t io n g r o u p s c o m p a r e d w i t h t h e n o n - i m m u n i z a t i o n g r o u p s ( P 0 . 0 5 ) 3 讨论 结核杆菌是胞内寄生菌， 主要寄生在巨噬细胞 中。活菌的分泌蛋白起主要的免疫保护作用， 可激 活宿主T细胞介导的细胞免疫。入侵机体的结核 杆菌既可被M(D吞噬和杀灭， 也可通过多种特殊受 体介导的内吞途径阻止 M(D吞噬溶酶体的形成以 及抗活性氧、 活性氮等途径， 逃避杀伤机制而在M (D 中存活、 繁殖。因此， M O的活化情况对结核菌在体 内的

35、转归具重要作用。对于胞内菌特异性免疫， 普 遍认为C D 4 T细胞产生的Y - 干扰素( I F N - Y ) 是激活 M O抗菌活性的主要因素( 3 3 o M (p另一重要功能是 对结核杆菌抗原有呈递作用。M(D加工和提呈结核 杆菌抗原给T淋巴细胞， 刺激特异性C D 4 T细胞增 殖; 并可与T细胞相互作用刺激其功能， 从而放大 特异性免疫效应。由T淋巴细胞和 M (D介导的细 胞免疫是机体抵抗结核杆菌的主要防御机制， 其中 M o 不仅在非特异性甚至在特异性防御中， 都起着 十分关键的作用(s - i o ) 0 2 0 0 6 , 2 2 ( 3 ) 中 国 人 兽 共 患 病

36、学 报 Ch i n e s e J o u r n a l o f Z o o n o s e s 2 3 5 分子免疫学研究表明， I F N - y 等细胞因子可激 活M (D ， 引起呼吸爆发， 产生大量活性氧介质( R O I , H 2 0 2 ) ， 并诱导产生i N O S 酶( 诱导型一氧化氮合成 酶) ， 合成大量活性氮介质( R N I , N O ) . N O是活化 M 4)杀灭结核杆菌的重要效应分子， 而R O I 与R N I 的联合作用则能明显增强 M(D杀灭结核杆菌功 能( 1 1 ) ; 与此同时， 活化的M (D还能分泌表达一系列 抗结核细胞因子: 如T

37、N F - a , I L - 1 2 , I L - 1 8 等。I L - 1 2 能促使T h 0 细胞向T h l 细胞分化， 在增强T h l 型细 胞免疫， 介导天然免疫和特异性免疫之间的联系、 介 导抗结核免疫中起着十分重要的作用( 1 2 ) ; T N F - 。 则 能显著诱导感染结核菌的巨噬细胞凋亡， 促进结核 肉 芽肿形成， 从而对宿主产生有利的免疫保护应 答( 1 3 ) ; I L - 1 8 也是新近发现的在机体抗结核免疫中 起主要作用的一种细胞因子( 1 4 ) 。因此阐明人型结 核杆菌减毒株 H 3 7 R a 免疫小鼠后巨噬细胞氮氧化 物的产生、 细胞因子的

38、表达对于了解 H 3 7 R a 的免疫 应答过程及对巨噬细胞的抗菌免疫作用、 结核病的 发病机制以及新疫苗的筛选等均有十分重要的意 义。 本研究结果表明H 3 7 R a 免疫小鼠后第3 0 , 6 0 d , 其腹腔巨噬细胞N O , 姚姚 产量与未免疫组比较， 其差异具有统计学意义( P 0 . 0 5 ) ， 与B C G对照组 无明显差异; 巨噬细胞 I L - 1 2 , T N F - a 表达水平与 B C G对照组、 未免疫组比较均有统计学意义( P 0 . 0 5 ) ， 由此说明 H 3 7 R a 免疫小鼠后能显著诱导 M D 活化并产生较强的激活作用， 且该作用略优于

39、 B C G 。分析其原因， 作者认为可能的机理是 H 3 7 R a 皮内接种小鼠后， 刺激T淋巴细胞发生了增殖转化 并产生I F N - y ， 由I F N - y激活巨噬细胞引起呼吸爆 发所致。而当被免疫激活的 M。体外受 I F N - y 再 次刺激后( 模拟体内环境即机体持续受到致敏 T淋巴细胞产生的 I F N - y 刺激) ， 其活化作用进一步 增强， 则更进一步证实H 3 7 R a 免疫激活诱导产生的 I F N - y 是激活M o抗结核活性的中心活性因子(3 ) 0 而未免疫组由于未接受H 3 7 R a 皮内接种， 无特异性 抗结核细胞免疫产生， 因此 M D不会

40、受到T细胞持 续分泌的I F N - y 刺激， 故在实验安排中我们没有使 用I F N - y 体外激活。 同时我们也注意到H 3 7 R a 免疫组、 B C G对照组 的I L - 1 2 , T N F - a , N O及H 2 0 2 4 项指标水平均随免 疫时间延长而下降， 显示出M(D的激活效应似乎随 接种时间推移而减弱的趋势。作者认为这可能与免 疫6 0 d 后体内结核菌生长繁殖减少， 导致机体抗结 核细胞免疫相对减弱， 使 I F N - y分泌减少所致; 同 时也表明一定数量的结核杆菌在小鼠体内生存繁殖 是诱导机体产生一定强度免疫力的先决条件。而当 接种的活菌在体内逐渐消

41、失后， 由于机体受H 3 7 R a 免疫刺激已产生特异性致敏 T细胞， 并有记忆存 在， 一但致病性结核杆菌进入体内， 即可触发抗结核 细胞免疫， 分泌 I F N - y 并诱使 M(D活化产生抗结核 免疫作用， 从而保护机体避免患病。 总之， 我们研究结果说明H 3 7 R a 皮内接种小鼠 后能显著诱导 M。活化并产生氮氧化物效应物质 和抗结核细胞因子， 从而产生有利于宿主的抗结核 免疫力， 且该作用略优于B C G . 参考文献: ( 1 卢贤瑜， 魏江 ， 小鼠胃内接种B C G后细菌的定植及抗结核细胞 免疫功能的探讨( J ) . 中国免疫学杂志， 2 0 0 5 , 2 1 (

42、 4 ) : 3 0 4 一 3 0 7 . ( 2 ) Wo r l d H e a l t h O r g a n i z a t io n . H e a l t h s y s t e m: im p r o v in g p e r f o r m a n c e ( R ) . Wo r l d h e a l t h r e p o r t , 2 0 0 0 : 1 5 2 一 1 6 4 ( 3 吴守芝， 宋俊峰. 结核分枝杆菌致病机制与免疫( J ) . 中华结核 和呼吸杂志, 2 0 0 3 , 2 6 ( 2 ) : 1 0 1 一1 0 3 . ( 4 ) A n d

43、 e r s e n P , Mu n k ME , P o ll o c k J M, e t a l . S p e c if ic i m m u n e - b a s e d d ia g n o s i s o f t u b e r c u lo s i s ( J ) . L a n c e t , 2 0 0 0 , 3 5 6 ( 9 2 3 5 ) : 1 0 9 9 . ( 5 ) D h im a n N , K h u ll e r G K. I m m u n o a c t i v i t y o f p e p t i d e s g e n e r a t

44、e d b y l i m i t e d p r o t e o l y s i s o f 7 1 - k D a c e ll w a ll p r o t e i n o f My c o b a c t e ri u m t u - b e r c u l o s i s H 3 7 R a u s i n g P L G - m ic r o p a rt i c l e s ( J ) . L e t t A p p l M i c r o b i - o l , 2 0 0 0 , 3 0 ( 5 ) : 3 4 5 - 3 5 0 . ( 6 ) S in h a R K ,

45、 V e r m a I , K h u ll e r G K. I m m u n o b io lo g ic a l p r o p e rt i e s o f a 3 0 k D a s e c r e t o r y p r o t e i n o f M y c o b a c t e ri u m t u b e r c u l o s i s H 3 7 R a ( J ) . V a c c i n e , 1 9 9 7 , 1 5 ( 6 - 7 ) : 6 8 9 一 6 9 9 . ( 7 ) 汤红明， 刘君炎， 高力芬 . I F N - y 与T N F - a

46、 联合治疗结核菌感染 小鼠 疗效及机理的研究( J ) 免疫学杂志， 2 0 0 1 , 1 7 ( 6 ) : 4 5 7 . ( 8 A d e r e m A , U n d e r h i ll D M. Me c h a n i s m s o f p h a g o c y t o s i s i n m a c r o p h a g e s ( J ) . A n n u R e v I m m u n o l , 1 9 9 9 , 1 7 : 5 9 3 一 5 9 6 . ( 9 ) E r n s t J D . Ma c r o p h a g e r e c e p

47、 t o r s f o r M y c o b a c t e ri u m t u b e r c u l o s i s ( J ) . I n f e c t i m m u n , 1 9 9 8 , 6 6 : 1 2 7 7 一1 2 8 3 . ( 1 0 ) R a g n o S , E s t r a d a - G a r c i a I , B u t l e r R , e t a l . R e g u la t io n o f m a c r o p h a g e g e n e e x p r e s s io n厉 My c o b a c t e r

48、i u m t u b e r c u l o s i s : d o w n - r e g u l a t io n o f m i t o c h o n d r i a ) c y t o c h r o m e o x id a s e ( J ) . I n f e c t im m u n , 1 9 9 8 , 6 6 ( 8 ) : 3 9 5 3 一 3 9 5 9 . ( 1 1 ) C h a n J . M i c r o b ia l g l y c o li p i d s : p o s s i b l e v ir u l e n c e f a c t o

49、r s t h a t s c a v - e n g e o x y g e n r a d i c a l s ( J ) . 1 9 9 5 , 1 3 2 : 1 5 0 一 1 5 5 . ( 1 2 ) Z h a n g M , G a t e l y M k , Wa n g E , e t a l . I n t e r l e u k i n 1 2 a t t h e s i t e o f t h e d i s e a s e i n t u b e r c u l o s i s ( J ) . C li n I n v e s t , 1 9 9 4 , 9 3 : 1 7 3 3 一 1 7 3 9 . ( 1 3 ) K e a n e J , G e r s h o n S , Wis e R P , e t a l . T u b e r c u lo s is a s s o c ia t e d w i t h in fl ix i m a b , a t u m o r n e c r o s i s f a c t o r a l p h a - n e u t r a l iz in g a g