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1、垫堂医堂盘查2 嫂墨堡鱼旦筮墨鲞筮鱼坦 【文章编号】1 6 7 2 3 6 1 9 ( 2 0 0 8 ) 0 6 - 0 5 3 3 - 0 3 5 3 3 基础研究论著 经口感染弓形虫在小鼠组织内的动态分布 申金雁，杨莎莎，殷国荣，马广源，孟晓丽，刘红丽 ( 山西医科大学医学寄生虫学研究所寄生虫学教研室，太原0 3 0 0 0 1 ) 【摘要】目的观察经口感染弓形虫速殖子在小鼠小肠组织、实质器官内的动态分布。方法B A L B c 小 鼠9 6 只，随机分为8 组。0d 组用0 5m lP B S 只灌胃，其余组用R H 株弓形虫速殖子1 X 1 0 4 个灌胃感染，感染 后2 、4 、6
2、 、8 、l O 、1 2 、1 4d 处死小鼠，每次处死1 2 只，取十二指肠、空肠、回肠、肝脏、脾、肾、肺、心和脑做组织印 片，吉一瑞氏染色，镜检。结果感染后2d 在十二指肠、空肠、回肠、肺和心，4d 在脾，6d 在肾和肝脏发现虫 体，脑内未发现虫体。十二指肠、空肠、回肠组织内虫体数量呈上升趋势，第6 天达高峰后稍有下降。肝内虫体数 量呈上升趋势，第6 天最多；脾内虫体数量在6d 达峰值后保持较高水平；实验期问肾、肺和心内虫体数量保持 较低水平。结论弓形虫经口感染小鼠后2d ，小肠组织_ 现大量速殖子；同时肺和心内有少量速殖子；4d 在 脾、6d 在肾和肝脏发现虫体；速殖子在上述组织内增殖
3、，并形成假包囊。脑内未发现虫体。 【关键词】 弓形虫；组织内分布；经口感染 中图分类号：R 3 8 2 5文献标识码：A D i s t r i b u t i o no fT o x o p l a s m ag o n d i ii nT i s s u e so fM i c eF o l l o w i n gO r a lI n f e c t i o n S H E NJ i n - y a n ，Y A N GS h a - s h a ，Y I NG u o r o n g 。，M AG u a n g - y u a n ，M E N GX i a o - l i ，L I
4、UH o n g l i ( D e p a r t m e n to fP a r a s i t o l o g y ，S h a n x iM e d i c a lU n i v e r s i t y ，T a i y u a n0 3 0 0 0 1 ，C h i n a ) 【A b s t r a c t 】O b j e c t i v e T oe x a m i n et h ed y n a m i cd i s t r i b u t i o no ft a c h y z o i t e si nm i c ea f t e ro r a l l yi n f e
5、c t e dw i t h T o x o p l a s m ag o n d i i M e t h o d N i n t y - s i xB A L B cm i c ew e r er a n d o m l yd i v i d e di n t o 8g r o u p s A l lm i c ew e r e i n t r a g a s t r i c a l l yc h a l l e n g e dw i t h 1xl0 4t a c h y z o i t e so ft h ev i r u l e n tR Hs t r a i no fT o x o
6、p l a s m ag o n d i i C o n t r o lm i c ew e r e a d m i n i s t e r e dw i t h0 5m lP B S M i c ew e r es a c r i f i c e da td a y 2 ，4 ，6 ，8 ，1 0 ，1 2a n d1 4p o s t i n f e c t i o n T a c h y z o i t e s i nd u o d e n u m ，j e j u n u m ，i l e u m ，l i v e r ，s p l e e n ，k i d n e y ，l u n
7、g ，h e a na n db r a i nw e r es t a i n e db yG i e m s a Sa n dW r i g h t S s t a i n T h es t m n e ds a m p l e sw e r eo b s e r v e du n d e rl i g h tm i c r o s c o p e R e s u l t T a c h y z o i t e sw e r ef o u n di nd u o d e n u m j e j u n u m ，i l e u m ，l u n ga n dh e a r ta td a
8、y 一2 ， i ns p l e e no na td a y 一4 ，a n di nk i d n e ya n dl i v e ro na td a y 6 N o t a c h y z o i t e sw a sf o u n di nb r a i n T h en u m b e ro ft a c h y z o i t e si nd u o d e n u m ，j e j u n u m ，a n di l e u mW i l l 8f o u n dt oi n c r e a s e g r a d u a l l y ，a n dt h en u m b e
9、 ro ft a c h y z o i t e si nt h el i v e rr e a c h e dap e a kv a l u ea td a y 一6 T h e r ew e r en od i f f e r e n c ei n p a r a s i t el o a d si nk i d n e y 1 u n ga n dh e a n P a r a s i t el o a d si ns p l e e nr e a c h e dap e a ka td a y - 1 2 C o n c l u s i o n T a c h y z o i t e
10、sw e r em a i n l yf o u n di ns m a l li n t e s t i n a lt i s s u e sa f t e ro r a li n f e c t i o n N op a r a s i t eW a sf o u n di nb r a i nd u r i n g t h ee n t i r ep e r i o do fs t u d y 【K e yw o r d s 】T o x o p l a s m ag o n d i i ；d i s t r i b u t i o ni nt i s s u e ；o r a l l
11、yi n f e c t i o n 弓形虫为专性细胞内寄生原虫，可感染人和多种动 物，引起人畜共患寄生虫病。经口感染是弓形虫的主要自 然感染途径。感染后在肠道部位侵入黏膜上皮，在肠黏膜 上皮细胞内大量繁殖。随循环系统播散至全身致病：“。研 究弓形虫在体内的分布对揭示其致病机制和制定防治策 基金项目：国家自然科学基金( N o 3 0 6 4 0 0 5 7 ) ；山西省自然科学基 金( N o 2 0 0 4 1 1 0 5 ) ；山西省青年科技基金( N o 2 0 0 5 1 0 4 5 ) 。 作者简介：申金雁( 1 9 7 8 一) ，女，山西人，在读硕士生，主要从事感 染与免疫研究
12、。 $ 通讯作者：殷国荣，E - m a i l ：g u o r o n g y i n 1 6 3 c o m 略具有重要的意义。B e r n a r d e s 等c ： 通过免疫组织染色法研 究了弓形虫在小肠、肝脏、肺和脑中的分布。本实验采用组 织印片、吉瑞氏染色法动态观察了经口感染的弓形虫在 小鼠小肠组织和实质器官内的分布以期为研究其致病机 制提供实验依据。 1 材料与方法 1 1 实验动物及弓形虫株 B A L B c 小鼠引白中国医学科学院实验动物研究所， 实验室为B S L 2 级。围际标准强毒R H 株弓形虫，本实验 室保种。常规复苏弓形虫速殖子，腹腔接种B A L B c
13、 小鼠， 5 3 4 传代3 次收集第3 代腹腔冲洗液，分离速殖子，用P B S 调 整速殖子浓度至2 1 0 4 个m L 。用于灌胃感染。 1 2 动物分组与处理 7 。8 周龄B A B L c 小鼠9 6 只。雌雄各半，随机分为0 d 组、2d 组、4d 组、6d 组、8d 组、1 0d 组、1 2d 组和1 4 d 组每组1 2 只。0d 组用O 5m l 只P B S 灌胃，其余各组 每只小鼠用含速殖子1 1 0 4 个的P B S0 5m l 灌胃感染。逐 日观察健康状况。测定体重。分别于灌胃后第2 、4 、6 、8 、 1 0 、1 2 、1 4 天颈椎脱臼处死各组小鼠，取十二
14、指肠、空肠、 回肠、肝、脾、肾、心、肺和脑。 1 3 组织印片与感染评分 将上述组织器官以最大面积剖开，用载玻片轻压于病 变区，使虫体和脱落细胞黏附在玻片上，立即浸入4 丙酮 中固定1 0r a i n ，自然干燥，吉。瑞氏染液常规染色，镜检。 组织印片中速殖子定量评分标准：未见虫体( O 分) ； 5 1 0 个虫体( 1 分) ；1 0 2 0 个虫体( 2 分) ； 2 0 个虫体( 3 分) 。 1 4 统计学分析 用S P S S I O 0 统计软件对实验数据进行A N O V A 方差 分析。 2 结果 2 1小鼠健康状况及体重变化 小鼠感染弓形虫后第5 - 6 天，均表现不同程
15、度竖毛、 弓背、懒动、采食减少、畏光等异常现象，第6 、1 0 和l l 天 死亡各1 只。体重呈下降趋势，但各时间点的体重差值变 化无统计学意义( P 0 0 5 ，图1 ) 。体重差差异值( g ) = 处死 前体重一灌胃前体重。 2 肿 3 O J D o 器- 2 棚 | 圭- - 4 0 0 024681 01 2 “ 感染时问曲 图l 处死前与灌胃前小鼠的体重差值 瑰1 V a r i a n c eo fb o d yw e i g h tb e f o r es a c r i n f i c ea n d i n t r a g a s t r i ci n f e c t
16、i o nf o rm i c e 2 2 小肠组织内虫体分布 感染后第2 天，十二指肠、空肠和回肠组织印片中 发现弓形虫速殖子( 图2 ) ，并逐渐增多，6d 时最多( P 0 0 5 ) 。感染后第4 天脾内发现虫体，从第6 天虫量 增多( P 0 0 5 ，图7 ) 。在整个实验期间脑组织未发 现虫体。 隶磐霸牛 越堂匡堂苤查2 塑墨生鱼旦笙墨鲞筮鱼塑 图5 感染后2d 肺组织中的速殖子1 4 0 0 X ) F i g 5T a c h y z o i t e so fT o x o p l a s m ag o n d i ii nl u n gt i s s u e O nd a
17、y2a f t e ri n f e c t i o n ( 4 0 0 x ) 图6 感染后2d 心脏组织中的速殖子( 4 0 0 X ) F i g 6T a c h y z o i t e so fT o x o p l a s m ag o n d i ii nh e a r tt i s s u e O nd a y2 时t 盯i n f e c t i o n 【4 0 0 x ) 2 1 0 1 6 鑫L 2 露 牛0 8 o 4 o O 一肝 O2468l O1 21 4 感染后时间回 图7 小鼠实质器官中弓形虫的动态分布 7K i n e t i cd i s t H b u
18、 f i o no fT o x o p l a s m ag o n d i ii n p a r e n c h y m a iO l g 蛐t So fm i c e 3 讨论 小鼠在感染弓形虫后由于虫体侵入引起食欲不振和 消化系统的病理变化导致体重下降。小鼠感染弓形虫后 6 8d ，小肠损伤都被很清楚的检测到【2 】。体重的急剧下降 可能与回肠炎症有关。 本实验观察到弓形虫R H 株经口1 感染小鼠后，首先侵 入十二指肠、空肠、回肠、肺和。f i , ( 2d ) ，随后是脾( 4d ) ，最后 是肾( 6d ) 和肝脏( 6d ) ，脑在实验阶段未发现虫体。感染后 6d 小肠内虫体数
19、量达到高峰H e s e n f e l d 等f 1 证实，弓形虫经 5 3 5 口感染的典型特征是虫体在小肠内的增殖，C 5 7 B L 6 小鼠对 口服感染的敏感性取决于小肠绒毛的坏死 引。感染后肺内虫 体先增多后减少可能是活化的肺泡巨噬细胞在抵抗弓形虫 感染肺的过程中起了效应器的作用【“。 由于接种量的不同和实验动物品系的差异，可能会影 响小鼠各脏器内虫体分布【”。S u m y u e n 等用无毒型C 株 弓形虫包囊经口感染小鼠，于感染后1 2h 、2 4 h 、3 6h 、2 d 、3 d 、7d 、l Od 、1 4d 、2 1d 、3 0d 、5 0d 、7 2d 观察弓形虫
20、 在血液、脾、集合淋巴结( P P 结) 、肝、肺和脑内的分布情 况。脾和P P 结在感染后第2d 、3d 发现虫体，是受感染最 早的器官。肝、肺在第7d 发现虫体，而脑在第1 0d 发现 虫体，血液中均未发现虫体。据此推断，弓形虫主要是通过 淋巴系统播散。Z e n n e r 等r 9 | 实验证明小鼠口服感染R H 株 后弓形虫首先穿过肠屏障到达M L N 。然后到达脾，最后 通过血液播散遍及各器官。本实验过程中，脑未检出虫体， 这可能与感染后时间较短及检测方法有关。 参考文献】 【1 K a s p e rL ，C o u r r e tN ，D a r c h eS ，e ta 1
21、T o x o p l a s r r mg o n d i i a n dm u e o s a l i m m u n i t y J I n tJP a r a s i t o l ，2 0 0 4 ，3 4 ( 3 ) ： 加l - 4 0 9 2 B e m a r d e sE S ，S i l v aN M ，R u a sL P ，e ta 1 T o s o p l a s m ag o n d i i i n f e c t i o nr e v e a l san o v e lr e g u l a t o r yr o l e f o rg a l e c t i n
22、 一3i nt h e i n t e r f a c eo fi n n a t ea n da d a p t i v ei m m u n i t y J A mJP a t h o l ， 2 0 0 6 。1 6 8 ( 6 ) ：1 9 1 0 1 9 2 0 3 M e n n e c h e tF J ，K a s p e rL H ，B a c h i n e lN ，e ta 1 L a m i n a p r o p r i aC D 4 + Tl y m p h o c y t e ss y n e r g i z e w i t I Ir o u t i n ei n
23、 t e s t i n a l e p i t h e l i a lc e l l st oe n h a n c ep r o i n f l a m m a t o r yn e s p o n s ea g a i n s ta n i n t r a c e l h l a rp a t h o g e n J JI m m u n o l ，2 0 0 2 ，1 6 8 ( 6 ) ：2 9 8 8 - 2 9 9 6 4 1 L i e s e n f e l d0 O r a li n f e c t i o no fC 5 7 B L 6m i c ew i t h T o
24、 x o p l a s m ag o n d i i ： an e wm o d e lo fi n f l a m m a t o r yb o w e l d i s e a s e J JI n f e c tD i s ，2 0 0 2 ，1 8 5 ( S u p p l1 ) ：5 9 6 - 1 0 1 5 L i e s e n f e l dO ，K o s e kJ ，R e m i n g t o nj s ，e ta 1 A s s o c i a t i o no f C D 4 + Tc e l l d e p e n d e n t ， i n f e r f
25、e r o n g a m m a m e d i a t e dn e c r o s i s o ft h es m a l li n t e s t i n ew i t hg e n e t i cs u s c e p t i b i l i t yo fm i c et o p e r o n di n f e c t i o nw i t hT o x o p l a s m ag o n d i i J 】JE 印M e d ， 1 9 9 6 ，1 8 4 ( 2 ) ：5 9 7 6 0 7 6 R y n i n gF W ，R e m i n g t o nJ S E
26、f f e c to fa l v e o l a rm m p h a g e s 加 T o x o p l a s m ag o n d i i J3 I n f e c tI n m a u n ，1 9 7 7 ，1 8 ( 3 ) ：7 4 6 7 5 3 7 刘俊燕，杨秀珍，吴增强，等弓形虫R H 株在实验感染 小鼠体内分布的研究 J 中国人兽共患病杂志，2 0 0 0 ，1 6 ( 4 ) ：3 7 4 0 8 S u m y u e nM H ， G a r l nY J ，D e r o u i nF E a r l yk i n e t i c so f T o 口w p
27、 a s m a 伊n d ii n f e c t i o ni nm i c ei n f e c t e do r a l l yw i t hc y s t s o fa na v i r u l e n ts t r a i n J JP a r a s i t o l ，1 9 9 5 ，8 1 ( 2 ) ：3 2 7 3 2 9 9 g e n n e rL ，D a r c yF ，C a p r o nA ，e ta 1 T o x o p l a s r n ag o n d i i ： k i n e t i c so ft h ed i s s e m i n a t i o ni nt h eh o s tt i s s u e s d u r i n gt h e a c u t ep h a s eo fi n f e c t i o no fm i c ea n dr a t a J E x pP a r a a i t o l ， 1 9 9 8 ，9 0 ( 1 ) ：8 6 - 9 4 ( 收稿日期：2 0 0 8 0 2 0 4 ；修回日期：2 0 0 8 0 3 2 7 )