GB-7331-1987.pdf

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1、中华人民共和国国家标准 UDC 8 3 5 . 2 1 - 1 5 2 马铃薯种薯产地检疫 规程 GB 7331一 87 P l a n t q u a r a n t i n e r u l e s f o r p r o d u c i n g a r e a s o f s e e d p o t a t o 1 适用范围 本规程适用于各级原 ( 良)种场、科研院校、 集体单位和农户生产马铃薯种薯。 2 名词解释 2 . 1 产地检疫 指种薯生产过程中的全部检疫工作，即4 ，5 章规定的全部内容。 2 ， 2 脱毒种薯 指通过茎尖脱毒培养方法，除去墙铃薯花叶型、卷叶型、矮化型病毒 ( 不

2、包括束顶型)的脱毒 核心材料 ( 或脱毒苗)在隔离条件下生产的脱毒原原种、脱毒原种级种薯，并经检验合格。 2 . 3 健康良 种 指按照5 . 3 所列方法进行检查和检验，未发现检疫对象， 控制病害发生率符合5 . 3 . 3 所订标准的种 薯。 3 检疫 对象及控制病害 3 . 1 检疫对象 3 . 1 . 1 当 铃薯 癌肿 病S y n c h y t r i u m e n d o b i o t i c u m ( S c h i l b ) P e r , 3 . 1 . 2 当 铃薯 环腐病C o r y n e b a c t e r i u m m i c h i g a n

3、 e n s e P v , S e p e d o n i c u m ( S p i e c h e t Ko t t h ) S k a p t e t B u r k h , 3 . 2 控制病害 3 . 2 . 1 马 铃薯 黑 胫病 E r w i n i a C a r o t o v a r a P v , a t r o s e p t i c a ( r o n e s ) 二 E r w i n i a P h y t o - p h o r a( A p p e l )H o l l a n d ) , 3 . 2 . 2 马铃薯花叶型、卷叶型、矮化型 病毒病。 4 种

4、井的生产 4 . 1 种薯地的选择 4 . 1 . 1 种薯 地应选在无 检疫对象发生的地区或轻发生地区的未发病地块。 4 . 1 . 2 留种地确定后，于 播种前一 月向所在地植检部门申 报并填写 “ 马 铃薯种薯产地检疫申 报表” ( 见表 1 ) 。 国家标准局1 9 8 7 - 0 3 - 0 1 批准1 9 8 7 一 1 0 一 0 ， 实施 GB 7 3 3 1 一 . 7 表 1 马铃薯种薯产地检疫申报表 申报单位 联系人 繁殖地点 繁殖面积 品种 种薯 ( 或核心材料)来源 播种时期 隔离条件 备注 注:申报表一式三份，一份交植检部门、一份交种薯 收购主管部门，一份存浓育单位

5、 ( 或农户)备杳。 二2 脱毒种薯的生产 4 . 2 . 1 脱毒核心材料的培育见附录A ( 补充件) 。 4 . 2 . 2 脱毒原原种的繁育见附录B ( 补充件) 。 4 . 2 . 3 脱毒原种级种薯的高 倍繁 殖。 4 . 2 . 3 . 1 必须选用附有产地检疫合格证 ( 引 进的凭检疫证书，下同) 的脱毒原原种 ( 或脱毒原种) 为种薯。 4 . 2 . 3 . 2 播种一月前必须进行逐薯 块检验。 方 法见附录C ( 补充件) 。 4 . 2 . 3 . 3 检验合格的种薯用脐芽法繁育。见附录D ( 补充件) 。 4 . 3 健康良种的生产 4 . 3 . 1 以脱毒良 种(

6、三 代以下脱毒薯) 或以三 圃 提纯复壮后的优良种薯为生产健康良种的种落， 均须 附有产地检疫合格证。 4 . 3 . 2 4 . 3 . 3 4 . 3. 4 4 . 4 4 . 4 . 1 播种前将种薯 在室内 晾7 一1 0 天，以 汰除暴茸出来 的病薯。整薯 播种选用4 0 一 6 0 g 小整薯。 切块播种的地方，必须进行切刀消毒。见附录E ( 补充件) 。 亦可选用夏播 ( 或晚播)小种薯直接播种。 防疫措施 4 . 4. 2 4 . 4 . 3 4 . 4 . 3 . 4 . 4 . a。 癌肿病发生区应采用以 抗病品种为主的高厢畦植并彻底拔除隔生薯。 疫情处理:发现本规程所列病

7、害必须全部拔除病株，挖出已形成的种， 深埋或 烧毁。 药剂防护 1 用2 5 0/ a 粉锈宁可湿性粉 ( 或乳油)叶面喷雾防治马 铃薯癌肿病。 2 治蚜。田间蚜虫点片发生或有蚜株率 次，防止病毒再侵染。 4 . 4 . 3 . 3 田间发现晚疫病 4 . 4 . 4 窖藏管理 5% 时，开始药剂防治，每7 一1 0 天一次， 共23 “ 中心病株” ，开始药剂常规喷雾，保证田间检查和疫情处理准确进行。 4 . 4 . 4 . 1 人窖前严格汰除病、烂、伤、杂、劣 种薯并经常翻晾。 4 . 4 . 4 . 2 通风窖 贮存，贮量不超过窖内 空间的三 分 之一。 窖内温 度保持在1 一3 为宜，

8、 相对湿度 GB 7331一 87 7 5 。 。 j 【_1 0: 丫 ， 4 . 4 . . “ 死窖”贮藏，冬季封好窖口，严防受冻或受热烂种。 5 检查和签证 5 . 1 脱毒核心材料必须同时采用指示植物及血清检验 ( 至少两种以上 血清方法) ，确认无病毒者签 发产地检疫合格证 ( 见表4 ) 。检验方法见附录F ( 补充 件)。 5 . 2 脱毒原原种和脱毒原种级种薯的检查 5 . 2 . 1 每周肉 眼检杏一次，若发现病株应及时拔除销毁。对其周围1 m 以内 的植株全部 进行血清检 测以拔除隐症病株。 5 . 2 . 2 收获前一周，脱毒原原种顺行每隔5 0 株，脱毒原种级种薯顺行

9、每隔1 0 0 株检查一株，并进行 血清检验以拔除隐症病株。 5 . 2 . 3 对无检疫对象和限制病害者发给产地检疫合格证 ( 见表4 ) 。 5 . 3 健康良种的检验 以田间检验为主，必要时进行室内复检。 5 . 3 . 1 田间检查 5 . 3 . 1 . 1 检查日 期。分别于苗高6-7 寸、盛花期和收获前各检查一次。 5 . 3 . 1 . 2 检杳株数。在观察全田的基础上， 根据不同面积随机选点，一亩以 下地块检查2 0 0 株，一 亩以L 的地块检查总株数不得少于5 0 0 株。 5 . 3 . 1 . 3 症状鉴别、田间病株和薯块症状，以肉眼观察为主。见附录H ( 参考件)

10、。 5 . 3 . 1 . 4 检查结果记人田间检查记录表 ( 见表2 ) . 表 2 马铃薯田间检查记录表 面积 地点 日 期 检 查 方 法 检 杳 数 最 发现病株情况 l 调查 马铃薯 癌肿病 马铃薯 环属病 马铃挤 黑胫病 马铃挤 病毒病 株 ( 块)%株 ( 块 )% 株 ( 块)%株 ( 块)% 薯块 检杏 人员意见 5 . 3 . 2 室内检验 5 . 3 . 2 . ， 田 间不能确诊的植株 ( 或薯 块) ，采集标本作室内检验。 5 . 3 . 2 . 2 检验结果填人产地检验送检标本报告单 ( 见表 3 ) 。 方法见附录I( 补充件) 。 GB 7 3 31 一 8 7

11、 表 3 产地检验送检标本报告单 送检年月日检验年月日 标本编号检验对象检验方法检验结果检验人备注 5 . 3 . 3 凡经田间检查和室内检验未发现马铃薯癌肿病。 最后一次田间检查 ( 含前两次检查曾发现病 株已作彻底的疫情处理)未发现马铃薯 环腐病;黑胫病病株率0 . 2 %以下， 病毒病株率不超过1 0 % 者可 发给产地检疫合格证 ( 见表4 ) 。 表 4 马铃薯种薯产地检疫合格证 字第号 年度繁育品种 ( 脱毒核心材料、原原种、原种级 种薯、良种) 病毒病株率为 二 九 田万斤 ( 管)经产地检验未发现检疫对象， 黑胫病株率%， %，符合国家脱毒、 健康种薯标准，准予作种用，特发此证

12、。 5 . 4 5 . 4 . 5. 4 . 本证一式三联，第一联为存根衬第二联交制种单位 ( 或农户) ，第三联交种 r 收购部门 ( 或用户) 。 本证书半年之内有效，但只限本单 位( 户) 该批种，使用. 不得转借他人或弄虚作假， 否则以违章调运沦处。 本证不作检疫证书 使用。 其他要求 1 以当地植保 ( 植检)部门为主与种子 管理和育种单位组成三 结合产地检查小组。 2 详细填写马铃薯产地检疫档案卡片。见附录G ( 补充件) 。 CB 7 331一 87 附录A 马铃抽 脱毒核心材料的培育 ( 补充件) A. 1 器材与试剂 WS 2 - 8 4 一 5 4 手提式高压灭菌锅:2 8

13、 0 m 1 x 2 8 0 . l ，1 个。 无菌 箱:1 个; 紫外灯:1 个， 酒精灯:1 个; 长镊子 :2 个; 棒状温度计:5 只， 4 0 W日光灯:1 4 只. 培养 架: 一 组; 培养 室 : 3 0 m ; 试管:2 0 x 2 0 0 , 6 0 0 0 支; 营养钵:6 0 0 0 个。 聚 氯乙 烯 塑料 大 棚: 3 0 一 5 0 . 2 ，一 个; 7 5 % 酒精; 甲1R; 升汞; 高锰酸钾; 解剖针; 漂白粉溶液， p H试纸. M S培养基:配制见下表。 M S培养基母液配制表 I ;I 液化合物 数以 g 加蒸馏水1 0 ml 配制 i L培养 基

14、需母液肚 ml A N H , N O ,( 硝酸铁) K N O ,( 石 肖 酸钾) K日 2 P 0 ,( 碑酸 几 氢钾) M K S 0 , 7 H 2 O( 硫酸镁) C a C l , 2 H 2 O( 氮化钙) 1 6 . 5 1 9. 0 1 . 7 3 . 7 4 . 4 1 0 0 0 1 0 0 B F e S 0 ,( 硫 酸亚 铁 ) N a t 一 E D T A( 乙 飞 胺四乙酸 几 钠): 一: : t o o 5 C KI( 碘化钾) N a , M o O , . 2 H 2 0 0 1 1 酸钠)0 .0830 .025 1 0 0 1 CB 7881

15、一 8 7 续表 母液化合物 数量 8 加燕馏水量 ml 配制 1 L培养 基需母液量 ml C C O C 1 2 . 6 H 2 O( 抓化钻) C u $ O , 5 H 2 O( 硫酸铜) M n S O, 4 H 2 O( 硫酸锰) Z n S O , 7 H 2 O( 硫酸锌) H 3 B O 3( 翻酸) 0 . 0 0 2 5 0 . 0 0 2 5 2 . 2 3 0 . 8 6 0 . 6 2 1 0 01 D E F 盐酸硫胺素 ( B ) 盐酸素 ( B Z ) 甘氨酸 0 . 0 0 4 0 . 0 0 5 0 . 0 2 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0

16、1 0 1 0 G H 获酸 肌 一 肌R A 蔗塘 琼脂 p H 0. 0 0 5 1 . 0 3 0 . 0 7. 0 5 . 8 : 1 0 1 0 直接加人 直接加人 注:在配制母 液A时最后加氮化钙。 A. 2 操作程序 A . 2 . 1 取刚出 土 幼苗或块茎上 的芽，切下1 一2 c m长一段，放在烧杯里，上 面盖好纱布， 用自来 水冲洗 1 h ,然后移人无菌 接种箱内，浸泡在饱和漂白粉溶液中5 一1 0 m i n ，取出后用无菌水冲洗2 一 3 次。 A . 2 . 2 将制备好的IN S培养基培养液分装于试管，每管l o m l ，试管口用包纱布棉花球塞紧，放人 硫酸纸

17、袋中 ( 每袋1 0 一2 0 支)在。 . 8 - 1 k g f / c m z 高压锅中消毒1 5 m i n ,冷却后放人无菌 接种箱待用。 A . 2 . 8 操作前操作室、工作台面、 操作工 具等用福尔马林 ( 甲 醛)熏蒸，然后用紫外线照射2 0 一 I 0 m i n , L 作人员 着清洁L 作服，手进人接种箱前用肥皂洗净并用7 0 %乙醇 擦拭消毒。 A . 2 . 4将 幼苗切 段放 在4 0 倍双 筒 解剖 显 微 镜下， 用 解剖 针去 掉 幼叶， 直 至 解出 半 光 滑的 生长 点， 用 解剖刀从0 . 1 - 0 . 3 m m 处切下， 接到试管内 培养 基上

18、 ， 每个试管接三 茎尖， 接后在试管上 端外面纸 帽上 注明处理和接种f 期。 A . 2 . 5 把 接种好的试 箫从无菌箱中 移出 置于2 1 一 2 5 C 、光照3 0 0 0 一4 0 0 0 c d 条件下 培养。 CB 7331一 8 7 附录B 马铃翔脱毒原原种的该育 ( 补充件) B. 1 器材与试剂 同附录A。 B. 2 萦育材料 经检验合格的脱毒核心材料 ( 试管苗，下同)若干管。 B. 3 操作程序 B . 3 . 1 将配备好的ms 培养基培养液分装于试管中，每管l o m l ，放人高压灭菌锅灭菌处理1 5 m i n , 冷却待用。 B . 3 . 2 L 作台

19、 面和L 只 用7 0 % 乙醇 擦拭消毒;盛试 管苗 培养基的试管用1 % 升汞 表面消毒后放人 无菌接种箱。 B. 3 . 3 1 . 作人员着清洁L 作服，双手用肥皂洗净， 伸人无菌箱后用7 0 % 乙醇棉擦拭消毒，长把镊 子 和剪子每次使用前都应在酒精上 燃烧消毒。 B. 3 . 4 把试管苗木植株按节剪 断，每颗带一叶片，然后腋芽向上插于另一试管内 培养基上 ，烤于 管口，用棉球塞紧管口。 B. 3 . 5 插完的试管拿出无菌箱，用牛皮纸包好管口，放于试管架上，在温度2 1 一 2 5 C ，光照3 0 0 0 一4 0 0 0 c d 条件下培养。 B. 3 . 6 按细砂: 腐熟

20、马粪: 耕层熟土二 1 5 : 3 0 : 5 5 配制营养土，分装于 营养钵中。 B. 3 . 7 当试管内 小植株高5一l o c m时，去掉纸帽和棉球锻练1 2 天，移植到钵内， 置于大棚内 在温度2 0 C 下假植。 B . 3 . $ 假植苗株高1 0 . 1 5 c m时，放人网室定植。 B. 3 . ， 加强水肥管理，发现蚜虫即用1 : 1 5 0 0 乐果常规叶面喷雾，每隔7 天喷1 次，直到无蚜虫为 止。 GB 7 3 31 一 8 7 附录C 脱毒原原种的拼块检查 ( 补充件) C. 1 设备和材料 . 1. 1 一 一; 培养室:3 0 m 左右。 培养架:一组。 木制

21、( 或塑料)培养盘 ( 如图C1 )若1 - 个，每个6 0 孔，每 孔J O c m 2 0 CCC 厂门 1 I 1 0 0 cm 图 C1 C. 1 . 4 按无 病上: 腐熟粪肥: 细砂=7 : 2 : 1 配制床土。床土含水量保持2 0 左右。 C. 1 . 5 f 3 瓷盘 ( 3 0 x 5 0 c m)一 组。 C. 1 . 6 小杯 ( 口径2 . 5 一3 . 5 c m) 1 0 0 0 个/ f . 右。 C . 2 操作程序 C. 2 . 1 将配制好的床上 装人培养盘的小方格，每小方格装床上 五分之四以下。 C. 2 . 2 将应检薯 块统 一 编号。 C. 2 .

22、 3 取每个薯 块的 一 个顶芽 ( 如 图C2 ) ， 放在白 瓷盘相应编号位置的 小杯内， 用0 . 3 。 的2 氯乙醇液浸绩3 0 m i n 后， 移入相应编号的培养盘方格内。 GB 7331一 87 图 C 2 C . 2 . 4 将培养 盘移 人培养室的培养架上， 培养室温度维持在2 0 左右， 培养 架应置于阳光充足的 地方，适时浇水。 C . 冬5 待薯 芽长到2 0 一 2 3 c m时， 逐株肉 眼鉴 定， 病状参照附录H。 发 现有病或 疑似有 病的相 应薯 块应淘汰，有条件的可进行逐株血清检测。 GB 7331一 87 附录D 原种级种拍的高倍繁殖 ( 册芽法) (

23、补充件) D . 1 配制床土 同 附录C 中 C . 1 . 4 . D . 2 操作 程序 D . 2 . 1 将种， 按芽切 块放在 床土中， 芽 床温 度维持在1 5 一 2 0 C ， 床土含水 量为2 0 % 左 右。 D . 2 . 2 薯芽长 到4 一5 c m时姗 下， 插人营养 钵里， 母薯 继续在苗 床催芽，一个 芽眼可研二 次芽。 操作时手用肥皂水洗干 净。 D - 2 . 3 营养钵在常温下，当苗长到1 5 c m左右时，移人播种地定植生产一代以 后种，。 D. 2 . 4 播种地选择在5 0 0 m内无马铃薯主要病毒病寄主作物的地方。 GB 7 3 31 一 8 7

24、 附录E 切刀消毒操作程序 ( 补充件) E. 1 器材 切刀: 2 把， 搪瓷盆 ( 或 塑料盆) :2 个， 大筐 ( 或席) : 1 个 ( 或一领) ， 消毒药液:2 0 0 0 m 1 ( 0 . 1 %酸性升汞, 0 . 1 % 高 锰酸钾、7 5 %乙醇、5 % 的碳酸任选一种即可) 。 E. 之 操作程序 E. 2 . 1 将对好的药液倒人盆中， 将切刀 柄朝上 浸人药液中。 E . 2 . 2 先取出一 把切刀，切 完一个种薯 ， 放回药 液， 取另 一把切刀， 再切 完一个种薯，又放回药 液。如此两把刀不断交替使用。 E. 2 . 3 切薯 块时，边切边肉眼观察切面，发现病

25、薯或可疑薯 块全部淘汰。 E. 2 . 4 切好的薯块放在清洁大筐里 ( 或苇席上 ) 备用。 GB 7 3 31一 3 7 附录F 几种主要马铃抽 病毒的检验方法 ( 补充件) F . 1 玻片点滴凝班 法 ( 利用粗制抗血清)检验马铃粉P V X病毒 F . 1 . 1 取被检株中、上 部叶片放人研钵中， 再 按1 : 1 加人中 性磷酸缓冲液 研磨， 用双层纱布过滤， 滤液备用 ( 也可用中 性磷酸缓冲液浸湿纱布， 折成双层，包住样品揉挤拧汁备用) 。 F . 1 . 2 用滴管 吸取样品汁 液滴于 载玻片上， 左右 各一滴。 F . 1 . 3 取被0 . 8 5 % 生理盐水稀释到5

26、 到1 0 倍的抗血清和正常血清各一滴，抗血清滴于玻片右边样 品汁液上 ，正常血清滴于左边样品汁液上，置于2 0 左右的常温下2一3 m i n ，若右边汁液边缘出现 大 块 凝 聚 颗 粒 ， 证 萌 带 有 X 病 毒 ， 无 凝 聚 颗 粒 证 明 被 检 株 无 X 病 毒 。 F . 2 乳酸凝班 试验 把某一特异 性的病毒抗血清中提纯出 的免疫球蛋白，吸附在均一的乳胶颗拉表面，当这种致敏的 乳胶颗粒遇到相应的被鉴定抗原时，就会产生凝聚。 F . 2 . 1 被检植物汁液的榨取方法 取供试样品叶片约1 g ，按 1 : 1 0( 重量/ 容积)的比例加人含。 . 8 5 % 抓化钠的

27、。 . 1 M T r i s 盐酸缓冲 液，在研钵内研碎。以3 0 0 0 r / mi n 离心1 5 m i n ，取上 清液供鉴定用。 或将 1 g 叶片样品研碎，用一薄片脱脂棉挤压过滤，用吸管吸取 1 滴汁液加人0 . 5 m l 的0 . 1 M T r i s 盐酸缓冲液， 供鉴定用。 F . 2 . 2 用双凹 载玻片或用油笔在一般玻片上 划两个圆圈，用滴管吸取被检植物汁液滴在一侧的凹 中或圆圈七 ;用另一滴管吸取一滴阴性对照或阳性对照的汁液，滴在另一侧。 F . 2 . 3 吸取乳胶致敏的抗血清滴加在被检植物汁液和对照的植物汁液上 ，轻轻摇动混匀。然后把 玻片放到培养皿中，盖

28、好上 盖。 F . 2 . 4 把培养fm 放置在2 3 C 温度条件下1 5 一 3 0 m i n ，在这当中还可再轻轻摇动一、二次。 有微型振 荡机时，可把培养皿放置于振荡机L 振荡。 F . 2 . 5 用扩大 镜观察，出现颗粒凝聚者为阳 性， 证明 带有X 病毒; 纤细的乳胶颗粒均匀分布者为 阴性，i li: 明被检株无X病毒。 F . 3 酶联免疫吸附测定植株病毒 ( P S T V除外) F . 3 . 1 取被检植株L 部叶片 ( 在马 铃薯开花期)5一l o g ，加人中 性磷酸缓冲液研磨，取汁液和 包被缓冲液混匀，榨叶汁备用。 F . 3 . 2 在编号的塑料微鼠多孔平底反

29、应板上 ，每 孔滴人2 0 0 川被检株汁液，在3 7 下置2 h( 或 4 下2 4 h ) ，并设已知 病毒为阳 性对照， 健康叶汁为 阴 性对照。 F . 3 . 3 弃包被液后，每孔用洗涤缓冲液漂洗三次，每次5 m i n . F. 3 . 4 去洗液后每孔加稀释好的 ( 稀释液为生理盐水，稀释23 倍) 抗血清2 0 0 川， 在3 7 下置 2 h . F . 3 . 5 去血清后按F . 3 . 3 洗涤三次。 F . 3 . 6 每孔加经稀释5 0 - 8 0 倍的酶标血清2 0 0 1 1 ，在3 7 下置2 h . F . 3 . 了 弃酶标后 按F . 3 . 3 洗涤三

30、次。 F. 3 . 6 去洗液后每孔加入2 0 0 0底物缓冲液，在3 7 下置1 5 一4 5 m i n , F . : 二 每孔加人5 0 02 M硫酸终止反应。 CB T331一 37 F. 3 . 1 0小孔内出现黄褐色反应为阳 性， 被检株带病毒。 注: 底物缓冲液的配法: A 液:0 . I M柠橡酸2 . 0 0 . 1 . B液:0 . 2 M碑酸氢钠2 0 0 . 1 . 3 0 0 双氧水B O v i . 邻苯二胺2 0 m g , 底物缓冲液二 2 4 . 3 . 1 A液+ 2 5 . 7 m 1 B液+ 8 0 N 1 双氧水+ 2 0 m g 邻苯二胺。 包被缓

31、冲液: 1 . 5 9 g 碳酸钠+ 2 . 9 3 g 碳酸氢钠+I 0 0 0 m l 水调p H二 9 . 6 , 稀释缓仲液: 8 g 氮化钠+ 0 . 2 g 磷酸二氢钾+ 2 . 9 g N a 2 H P 0 4 . 1 2 H 2 0 + 1 0 0 0 m 1 水调p H= 7 . 4 ，再加0 . 2 g 抓化钾，0 . 5 . 1 T w e e n - 2 0 混合后，从中取1 0 0 . 1 加1 g 牛血清蛋白，4 贮存。 洗涤缓冲液 ( P B S一 T w e e n 一 2 0 ) ; 8 g 抓化钠+ 0 . 2 g 磷酸二 氢钾+ 2 . 9 g N a

32、2 H P 0 4 - 1 2 H2 0+ 0 . 2 9 氛化钾+ 0 . 5 m l T w e e n 一 2 0 + 水1 0 0 0 . 1 ， 调p H=7 . 4 。 F. 4 利用鉴别寄主检验X, Y, S、G, A, M,P S T V病毒 F . 4 . 1 在2 0 左右，防蚜条件下盆栽千日 红、 心叶烟、香料烟和蓖若若干 。 F . 4 . 2 按F , 1 . 1 制备被检汁液。 F . 4 . a 用汁 液摩擦接种法先在指示植物叶片上用小型喷粉器轻轻喷上一层金岗砂 ( 4 0 0 筛目) ，然 后用已消毒的棉球沾被检株叶或芽汁，在指示植物叶片上 轻轻摩擦，用清水洗掉

33、叶片上的杂物， 置于 2 0 -2 4 左右，3-7 天后逐日 观察症状。 马铃薯病毒在主要指示植物上 的症状 检测病毒 接毒后检在时间指示植物表现症状 PVX PVM PVS PVG PVY PVA PSTV 5一 7天 1 2-2 4 天 1 4-2 5 天 2 0 夭 71 0 天 71 0 天 51 5 天 千 日红 千 日红 千 日红 心叶烟 普通烟 香料烟 负若 叶片出现红环枯斑 接种叶片出现紫红色小圆枯斑 接种叶片出现桔红色小斑点. 略微凸出的圆或 不规则小斑点 系统自斑花叶症 初期明脉，后期沿脉出现纹带 微明脉 沿脉出现褐色坏死斑点 F. 5 利用苯酚 测定P L R V( 卷

34、叶病毒) F . 5 . 1 按F . 1 . 1 制备被检株汁液。 F . 5 . 2 取被检汁5 g 放人清洁指形管，并加人5 m l 6 % 苯酚溶液，摇匀后静置5 一1 0 m i n 到叶绿 素和细胞残体沉淀为止。 F . 5 . 3 去掉上 层液体，在沉淀物里加人5 m l 清水。 F. 5 . 4 观察结果 若产生沉淀液，表示被检株不带P L R V，产生混浊液表示被检株带有P L R V, 1 0 9 GB 7 33 1一 8 7 附录G 马铃翔 种落 产地检疫档案卡片 ( 补充件) 马铃薯种薯产地检疫档案卡片见下表。 地块 田间检杏室内检验 检查 年月日 品种 种薯来源播种日

35、 期消毒办法 检 查人 病害株率 % 株 结果 n o GB 73 31一 7 附录。H 马铃翔 病害田间 症状鉴别 ( 参考件) 马铃薯病害田间症状鉴别见下表。 发病部位马铃落癌肿病马铃，环腐病马铃井黑胫病 马铃薯 病毒 病 卷叶型花叶型矮化型束顶型 茎 叶 在高度感病的品 种中主枝与分枝 、 分枝与 分枝或枝 叶的腋芽、茎尖 等处，长出一团 团密积的卷叶状 组织的瘤，形似 花叶菜花， 绿色， 后变褐，最后变 黑腐烂脱落，茎 杆、花梗上和叶 背、花曹背面长 出无叶柄、 绿色、 有主脉无枝脉的 丛生小叶 现苦后陆续出 现萎芍型，顶 叶变小，叶缘 向上卷曲，叶 色变淡呈 灰绿， 茎杆一株或数 枝

36、萎芍垂倒黄 化枯死，但枯 死后叶片不脱 落 苗期 s7 寸 始表现植株矮 化，叶片退绿 黄化，茎部呈 黑腐，表皮组 织破裂，后期 形成 “ 黑脚气 极易从土坡中 拔除 叶片向上卷曲， 变厚，呈匙状， 质地硬脆。个别 品种病变处呈紫 红色或退绿变蔺. 注愈轻卷叶 ( 顶 部显症)沿中脉 包起来。严重的 矮化 ( 减产8 0 0 o 左右。有时有 复合侵染，紫点 加卷叶 叶片表现退绿 区域或黄绿相 间的花叶，病 变不受叶脉限 制，有的叶脉 坏死呈黑揭色 坏死条斑.也 有的产生黄色 斑驳的花叶症 伏 病株分枝丛 生. 葵编，叶片变 小。有时顶端 叶片黄化。还 有一种矮皱、 束顶 叶柄角度变小， 多

37、呈 锐角，向 上竖 起，上 部卜 片变小 薯 块 茎基部、 甸旬茎、 薯块 仁 形成形状 不 一 的瘤，似花 椰菜， 质碎易断， 为乳白色或近似 薯块的颜色，以 后逐变为粉红或 揭色，最后变黑 而腐k “ 尾脐部皱缩凹 陷，可挤出乳 黄色菌脓，多 有皮层分离 病组织呈灰黑 色并常形成黑 孔 块茎小，皮裂由圆变长呈纺 锤形表皮多出 现裂纹 I I I C日 73 31一 7 附 录I 几种主要真菌细菌 病容的检验方法 ( 补夯件) I . 1 马铃挤庙肿 病的室内检验 I . 1 . 1 显微镜检验 用接种针挑取病组织或作横断面切片，在显微镜下检查，若发现菌原抱班堆、夏 抱子堆或休眠抱 子囊为马

38、铃薯癌肿病。 I . 1 . 2 染色法检验 I . 1 . 2 . 1 将病组织放在蒸馏水中浸泡半小时; 1 . 1 . 2 . 2 用吸管吸取上浮液一滴放在载玻片上. 1 . 1 . 2 . 3 加1 % 的饿酸或0 . 1 % 升汞水一滴固定，在空气中自 然干 燥，再用1 % 酸性品红或1 -5 % 龙胆紫一 滴染色1 m i n ; 1 . 1 . 2 . 1 洗去染液镜检，可见到单鞭毛的游动抱子。 1 . 2 马铃翻 环腐病的室内检验 用革兰氏雷氏 ( R o c i c o t )染色法。 1 . 2 . 1 试剂 a . 结晶紫 ( 或龙胆紫) :2 . 5 g ; 水:l 0

39、0 0 m l ; b . 碳酸氢钠:1 2 . 5 8 ， 水 c . 碘 1 0 0 0 m1 ; 2 0 g ; 氢氧化钠 ( 1 N)液:l o o m l ; 水: 9 0 0 m 1 ， 将碘先溶于氢氧化 钠溶液中，然后加水稀释。 d . 乙醇( 9 5 % ):7 5 0 m i ; 丙 酮 : 2 5 0 m l ; e . 碱性晶红 ( 9 5 %乙醇饱和溶液):1 0 0 m 1 ; 水:9 0 0 m 1 o 1 . 2 . 2 操作程序 1 . 2 . 2 . 1 在被检标本的病部挑取细菌溢作涂片，用1 . 2 . 1 中a , b 等量混合染色l o s ,除去染液后

40、用 1 . 2 . 1 中c 处理l o s , 1 . 2 . 2 . 2 水洗后用1 . 2 . 1 中d 处理5 一l o s ，到颜色 洗下为止。 1 . 2 . 2 . 3 用I , 2 . 1 中 e 处理2 一3 : ， 水洗，干 燥后 镜检， 病菌 被染成紫色为 马铃薯 环腐病。 1 . 2 . 3 为核对技术上的误差，最好用已知染色反应作对照。 CB 7 3 3 I 一 公 T 附加说明: 本标准由中华人民共和国农牧渔业部提出。 本标准由全国植物保护总站、 黑龙江省植物检疫 植物保护站、 山西省农牧厅植保植检站、四川省农 牧厅植物检疫站起草。 本标准卞要起草人李先誉、李庆孝、

41、吴清彪、陈永康、耿秉晋。 *草庐一苇草庐一苇*提供优质文档， 如果 你下载的文档有缺页、 模糊等现象或 者遇到找不到的稀缺文件， 请发站内 信和我联系！我一定帮你解决！ 提供优质文档， 如果 你下载的文档有缺页、 模糊等现象或 者遇到找不到的稀缺文件， 请发站内 信和我联系！我一定帮你解决！ 本人有各种国内外标准 20 余万个， 包括全系 列 GB 国标国标及国内行业行业及部门标准部门标准，全系列 BSI EN DIN JIS NF AS NZS GOST ASTM ISO ASME SSPC ANSI IEC IEEE ANSI UL AASHTO ABS ACI AREMA AWS ML NACE GM FAA TBR RCC 各国船级 社 船级 社 等大量其他国际标准。豆丁下载网址：豆丁下载网址： http:/