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1、广东海洋大学本科生毕业论文（设计）开题报告（学生用表）（使用届别：2014届）毕业论文（设计）题目 3种褐藻多酚类成分的提取分离和抗氧化活性研究学号201011221115姓名李源院(系)食品科技学院专业食品质量与安全指导教师卢虹玉所在单位、部门食品科技学院食品质量与安全系职称讲师一、本项目研究的目的与意义抗氧化剂可分为天然抗氧化剂和人工合成抗氧化剂两种。由于天然抗氧化剂需要养殖，提取等等繁琐的工序，因此在食品工业一些人工合成抗氧化剂如二丁基羟基甲苯（BHT）、丁基羟基茴香醚（BHA）、叔丁基对苯二酚、没食子酸丙酯被大量使用。虽然生产快速，成本低廉，但人体在长期高剂量的摄入后，会导致细胞突变从
2、而患上癌症。已有大量事实证明，在食品中，就毒性而言，天然抗氧化剂要远比人工合成抗氧化剂的毒性低的多。褐藻多酚具有显著的抗氧化活性，能够起到良好的清除自由基、预防癌症的作用且对人体无害，适宜大量开发用作天然抗氧化剂。寻求抗氧化活性的药物用于清除自由基具有重要意义，由于人工合成药物的毒性和成本问题，寻找具有抗氧化活性可清除自由基的天然产物是当前的研究热点。通常在有机物提取实验中，当醇含量为50%60%时可除去淀粉等杂质；醇含量达60%时，无机盐开始沉淀；醇含量达75%以上时，可除去蛋白质等杂质；当醇含量达80%时，几乎可除去全部淀粉、多糖、蛋白质、无机盐类杂质，但是鞣质、水溶性色素、脂质等不易除去
3、。所以，本课题选择用无水正己烷浸取除去样品中的脂质，用甲苯溶液过柱除去样品中的水溶性色素，用甲醇提取尽可能的除去淀粉，多糖，蛋白质，无机盐，用70%丙酮提取其中的褐藻多酚，如此操作可以较为有效地减少多糖和蛋白质对多酚提取的影响。 测定抗氧化活性的方法有很多种，但综合考虑成本及实验条件，磷钼络合物法有良好的可操作性和再现性，且成本低廉，适用于多种样品溶剂的抗氧化能力测定，故本课题选用磷钼络合物法测定褐藻多酚提取物的总抗氧化活性。而二苯代苦昧酰基（DPPH）法具有稳定、快速、简便、灵敏的优点，故选用DPPH法评价提取物的自由基清除能力。湛江作为我国大型海藻资源地之一，有着丰富的褐藻资源，尤其是硇洲
4、马尾藻为湛江特有，且少见相关研究的报道。这样的资源不加以利用太过于可惜和浪费。不同种类的褐藻中褐藻多酚的含量差距很大，与藻体的大小、年龄、组织、盐度、季度、营养条件、光照条件及采摘后的保存时间和条件都有关系。因此本课题选取3种典型的湛江产马尾藻：硇洲马尾藻、硇洲产铜藻和鲜鱼头草，提取褐藻多酚并检测其含量、总抗氧化能力以及对自由基清除能力。为硇洲马尾藻、硇洲产铜藻和鲜鱼头草的开发利用提供一定依据，为研发新型自由基清除剂、天然抗氧化剂和后续研究提供一定的参考价值。二、国内外研究（设计）发展状况迄今为止，国内外报道的提取分离褐藻多酚的方法主要超声波提取法、微波提取法、超临界流体萃取法、吸附树脂法、高
5、速逆流色谱法和有机溶剂萃取法等。国内外报道的测定褐藻多酚抗氧化物质清除自由基的方法主要有紫外-可见光分光光度法、化学发光法、电子自旋共振法、电化学检测法、荧光法、气相色谱法和超高效液相色谱串联质谱法等。目前，1，1-二苯基-2-苦基苯肼（DPPH）清除实验被广泛用于抗氧化活性的测定，具有稳定、快速、简便、灵敏的优点。国外很多学者运用DPPH溶液的紫外-可见光分光光度计的吸光度变化作为清除DPPH自由基能力的测定方法。但国内并无系统的研究体系。尤其是对于湛江海域出产的3中马尾藻：硇洲马尾藻、铜藻、鲜鱼头草，少见相关的研究报道。 三、研究目标、内容(1) 褐藻多酚的提取分离；(2) 褐藻多酚含量的
6、测定；(3) 褐藻多酚总抗氧化能力的检测；(4) 褐藻多酚的DPPH自由基清除能力检测。(5) 评价3种马尾藻的褐藻多酚含量和抗氧化活性。四、项目拟解决的关键问题（1）选择合适的方法和试剂提取褐藻多酚 五、研究（设计）方案与技术路线总酚含量的测定3种马尾藻中褐藻多酚的提取分离总抗氧化能力检测自由基清除能力检测综合两种结果，评价3种马尾藻中褐藻多酚的抗氧化活性六、研究方法(1) 褐藻多酚的提取分离：采用溶剂抽提法提取，采用微晶纤维素吸附法进行分离。(2) 褐藻多酚含量的测定：采用Folin - Ciocalteu比色法，以没食子酸（GA）为当量。(3) 褐藻多酚总抗氧化能力的检测：采用磷钼络合物
7、吸光度法。(4) 褐藻多酚的DPPH自由基清除能力检测：采用二苯代苦昧酰基自由基(DPPH)法做5个梯度，计算半数清除浓度(IC50)。7、 参考文献1. 李俊,贾之慎. 海洋生物抗氧化剂研究进展J.天然产物研究与开发,2000,12(4) . 全选 2. 杨会成,董士远,刘尊英等. 海藻中多酚类化学成分及其生物活性研究进展J.中国海洋药物杂志, 2007,26 (5):53-59.3. Butterfield DA, Castenga A ,Pocernich CB et al. Nutritional approaches to combat oxidative stress in Alz
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16、资料，并对其进行分类，整理，归纳。开始撰写开题报告，并对其修改。提交老师查阅。在老师的意见下，重新修改了开题报告，并不断修复，完善。确定实验方案并进行实验：(1)准备实验材料和订购所需试剂；(2)熟悉相关的仪器操作和实验室规范；(3)按照既定方法进行实验，详细记录相关数据。进行数据统计和处理与分析，完成论文初稿、交指导老师审阅、修稿并定稿、完成其它教学材料。论文定稿，答辩幻灯片和摘要的准备。答辩 根据答辩小组提出的意见再次修改论文。选题是否合适： 是 否方案是否可行： 是 否进程是否合理： 是 否任务能否完成： 能 不能指导教师（签字） 年 月 日选题是否合适： 是 否方案是否可行： 是 否进程是否合理： 是 否任务能否完成： 能 不能指导小组组长（签字） 年 月 日5