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1、附片蓟对小鼠促凝血作用的初探 目 录摘要 1关键词1前言 21 材料与方法 3 1.1 试验材料 31.1.1实验仪器31.1.2试验动物 31.1.3试验药物 31.1.4主要器材31.1.5试验试剂31.2方法与步骤 3 1.2.1动物凝血时间观察及植物催进凝血作用实验3 1.2.2测定纤维蛋白含量实验3 2 结果与分析 43 讨 论 53.153.253.354 结论 5谢辞6参考文献76附片蓟对小鼠促凝血作用的初探摘要：本文通过灌胃天然植物附片蓟四种不同部分5%混悬滤液，分别于0、10、30、60、120测定凝血时间；同时对灌胃天然植物附片蓟四种不同部分5%混悬滤液，1小时后断头采血抗
2、凝制备血滤液，用723分光光度计测定血滤液中的纤维蛋白原（FIB）含量。结果表明：叶子，杆子和全草悬滤液都具有一定的促凝血作用。关键词：附片蓟；纤维蛋白原；凝血时间前言血液中存在着凝血和抗凝血两个对立统一的机制。在生理状态下二者保持平衡，共同维持着血液的正常生理。这两种系统功能紊乱平衡失调时就会出现血液循环的病理变化。凝血是一些通过加速血液凝固过程或者阻止纤维蛋白溶解作用而受到止血效果的物质，它们在药物治疗学上占有重要的地位。同时，血液凝固系统与纤维蛋白溶解系统是存在于血液中的一种对立统一机制。在生理状态下二者保持平衡，共同维持着血液的正常生理。血液的凝固有内源性和外源性两条途径，二者的区别在
3、于启动方式和参加凝血因子不完全相同，前者是指心血管内膜受损或血液流出体外，接触某些异物表面时触发的凝血过程;后者则是指由于受损组织中释放出组织凝血活素的参与而引起的凝血过程;但又非各自独立完全。这一过程可概括为以下3个步骤：:在血管或组织损伤后，经一系列凝血因子的递变而形成因子Xa；在后者与Ca2+、因子V和血小板磷脂的作用下，是凝血酶原(因子II)变成凝血酶(IIa)；在凝血酶的作用下，纤维蛋自原(因子I)变成纤维蛋自(I a)，产生凝血块而止血。促凝血药主要是通过该途径增加血小板生成，增强其聚集及黏液合力，促使凝血活性物质释放，缩短凝血时间，或竞争性对抗纤溶酶原激活因了的作用，使纤溶酶原不
4、能转变成纤溶酶，从而抑制纤维蛋白的溶解，达到止血效果1，2，3，4。能促进血液凝固而使出血停止的药物，称为凝血药。是临床应用范围广泛的药物之一，在创伤中也有重要的应用价值。它主要通过增强体内凝血因素或抑制抗凝血因素，促使凝血，以达到凝血目的。凝血中药具有收敛、凝固、凉血等作用，用以治疗咯出血症，并用于创伤性出血。目前虽然针对各种类型止血都具有相应的止血药。本实验所用植物附片蓟具有新疆资源丰富，生命力强的特点，并且民间广泛用于各种创伤止血，具有开发前景。本文就植物附片蓟的止血作用进行了初步探讨，为植物药源开发以及在兽医临床上推广使用奠定基础5。 1 材料与方法1.1材料1.1.1试验仪器 PL2
5、002电子天平（上海博特勒-托利多仪器有限公司）;TDL-4Z台式自动平衡离心机（南星科学仪器有限公司）；723分光光度计(上海菁华科技仪器有限公司)；粉碎机（浙江省温岭市大鹏机械有限公司）1.1.2 试验动物 昆明系小鼠，体重18-22 g（新疆医科大学试验动物中心提供）1.1.3 试验药物附片蓟（由乌鲁木齐南山水西沟采制）1.1.4 主要器材注射器，灌胃针头，试管（不同规格），烧杯，天平，酒精灯，铁架，定性滤纸（直径12.5cm），三角瓶，载玻片（95%酒精浸泡准备），大头针，镊子，剪刀，干棉球1.1.5试验试剂 生理盐水：0.9 g NaCl溶于蒸馏水中，定容至100 ml，于121高压
6、灭菌15 min备用。5%附片蓟溶液：最先把附片蓟每一部分分别压碎调成分的状态（杆子粉，种子粉，叶子粉和混合粉）。每一部分分别称2.5g加上50ml蒸馏水，水烫完以后煮在烫水里30min左右，然后存到冰箱里备用。饱和氯化钠：在蒸馏水中加氯化钠直至不溶为止，即为饱和氯化钠溶液。3.8%柠檬酸钠（抗凝血剂）：称0.38g柠檬酸钠，加蒸馏水到10ml溶解。1.2方法及步骤1.2.1动物凝血时间观察及附片蓟促凝血作用实验20只健康昆明系小鼠随机分5组，雌雄各半，分别为生理盐水对照组、5%附片蓟杆混悬滤液组、5%附片蓟叶混悬滤液组、5%附片蓟种子混悬滤液组及5%全草混悬滤液组。1.2.1.1采血小鼠尾尖
7、采血，血液滴在准备好的载玻片上面，血液直径大约为5-10mm，立即开始计时。1.2.1.2观察凝血时间每隔30s用大头针快速跳动载玻片上的血滴，至到出现纤维蛋白丝为止。自血液流出至出现纤维蛋白丝的时间即凝血时间。1.2.2 纤维蛋白原含量测定（采用饱和氯化钠法测定）1.2.2.1 断头采血、抗凝、离心，取血浆0.5ml，置于刻度试管中，加入饱和氯化钠4.5ml充分摇匀，置37水浴中温育3分钟，取出后再次摇匀即可。1.2.2.2对照试管液的配制取生理盐水0.5ml加入饱和氯化钠溶液4.5ml进行同样操作。1.2.2.3 选用波长520nm，以对照试管液调定光密度测定仪的零点，然后测定被测样品试液
8、的光密度，按下式计算纤维蛋白原的含量。纤维蛋白原含量的计算公式：纤维蛋白原含量（mg）=测定光密度/0.5*10001.3数据处理采用配对t检验，成对双样本均值分析进行处理6。2 结果与分析2.1附片蓟对小鼠血液凝血时间的影响表1附片蓟不同部位对小鼠血液凝血作用的影响实验组观察时间对照组杆子混悬滤液叶子混悬滤液种子混悬滤液全草悬滤液给药前2.452.222.362.412.3810分钟2.420.8511.921.6830分钟2.420.550.520.910.6260分钟1.840.781.480.861.66120分钟1.651.261.571.291.99表2 成对双样本均值分析（t-检
9、验）各组比较P(T=t) 单尾P(T=t) 双尾A与B0.016*0.033* A与C0.0540.109A与D0.029*0.058A与E0.1280.256备注：p0.01差异极显著，用*表示；P0.05 差异显著，用*表示。A对照组,B杆子混悬滤液,C叶子混悬滤液,D种子混悬滤液,E全草悬滤液。从表2中可以看出标志*的是差异显著,具有统计学意义7。图1不同药物组凝血时间从图1中可以看出附片蓟的杆子，叶子和全草灌胃30分钟后具有明显的促凝血作用。2.2附片蓟对小鼠纤维蛋白含量的影响实验组对照组杆子混悬 滤液叶子混悬 滤液种子混悬滤液全草混悬 滤液纤维蛋白原含含量(mg)0.0920.002
10、0.0150.0190.009表3附片蓟不同部分对小鼠纤维蛋白含量的影响表4成对双样本均值分析（t-检验）各组比较P(T=t) 单尾P(T杆子全草。通过表3和图2测定纤维蛋白原含量表明，附片蓟具有较强的抗纤维蛋白溶解作用，其机理有待研究。由上表4采用配对t检验，成对双样本均值分析结果可知，附片蓟各部位和对照组之间差异显著0.01p0.05，显示附片蓟具有促凝血作用。3.2 附片蓟是一种山区生长的天然植物，同时，至今还没有作为药物使用的文献报道，本文对附片蓟的促凝血作用进行了药效学方面的初步探讨，为进一步研究奠定了基础，其促凝血机制及其安全性评价有待于进一步的研究。4 结论实验结果表明附片蓟缩短
11、凝血时间，降低血液纤维蛋白原含量具有促凝血作用。参考文献：1乔彦，吕晓川.抗凝血药物研究进展.100017北京市，解放军总参谋部警卫局保健处(2005)08-0631-04.2叶妮，张临洪.低分子量肝素的药理作用及其在缺血性卒中的临床应用.国外医学，2001，9；45.3Money SR, York JW. Development of oral heparin therapy for prophylaxis and treatment of deep venous thrombosis. Cardiovasc Surg，2001, 9:211-218.4Ben C, Christine H. Antithrombotic drug market.nature Reviews Drug Discover，2003，2:11一12.5李萍，土永安，杨涛，徐维家.血液促凝剂的临床应用及评价.2006年第27卷第8期.6邱家祥，米克热木沙衣布扎提，徐鸣，王贤.两种DIC模型的建立及血液指标的变化比较.新疆农业大学动物医学学院.7三种中药体外促凝作用实验结果的方差分析wang建生任远金辉冉桦强甘肃中医学院中药系(730000).