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1、不同产地枸杞果和叶中总生物碱和总黄酮含量的测定 摘要：检测不同地区枸杞果和叶中总生物碱和总黄酮含量，比较各地区含量之间是否存在差异。在对不同地区的枸杞果和叶进行测量时，采用TU-1901型双光束紫外可见分光光度法进行含量的测定，应用滴定法进行枸杞总糖含量测定。甘肃与新疆、青海、宁夏和内蒙古枸杞果中总生物碱含量存在显著差异；新疆与青海、宁夏枸杞果实中总生物碱含量存在显著差异；青海和宁夏枸杞果实中总生物碱含量无显著差异；青海与内蒙枸杞果实中总生物碱含量有显著差异；甘肃和湖北果实中总生物碱含量无显著差异；新疆与湖北果实中总生物碱含量无显著差异。新疆与甘肃枸杞叶总生物碱含量有显著差异；甘肃与宁夏无显著
2、差异；甘肃与内蒙有显著差异；青海与湖北五显著差异；宁夏与湖北有显著差异。新疆与青海、宁夏枸杞果中总黄酮含量无极显著差异，而与甘肃、内蒙和湖北达极显著差异；甘肃与内蒙达极显著差异；内蒙与湖北达极显著差异。新疆与甘肃、宁夏枸杞叶中总黄酮含量无极显著差异，而与青海达极显著差异；青海与内蒙达极显著差异；内蒙与湖北达极显著差异。关键词：枸杞，不同地区，总生物碱，总黄酮GOJI BERRIES AND LEAVES IN DIFFERENT REGINES WITH THE DETERMINATION OF TOTAL ALKALOIDS AND FLAVONOIDS CONTENTwangwei (Ni
3、ngxia University life sciences institute Ningxia Yinchuan 750021)Abstract: the detection of wolfberry fruit in different areas and total alkaloids and total flavonoids content in leaf, compare various areas if there is a difference between levels. On the goji berries and leaves in different parts of
4、 the measure, the TU - 1901 type double beam uv visible spectrophotometry to determine the content, the titration method was applied to determine medlar total sugar content. Gansu and xinjiang, qinghai, ningxia and Inner Mongolia total alkaloid content in the goji berries existed significant differe
5、nce; Xinjiang and qinghai, ningxia wolfberry fruit total alkaloid content in the significant differences; Total alkaloid content in qinghai and ningxia wolfberry fruit there was no significant difference; Total alkaloid content in qinghai and Inner Mongolia wolfberry fruit has significant difference
6、; In gansu province and hubei total alkaloid content in the fruits of no significant difference; Xinjiang and hubei total alkaloid content in the fruits of no significant difference. Xinjiang and gansu Chinese wolfberry leaves total alkaloid content had significant difference; There was no significa
7、nt difference in gansu and ningxia; Gansu and Inner Mongolia have significant differences; Qinghai province and hubei five significant differences; Ningxia province and hubei have significant differences. Total content of flavonoids in the xinjiang and qinghai, ningxia wolfberry fruit promise signif
8、icant differences, and gansu, Inner Mongolia and hubei province up to extremely significant difference; Gansu and Inner Mongolia reach very significant differences; Inner Mongolia and hubei reach very significant differences. Xinjiang and gansu, ningxia wolfberry, total content of flavonoids in the
9、leaf promise significant difference compared with qinghai up to extremely significant difference; Qinghai and Inner Mongolia reach very significant differences; Inner Mongolia and hubei reach very significant differences. Key words: Chinese wolfberry, different areas, total alkaloid, total flavonoid
10、s 枸杞是我国重要的药用植物资源之一，不仅是一种保健品，而且还是一种道地中药材。枸杞主要分布于宁夏、新疆、内蒙古、青海等省区，枸杞主要药用部位为果实，其药用功效的发挥往往与果实内含有的特殊化学成分具有密切的关系。现代医学研究发现，枸杞子具有增强免疫力、防衰 老、抗肿 瘤、抗 氧化 等多方 面的药 理作用，其中枸杞总生物碱和总黄酮被公认是果和叶中。近年来，关于枸杞植化、药理、临床、栽培和加工等领域已有深入的研究。传统的判断枸杞品质优劣的主要依据是以外观上是否个大、肉厚、色红、味甜来判断，而这种常规外观判断标准与枸杞果实内在的成分间有无直接的关系，一直是人们普遍关心的问题。为此，我们对不同产地枸杞
11、总生物碱和总黄酮含量测定，比较它们之间存在的差异性。为进一步提高枸杞质量提供理论依据。1 材料与方法1.1材料实验材料于2008年夏季分别采自新疆阜康、甘肃陇西、青海省都兰、内蒙古赤峰、宁夏中宁、湖北随州。采样方法：每个产地选取20-30株生长良好的枸杞灌木，在其中、上部位东、南、西、北4个方向分别采集叶片、果实，自然风干后干燥、粉碎并过50目筛备用。1.2主要仪器与试剂TU-1901型双光束紫外可见分光光度计(北京普析), 旋转蒸发仪（Buchi，瑞士）、 电热恒温水浴锅HH.S11-2（北京长安科学仪器厂）、SHZ-D循环水式真空泵（河南郑州长城科工贸有限公司）、DHC-3型酸度计(上海雷
12、磁仪器厂); 芦丁对照品（中国药品生物制品检定所），硫酸阿托品对照品(河南省许昌华仁制药有限公司),溴甲酚绿(分析纯,中国医药公司),其他试剂均为分析纯。1.3 总生物碱含量的测定1.3.1样品提取精密称取样品2g，用90%的乙醇在索氏提取器中提取5h，浓缩近干，加蒸馏水约20ml，用2mol/L的盐酸调pH至3-4，抽滤，滤液用浓氨水调pH至9-10,用氯仿萃取3次,每次20ml,合并氯仿液，蒸干，得氯仿萃取物；水层再用正丁醇萃取3次，每次20ml，合并正丁醇液,蒸干，得正丁醇萃取物。氯仿和正丁醇萃取物加无水乙醇溶解并转移至10ml容量瓶中,用无水乙醇稀释至刻度,得样品溶液。1.3.2溴甲酚
13、绿缓冲液的配制及对照品溶液的配制7 精密称取溴甲酚绿125 mg，用0.2 mol/L的 NaOH 12.5 ml溶解后，加入邻苯二甲酸氢钾2.55 g，加少量蒸馏水溶解，转移至250 ml的容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，备用。 精密称取硫酸阿托品对照品约25 mg，置于100 ml的容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，备用。1.3.3 测定波长的选择 按1.3.1和1.3.2项下操作制备对照品溶液，在200-800 nm范围内扫谱，测定其最大吸收。结果对照品溶液与样品溶液显色后在420nm处均有最大吸收，所以选择420nm为测定波长。1.3.4 标准曲线的绘制精密吸取对照品溶液1 ml，2
14、 ml，3 ml，4 ml，5 ml分别置于10 ml容量瓶中，定容，各取1 ml置入已放入10 ml氯仿的分液漏斗中，再精密加入2 ml溴甲酚绿缓冲液振摇1 min，静置至氯仿液澄清，分取氯仿层，以溴甲酚绿缓冲液饱和的氯仿液为空白，在420 nm处测其吸收度。以硫酸阿托品量X为横坐标，以吸光度Y为纵坐标作标准曲线，得回归方程Y=0.0062X-0.015，r=0.9965，表明硫酸阿托品在25-125 (g/ml) 的范围内线性关系良好。1.3.5样品含量测定精密量取样品溶液1 ml，置入已放入10 ml氯仿的分液漏斗中，再精密加入2 ml溴甲酚绿缓冲液，振摇1 min，静置至氯仿液澄清，分
15、取氯仿层，以溴甲酚绿缓冲液饱和的氯仿液为空白，在420 nm处测其吸光度。1.3.6精密度考察精确称取样品粉末约2 g，按照待测样品制备方法制备待测样品溶液，准确吸取待测溶液1.0 ml,按1.3.5项下的方法，在420 nm下测定其吸光度，重复5次，RSD为0.72%，说明仪器的精密度良好。1.3.7稳定性研究在室温下每隔30 min测定供试品溶液，0-4 h内RSD=62.06 %,2-4 h内RSD=1.05%,说明样品需静置2 h以上测定。1.3.8重现性考察将上述溶液平行制备5份待测溶液，测定其吸光度，5次测定的RSD为0.883%，说明方法的重现性好。1.4 总黄酮含量的测定1.4
16、.1 样品提取精密称取材料2 g，用80%乙醇回流提取，固定提取次数为3次，抽滤，合并3次滤液，减压蒸馏，回收乙醇，将提取液用无水乙醇定容于100 ml容量瓶中，摇匀，作为待测原溶液。各取上述待测原溶液5 ml，精密测定，置25 ml容量瓶中，加适量无水乙醇超声溶解，稀释至刻度，摇匀，静置。取上清夜5 ml置蒸发皿中，加入2.0 g聚酰胺粉吸附，于50水浴中挥去乙醇，然后转入层析柱，先用25 ml石油醚洗脱，弃去洗脱液，再用无水乙醇洗脱，收集洗脱液（至盐酸镁粉反应为阴性），置25 ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，作为待测样品溶液。1.4.2 标准曲线的绘制精密称取在120干燥至恒重的芦丁标准品
17、5.0 mg，用无水乙醇溶解，定容至100 ml，得浓度为50 g/ml的标准液。分别精密吸取上述芦丁标准液0.0 ml、0.2 ml、0.4 ml、0.6 ml、0.8 ml、1.0 ml置于10 ml容量瓶中，分别加5%亚硝酸钠0.3 ml，放置6 min，再加10%硝酸铝0.3 ml，放置6 min，加4%氢氧化钠4 ml，加蒸馏水定容至刻度，摇匀，放置15 min后，在分光光度计上于510 nm处测定其吸光度，无水乙醇为空白参比。以吸收度A为纵坐标，浓度C为横坐标，进行回归分析，绘制回归曲线。结果在05 g/ml的范围内，浓度与吸光度有良好的线性关系。得出回归方程：A0.0295C0.
18、0006（C：g/ml），r0.9998。1.4.3 样品总黄酮含量测定精密吸取上述待测样品溶液1.0 ml，分别置10 ml容量瓶中，按照“标准曲线的绘制”项下的方法，在510 nm下测定其吸光度A，按回归方程计算出提取物中的总黄酮含量。2.结果与分析2.1不同产地枸杞总生物碱含量取不同产地经过处理的枸杞果实和叶的样品，按1.3项下操作制备供试溶液，依次测定，计算样品中生物碱的含量，结果见表1.表1 不同产地枸杞果和叶中总生物碱含量（mg/g）枸杞果实mg/g枸杞叶mg/g新疆0.46b0.67a甘肃0.39a0.42b青海0.59c0.86d内蒙古0.31d0.58c宁夏0.52c0.39
19、b 湖北0.40ab0.76d注:表中数字为其平均数, “*”表示不同地区间差异显著（P0.05）, 同一列数据右上角字母不同表示差异显著（P0.05）。 由表1可见，甘肃与新疆、青海、宁夏和内蒙古枸杞果中总生物碱含量存在显著差异；新疆与青海、宁夏枸杞果实中总生物碱含量存在显著差异；青海和宁夏枸杞果实中总生物碱含量无显著差异；青海与内蒙枸杞果实中总生物碱含量有显著差异；甘肃和湖北果实中总生物碱含量无显著差异；新疆与湖北果实中总生物碱含量无显著差异。新疆与甘肃枸杞叶总生物碱含量有显著差异；甘肃与宁夏无显著差异；甘肃与内蒙有显著差异；青海与湖北五显著差异；宁夏与湖北有显著差异。2.2不同产地枸杞总
20、黄酮含量取不同产地经过处理枸杞的果实和叶的样品，按1.4项下操作制备供试溶液，依次测定，计算样品中总黄酮的含量，结果见表2.表2 不同产地枸杞果和叶中总黄酮含量（mg/g）果实叶新疆11.43A10.67A甘肃10.12B10.49A青海11.07A11.83B内蒙古9.87C9.21C宁夏12.39A12.13A湖北10.50D13.91D注:表中数字为其平均数， *表示不同地区间差异达极显著（P0.01）， 同一列数据右上角字母不同表示差异显著（P0.01）。新疆与青海、宁夏枸杞果中总黄酮含量无极显著差异，而与甘肃、内蒙和湖北达极显著差异；甘肃与内蒙达极显著差异；内蒙与湖北达极显著差异。新
21、疆与甘肃、宁夏枸杞叶中总黄酮含量无极显著差异，而与青海达极显著差异；青海与内蒙达极显著差异；内蒙与湖北达极显著差异。结论与讨论本实验结果：甘肃与新疆、青海、宁夏和内蒙古枸杞果中总生物碱含量存在显著差异；新疆与青海、宁夏枸杞果实中总生物碱含量存在显著差异；青海和宁夏枸杞果实中总生物碱含量无显著差异；青海与内蒙枸杞果实中总生物碱含量有显著差异；甘肃和湖北果实中总生物碱含量无显著差异；新疆与湖北果实中总生物碱含量无显著差异。新疆与甘肃枸杞叶总生物碱含量有显著差异；甘肃与宁夏无显著差异；甘肃与内蒙有显著差异；青海与湖北五显著差异；宁夏与湖北有显著差异。新疆与青海、宁夏枸杞果中总黄酮含量无极显著差异，而与甘肃、内蒙和湖北达极显著差异；甘肃与内蒙达极显著差异；内蒙与湖北达极显著差异。新疆与甘肃、宁夏枸杞叶中总黄酮含量无极显著差异，而与青海达极显著差异；青海与内蒙达极显著差异；内蒙与湖北达极显著差异。本实验结果表明，不同地区种的枸杞之间存在差异，有的达极显著水平，有的达显著水平，而地区与地区之间地理环境相差不大的几乎无显著水平，说明总生物碱和总黄酮含量与地理环境有关。参考文献：国家药典委员会中国药典年版一部北京：中国医药科技出版社，：田庚元枸杞子糖缀合物的结构与生物活性研究世界科学技术中医药现代化，（）：孙志刚宁夏枸杞药理研究进展西北药学杂志，（）：，（）： （）：，：， ，：