2020届高三生物人教一轮复习课件：选修1.2微生物的培养与应用.pdf

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1、第2课 微生物的培养与应用 考点一 微生物的实验室培养考点一 微生物的实验室培养 【必备知识回顾】【必备知识回顾】 1.1.培养基：培养基： (1)(1)概念：概念：人们按照微生物对人们按照微生物对_的不同需求，的不同需求， 配制出供其生长繁殖的营养基质。配制出供其生长繁殖的营养基质。 (2)(2)种类：液体培养基和种类：液体培养基和_培养基，二者的区别是培养基，二者的区别是 是否添加是否添加_。 营养物质营养物质 固体固体 凝固剂凝固剂 (3)(3)营养成分：营养成分： 主要营养物质：主要营养物质：_、_、水和无机盐。、水和无机盐。 其他条件：其他条件：pHpH、_和氧气。和氧气。 碳源碳源

2、氮源氮源 特殊营养特殊营养 2.2.无菌技术：无菌技术： (1)(1)目的：获得目的：获得_。 (2)(2)关键：防止关键：防止_的入侵。的入侵。 (3)(3)常用方法：常用方法：_和和_。 纯净的培养物纯净的培养物 外来杂菌外来杂菌 灭菌灭菌消毒消毒 (4)(4)无菌技术的主要方法及适用对象无菌技术的主要方法及适用对象( (连一连连一连) )： 3.3.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基： (1)(1)计算：依据配方比例，计算配制计算：依据配方比例，计算配制100mL100mL的培养基的培养基 时，时，_的用量。的用量。 (2)(2)称量：准确地称取称量：准确地称取_。

3、各种成分各种成分 各种成分各种成分 (3)(3)溶化溶化 牛肉膏连同牛肉膏连同_一同放入烧杯一同放入烧杯 加入少量水，加热加入少量水，加热 牛肉膏溶化后取出称量纸牛肉膏溶化后取出称量纸 加入称量好的加入称量好的_和氯化钠，搅拌和氯化钠，搅拌 加入加入_，加热使其熔化，并不断搅拌，加热使其熔化，并不断搅拌 补加蒸馏水定容补加蒸馏水定容 称量纸称量纸 蛋白胨蛋白胨 琼脂琼脂 (4)(4)灭菌灭菌 灭菌前：调节灭菌前：调节_ 方法：方法：_灭菌法。压力为灭菌法。压力为100 kPa100 kPa， 温度为温度为_ _ ，灭菌时间为，灭菌时间为_min_min pHpH 高压蒸汽高压蒸汽 121121

4、15153030 (5)(5)倒平板：待培养基冷却至倒平板：待培养基冷却至_左右时，在左右时，在_ _倒平板。倒平板。 5050酒精灯酒精灯 火焰附近火焰附近 4.4.纯化大肠杆菌：纯化大肠杆菌： (1)(1)菌落：由菌落：由_繁殖而来的肉眼可见的繁殖而来的肉眼可见的_ 群体。群体。 一个细胞一个细胞子细胞子细胞 (2)(2)主要方法及纯化原理：主要方法及纯化原理： 主要方法主要方法平板划线法平板划线法稀释涂布平板法稀释涂布平板法 纯化原理纯化原理 通过接种环在琼脂固通过接种环在琼脂固 体培养基的表面体培养基的表面_ _操作，将聚集的操作，将聚集的 菌种逐步稀释分散到菌种逐步稀释分散到 培养基

5、表面培养基表面 将菌液进行一系列的将菌液进行一系列的 _，稀释度足，稀释度足 够高时，聚集在一起够高时，聚集在一起 的微生物将被分散成的微生物将被分散成 单个细胞单个细胞 主要步骤主要步骤_操作操作 系列稀释操作和涂布平系列稀释操作和涂布平 板操作板操作 连续连续 划线划线 梯度稀释梯度稀释 平板划线平板划线 主要方法主要方法平板划线法平板划线法稀释涂布平板法稀释涂布平板法 接种工具接种工具接种环接种环_ 平板示平板示 意图意图 涂布器涂布器 (3)(3)平板划线操作中灼烧接种环的目的：平板划线操作中灼烧接种环的目的： 灼烧时间灼烧时间灼烧目的灼烧目的 第一次划第一次划 线前线前 杀死接种环上

6、原有的微生物，防止杀死接种环上原有的微生物，防止_ 污染培养基污染培养基 第二次及第二次及 以后每次以后每次 划线前划线前 杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线 的菌种直接来源于的菌种直接来源于_ 最后一次最后一次 划线后划线后 杀死接种环上残存的菌种，避免细菌杀死接种环上残存的菌种，避免细菌_和和 _ 外来杂菌外来杂菌 上次划线的末端上次划线的末端 污染环境污染环境 感染操作者感染操作者 5.5.菌种的保藏方法：菌种的保藏方法： 主要方法主要方法临时保藏法临时保藏法甘油管藏法甘油管藏法 保藏对象保藏对象频繁使用的菌种频繁使用的菌种_的菌种的

7、菌种 方法步骤方法步骤 先接种到试管的先接种到试管的 _培养基培养基 上培养，然后放入上培养，然后放入 4 4 的冰箱中的冰箱中 转入灭菌后的转入灭菌后的_ 中，混匀后放在中，混匀后放在-20 -20 冷冻箱中保存冷冻箱中保存 长期保藏长期保藏 固体斜面固体斜面 甘油甘油 6.6.【教材易漏知识】【教材易漏知识】选修选修1 1 P18“P18“旁栏小资料旁栏小资料” 微生物的接种方法只有平板划线法和稀释涂布平板法微生物的接种方法只有平板划线法和稀释涂布平板法 吗？微生物接种的核心是什么？吗？微生物接种的核心是什么？ 提示：提示：不是。微生物的接种方法还包括斜面接种、穿不是。微生物的接种方法还包

8、括斜面接种、穿 刺接种等，其核心是防止杂菌污染，保证培养物的纯刺接种等，其核心是防止杂菌污染，保证培养物的纯 度。度。 【特别提醒】【特别提醒】 微生物培养的微生物培养的“三点提醒三点提醒” (1)(1)培养基中营养物质的确定方法。培养基中营养物质的确定方法。 自养型微生物所需的主要营养物质是无机物，碳源自养型微生物所需的主要营养物质是无机物，碳源 可来自大气中的可来自大气中的COCO2 2，氮源可由含氮无机盐提供。，氮源可由含氮无机盐提供。 异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳 源必须由含碳有机物提供，氮源也主要由有机物提供，源必须由含碳有

9、机物提供，氮源也主要由有机物提供， 部分异养型微生物也可以利用无机氮源。部分异养型微生物也可以利用无机氮源。 (2)(2)选择无菌技术的原则。选择无菌技术的原则。 考虑无菌技术的效果：灭菌的效果比消毒要好。考虑无菌技术的效果：灭菌的效果比消毒要好。 考虑操作对象的承受能力：活体生物材料、操作者考虑操作对象的承受能力：活体生物材料、操作者 的手等只能采用消毒，而不能灭菌。的手等只能采用消毒，而不能灭菌。 (3)(3)纯化大肠杆菌的两种方法的异同。纯化大肠杆菌的两种方法的异同。 相同点：平板划线法和稀释涂布平板法都能获得单相同点：平板划线法和稀释涂布平板法都能获得单 细胞菌落。细胞菌落。 不同点：

10、平板划线法不能对微生物计数，而稀释涂不同点：平板划线法不能对微生物计数，而稀释涂 布平板法能对微生物计数。布平板法能对微生物计数。 【核心素养提升】【核心素养提升】 【典例示范】【典例示范】 (2016(2016全国卷全国卷)空气中的微生物在重力等作用下，空气中的微生物在重力等作用下， 可以一定程度地沉降。某研究小组欲用平板收集教室可以一定程度地沉降。某研究小组欲用平板收集教室 空气中的微生物，以了解教室内不同高度空气中微生空气中的微生物，以了解教室内不同高度空气中微生 物的分布情况。实验步骤如下：物的分布情况。实验步骤如下： 配制培养基配制培养基( (成分：牛肉膏、蛋白胨、成分：牛肉膏、蛋白

11、胨、NaClNaCl、X X、 H H2 2O)O)； 制作无菌平板；制作无菌平板； 设置空白对照组和若干实验组，进行相关操作；设置空白对照组和若干实验组，进行相关操作； 将各组平板置于将各组平板置于37 37 恒温箱中培养一段时间，统计恒温箱中培养一段时间，统计 各组平板上菌落的平均数。各组平板上菌落的平均数。 回答下列问题：回答下列问题： (1)(1)该培养基中微生物所需的氮来源于该培养基中微生物所需的氮来源于_。 若要完成步骤若要完成步骤，该培养基中的成分，该培养基中的成分X X通常是通常是_。 (2)(2)步骤步骤中，实验组的操作是中，实验组的操作是_ _。 (3)(3)若在某次调查中

12、，某一实验组平板上菌落平均数为若在某次调查中，某一实验组平板上菌落平均数为 3636个个/ /平板，而空白对照组的一个平板上出现了平板，而空白对照组的一个平板上出现了6 6个菌个菌 落，这种结果说明在此次调查中出现了落，这种结果说明在此次调查中出现了_现象。现象。 若将若将30(30(即即36-6)36-6)个个/ /平板作为本组菌落数的平均值，该平板作为本组菌落数的平均值，该 做法做法_(_(填填“正确正确”或或“不正确不正确”) )。 【素养解读】【素养解读】本题主要考查的核心素养是科学思维和本题主要考查的核心素养是科学思维和 科学探究，具体表现在三个角度：科学探究，具体表现在三个角度：

13、核心素养核心素养素养角度素养角度具体表现具体表现 科学思维科学思维 分析与分析与 综合综合 (1)(1)中分析微生物所需氮的来源、中分析微生物所需氮的来源、 培养基中培养基中X X的成分，的成分，(3)(3)中分析空中分析空 白对照组出现菌落的原因白对照组出现菌落的原因 批判性批判性 思维思维 (3)(3)中对菌落数平均值的计算方法中对菌落数平均值的计算方法 的正误做出判断的正误做出判断 科学探究科学探究设计实验设计实验(2)(2)中实验步骤的完善中实验步骤的完善 【解析】【解析】本题主要考查微生物培养。本题主要考查微生物培养。 (1)(1)微生物的生长需要碳源、氮源等营养物质，培养基微生物的

14、生长需要碳源、氮源等营养物质，培养基 中的牛肉膏、蛋白胨为微生物的生长既提供了碳源，中的牛肉膏、蛋白胨为微生物的生长既提供了碳源， 也提供了氮源。微生物培养通常采用的培养基是固体也提供了氮源。微生物培养通常采用的培养基是固体 培养基，故题中培养基，故题中X X应是琼脂，在培养基中起凝固剂的作应是琼脂，在培养基中起凝固剂的作 用。用。 (2)(2)本实验的目的是了解教室内不同高度空气中微生物本实验的目的是了解教室内不同高度空气中微生物 的分布情况，应选择在不同的高度放置平板，使之暴的分布情况，应选择在不同的高度放置平板，使之暴 露在空气中一段时间，以利于空气中微生物的沉降。露在空气中一段时间，以

15、利于空气中微生物的沉降。 (3)(3)空白对照实验组不应出现菌落。出现了菌落说明在空白对照实验组不应出现菌落。出现了菌落说明在 此次实验中平板被污染。用实验组获取的菌落数的平此次实验中平板被污染。用实验组获取的菌落数的平 均值减去污染产生的菌落数作为实验的结果，这种做均值减去污染产生的菌落数作为实验的结果，这种做 法不正确，应在防止污染的情况下重新实验，以获得法不正确，应在防止污染的情况下重新实验，以获得 较准确的数据。较准确的数据。 答案：答案：(1)(1)牛肉膏、蛋白胨 琼脂牛肉膏、蛋白胨 琼脂 (2)(2)将各实验组平板分别放置在教室不同高度的位置上，将各实验组平板分别放置在教室不同高度

16、的位置上， 开盖暴露一段时间开盖暴露一段时间 (3)(3)污染 不正确污染 不正确 【方法规律】【方法规律】 判断培养基制作与接种操作是否合格的方法 判断培养基制作与接种操作是否合格的方法 (1)(1)从培养基制作是否合格上判断：如果未接种的培养从培养基制作是否合格上判断：如果未接种的培养 基在恒温箱中保温基在恒温箱中保温1 12 d2 d后无菌落生长，说明培养基后无菌落生长，说明培养基 的制备是成功的，否则需要重新制备。的制备是成功的，否则需要重新制备。 (2)(2)从接种操作是否符合无菌要求上判断：从接种操作是否符合无菌要求上判断： 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本如果培养基上

17、生长的菌落的颜色、形状、大小基本 一致，并符合接种菌菌落的特点，说明接种操作是符一致，并符合接种菌菌落的特点，说明接种操作是符 合要求的。合要求的。 如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中， 无菌操作未达到要求，需要分析原因，重新操作。无菌操作未达到要求，需要分析原因，重新操作。 【高考角度全练】【高考角度全练】 角度一角度一 微生物的培养微生物的培养 1.(20171.(2017江苏高考江苏高考) )苯酚及其衍生物广泛存在于工业苯酚及其衍生物广泛存在于工业 废水中，对环境有严重危害。小明同学准备依据下图废水中，对环境有严重危害。小明同学准备

18、依据下图 操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解 高效菌株。请回答下列问题：高效菌株。请回答下列问题： 世纪金榜导学号世纪金榜导学号1412021514120215 (1)(1)酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K K2 2HPOHPO4 4、MgSOMgSO4 4、 苯酚和水，其中可作为碳源的有苯酚和水，其中可作为碳源的有_ _ _。 (2)(2)将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数 增加而逐渐增加而逐渐_，以达到富集酚降解菌，以达到富集酚降解菌 的目的。若上图

19、平板中菌落过于密集，应进一步的目的。若上图平板中菌落过于密集，应进一步 _，以便于菌落计数与分离。制备平板，以便于菌落计数与分离。制备平板 培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加 _。 (3)(3)下图为连续划线法示意图，在图中下图为连续划线法示意图，在图中_(_(填填 图中序号图中序号) )区域更易获得单菌落。区域更易获得单菌落。 (4)(4)采用比色测定法采用比色测定法( (使用苯酚显色剂使用苯酚显色剂) )检测降解后的废检测降解后的废 水中苯酚残留量。先制作系列浓度梯度并进行显色反水中苯酚残留量。先制作系列浓度梯度并进行显色反 应，下表中应，

20、下表中1 15 5 号比色管的苯酚浓度应分别为号比色管的苯酚浓度应分别为 _。 管号管号1 12 23 34 45 56 6 苯酚浓度苯酚浓度(mg/L)(mg/L)1 1 如果废水为如果废水为50 mg/L50 mg/L苯酚溶液，降解后约有苯酚溶液，降解后约有21%21%的苯酚的苯酚 残留，则需将残留液稀释残留，则需将残留液稀释_(_(填序号：填序号：5 5 1010 20)20)倍后，再进行比色。倍后，再进行比色。 【解析】【解析】(1)(1)蛋白胨和苯酚都是含碳有机物，可以为酚蛋白胨和苯酚都是含碳有机物，可以为酚 降解菌提供碳源。降解菌提供碳源。(2)(2)将采集到的样品接种培养，随转将

21、采集到的样品接种培养，随转 接次数增加而逐渐增加苯酚用量可以增大酚降解菌的接次数增加而逐渐增加苯酚用量可以增大酚降解菌的 比例，以达到富集酚降解菌的目的。如果图中平板中比例，以达到富集酚降解菌的目的。如果图中平板中 菌落过于密集，说明培养液中酚降解菌数量过多，需菌落过于密集，说明培养液中酚降解菌数量过多，需 要进一步稀释后再涂布，以便于菌落计数与分离。平要进一步稀释后再涂布，以便于菌落计数与分离。平 板培养基是固体培养基，在配制的时候除了需要水、板培养基是固体培养基，在配制的时候除了需要水、 营养物质外，还必须添加琼脂等凝固剂。营养物质外，还必须添加琼脂等凝固剂。(3)(3)因为每次因为每次

22、划线的菌种都来自上一次划线的末端，所以最后一次划线的菌种都来自上一次划线的末端，所以最后一次 划线结束的时候更容易获得单菌落。划线结束的时候更容易获得单菌落。(4)(4)根据表中根据表中6 6号号 管中苯酚浓度为管中苯酚浓度为1 mg/L1 mg/L，可推知，可推知1 15 5号管中苯酚浓度号管中苯酚浓度 应分别为应分别为0 mg/L0 mg/L、0.2 mg/L0.2 mg/L、0.4 mg/L0.4 mg/L、0.6 mg/L0.6 mg/L、 0.8 mg/L0.8 mg/L。根据题意，废水为。根据题意，废水为50 mg/L50 mg/L苯酚溶液，降解苯酚溶液，降解 后约有后约有21%2

23、1%的苯酚残留，要使稀释后苯酚残留液浓度在的苯酚残留，要使稀释后苯酚残留液浓度在 0 01 mg/L1 mg/L，需将残留液稀释，需将残留液稀释2020倍。倍。 答案：答案：(1)(1)蛋白胨、苯酚 蛋白胨、苯酚 (2)(2)增加 稀释涂布 凝固增加 稀释涂布 凝固 剂剂 (3)(3) (4) 0(4) 0、0.20.2、0.40.4、0.60.6、0.80.8 2.(20132.(2013全国卷全国卷)临床使用抗生素前，有时需要做临床使用抗生素前，有时需要做 细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量 样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定

24、某致病样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病 菌对不同抗生素的敏感性。菌对不同抗生素的敏感性。 回答下列问题：回答下列问题： (1)(1)为了从样本中获取致病菌单菌落，可用为了从样本中获取致病菌单菌落，可用_ 法或法或_法将样本接种于固体培养基法将样本接种于固体培养基 表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。 (2)(2)取该单菌落适当稀释，用取该单菌落适当稀释，用_法接种于固体法接种于固体 培养基表面，在培养基表面，在37 37 培养箱中培养培养箱中培养24 h24 h，使其均匀生，使其均匀生 长，布满平板。长，布满平板。 (3)(3)为了检测该致病菌

25、对于抗生素的敏感性，将分别含为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含 有有A A、B B、C C、D D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上 的不同位置，培养一段时间后，含的不同位置，培养一段时间后，含A A的滤纸片周围出现的滤纸片周围出现 透明圈，说明该致病菌对抗生素透明圈，说明该致病菌对抗生素A_A_； 含含B B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗 生素生素B_B_；含；含C C的滤纸片周围的透明圈比含的滤纸片周围的透明圈比含A A 的小，说明的小，说明_； 含含D D的滤纸片周围的透明圈也比含的滤纸

26、片周围的透明圈也比含A A的小，且透明圈中的小，且透明圈中 出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落 很可能是抗生素很可能是抗生素D D的的_。 (4)(4)根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选用根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选用 抗生素抗生素_。 【解题指南】【解题指南】解答本题注意两个方面：解答本题注意两个方面： (1)(1)分离微生物方法：平板划线法和稀释涂布平板法。分离微生物方法：平板划线法和稀释涂布平板法。 (2)(2)透明圈的大小表示此种抗生素抗菌能力的强弱。透明圈的大小表示此种抗生素抗菌能力的强弱。 【解析】【解

27、析】本题考查微生物接种和抗生素抗菌能力判断。本题考查微生物接种和抗生素抗菌能力判断。 (1)(1)在微生物的培养过程中，常用来分离微生物的方法在微生物的培养过程中，常用来分离微生物的方法 是稀释涂布是稀释涂布( (平板平板) )法或平板划线法。法或平板划线法。 (2)(2)为了使微生物在培养基上能够均匀分布，一般用涂为了使微生物在培养基上能够均匀分布，一般用涂 布法将微生物接种在培养基上。布法将微生物接种在培养基上。 (3)(3)在抗药性检验过程中，如果在抗生素周围出现透明在抗药性检验过程中，如果在抗生素周围出现透明 的圆圈，说明此种抗生素可抑制该细菌生长；透明圈的圆圈，说明此种抗生素可抑制该

28、细菌生长；透明圈 的大小表示此种抗生素抗菌能力的强弱，据此可判断的大小表示此种抗生素抗菌能力的强弱，据此可判断 A A、B B、C C抗菌能力强弱依次是抗菌能力强弱依次是A A、C C、B B；D D的透明圈中出的透明圈中出 现了一个菌落，说明该菌落对此种抗生素具有耐药性。现了一个菌落，说明该菌落对此种抗生素具有耐药性。 (4)(4)实验结果表明抗生素实验结果表明抗生素A A对该致病菌的抗菌效果最好。对该致病菌的抗菌效果最好。 答案：答案：(1)(1)平板划线 稀释涂布平板划线 稀释涂布( (平板平板)()(或涂布或涂布) ) (2)(2)涂布 涂布 (3)(3)敏感 不敏感 该致病菌对敏感

29、不敏感 该致病菌对C C的敏感性比的敏感性比 对对A A的弱 耐药菌 的弱 耐药菌 (4)A(4)A 角度二角度二 无菌技术无菌技术 3.(20183.(2018石家庄模拟石家庄模拟) )牛奶是微生物培养的良好培养牛奶是微生物培养的良好培养 基，牛奶在饮前都要经过巴氏消毒，以杀死有害微生基，牛奶在饮前都要经过巴氏消毒，以杀死有害微生 物，为检测消毒前后牛奶中细菌含量变化情况，做如物，为检测消毒前后牛奶中细菌含量变化情况，做如 图所示操作。用无菌吸管从锥形瓶中吸取图所示操作。用无菌吸管从锥形瓶中吸取1 mL1 mL生牛奶生牛奶 稀释液至盛有稀释液至盛有9 mL9 mL无菌水的试管中，混合均匀，如

30、此无菌水的试管中，混合均匀，如此 再重复再重复2 2次。请回答下列有关问题：次。请回答下列有关问题： (1)(1)巴氏消毒的方法是巴氏消毒的方法是_，使用这种方，使用这种方 法对生鲜牛奶进行消毒的好处是法对生鲜牛奶进行消毒的好处是_。 (2)(2)取最终的牛奶稀释液取最终的牛奶稀释液0.1 mL0.1 mL滴在培养基上进行涂布，滴在培养基上进行涂布， 应选择的涂布工具是应选择的涂布工具是_。 (3)(3)消毒后的牛奶中绝大部分细菌被杀死，若继续用该消毒后的牛奶中绝大部分细菌被杀死，若继续用该 方法检测消毒后的牛奶中细菌的数量，则在操作步骤方法检测消毒后的牛奶中细菌的数量，则在操作步骤 上应做什

31、么改动？上应做什么改动？_。 (4)(4)从生牛奶取样培养得到的菌落中混有各种杂菌，从从生牛奶取样培养得到的菌落中混有各种杂菌，从 中检测出大肠杆菌的方法是在培养基中加入中检测出大肠杆菌的方法是在培养基中加入_， 菌落具有菌落具有_特征的可以认定为大肠杆菌。特征的可以认定为大肠杆菌。 【解析】【解析】(1)(1)采用巴氏消毒法加工牛奶，在采用巴氏消毒法加工牛奶，在707075 75 煮煮30 min 30 min 或或80 80 煮煮15 min15 min进行杀菌，此种方法在杀进行杀菌，此种方法在杀 灭牛奶中有害微生物的同时牛奶的营养成分不被破坏，灭牛奶中有害微生物的同时牛奶的营养成分不被破

32、坏， 完好地保存了营养物质和纯正口感。完好地保存了营养物质和纯正口感。 (2)(2)取最终的牛奶稀释液取最终的牛奶稀释液0.1mL0.1mL滴在培养基上进行涂布，滴在培养基上进行涂布， 应选择涂布器。应选择涂布器。 (3)(3)消毒后的牛奶中绝大部分细菌被杀死，若继续用稀消毒后的牛奶中绝大部分细菌被杀死，若继续用稀 释涂布平板法检测消毒后的牛奶中细菌的数量，则在释涂布平板法检测消毒后的牛奶中细菌的数量，则在 操作步骤上应减少稀释次数。操作步骤上应减少稀释次数。 (4)(4)欲检测大肠杆菌，可在培养基中加入伊红美蓝，大欲检测大肠杆菌，可在培养基中加入伊红美蓝，大 肠杆菌菌落会呈黑色，略带金属光泽

33、。肠杆菌菌落会呈黑色，略带金属光泽。 答案：答案：(1)(1)在在707075 75 煮煮30 min(30 min(在在80 80 煮煮15 min)15 min) 牛奶的营养成分不被破坏牛奶的营养成分不被破坏 (2)(2)涂布器 涂布器 (3)(3)减少稀释次数减少稀释次数 (4)(4)伊红美蓝 伊红美蓝 ( (金属光泽的紫金属光泽的紫) )黑色黑色 【加固训练】【加固训练】 1.(20181.(2018揭阳模拟揭阳模拟) )炭疽杆菌能引起人畜患炭疽病。炭疽杆菌能引起人畜患炭疽病。 炭疽杆菌两端截平、呈竹节状排列，菌落呈卷发状。炭疽杆菌两端截平、呈竹节状排列，菌落呈卷发状。 对炭疽病疑似患

34、者，可根据噬菌体的寄主专一性，通对炭疽病疑似患者，可根据噬菌体的寄主专一性，通 过实验进行确诊。过实验进行确诊。 细菌培养：采集疑似患者的样本，分离培养，获得细菌培养：采集疑似患者的样本，分离培养，获得 可疑菌落。可疑菌落。 细菌鉴定：实验流程图如图所示。细菌鉴定：实验流程图如图所示。 (1)(1)对配制的液体培养基要采用对配制的液体培养基要采用_法灭菌。培养法灭菌。培养 基配制和灭菌时，灭菌与调节基配制和灭菌时，灭菌与调节pHpH的先后顺序是的先后顺序是_ _ _。 (2)(2)挑选可疑菌落制片后，用挑选可疑菌落制片后，用_观察，可看到呈观察，可看到呈 竹节状排列的炭疽杆菌。竹节状排列的炭疽

35、杆菌。 (3)(3)接种可疑菌后，接种可疑菌后，3535培养培养2424小时，液体培养基变浑小时，液体培养基变浑 浊，原因是浊，原因是_。图中的对照组试管中应。图中的对照组试管中应 加入加入_。两组试管同时培养。两组试管同时培养6 6小时后，进小时后，进 行比较，若实验组液体培养基的浑浊度行比较，若实验组液体培养基的浑浊度_(_(填填 “提高提高”“”“降低降低”或或“不变不变”) )，则可明确炭疽病疑似，则可明确炭疽病疑似 患者被炭疽杆菌感染。此实验依据的原理是患者被炭疽杆菌感染。此实验依据的原理是_ _。 【解析】【解析】(1)(1)培养基一般采用高压蒸汽灭菌法灭菌。在培养基一般采用高压蒸

36、汽灭菌法灭菌。在 配制培养基时，需要先调节配制培养基时，需要先调节pHpH，后灭菌。，后灭菌。 (2)(2)菌落可以通过肉眼观察，而单个细菌无法通过肉眼菌落可以通过肉眼观察，而单个细菌无法通过肉眼 观察，需要借助显微镜观察。观察，需要借助显微镜观察。 (3)(3)接种可疑菌后，接种可疑菌后，3535培养培养2424小时，液体培养基变浑小时，液体培养基变浑 浊，原因是细菌大量繁殖；对照组试管中应加入等量浊，原因是细菌大量繁殖；对照组试管中应加入等量 的生理盐水，与实验组同时培养的生理盐水，与实验组同时培养6 6小时后，若实验组液小时后，若实验组液 体培养基的浑浊度比对照组低，则可明确炭疽病疑似体

37、培养基的浑浊度比对照组低，则可明确炭疽病疑似 患者被炭疽杆菌感染。噬菌体的宿主具有专一性，实患者被炭疽杆菌感染。噬菌体的宿主具有专一性，实 验组加入的噬菌体会侵染炭疽杆菌，使炭疽杆菌裂解，验组加入的噬菌体会侵染炭疽杆菌，使炭疽杆菌裂解， 细菌数量减少，溶液浑浊度降低。细菌数量减少，溶液浑浊度降低。 答案：答案：(1)(1)高压蒸汽灭菌 先调节高压蒸汽灭菌 先调节pHpH，后灭菌，后灭菌 (2)(2)显微镜显微镜 (3)(3)细菌大量繁殖 等量生理盐水 降低细菌大量繁殖 等量生理盐水 降低 实验组中的噬菌体能特异性地侵染炭疽杆菌，使其死实验组中的噬菌体能特异性地侵染炭疽杆菌，使其死 亡，溶液变澄

38、清亡，溶液变澄清 2.(20182.(2018临川模拟临川模拟) )牛奶中富含蛋白质，长期饮用有牛奶中富含蛋白质，长期饮用有 助于增强体质，但牛奶同时也是多种疾病的传播载体。助于增强体质，但牛奶同时也是多种疾病的传播载体。 以下是牛奶消毒及细菌检测实验。分析回答：以下是牛奶消毒及细菌检测实验。分析回答： (1)(1)图中步骤图中步骤称为称为_消毒法。步骤消毒法。步骤是是 _。 (2)(2)培养基中的蛋白胨可以为微生物提供培养基中的蛋白胨可以为微生物提供_。 进行步骤进行步骤操作时，应选用下列哪种工具？操作时，应选用下列哪种工具？ _。为了避免杂菌污染，此步骤应在。为了避免杂菌污染，此步骤应在

39、_附近进行。附近进行。 (3)(3)为了判断牛肉膏蛋白胨培养基制作是否合格，应为了判断牛肉膏蛋白胨培养基制作是否合格，应 该该_。 【解析】【解析】(1)(1)题图中步骤题图中步骤对牛奶进行消毒采用了对牛奶进行消毒采用了 80 80 、15 min 15 min 恒温水浴加热，这种消毒法称为巴恒温水浴加热，这种消毒法称为巴 氏消毒法。根据题图提供的信息可知，步骤氏消毒法。根据题图提供的信息可知，步骤是系是系 列稀释或梯度稀释。列稀释或梯度稀释。 (2)(2)微生物的营养物质主要有碳源、氮源、水和无机微生物的营养物质主要有碳源、氮源、水和无机 盐等，有的微生物还需要特殊的营养物质，如生长因盐等，

40、有的微生物还需要特殊的营养物质，如生长因 子和维生素等，蛋白胨主要为微生物提供碳源、氮源子和维生素等，蛋白胨主要为微生物提供碳源、氮源 和维生素。进行步骤和维生素。进行步骤操作后需培养计数，因此该接操作后需培养计数，因此该接 种操作的方法是稀释涂布平板法，应选用种操作的方法是稀释涂布平板法，应选用B(B(涂布器涂布器) )作作 为接种工具。为了避免杂菌污染，步骤为接种工具。为了避免杂菌污染，步骤应在酒精灯应在酒精灯 火焰附近进行。火焰附近进行。 (3)(3)为了判断牛肉膏蛋白胨培养基制作是否合格，应该为了判断牛肉膏蛋白胨培养基制作是否合格，应该 将一个未接种的培养基作为对照组，与接种后的培养将

41、一个未接种的培养基作为对照组，与接种后的培养 基共同培养。基共同培养。 答案：答案：(1)(1)巴氏 梯度稀释巴氏 梯度稀释 (2)(2)碳源、氮源和维生素 碳源、氮源和维生素 B B 酒精灯火焰 酒精灯火焰 (3)(3)将一个未接种的培养基与接种后的培养基共同培将一个未接种的培养基与接种后的培养基共同培 养养 考点二 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数考点二 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 【必备知识回顾】【必备知识回顾】 1.1.筛选菌株：筛选菌株： (1)(1)寻找目的菌株的方法：根据寻找目的菌株的方法：根据它对它对_的的要求，要求， 到相应的环境中去寻找。到相应的环境中去寻找。 生存环

42、境生存环境 (2)(2)实验室中微生物的筛选：实验室中微生物的筛选： 方法：方法：_有利于目的菌株生长的条件，同时有利于目的菌株生长的条件，同时 抑制或阻止其他微生物生长。抑制或阻止其他微生物生长。 实例：筛选尿素分解菌时使用以实例：筛选尿素分解菌时使用以_为唯一氮源的为唯一氮源的 _培养基进行培养。培养基进行培养。 人为提供人为提供 尿素尿素 选择选择 (3)(3)选择培养基：在微生物学中，将允许选择培养基：在微生物学中，将允许_的的 微生物生长，同时微生物生长，同时_其他种类微生物生长其他种类微生物生长 的培养基。的培养基。 特定种类特定种类 抑制或阻止抑制或阻止 2.2.统计菌落数目：统

43、计菌落数目： 比较比较 项目项目 间接计数法间接计数法 ( (稀释涂布平板法稀释涂布平板法) ) 直接计数法直接计数法 ( (显微计数法显微计数法) ) 原理原理 样品的稀释度足够高时，培养样品的稀释度足够高时，培养 基表面生长的一个菌落，来源基表面生长的一个菌落，来源 于样品稀释液中的于样品稀释液中的_活菌，活菌， 通过统计平板上的菌落数，就通过统计平板上的菌落数，就 能推测出样品中大约含有多少能推测出样品中大约含有多少 活菌活菌 利用特定利用特定_ 或或_，在，在 显微镜下计算一定容显微镜下计算一定容 积的样品中微生物的积的样品中微生物的 数量数量 一个一个 细菌计数板细菌计数板 血细胞计数板血细胞计数板 比较比较 项目项目 间接计