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1、1 透析袋处理及透析操作 透析只需要使用专用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状，将生 物大分子样品溶液置入袋内， 将此透析袋浸入水或缓冲液中， 样品溶液中的大分 子量的生物大分子被截留在袋内，而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外，直到 袋内外两边的浓度达到平衡为止。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保 留液“，袋（膜）外的溶液称为 “渗出液“或“ 透析液 “。透析的动力是扩散压，扩 散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度， 正比于欲 透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度，还正比于膜的面积和温度， 通常是 4透析，升高温度可加快透析速度。 透析膜可用动物膜和玻璃纸
2、等，但用的最多的还是用纤维素制成的透析膜， 目前常用的是美国Union Carbide （联合碳化物公司）和美国光谱医学公司生 产的各种尺寸的透析管，截留分子量MwCO （即留在透析袋内的生物大分子的 最小分子量，缩写为MwCO ）通常为 1 万左右。商品透析袋制成管状，其扁平 宽度为 23 mm 50 mm不等。为防干裂，出厂时都用10 的甘油处理过， 并含有极微量的硫化物 (0.1%)、重金属和一些具有紫外吸收的杂质，它们对蛋 白质和其它生物活性物质有害，用前必须除去。 透析袋的处理：可先用50 乙醇煮沸 1 小时，再依次用 50 乙醇、 0.01 mol/L碳酸氢钠和 0.001 mol
3、/L EDTA溶液洗涤，最后用蒸馏水冲洗即可使用。 实验证明， 50 乙醇处理对除去具有紫外吸收的杂质特别有效。（也可先在大 体积的 2%(W/V)碳酸氢钠和 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将透析袋煮沸 10 分 钟，用蒸馏水彻底清洗后，再放在1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将之煮沸 10 分 钟。）使用后的透析袋洗净后可存于4蒸馏水中，确保透析袋始终浸没在溶液 内。若长时间不用，可加少量NaN2 ，以防长菌。从此时起取用透析袋必须戴手 套。洗净凉干的透析袋弯折时易裂口， 用时必须仔细检查， 不漏时方可重复使用。 新透析袋如不作如上的特殊处理，则可用沸水煮五至十分钟，再用
4、蒸馏水洗 净，即可使用。使用时，一端用橡皮筋或线绳扎紧，也可以使用特制的透析袋夹 夹紧，由另一端灌满水，用手指稍加压，检查不漏，方可装入待透析液，通常要 留三分之一至一半的空间， 以防透析过程中， 透析的小分子量较大时， 袋外的水 和缓冲液过量进入袋内将袋涨破。含盐量很高的蛋白质溶液透析过夜时，体积增 加 50 是正常的。为了加快透析速度，除多次更换透析液外，还可使用磁子搅 拌。透析的容器要大一些，可以使用大烧杯、大量筒和塑料桶。小量体积溶液的 透析，可在袋内放一截两头烧园的玻璃棒或两端封口的玻璃管，以使透析袋沉入 液面以下。 检查透析效果的方法是：用1 BaCl2 检查(NH4)2SO4，用
5、 1 AgNO3 检查 NaCl 、KCl 等。 2 透析袋预处理方法 （1）将透析管剪成适当长度，10-20cm的小段，即形成透析袋 （2）在大体积 2（m/V ）碳酸氢钠和 1mmol/LEDTA（PH8.0 ）中将 透析袋煮沸 10min （3）将透析袋用蒸馏水彻底漂洗 （4）将透析袋置 1mmol/LEDTA（PH8.0 ）中煮沸 10min （5）将透析袋冷却， 存放于 4 摄氏度，应确保透析袋始终浸没在液体中。 重要：从此步起用透析袋时一定要带手套操作 （6）在使用前要用蒸馏水将透析袋里外加以清洗。 用过的透析袋保存前需要怎么处理？ 用生理盐水浸泡以去掉蛋白，并用蒸馏水清洗干净，然后置50 乙 醇中保存即可； 用完以后 ,要彻底洗干净 ,透析袋也可以保存在0.1% 叠氮钠（可防止 微生物生长）里； 0.05%-0.1%叠氮钠，或者 1mM EDTA ，或者 50 甘油中 4 度保 存，公司的人建议前两种保存比较好！ 3