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1、单核巨噬细胞吞噬功能测定单核巨噬细胞在机体免疫反应中起着重要作用，因此，检测单核巨噬细胞功能对于了解机体的免疫功能状态具有重要意义。小鼠巨噬细胞吞噬功能试验（体外法）1、原理巨噬细胞具有吞噬异物的功能，将巨噬细胞与被吞噬物(鸡红细胞、白色念珠菌、白色葡萄球菌等)共同温育，染色，在油镜下计数吞噬异物的巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数，以此判断巨噬细胞的吞噬功能，从而评价机体的免疫状态。2、方法 (1)小鼠巨噬细胞制备 实验前三天每只小鼠腹腔注射1可溶性淀粉1 ml。实验时眼球放血、断椎处死小鼠，碘酒、洒精消毒皮肤，剪开腹部皮肤，暴露腹膜，用镊子夹起腹膜剪开一小口(注意避开血管)用生理盐水(或164
2、0)灌注腹腔，收集腹腔液于试管中(约4 ml)，1500 r/min，离心10 min，去上清，沉积细胞用生理盐水(或1640)洗二次，离心转速、时间同上。最后沉积细胞用含10小牛血清1640配成适当浓度备用(12106ml)。 (2)被吞噬物的制备 1）鸡红细胞制备 从鸡翼下抽取静脉血，加入5倍量Alsever液(2.05 g葡萄糖，0.42 g NaCl，0.8 g枸橼酸钠5H2O、0.55 g枸椽酸，加双蒸水到100 ml，加热溶解后过滤分装，8磅高压灭菌，4保存)，置4可以保存1个月。用前取适量鸡红细胞悬液，用PBS洗涤二次后配成1的浓度备用。 2）白色念珠菌制备 将白色念珠菌接种于沙
3、氏平皿培养基中，培养48小时，收集菌，用适量生理盐水配成悬液，100，煮沸30 min灭活，离心去掉上清，再用1美兰染色30 min，用生理盐水洗涤二次，用生理盐水配成1108ml菌悬液，4冰箱保存备用。 3、操作 取巨噬细胞0.5 ml加1鸡红细胞或ll08ml白色念珠菌悬液0.5ml，置37温育30min。取2滴混合液置玻片上加盖玻片，在高倍镜下观察计数，或离心1000rmin,10min，取细胞沉淀混悬液制成涂片，甲醇固定，姬姆萨染色、油镜观察计数。吞噬率=(吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/100个巨噬细胞)100吞噬指数=100个巨噬细胞中吞噬鸡红细胞总数/100个巨噬细胞 *(吞噬指数式中
4、巨噬细胞为阳性吞噬细胞)（三）小鼠巨噬细胞吞噬功能试验（体内法） 原理 巨噬细胞具有吞噬大颗粒异物的特性，通常选用鸡红细胞作为吞噬颗粒，将其注入小鼠腹腔中，腹腔中巨噬细胞则将鸡红细胞吞入。取小鼠腹腔液涂片、染色后可见鸡红细胞被吞噬的现象，计数100个吞噬细胞中吞噬鸡红细胞的细胞数可判断其吞噬功能。 材料 11鸡红细胞悬液。 2小白鼠。 36可溶性淀粉肉汤 肉汤培养液100 m1加入可溶性淀粉6 g，混匀后煮沸灭菌 4瑞氏染液。 5解剖小器械一套、无菌注射器、显微镜等。 方法 1试验前3天，于小白鼠腹腔内注射6可溶性淀粉肉汤1 ml。 2试验当天于每只小鼠腹腔内注射0.5 ml 1鸡红细胞悬液，并轻揉腹部。 3. 注射后30 min，将小鼠处死、取腹腔液涂片并行瑞氏染色。 4油镜观察涂片。 结果观察 镜下可见吞噬细胞细胞核呈蓝色，被吞噬的鸡红细胞胞浆呈红色，而核则染成蓝色(鸡红细胞有细胞核)。计数100个吞噬细胞，并计算吞噬阳性细胞的百分率。 注意事项 1小白鼠腹腔注射时注意不要刺伤内脏。 2如小鼠腹腔液过少时，可注入适量的生理盐水。 3被吞噬的鸡红细胞时间过长可被消化，时间过短则尚未被吞噬，因此须掌握好时间。