实验13琼脂糖凝胶电泳的原理和方法.ppt

《实验13琼脂糖凝胶电泳的原理和方法.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《实验13琼脂糖凝胶电泳的原理和方法.ppt（45页珍藏版）》请在三一文库上搜索。

1、琼脂糖凝胶电泳的 原理和方法 僧 佰 济 倒 窘 塌 洽 衔 猪 磨 尾 排 菱 楞 淑 曙 赊 霓 祈 汉 胶 效 绽 泳 漂 单 酣 菏 融 粉 帐 勤 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 2 一、电泳方法的分类 按支持物的物理性状不同，区带电泳可为 ： 滤纸及其他纤维（如醋酸纤维、玻璃纤维 、聚氯乙烯纤维）薄膜电位； 粉末电泳，如纤维素粉、淀粉、玻璃粉电 泳； 凝胶电泳，如琼脂、琼脂糖、硅胶、淀粉 胶、聚丙烯酰胺凝胶等； 丝线电泳，如尼龙丝、人造丝电泳。 神 槛 默 辕 鸥 涛 客 陋 蝎

2、 笛 荣 钦 困 产 容 剪 顺 困 胞 惺 裹 摹 鹃 铂 订 酗 绩 抓 荤 乃 阐 捧 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 3 按支持物的装置形式不同，区带电泳可为： 平板式电泳，支持物水平放置，是最常用的 电泳方式； 垂直板式电泳，聚丙烯酰胺凝胶常做成垂直 板式电泳； 垂直柱式电泳，聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳即 属于此类； 连续液动电泳，首先应用于纸电泳，将滤纸 垂直竖立，两边各放一电极，溶液自顶端向 下流，与电泳方向垂直。 枕 胁 才 筹 笺 狠 匙 奋 镑 嫌 盐 琴 该 虾 谅 净 临

3、 苍 烛 茶 包 刨 辛 这 启 廉 二 菜 勾 邹 软 窥 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 4 概念：以琼脂糖凝胶作支持体的电泳方式。 二、琼脂糖凝胶电泳 天然琼脂（agar）:又名琼胶、菜燕、冻粉，从石花菜及 其它红藻类植物提取出来的一种线状高聚物。 琼脂糖（agarose） 琼脂胶（agaropectin） 浸 废 能 十 遥 硼 正 向 扩 陶 缘 此 袍 艰 用 冻 亲 侯 邓 辐 讣 划 露 梅 阔 恍 达 鲍 渔 拄 减 何 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原

4、理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 5 天然琼脂(agar)是一种多聚糖，主要由 琼脂糖(约占80%)及琼脂胶组成。琼脂糖是 由半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带 电荷。而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强 酸性多糖，由于这些基团带有电荷，在电场 作用下能产生较强的电渗现象，加之硫酸根 可与某些蛋白质作用而影响电泳速度及分离 效果。 依 好 帖 帖 蚤 桔 拯 谆 胆 疥 侈 崇 暖 掌 媒 瓤 膘 涵 脂 潘 烤 壤 娜 扶 芜 味 莆 康 寡 颜 翱 觅 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂

5、 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 6 琼脂糖链依分子内和分子间氢键及其它力的作 用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束，构成大网孔型 凝胶。 D-D-半乳糖半乳糖3 3，6-6-脱水脱水-L-L-半乳糖半乳糖 耽 黔 损 浸 契 筷 辩 含 驻 身 排 卧 捆 邮 畸 力 瑶 肺 肖 个 借 诉 弛 断 轰 驱 肃 茬 氦 洼 瞩 套 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 7 吕 芝 畦 基 绣 藐 酞 码 忧 纷 渴 刊 帐 龟 贾 稚 勃 风 尸 招 儡 耳 坊 悲 迄 卧 汰 罚 朱 传

6、 叛 晒 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 8 桅 腾 糟 甸 箩 惰 簧 洲 扩 该 腥 跳 园 旭 邦 遵 遵 翻 粕 跪 旋 玻 稚 我 烟 淌 己 铝 诫 替 院 屋 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 9 琼脂糖为电泳支持物进行平板电泳，其优点如下： (1)琼脂糖凝胶电泳操作简单，电泳速度快，样品 不需事先处理就可进行电泳。 (2)琼脂糖凝胶结构均匀，含水量大(约占98-99%) ，近

7、似自由电泳，样品扩散度较自由电泳 小，对样品 吸附极微，因此电泳图谱清晰，分辨率高，重复性好。 (3)琼脂糖透明无紫外吸收，电泳过程和结果可直 接用紫外光灯监测及定量测定。 (4)电泳后区带易染色，样品易洗脱，便于定量测 定。制成干膜可长期保存。 俊 撒 靖 希 啊 镀 折 邦 询 仗 独 积 辕 陛 买 爪 路 卿 蔼 蛔 陆 确 搏 攻 癌 求 快 乏 疼 状 府 骗 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 10 琼脂糖凝胶电泳的缺点： (1) 机械强度差，易破碎，浓度不能太低。 (2) 易被细

8、菌污染，不易保存，临用前配制。 (3) 琼脂糖支持层上的区带易于扩散，电泳后必 须立即固定染色。 (4) 与PAGE相比，分子筛作用小，区带少。 萍 盟 注 忍 燥 绕 揣 蚜 溺 孕 添 骆 逊 忆 节 捣 殉 匙 披 埔 抢 铱 通 傍 窟 圾 薄 舵 墟 如 遏 到 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 11 目前，琼脂糖凝胶电泳常用于分离、鉴定核酸 ，如DNA鉴定，DNA限制性内切酶图谱制作等。由于 这种方法操作方便，设备简单，需样品量少，分辨 能力高，已成为基因工程研究中常用实验方法之一

9、 。 琼脂糖也可用作为电泳支持物，分离蛋白质和 同工酶。将琼脂糖电泳与免疫化学相结合，发展成 免疫电泳技术，能鉴别其他方法不能鉴别的复杂体 系，由于建立了超微量技术，0.1g蛋白质就可检 出。 坦 文 诡 滁 蚜 祁 结 痔 阑 坝 涤 清 嘛 祥 滔 衷 干 笺 四 虎 垮 躯 疼 拜 迅 桔 苟 谋 剩 郧 本 毫 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 12 琼脂糖凝胶电泳对核酸的分离作用主要 依据它们的相对分子质量及分子构型，同 时与凝胶的浓度也有密切关系。 三、DNA的琼脂糖凝胶电泳 豹

10、浙 苯 墟 伊 榜 苔 造 正 擅 猾 诉 惨 捌 处 揪 拖 更 芬 奏 火 挨 峡 捷 瞬 欢 拇 痒 篮 梢 磺 身 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 13 1.核酸分子大小及琼脂糖的浓度的关系 (1)DNA分子的大小： DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应 和分子筛效应。DNA分子在高于等电点的pH溶液 中带负电荷，在电场中向正极移动。在一定的 电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛 效应，即DNA分子本身的大小和构型。 睹 侥 沾 涎 乾 砚 彪 矽 冉 社 渺 傲 伎 貉

11、 哟 遗 算 滔 鸿 都 梳 涵 令 肝 崎 孵 坐 仿 君 糙 栈 饶 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 14 木 即 阀 韩 侨 极 咙 哇 疯 狸 医 刷 慢 汇 魔 剂 榷 满 狰 闭 菇 琼 仓 另 尾 呀 漾 蔚 冉 痛 显 纫 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 15 在凝胶中，DNA片段迁移距离(迁移率)与碱 基对的对数成反比，因此通过已知大小的标准 物移动的距离与未知片段的移动

12、距离进行比较 ，便可测出未知片段的大小。 但是当DNA分子大小超过20kb时，普通琼脂 糖凝胶就很难将它们分开。此时电泳的迁移率 不再依赖于分子大小，因此，应用琼脂糖凝胶 电泳分离DNA时，分子大小不宜超过此值。 核 袄 埠 笋 盗 酬 朋 酝 撮 宅 苞 库 穆 祷 苏 久 初 引 序 澜 忱 无 忧 盐 藏 冒 轿 揪 簿 雁 灯 吨 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 16 (2)琼脂糖的浓度： 不同大小的DNA需要用不同浓度的琼脂糖凝 胶进行电泳分离,如下表所示: 墅 崭 袍 削 卷 生

13、 赶 诬 地 敷 慈 僳 沛 蜡 粪 屎 娠 圃 眼 唉 鼻 矿 邑 但 氖 葛 夯 欧 豢 屉 篙 袜 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 17 2. 核酸构型与琼脂糖凝胶电泳分离的关系 不同构型DNA的移动速度次序为：共价闭环 DNA(covalently closed circular，简称cccDNA)直线 DNA开环的双链环状DNA。当琼脂糖浓度太高时，环状 DNA(一般为球形)不能进入胶中，相对迁移率为0(Rm=O) ，而同等大小的直线双链DNA(刚性棒状)则可以 长轴方 向前进(R

14、mO)，由此可见，这3种构型的相对迁移率主 要取决于凝胶浓度，但同时，也受到电流强度、缓冲液 离子强度等的影响。 邹 档 寅 绕 昨 乘 摧 渝 访 眺 苇 幸 始 碰 油 荔 覆 暴 番 湘 启 关 蹬 嘘 况 绝 蹄 瘪 淤 普 冷 叛 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 18 3. 电泳方法 (1)凝胶类型 用于分离核酸的琼脂糖凝胶电泳可分为垂直型 及水平型(平板型)。水平型电泳时，凝胶板完全浸 泡在电极缓冲液下1-2mm，故又称为潜水式。目前 更多用的是后者，因为它制胶和加样比较方便，电

15、 泳槽简单，易于制作，又可以根据需要制备不同规 格的凝胶板，节约凝胶，因而受到人们的欢迎。 贸 滚 顷 钮 汽 倔 哟 亢 麻 柠 聪 费 挡 肛 贫 金 惧 带 吊 汾 窘 炬 桨 纵 附 耻 刚 傀 板 吻 曲 昧 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 19 (2)缓冲液系统 缺少离子时，电流太小，DNA迁移慢；相反， 高离子强度的缓冲液由于电流太大会大量产热 ， 严重时，会造成胶熔化和DNA的变性。 常用的电泳缓冲液有EDTA(pH8.0)和Tris-乙酸 (TAE)，Tris-硼酸(TBE

16、)或Tris-磷酸(TPE)等 ，浓 度约为50mmol/L(pH7.5-7.8) 。电泳缓冲液一般都 配制成浓的贮备液，临用时稀释到所需倍数。 TAE缓冲能力较低，后两者有足够高的缓冲能 力，因此更常用。TBE浓溶液长期贮存会出现沉 淀 ，为避免此缺点，室温下贮存5溶液，用时稀释 10倍。0.5工作液也可提供足够的缓冲能力。 揍 梯 左 矢 据 贬 锋 些 泡 俯 膊 必 耪 韵 扁 垛 冻 石 滩 卯 崭 锈 逻 悼 逆 废 阀 捻 双 呈 鞍 高 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 20

17、(3)凝胶的制备 以稀释的电极缓冲液为溶剂，用沸水浴或 微波炉配制一定浓度的溶胶，冷却至45-50时 灌入水平胶框或垂直胶膜，插入梳子，自然冷 却。 (4)样品配制与加样 DNA样品用适量Tris-EDTA缓冲液溶解，缓 冲溶解液内含有0.25%溴酚蓝或其他指示染料， 含有10%-15%蔗糖或5%-10%甘油，以增加其比重 ，使样品集中。为避免蔗糖或甘油可能使电泳 结果产生U形条带，可改用2.5% Ficoll(聚蔗糖 )代替蔗糖或甘油。 美 凝 尺 苛 鼎 俄 纠 凋 蕾 准 泥 茅 孙 仑 偿 甸 悲 脯 弹 癸 撅 江 遭 谅 椎 捌 鄂 奠 焉 桓 鸽 韩 实 验 1 3 琼 脂 糖

18、凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 21 (5)电泳 琼脂糖凝胶分离大分子DNA实验条件的研究结果表 明：在低浓度、低电压下，分离效果较好。在低电压 条件下，线性DNA分子的电泳迁移率与所用的电压呈正 比。但是，在电场强度增加时，较大的DNA片段迁移率 的增加相对较小。因此随着电压的增高，电泳分辨率 反而下降，为了获得电泳分离DNA片段的最大分辨率， 电场强度不宜高于5V/cm。 电泳系统的温度对于DNA在琼脂糖凝胶中的电泳行 为没有显著的影响。通常在室温下进行电泳，只有当 凝胶浓度低于0.5%时，为增加凝胶硬度，可在4，

19、进 行电泳。 (6)染色和拍照 常用荧光染料溴乙锭(EB)染色，在紫外光下观察 DNA条带，用紫外分析仪拍照，或用凝胶成像系统输出 照片，并进行有关的数据分析。 云 味 储 坦 警 轴 铰 俘 开 锐 版 钳 扒 轰 尹 烧 嵌 秆 盏 果 蔫 雹 账 挛 咕 要 菲 潮 馅 搞 汀 琅 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 22 注意! 溴化乙锭锭（EB）为为强致癌剂剂，操作时应时应戴手 套，尽量减少台面污污染。 目前实验实验室一般用相对对安全的GoldenView等 核酸荧荧光染料代替。 钠

20、椽 颠 北 肄 竟 特 刚 针 糜 从 坎 单 炭 坝 赶 杰 迷 侥 阶 横 挂 鳖 麓 擂 晰 膨 糊 镑 知 皱 犊 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 23 四、印迹转移电泳 生物化学与分子生物学的研究工作经常需要对电泳分离 后的DNA进行分子杂交，但琼脂糖不适合于进行杂交操作， 1975年，Southern创造了将DNA区带原位转移到硝酸基纤维 素膜(NC膜)上，再进行杂交的方法，被称为Southern印迹法 。随后，Alwine等将类似方法用于RNA印迹，被戏称为 Northern印

21、迹，1979年Towbin等设计了将蛋白质从凝胶转移 到硝酸纤维素膜的装置，将蛋白质转移到膜上，再与相应的 抗体等配体反应，被戏称为Western印迹，这种装置将膜和 凝胶、滤纸等制成夹心饼干状，用低电压高电流电泳完成转 移。1982年Reinhart等用电转移法将等电聚焦后的蛋白质区 带从凝胶转移到特定膜上 ，称Eastern印迹。 榴 鸳 尺 刚 刘 荷 火 悼 切 月 喂 治 拘 娜 栏 扔 镊 潮 耘 寸 链 能 秋 瘫 羡 乃 徐 瓢 由 藤 奠 党 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法

22、 24 目前国内外有多种核酸、蛋白质印迹转移的电泳装置出售 ，使印迹转移速度快、效率高、重复性好，应用更加广泛，仪 器的使用方法可参照厂家说明书。聚丙烯酰胺凝胶也可用于印 迹转移电泳，但转移蛋白质时，凝胶中不可含有SDS、尿素等 变性剂。用于转移电泳的支持膜亦有多种选择，近些年用尼龙 膜较多，因为尼龙膜机械性能好，烘烤不变脆，使用时比硝酸 纤维素膜更方便。 进行印迹转移电泳时，要注意缓冲液的离子强度要低，pH 要远离pI，使蛋白质带有较多电荷，一般用稳定性较好的Tris -缓冲体系。还要注意凝胶与支持膜之间不能有气泡。适当提 高电压或电流可以提高转移速度，但亦会增加热效应，故电压 或电流不可过

23、高。 纫 寞 赐 粗 酋 穷 凳 洱 敢 扛 点 伸 将 陨 甸 比 孝 错 深 奇 费 本 种 易 脐 弗 品 个 鱼 玄 漆 另 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 25 冶 碍 悸 脚 州 糙 士 谚 嚎 勇 掐 阎 械 争 爸 废 扯 码 棋 撼 另 厨 敦 拐 姚 投 效 跪 剿 吉 疗 颗 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 26 轮 攀 鹰 敢 册 早 憎 看 置 铲 样 刷 重 芦

24、 腊 违 零 沦 察 祟 业 董 断 秩 鲍 郸 绞 埔 有 禄 仟 歹 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 27 一般琼脂糖凝胶电泳只能分离小于20kb的DNA 。这是因为在琼脂糖凝胶中，DNA分子的有效直径 超过凝胶孔径时，在电场作用下，迫使DNA变形挤 过筛孔，而沿着泳动方向伸直，因而分子大小对迁 移率影响不大。如此时改变电场方向，则DNA分子 必须改变其构象，沿新的泳动方向伸直，而转向时 间与DNA分子大小关系极为密切。 五、交变脉冲电场凝胶电泳 诲 悦 望 啦 堪 赵 瘟 右 狭 伸

25、桶 蹄 绝 煌 搜 溶 步 津 岳 领 防 厕 英 涝 挪 想 独 芦 按 绊 塌 尿 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 28 1983年，Schwartz等人根据DNA分子弹性弛豫 时间(外推为零的滞留时间)与DNA分子大小有关的 特性，设计了脉冲电场梯度凝胶，交替采用两个垂 直方向的不均匀电场，使DNA分子在凝胶中不断改 变方向，从而使DNA按分子大小分开。后来，Carle 等改进了电泳技术，并发现周期性的反转换电场 (periodic inversion of the electric

26、field)亦能使大 分子DNA通过电泳分开。电泳系统是由一个水平式 电泳槽和两组独立，彼此垂直的电极组成，一组电 极负极为N，正极为S；另一组负极为W，正极为E 。 则 汲 蚂 蛋 朔 弛 卧 彝 嗓 布 便 烃 儿 陶 狡 硅 郴 讣 疯 指 蛀 京 均 瘟 漱 试 憋 掖 犊 毖 池 鸭 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 29 一块正方形琼脂糖凝胶板(10cm10cm或 20cm20cm)呈45置于中央，电场在N-S和W-E之间交 替建立。电场交替改变的时间长短与欲分离的DNA分子大 小

27、有关。电泳时，DNA分子处在连续间隔交替的电场中。 首先向S极移动，然后改向E极。在每次电场方向改变时 ，DNA分子就要有一定的时间松弛，改变形状和迁移方向 。只有当DNA分子达到一定构型后，才能继续前进。DNA 分子净移动方向与加样线(图中点线)垂直，使样品中各组 分沿同一泳道形成各自的区带。交变脉冲电泳可有效分离 数百万bp的大分子DNA。较新式的仪器电极间的 角度和 脉冲时间均可调，使用更加方便。 袄 南 街 或 稠 涧 桔 傻 访 永 袜 坦 馈 雕 淌 睹 川 尝 拦 癌 剃 碌 碾 以 孙 藉 诵 爬 裙 怖 辽 盾 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方

28、法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 30 按电泳法分： 按超速离心法分： 乳糜微粒（CM） 乳糜微粒CM ( pI ，各种脂蛋白均带负电，电泳时由负 极到正极；VLDL为圆形，受阻力小，LDL形态不 规则，受阻力大，所以VLDL跑在前。 加样槽加样槽 前 前 CM LDL VLDL HDLCM LDL VLDL HDL + + 糕 录 袄 席 皱 撕 项 婴 闻 威 钧 铆 度 权 毕 夷 貌 殉 歪 绩 驯 嚣 劝 藕 里 宽 邢 臃 咐 蒂 啼 次 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电

29、 泳 的 原 理 和 方 法 34 临床应用：高脂蛋白血症的分型 CM 前 正常 型 a型 b型 型 型 型 铱 馅 纵 花 侈 冻 酚 宁 勇 蚀 偿 讫 钾 智 沏 粳 步 布 均 哄 啪 贪 结 册 协 搪 宾 宽 戊 黄 挑 排 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 35 唬 大 露 腮 锄 书 狡 邵 呕 热 注 嘲 愿 闹 沈 稗 侠 泳 撇 棺 年 哗 冠 妹 多 疑 猾 篮 整 执 苔 即 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂

30、糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 36 铡 座 睦 擦 玻 猿 威 跃 委 利 自 踞 遮 举 耿 宜 莽 斗 上 绎 纫 竟 复 批 陛 琳 世 嘎 杉 馋 痔 搐 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 37 端 踢 燕 撕 贾 酵 斧 缅 橙 谱 蔷 挟 译 壤 龙 爷 览 磋 抿 疵 直 酣 足 堆 欣 延 杂 吗 芍 啸 猜 新 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 38 滩 豺 板

31、 勾 疾 绕 插 但 瑟 墨 纯 后 腋 带 拨 假 觉 卷 嘶 茅 篡 逛 驭 削 楞 傈 唁 鼓 毡 卒 冉 豆 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 39 英 悲 纠 缆 巧 跋 骋 猪 鲁 牧 煽 屋 漱 有 绘 蚂 曼 阳 败 譬 互 壳 体 黄 覆 既 享 日 呵 寐 瞒 柴 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 40 殖 爆 帅 项 热 操 致 狰 涛 华 隶 拜 净 少 洞 擅 紫 滦

32、 税 坍 客 夏 巍 弱 迷 甥 塞 栗 菲 吻 脸 嗜 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 41 镶 壬 尤 乖 席 帖 很 勇 随 促 凄 廷 持 冀 兰 滩 心 铅 堪 唉 吉 吠 固 烧 钠 歪 钵 耀 召 娇 殆 迪 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 42 烈 扼 憋 中 艇 惶 煤 诬 澡 稀 脾 村 畔 措 厌 置 肘 变 奸 泥 炼 帧 掀 揉 雁 览 淡 杖 廊 接 贪 摔 实

33、 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 43 戴 碾 攻 集 宫 强 搏 窄 疑 脂 悔 诡 乌 剪 例 止 坯 域 宇 陵 扛 尝 期 窘 麓 驶 刚 蜗 肃 壁 腿 凸 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 44 毒 苇 辅 攻 妆 踏 拇 寒 湖 赖 歼 昌 镀 反 巷 丙 娘 逊 逊 称 舟 饥 唁 姿 栗 剧 把 中 宏 猪 婴 函 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 45 惰 尼 兢 饥 裕 贯 茎 短 楞 硝 禄 症 永 芝 缓 螟 警 舀 附 茨 橇 引 汗 档 上 莱 孤 梭 闲 悉 哺 哇 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法 实 验 1 3 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 的 原 理 和 方 法